Estresse oxidativo em ratos artríticos

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CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Maringá 
2018
ANA PAULA ARSSUFI AMES
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS 
ÁREA DE CONCENTRAÇÃO EM BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ
ESTRESSE OXIDATIVO EM RATOS ARTRÍTICOS
EFEITOS DO ÿ-CARIOFILENO, O PRINCIPAL COMPONENTE
DO ÓLEO DE COPAÍBA, SOBRE A INFLAMAÇÃO EO
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Biológicas.
do grau de Mestre em Ciências
Orientador: Dr. Jurandir Fernando Comar.
ANA PAULA ARSSUFI AMES
Dissertação apresentada ao Programa de 
Pós-graduação em Ciências Biológicas (Área de
Maringá
concentração - Biologia Celular e Molecular)
2018
da Universidade Estadual de Maringá, par.
DO ÓLEO DE COPAÍBA, SOBRE A INFLAMAÇÃO EO
ESTRESSE OXIDATIVO EM RATOS ARTRÍTICOS
EFEITOS DO ÿ-CARIOFILENO, O PRINCIPAL COMPONENTE
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No mestrado desenvolveu a pesquisa com o composto isolado do óleo de copaíba,
metabolismo hepático e bioenergético, que lhe rendeu o primeiro artigo publicado.
Bioquímica pela Universidade Estadual de Maringá (2015). Durante um período
BIOGRAFIA
em consonância com o primeiro artigo.
foi contemplada com três bolsas de Iniciação Científica (CNPq), e neste período
Ana Paula Arssufi Ames, filha de Leomar Antônio Ames e Edna Aparecida Arssufi
Participou do trabalho intitulado como: Anti-Inflammatory and antioxidante actions of
Ames nasceu em Maringá/PR no dia 7 de abril de 1993.
óleo de copaíba estão relacionados a modificações de células hepáticas em ratos artríticos, na área de
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AGRADECIMENTOS
Principalmente, sou imensamente grata por toda a ajuda, apoio e paciência 
de meu amor e meus maridos, são muito gratas por sua ajuda. Tenho que agradecer 
incontáveis vezes que ele me fez companhia no trabalho e as vezes
Andrieli, Bruno, Célia, Dos Anjos, Eurides, Franciele, Francielli, Jaison e Maria Angela 
muito obrigada pela gentileza e ensinamentos.
Citou ela no parágrafo dizer que minha anterior amiga, Franciele foi um grande 
apoiou, me obrigou e não pode me apoiar nos momentos mais tensos, provavelmente, 
muito importantes, meu amigo mesmo por tudo.
Ao meu instrutor expresso minha gratidão por todo o trabalho de confiança, 
por meio de exercícios que me ensinaram, por nunca me negar ajuda nesta hora de 
sanar alguma dúvida e por ajudar a obter nesta de dissertação os resultados que 
obtiveram. A professora Anachar ensina e por toda ajuda concedida, é um exemplo 
de pesquisadora. Também a professora Lívia ensinamentos e apoio científico pelos.
Um agradecimento especial aos meus amigos: Alex, Kamila, Thiago e outros 
mais distantes, pela amizade e compreensão.
Todos os dias sou grata a Deus por tudo, e em relação a este trabalho não 
seria diferente. Não teríamos objetivos mais objetivos sem a alcançar para mim dar e 
ser meu poder-me adivinhar.
me auxiliou na resolução de problemas do dia a dia de um laboratório.
que os membros do laboratório me oferecem sejam elas pequenas ou grandes, muito 
obrigada também pela amizade e os momentos de descontração. Cristiane foi como 
uma tutora em todo o período de Iniciação Científica e muito do que sei sobre a rotina 
do laboratório recebi dela, muito obrigada pelos ensinamentos, por sempre me ajudar 
quando te pedi socorro e amizade.
Aos meus pais devo a vida, o legado que eu me ensina a ter, não tenho como 
mostrar a quão grata sou, sem os ensinamentos e exemplo de vida eu não seus filhos 
onde estou hoje.
A todos os colegas do laboratório: Camila, Gabriela, Geferson, Heloisa, 
Juliana, Kaiany, Lorena, Lucas, Luciane, Mariana, Mellina e Patrícia. Não teria como 
citar como contribuições de cada um, mas sou muito grata por toda e qualquer ajuda
A todos os meus familiares (tanto quanto de sangue os que ganhei ao casar 
com meu marido) pelo carinho, apoio e compreensão pelos meus momentos de 
ausência. Aos meus afilhados, Gabriela e Otávio que me trazem alegria ao ver los 
afilhados.
Agradecer aos alunos e técnicos destes laboratórios, em ordem alfabética:
Como este trabalho foram concedidos a outros laboratórios, tenho que 
agradecer como professores Ciomar e Raquel, pelos ensinamentos e alguns por 
conceder seus laboratórios materiais para a realização dos experimentos.
E apoio financeiro do CNPq e da CAPES.
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“O período de maior ganho em
mais difícil da vida de alguém.
”
conhecimento e experiência é o período
(Dalai Lama)
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Animal do Departamento de Ciências Morfológicas da Universidade Estadual de
Este é um trabalho realizado no Laboratório de Metabolismo Hepático e
Aparecida Bersani Amado, Maria Raquel Marçal Natali, Adelar Bracht, Jurandir
Maringá, apresentado na forma de artigo científico original, em consonância com
Radioisótopos do Departamento de Bioquímica, no Laboratório de Inflamação do
Fernando Comar. Inflamação sistêmica e estresse oxidativo em ratos artríticos
as regras do Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas.
são reduzidos pelo ÿ-cariofileno, o principal componente do óleo de copaíba. Journal 
of Cellular Biochemistry, a ser.
Ana Paula Ames Sibin, Camila Lima Barizão, Cristiane Vizioli Castro Ghizoni,
Artigo:
Departamento de Farmacologia e Terapêutica e no Laboratório de Histologia
APRESENTAÇÃO
Francielli Maria Souza Silva, Anacharis Babeto Sá Nakanishi, Lívia Bracht, Ciomar
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o responsável pelos efeitos antiinflamatórios do óleo de copaíba em ratos artríticos,
distribuídos em grupos: controle, os quais receberam nove salina; controlar
adicionais 18 dias após a indução. A dose de ÿ-cariofileno corresponde à mesma
RESUMO GERAL
A artrite induzida por adjuvante é uma imunopatologia experimental em ratos que
outros dos órgãos animais são vistos, como o fígado, que apresenta mudanças
(trabalho publicado previamente em nosso laboratório). O ÿ-cariofileno parece ser
muitas características com artrite reumatoide. Além das articulações,
por gavagem, o qual foi iniciado 5 dias antes da indução da artrite e perdurou por
autoimune que afeta as articulações e atinge 0,5-1% da população adulta
cariofileno é um sesquiterpeno natural encontrado em vários óleos essenciais ao
mas sua ação sobre o ainda é incerta. Desta forma, o presente estudo
estresse sistêmico, o estresse oxidativo e o metabolismo hepático em ratos com artrite
INTRODUÇÃO: A artrite reumatoide é uma inflamação crônica da natureza
metabólicos e morfológicos associados com um acentuado estresse oxidativo. O ÿ
investigou a ação do ÿ-cariofileno administrado oralmente sobre a inflamação
e da membrana sinovial articular com a produção de espécies reativas de
constituinte do óleo de copaíba, um fitoterápico da Amazônia brasileira, que
efeitos do ÿ-cariofileno com os efeitos já conhecidos do óleo de copaíba em ratos 
artríticos. MÉTODOS: A indução da artrite foi feita em ratos Holtzman (180-200g) por 
meio de administração do adjuvante completo de Freund. Os ratos foram
presente quantidade nas doses de óleo de copaíbaempregada para tratar os ratos
mundial. A fisiopatologia da doença envolve uma intensa hiperplasia da cartilagem
qual tem sido atribuída a atividade anti-inflamatória. O mesmo é o principal
induzida por adjuvante. Em adição, este estudo fez uma comparação entre os
reumatoide é sistêmica e diversos órgãos, como cérebro, coração e coração.
morfologia no metabolismo e morfologia em ratos
negativo, os quais receberam óleo de milho; controle tratado com ÿ-cariofileno nas 
doses de 215 e 430 mg·Kg-1; artrítico (salina); artrítico (óleo de milho); artrítico tratado 
com ÿ-cariofileno nas doses 215 e 430 mg·Kg-1; e artrítico (controle positivo) tratado 
com ibuprofeno (30 mg·Kg-1). O tratamento foi feito diariamente
oxigênio (ROS), como colaboradores como mediadores dos danos teciduais. A artrite
preocupado com o estresse oxidativosistista de ratos artríticos, mas que
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artríticos foram determinados. No 19° dia, a peritoneal dos ratos
de diminuir os níveis de proteínas carboniladas e a atividade da MPO no alimento e
monitorados. O peso do fígado e linfonodos foram encontrados. E ainda, o número de
determinados no homogenato. Também foram determinados a capacidade
pata injetada quanto pata contralateral. Estes animais também não ganharam
determinadas em mitocôndrias isoladas do hhg. RESULTADOS: Os ratos
níveis superiores de ROS no fígado e de proteínas carboniladas não
Assim como o conteúdo da atividade de glutationa oxidada (GSSG) e a glicose (GSH)
e outra para a preparação do homogenato. Proteínas carboniladas e ROS foram
do parênquima hepático. Aneo glicogênese foi aproveitado os alimentos em
cariofilenos diminuíram o edema das patas injetadas, o peso dos linfonodos poplíteo
determinado no plasma para avaliar dano hepático. A análise morfológica e
vários graus secundários à artrite, peso dos linfonodos e número de
A gliconeogênese hepática foi diminuída em 40% pela arte e o tratamento não
anestesiados previamente expostos, o sangue colhido da veia cava e o fígado
leucócitos no sangue e recrutados paraócitos articulares femorotibiais de ratos
antioxidante total (TAC), tióis, proteínas carboniladas e atividade da MPO no
peso corporal e manifestações de inflamações sistêmicas, como
no plasma de animais artríticos. As duas doses do ÿ-cariofilenoram diminuíram em 30%
artríticos mostraram uma resposta inflamatória intensa ao adjuvante tanto na
plasma e carboidratos, aumento na atividade da catalase e sem conteúdo de GSH no 
fígado, e redução de TAC e tióis no plasma. O ÿ-cariofileno (430 mg·Kg-1) foi capaz
artríticos em um estudo prévio. O volume das patas e as tarefas secundárias foram
da catalase, mieloperoxidase (MPO) e superóxido dismutase (SOD) foram
quantificados no homogenato para avaliar o estresse oxidativo hepático. O
por fusão. A respiração e a geração de ROS foram adicionalmente
eo número de leucócitos articulares e circulantes. Ratos artríticos não tratados
leucócitos articulares e circulantes. Nos ratos artríticos, como duas doses do ÿ
modificou este parâmetro. As atividades de AST e ALP foram maiores em ratos
Removido e dividido em duas partes: uma usada para processamento histológico
morfométrica do fígado foi feita através de imagens da região próxima à veia central
plasma. A atividade das enzimas AST, ALT e fosfatase alcalina (ALP) foram
evidenciado pela atividade da MPO plasmática e hepática, deficiências
os níveis de ROS e reestabeleceram os níveis de GSH no fígado de ratos artríticos.
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hepatócitos por área de fígado (-23%) associado a um maior peso de fígado (+50%)
modificados em direitos humanos e, portanto, mostram que ÿ-cariofileno
Aneogênese glicogênese e peso corporal não foram modificados pelo tratamento dos
Pareceres do óleo de coíba ( C.
do óleo de copaíba. Em adição, os resultados indicam que o ÿ-cariofileno melhorou
eles aumentarão a GSH no fígado artrítico para próximos dos controles.
parâmetros (dados da literatura). Por outro lado, ao contrário do óleo de copaíba
injetadas (30%) e contralateral (50%) (maiores doses) e, na dose menor, a atividade
mitocôndrias isoladas não foram modificadas pela patologia nem pelos
na maior dose, reduziram os níveis de proteínas carboniladas e ROS no fígado
dos hepatócitos, gliconeogênese, hepatomegalia e peso corporal, entretanto, nem
Não hepática foi modificada e os leucócitos circulantes e articulares não foram
diretamente como “varredor” radicais livres. O ÿ-cariofileno mostra, além disso,
estresse oxidativo, gliconeogênese, metabolismo hepático.
e área dos hepatócitos (+18%), os quais não foram modificados pelo tratamento
animais controles. Animais artríticos também apresentaram menor número de
ratos artríticos. O ÿ-cariofileno, além do disso, a atividade da MPO
o estado oxidativo de ratos artríticos por meio dos mecanismos:
não foi hepatotóxico.
Estes resultados sugerem que o ÿ-cariofileno é responsável pela ação antioxidante
(dados publicados pelo nosso grupo de pesquisa), esses não foram
tratamento artríticos e o tratamento com o arquivo com não normalizou os parâmetros.
da MPO plasmática (30%). Essas ações semelhantes mostram que o ÿ-cariofileno
tratamentos. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: O ÿ-cariofileno eo óleo de copaíba 
(resultado) reduziram na mesma proporção do edema nas patas
artrítico para valores próximos aos controles. Além disso, em ambas as doses,
mesmo o ibuprofeno, a indometacina e a dexametasona melhoraram esses
atividade hepatoprotetora. No entanto, o sesquiterpeno não melhorou a hipertrofia
dos animais controles e artríticos. A produção de ROS e respiração de
quantificados para o óleo de copaíba. O ÿ-cariofileno e o óleo de copaíba, ambos
o número de leucócitos no sangue periférico e articulações. A atividade da MPO
processo de inflamação, estimulando o sistema antioxidante endógeno e fazendo
Palavras-chave: artrite induzida por adjuvante, ÿ-cariofileno, óleo de copaíba,
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população mundial. A fisiopatologia da artrite envolve uma intensa citocina
430), que foram tratados com ÿ-cariofileno nas doses de 215 e 430 mg·Kg
INTRODUÇÃO: A artrite reumatoide é uma doença inflamatória autoimune e crônica
são afetados, como o fígado, que apresenta alterações morfológicas e metabólicas
ser um dos responsáveis pelas ações nocivas do óleo, embora
pesquisadores). O ÿ-cariofileno parece ser responsável pela ação anti-inflamatória
distribuídos em nove grupos: controles, aos quais foi administrada solução salina;
imunopatologia em ratos que compartilha muitas características com artrite reumatóide. Esses
prejuízo. A artrite reumatóide é uma doença sistêmica e muitos órgãos são afetados,
estado oxidativo em ratos artríticos, mas causou modificações prejudiciais nas células do fígado
os verificados anteriormente para o óleo de copaíba. MÉTODOS: A indução de artrite foi
atividade anti-inflamatória. O ÿ-cariofileno é o principal componente do óleo de copaíba, um
inflamação, estado oxidativo e metabolismo das células hepáticas em ratos com
hiperplasiamediada da membrana sinovial articular e cartilagem e
doença que afeta principalmente as articulações e ocorre em 0,5-1,0% do adulto
associada a um acentuado estresse oxidativo. O ÿ-cariofileno é um
ação hepatoprotetora tem sido atribuída a ele. Por isso, o presente estudo
1; ratos artríticos (solução salina); ratos artríticos (óleo de milho); ratos artríticos tratados (Aÿ 215 e 
430), que receberam 215 e 430 mg·Kg-1 de ÿ-cariofileno; e controles positivos (AIBU), ratos artríticos 
tratados com ibuprofeno (30 mg·Kg-1). Os ratos foram tratados diariamente por via oral
ação do óleo de copaíba em ratos artríticos, mas sua ação ainda é incerta, podendo até
controles negativos, aos quais foi administrado óleo de milho; controles tratados (Cÿ 215 e
RESUMO GERAL
animais apresentam inflamação sistêmica e além dos sítios articulares outros órgãos
como cérebro, pulmões e coração. A artrite induzida por adjuvante é uma
metabolismo e morfologia de ratos saudáveis (dados previamente publicados pelo nosso
realizado em ratos Holtzman (180-200 g) com adjuvante de Freund. Os ratos foram
artrite. Além disso, este estudo teve como objetivo comparar os efeitos do ÿ-cariofileno com
superprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS), que atuam como mediadores
fitoterapia da Amazônia brasileira, que melhorou a inflamação sistêmica e
sesquiterpeno encontrado em vários óleos essenciais e tem sido relatado para apresentar
investigou a ação do ÿ-cariofileno administrado por via oral na
administração durante 5 dias antes e 18 dias após a indução da artrite. As doses
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avaliado. Leucócitos circulantes e aqueles recrutados para a articulação femorotibial
restaurou o conteúdo de GSH no fígado artrítico. A gliconeogênese hepática foi de 40%
óleo utilizado no tratamento de ratos artríticos em estudo anterior. Volume da pata e
A atividade de mieloperoxidase (MPO) e SOD foi realizada no homogenato. Total
ganho de peso e manifestações sistêmicas, como evidenciado pela maior
mitocôndria. RESULTADOS: Ratos artríticos desenvolveram uma resposta inflamatória intensa
os aumentos de grupos carbonila de proteínas e atividade MPO no fígado e plasma
foram medidos no homogenato para avaliar o estresse oxidativo hepático.
removidos e divididos em duas partes: uma foi utilizada para processamento histológico e
do parênquima hepático. A gliconeogênese foi medida em fígados perfundidos isolados. Isto
ratos apresentaram níveis mais elevados de ROS no fígado e grupos carbonila de proteína no
foram medidos no plasma para avaliar o dano hepático. Morfológica e
O ÿ-cariofileno diminuiu o edema de pata injetado, o inchaço da linfa poplítea
cariofileno reduziu esses parâmetros próximos aos normais.
cavidades foram ainda quantificadas em ratos artríticos. No dia 19, a cavidade peritoneal do
lesões secundárias foram medidas. O peso do fígado e dos linfonodos foi
capacidade antioxidante (TAC), tiol, grupos carbonila de proteínas e atividade de MPO foram
atividade da MPO hepática, lesões secundárias graves, aumento do peso dos linfonodos e
menor no fígado artrítico e ÿ-cariofileno não melhorou. AST e ALP foram
ao adjuvante na pata injetada e contralateral. Também não apresentavam corpo
de ratos artríticos. Ambas as doses de ÿ-cariofileno diminuíram os níveis de ROS e
de ÿ-cariofileno correspondem à mesma quantidade presente nas doses de copaíba
Teor de glutationa oxidada (GSSG) e reduzida (GSH) e catalase,
o outro utilizado para preparação de homogeneizado de fígado. Grupos carbonil de proteína e ROS
foi investigada adicionalmente a respiração e a produção de ROS em fígados isolados
plasma e fígado, atividade reduzida de catalase e conteúdo de GSH no fígado e diminuição de 
TAC e tióis no plasma. ÿ-cariofileno (430 mg·Kg-1) abolido
linfonodos e o número de leucócitos circulantes e articulares. Artrítico não tratado
A gliconeogênese e o peso corporal não foram modificados nos ratos controle tratados. Artrítico
ratos anestesiados foi exposto, o sangue coletado da veia cava e o fígado foi
a análise morfométrica foi feita com imagens da região próxima à veia central
também medido no plasma. Atividades de AST, ALT e fosfatase alcalina (ALP)
um maior número de leucócitos no sangue e articulações. Em ratos artríticos, ambas as doses de
aumentado em 100 e 150%, respectivamente, por artrite e tratamento com ÿ
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cariofileno e óleo de copaíba na maior dose reduziram a proteína carbonila
Os resultados indicam que o ÿ-cariofileno melhorou o estado oxidativo da artrite
atividade. Por outro lado, o ÿ-cariofileno não melhorou o efeito adjuvante
hepatotoxicidade. Com isso em vista, o ÿ-cariofileno pode ser um bom candidato como
estado, gliconeogênese, metabolismo hepático.
processo, estimulando levemente o sistema antioxidante endógeno, e agindo como
todos não modificados por ÿ-cariofileno em ratos controle e artríticos. Nem ROS
parâmetros (dados da literatura). No entanto, diferentemente do óleo de copaíba, esses parâmetros foram
dose, atividade de MPO plasmática (30%). Essas ações semelhantes mostram que ÿ
os valores de controle. Esses resultados sugerem fortemente que o ÿ-cariofileno é
as articulações. A atividade da MPO hepática não foi modificada e a circulação e articulação
ou mesmo um ponto de partida para o desenvolvimento de anti-inflamatórios.
ratos também apresentaram redução do número de hepatócitos por área hepática (-23%)
(C. reticulata) em ratos artríticos. Além disso, o ÿ-cariofileno reduziu a MPO hepática
óleo de copaíba (dados publicados) reduziu na mesma proporção o edema no
grupos e conteúdo de ROS no fígado artrítico para níveis próximos aos valores de controle. Dentro
inchaço dos hepatócitos, gliconeogênese, hepatomegalia e baixo peso corporal,
produção nem respiração de mitocôndrias isoladas foi modificada pela patologia
Palavras-chave: artrite induzida por adjuvante, ÿ-cariofileno, óleo de copaíba, oxidativo
leucócitos não foram medidos para o óleo de copaíba. Em relação ao estado oxidativo, ÿ
removedor direto de radicais livres. O ÿ-cariofileno mostra, além disso, efeitos hepatoprotetores
atividade, o número de leucócitos no sangue periférico e aqueles recrutados para
ao maior peso do fígado (+50%) e aumento da área dos hepatócitos (+18%), que foram
ratos por meio dos seguintes mecanismos: diminuindo a inflamação
adjuvante para potencializar os efeitos do tratamento convencional da artrite reumatóide
cariofileno parece ser responsável por essas ações benéficas do óleo de copaíba
responsável pela ação antioxidante do óleo de copaíba em ratos artríticos. Além disso, o
não foi modificado em ratos saudáveis e, portanto, o ÿ-cariofileno não foi associado a
Além disso, em ambas as doses, eles aumentaram GSH no fígado artrítico para níveis próximos a
patas injetadas (30%) e contralaterais (50%) (na maior dose) e, na menor
no entanto, mesmo ibuprofeno, indometacina e dexametasona não melhoraram esses
ou os tratamentos. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: ÿ-Cariofileno e
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ratos são reduzidos por ÿ-cariofileno, o principal
componente do óleo de copaíba
Inflamação sistêmica e estresse oxidativo em pacientes artríticos
1
3
2
87020900 Maringá, Brasil
14
PR, Brasil
Departamento de Bioquímica, Universidade Estadual de Maringá, PR, Brasil
Universidade de Maringá
Departamento de Farmacologia e Terapêutica, Universidade Estadual de Maringá,
Número total de figuras de texto e tabelas: 8
E-mail: jurandircomar@yahoo.com.br
Cabeça de corrida: atividade anti-inflamatória e antioxidante do ÿ-cariofileno
Departamento de Ciências Morfológicas, Universidade de Maringá, PR, Brasil
MS Silva2, Anacharis B. Sá Nakanishi1, Lívia Bracht1, Ciomar A. Bersani
Endereço de correspondência:
(CNPq); Número da concessão: 447876/2014-7
Ana P. Ames Sibin1, Camila L. Barizão1, Cristiane V. Castro Ghizoni1, Francielli
Patrocinador da bolsa: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Departamento de Bioquímica
Amado2, Maria R. Marçal Natali3, Adelar Bracht1, Jurandir F. Comar1*
*Jurandir Fernando Comar
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ratos. ÿ-cariofileno (430 mg·Kg-1) aboliu os aumentos de proteína carbonil
um estudo anterior (C. reticulata). Além disso, o ÿ-cariofileno reduziu a
associado a maior peso do fígado (+50%) e aumento da área de hepatócitos
reduz o estresse oxidativo no fígado e no plasma. Além disso, diferentemente de Copaíba
Palavras-chave: artrite induzida por adjuvante, ÿ-cariofileno, óleo de copaíba, oxidativo
40% menor no fígado artrítico e ÿ-cariofileno não melhorou. Artrítico
componente do óleo de copaíba, sobre a inflamação sistêmica, estado oxidativo e
hepatomegalia e peso corporal. Os resultados revelam que o ÿ-cariofileno
células de ratos saudáveis (dados publicados). Para isso, Holtzman saudável e
30% e restaurou o conteúdo de GSH no fígado artrítico. Essas ações benéficas
Ambas as doses de ÿ-cariofileno diminuíram o edema injetado na pata, o inchaço
modificado em ratos controles saudáveis e, portanto, o ÿ-cariofileno não foi
ABSTRATO
doses de 215 e 430 mg·Kg-1, que correspondem à mesma quantidade de ÿ
cariofileno com os verificados anteriormente para o óleo de copaíba, que melhorou a
e atividade da mieloperoxidase (MPO) no fígado e plasma de pacientes artríticos
(+18%), que não foram todos modificados por ÿ-cariofileno. ÿ-cariofileno fez
estado, gliconeogênese, metabolismo hepático.
metabolismo das células hepáticas de ratos com artrite induzida por adjuvante, um modelo para
associada à hepatotoxicidade.
de linfonodos e o número de leucócitos circulantes e articulares em pacientes artríticos
os ratos também apresentaram um número reduzido de hepatócitos por área hepática (-23%)
cariofileno nas doses de óleo de copaíba utilizadas anteriormente em estudo publicado.
O presente estudo investigou a ação do ÿ-cariofileno, o principal
marcadores plasmáticos de dano hepático em ratos artríticos. A gliconeogênese hepática foi
óleo (conforme dados publicados pelo nosso grupo de pesquisadores), esses parâmetros não foram
ratos artríticos foram tratados oralmente durante 18 dias com ÿ-cariofileno na
de ÿ-cariofileno ocorreu na mesma extensão daquelas com óleo de copaíba em
melhora a inflamação articular e sistêmica de ratos artríticos e que
ratos. Da mesma forma, o ÿ-cariofileno diminuiu as espécies reativas de oxigênio (ROS) por
inflamação sistêmica em ratos artríticos, mas causou modificações prejudiciais no fígado
não melhorar o inchaço induzido por adjuvante de hepatócitos, gliconeogênese,
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artrite reumatoide. Além disso, este estudo teve como objetivo comparar os efeitos de ÿ
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INTRODUÇÃO
O ÿ-cariofileno é o principal constituinte do óleo de copaíba, uma oleorresina
Amazônia Brasileira [Veiga Jr et al., 2007]. O óleo de copaíba também apresenta
estresse oxidativo em ratos com artrite induzida por adjuvante, um modelo para humanos
envolve uma intensa hiperplasia mediada por citocinas da membrana sinovial
As alterações metabólicas também são proeminentes na artrite reumatóide, como o músculo
doenças reumáticas [Desmarchelier, 2010; Veiga Jr et al., 2007]. A respeito disso,
encontrado em vários óleos essenciais e tem sido relatado para apresentar muitos
doença que afeta principalmente as articulações e ocorre em 0,5-1,0% do adulto
atividade, no entanto, tem sido a propriedade mais investigada do ÿ-cariofileno,
2010]. O ÿ-cariofileno é responsável por aproximadamente 40% do óleo extraído
[Medeiros et al., 2007], e atenuou a inflamação intestinal em camundongos com
de lesão tecidual [Mcinnes & Schett, 2011]. Além da inflamação, a oxidação
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produção em ratos e camundongos [Fernandes et al., 2007; Passos et al., 2007],
et al., 2013; Choi et al., 2013; Calleja et al., 2013; Bento et al., 2011; Passos
extraído de plantas do gênero Copaifera que é um importante fitoterápico
artrite reumatóide [Castro-Ghizoni et al., 2017].
condição debilitante conhecida como caquexia reumatóide [Roubenoff, 2009]. Metabólico
propriedades farmacológicas, como anti-inflamatórias, neuroprotetoras,
o estresse é aumentado nas articulações e sistemicamente [Lemarechal et al., 2006].
colite induzida por sulfato de dextrano [Bento et al., 2011; Cho et al., 2007].
óleo de copaíba (C. reticulata) atenuou a inflamação sistêmica pronunciada e
inibiu o edema induzido por LPS e a ativação de NF-ÿB na pata de ratos
ÿ-cariofileno, ou (-)-trans-cariofileno, é um sesquiterpeno natural
inflamatória e, por isso, tem sido popularmente utilizada para tratar
e superprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS), que atuam como mediadores
que inibiu o edema induzido por carragenina e citocinas pró-inflamatórias
de Copaifera reticulata (C. reticulata), a espécie mais abundante do
população mundial [Uhlig et al., 2014]. A fisiopatologia da artrite
medicamento da Amazônia brasileira comercializado mundialmente [Desmarchelier,
et al., 2007; Fernandes et al., 2007; Cho et al., 2007]. O anti-inflamatório
A artrite reumatoide é uma doença autoimune sistêmica e inflamatória crônica
modificações são igualmente significativas no fígado de ratos com
antidepressivo, antialérgico, antioxidante e antitumoral [Liu et al., 2014; Chang
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Como o ÿ-cariofileno é de longe o principal constituinte do óleo de copaíba (C.
inibiu a gliconeogênese hepática e alterou a morfometria das células hepáticas
e congestão vascular [Botelho et al., 2010; Brito et al., 2000]. É desconhecido
lesão e em camundongos com esteato-hepatite alcoólica [Varga et al., 2018; Calleja et
Considerando que o ÿ-cariofileno parece ser o responsável pela ação anti-
óleo [Castro-Ghizoni et al., 2017]. Ratos saudáveis tratados com óleo de copaíba realmente
Fedatto et ai., 1999]. O estresse oxidativo também é alterado no plasma, fígado, cérebro
ratos saudáveis. No entanto, a ação hepatoprotetora tem sido atribuída ao ÿ
A artrite induzida por adjuvante é um modelo de imunopatologia experimental
atividade inflamatória, particularmente o ÿ-humuleno [Leandro et al., 2012;
Este modelo também deve permitir extrapolaçõespara pacientes com doenças reumatoides
nefrotoxicidade em camundongos [Horváth et al., 2012]. Essas ações protetoras de ÿ
ações do ÿ-cariofileno administrado por via oral sobre os tecidos articular e sistêmico.
artrite, como aumento da oxidação de ácidos graxos, aumento da glicólise e
portanto, permite investigar os efeitos da patogênese nas articulações e
alterações metabólicas são proeminentes, o estresse oxidativo é bastante pronunciado quando
reticulata), a atividade anti-inflamatória do óleo foi atribuída a ele,
se o ÿ-cariofileno ou os outros componentes do óleo de copaíba são responsáveis
ação inflamatória do óleo de copaíba, principalmente em ratos artríticos, e sua
e coração de ratos artríticos [Braccht et al., 2016; Schubert et al., 2016; Wendt et
cariofileno foram todos associados a uma diminuição do estresse oxidativo tecidual.
artrite.
apresentam alterações na morfologia hepática relacionadas à colestase hepática
sistemicamente, como modificações no metabolismo hepático [Bendele et al., 1999].
gliconeogênese reduzida [Wendt et al., 2018; Sá-Nakanishi et al., 2018;
em ratos saudáveis, efeitos que foram atribuídos a uma possível hepatotoxicidade do
al., 2013;]. Além disso, o sesquiterpeno também atenuou o efeito induzido pela cisplatina.
em ratos que exibe uma resposta inflamatória forte e generalizada e,
17
Fernandes et al., 2007]. Por outro lado, o óleo de copaíba administrado por via oral
cariofileno, como verificado em ratos com doença hepática induzida por tetracloreto de carbono
no entanto, outros constituintes menores foram relatados como apresentando anti-
em comparação com outros órgãos [Wendt et al., 2015; Comar et al., 2013].
pelas modificações funcionais e morfológicas que ocorreram no fígado de
ação sobre o fígado ainda é incerta, o presente estudo teve como objetivo avaliar a
al., 2015; Comar et al., 2013]. Particularmente no fígado, onde a inflamação e
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o que o torna um composto de interesse singular, sobretudo como ponto de partida
função hepática de ratos artríticos e saudáveis. Considerando que o ÿ-cariofileno
inflamação, função hepática e estado oxidativo em ratos com
estresse oxidativo no fígado artrítico e a produção de ROS em
medido em fígados perfundidos para avaliar a ação do ÿ-cariofileno no
anel e uma ligação dupla trans em um anel de nove carbonos (Fig. 1A), ambos de natureza rara,
mitocôndrias hepáticas. O ÿ-Cariofileno apresenta em sua estrutura um ciclobutano
Ghizoni et al., 2017; Calleja et al., 2013], este estudo também avaliou a
18
morfometria e parâmetros plasmáticos do dano hepático. A gliconeogênese foi
para o desenvolvimento de medicamentos anti-inflamatórios e anti-reumáticos.
foi relatado apresentar atividade antioxidante [Varga et al., 2018; Castro
artrite induzida. O envolvimento hepático foi avaliado por meio de
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MATERIAL E MÉTODOS
mL (500 µg) de adjuvante de Freund ( Mycobacterium inativado pelo calor
Design experimental
controles (Ccorn), aos quais foi administrado óleo de milho; controles tratados (Cÿ 215
Animais e indução de artrite
fosfatase alcalina, albumina e proteínas totais foram adquiridos da Gold Analisa Diagnóstica® Ltda (Belo 
Horizonte, MG, Brasil). Todos os outros produtos químicos foram
animais (180-200g) foram injetados subcutaneamente na pata traseira esquerda com 0,1
grupo): controles (C), aos quais foi administrada solução salina; negativo
de grau analítico.
19
(-)-trans-Cariofileno (ÿ-cariofileno), o-ftalaldeído (OPT), 2,2-
obtido no Centro de Criação Animal da Universidade Estadual de Maringá
tuberculosis, derivado da cepa humana H37Rv), suspenso em óleo mineral
seguiu as diretrizes do Conselho Brasileiro de Controle de Animais
Produtos químicos
Ratos machos Holtzman pesando em torno de 170-180g (50 dias de idade) foram
[Donaldson et ai., 1993]. Ratos de idades semelhantes serviram como controles. Todos os procedimentos
ácido carboxílico (Trolox), ácido 5,5-ditiobis-2-nitrobenzóico (DTNB), 2,4-
de 24±3ºC sob um ciclo regulado de 12h claro/escuro. Os animais foram alojados em
Comitê de Experimentação Animal (CEUA) da Universidade Estadual de Maringá (Protocolo número CEUA 
4643280817).
e Cÿ 430), que foram tratados com ÿ-cariofileno nas doses de 215 e
difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromano-2-
(UEM) e mantida em condições laboratoriais padrão a uma temperatura
Experimentação (CONCEA) e foram previamente aprovados pelo Comitê de Ética
glutationa (GSH), glutationa oxidada (GSSG) e foram adquiridos da Sigma Chemical Co®. (St. Louis, MO, 
EUA). Kits comerciais para AST, ALT,
dieta de laboratório (Nuvilab®, Colombo, Brasil). Para a indução de artrite,
Cinquenta e quatro ratos foram distribuídos aleatoriamente em nove grupos (n=6 por
dinitrofenilhidrazina (DNPH), diclorofluoresceína oxidada (DCF),
gaiolas de aço convencionais (3 ratos/gaiola) e foram alimentados ad libitum com um
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resposta inflamatória em um período de 18 dias. Após a inoculação do adjuvante, o
rabo; (+1 ou +2) aparecimento de nódulos em uma ou ambas as orelhas; e (+1 ou +2)
na cavidade articular femorotibial foram realizados adicionalmente no 19º dia
exposto cirurgicamente. O sangue foi então coletado da veia cava e depositado
para processamento histológico. Em seguida, as articulações femorotibiais posteriores foram
coletados por meio da incisão da cauda para obter a contagem total e diferencial
(Aÿ 215 e Aÿ 430), que receberam ÿ-cariofileno nas doses de 215 e
Ratos em jejum de 12 h foram profundamente anestesiados com tiopental sódico
ibuprofeno por 5 dias antes da indução da artrite e por mais 18 dias.
em relação ao volume inicial (volume no dia 0). A aparência e a gravidade das lesões 
secundárias também foram avaliadas do 10º ao 18º dia de acordo com
Avaliação da resposta inflamatória
removido e dividido em duas partes: uma foi imediatamente liofilizada e
430 mg·Kg-1; ratos artríticos (A), aos quais foi administrada solução salina;
cariofileno presente nas doses de óleo de copaíba usadas anteriormente para tratar artrite
avaliar todos os parâmetros deste estudo. Os ratos foram tratados uma vez por dia no
volume de ambas as patas traseiras até a articulação tibiotársica foi medido por
descrito anteriormente [Estevão-Silva et al., 2016].
20
430 mg·Kg-1; controles positivos (AIBU), ratos artríticos tratados com ibuprofeno em
armazenado em nitrogênio líquido para avaliação do estado oxidativo e o outro foi utilizado
Os animais foram pesados e avaliados quanto à indução de adjuvante.
de leucócitos circulantes. Contagens totais e diferenciais de leucócitos recrutados
ratos [Castro-Ghizoni et al., 2017; Ziech et al., 2013].
ratos artríticos (Acorn), aos quais foi administrado óleo de milho; ratos artríticos tratados
aparecimento de inchaço em um ou ambos os membros anteriores [Braccht et al., 2012]. O sangue era
em tubos com 100 UI mL-1 de heparina sódica. O fígado foi posteriormente
Doses diárias de ÿ-cariofileno corresponderam à mesma quantidadede ÿ
ao seguinte escore graduado de 0 a 5: (+1) aparecimento de nódulos no
(100 mg·kg-1) mais lidocaína (10 mg·Kg-1) e a cavidade peritoneal foi
pletismografia. Os resultados foram expressos em termos de aumento do volume da pata
manhã pela administração oral (gavage) de ÿ-cariofileno, óleo de milho, soro fisiológico ou
Coleta de sangue e preparação de tecidos
a dose de 30 mg·Kg-1. Todos os procedimentos foram repetidos três vezes para
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com um micrótomo rotativo (Leica RM2245), montado em lâmina e corado com
o plasma para avaliar o estado oxidativo e inflamatório. Conteúdo de albumina
460 nm e a atividade calculada usando o coeficiente de extinção molar (ÿ) de
preparado com Trolox, um análogo solúvel em água da vitamina E, e os resultados foram
& Lafond, 1995]. Os teores de tiol foram calculados usando o coeficiente de extinção molar (ÿ) de 
1,36 × 104·Mÿ1·cmÿ1 e expressos como nmol·(mL plasma)ÿ1.
As atividades da fosfatase alcalina (ALP) foram medidas no plasma para avaliar danos no fígado 
usando kits comerciais (Gold Analisa®). A atividade da MPO foi
contagem de leucócitos.
espectrofotometria usando ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolina-6-sulfônico)
7.4) e uma alíquota foi separada para uso como homogenato total. O restante
A capacidade antioxidante total (TAC), grupos proteicos sulfidrila (tióis),
solução, desidratada em etanol graduado, clarificada em xilol e embebida em
Os teores plasmáticos de tiol foram medidos por espectrofotometria (412 nm)
expostas cirurgicamente, as cavidades articulares foram lavadas com 40 µL de fosfato
separada como uma fração solúvel do homogenato.
porção de tecido congelada foi homogeneizada em um Van Potter-Elvehjem
hematoxilina-eosina para determinar a morfologia e morfometria.
11,3x103·M-1·cm-1 [Bradley et al., 1982].
21
O sangue foi centrifugado a 3.000g por 10 min e o sobrenadante foi
usando DTNB (ácido 5,5'-ditiobis 2-nitrobenzóico) como descrito anteriormente [Faure
blocos de parafina. Seções transversais semi-seriadas de 6 µm de espessura de fígado foram preparadas
medida como o aumento da absorbância devido à oxidação da o-dianisidina em
Para o processamento histológico, as amostras de fígado foram fixadas em 10% Bouin
solução salina tamponada (PBS) contendo 1mM de EDTA e os exsudatos usados para
e aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e
expresso como nmol ·(mL de plasma)ÿ1.
o homogeneizado foi centrifugado a 11.000g por 15 min e o sobrenadante
grupos de proteínas carbonil e atividade de mieloperoxidase (MPO) foram medidos em
ou ABTS [Bracht et al., 2016]. O TAC foi calculado a partir da curva padrão
Ensaios analíticos plasmáticos
homogeneizador com 10 volumes de tampão de fosfato de potássio 0,1 M gelado (pH
A capacidade antioxidante total (TAC) do plasma foi medida por
separados como a fração plasmática. Para preparar o homogenato de fígado, o
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reação com gelo usando um espectrofluorímetro RF-5301 (Shimadzu) com excitação
do ensaio de o-ftalaldeído (OPT) como descrito anteriormente [Hissin & Hilf,
curvas foram preparadas com GSH ou GSSG.
os resultados foram calculados usando o coeficiente de extinção molar (ÿ) de 9,6 x 10-3
a inibição e os resultados foram expressos em unidades·(mg proteína)ÿ1. A atividade de
foi previamente incubado com 10 mM de N-etilmaleimida e posteriormente com
grupos foram calculados usando o coeficiente de extinção molar (ÿ) de 2,20 × 104
estimado medindo a mudança na absorbância em 240 nm usando H2O2 como
já descrito para o plasma [Levine et al., 1990].
Glutationa reduzida (GSH) e oxidada (GSSG) foram medidas
a oxidação de DCFH-DA ao fluorescente 2',7'-diclorofluoresceína (DCF) em
autooxidação em meio alcalino a 420 nm [Marklund & Marklund, 1974]. Um
Os grupos de proteínas carbonil foram medidos por espectrofotometria usando 2,4-
sobrenadante de homogeneizado de fígado por espectrofluorimetria com 2',7'-dicloro
Os níveis de proteínas carboniladas foram medidos no sobrenadante de
e comprimentos de onda de emissão em 504 e 529 nm, respectivamente. Uma curva padrão
As atividades da catalase, superóxido dismutase (SOD) e MPO foram
22
Mÿ1·cmÿ1 e expresso como nmol·(mL plasma)ÿ1.
A unidade SOD foi considerada a quantidade de enzima que foi capaz de promover 50%
a presença de ROS. A formação de DCF foi medida após a interrupção da
uma mistura contendo NaOH 1 M e OPT 0,4 µM para detectar fluorescência. Padrão
diacetato de fluoresceína (DCFH-DA) [Siqueira et al., 2005]. O ensaio quantifica
dinitrofenil -hidrazina [Levine et ai., 1990]. Os níveis de proteína carbonil
1976]. A fluorescência foi estimada como GSH. Para o ensaio GSSG, a amostra
Mÿ1·cmÿ1. A atividade da SOD foi estimada pela sua capacidade de inibir o pirogalol
Os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) foram quantificados no
espectrofluorimetricamente (excitação a 350 nm e emissão a 420 nm) por meio
substrato e expresso como mmol·minÿ1·(mg proteína)ÿ1 [Bergmeyer, 1974]. o
com diclorofluoresceína oxidada (DCF) foi usado para expressar os resultados como nmol·(mg 
proteína)ÿ1.
homogeneizado de fígado por espectrofotometria com DNPH usando o mesmo procedimento
ensaiado no sobrenadante de homogenato de fígado. A atividade da catalase foi
Parâmetros de estresse oxidativo hepático
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As mitocôndrias hepáticas foram isoladas por centrifugação diferencial [Saling et
EDTA e Tris-HCl 10 mM (pH 7,4). Succinato e ÿ-cetoglutarato, ambos em uma
consumo de oxigênio foram calculados a partir das inclinações dos traçados do registrador
A taxa de produção de ROS mitocondrial (produção de ROS em tempo real) foi
(pH 7,2) e succinato 10 mM como substrato respiratório. A reação foi
e II, respectivamente, da cadeia de transporte de elétrons mitocondrial. ADP, para um
Análises histológicas
respiração ou basal) e (b) logo após a adição de ADP (respiração estado III). o
O número e a área dos hepatócitos foram avaliados usando o programa Image-Pro
foram incubados na câmara de oxigrafia fechada em um meio (2,0 mL)
animal foram examinados, totalizando 1000 hepatócitos por grupo (ÿm2).
[Biazon et al., 2016]. Resumidamente, mitocôndrias intactas foram suspensas em 2 mL de
A MPO foi medida usando o mesmo procedimento já descrito acima para o
animal foram contados em uma área de 329.972,45 ÿm2 por imagem, totalizando 250
capturado de um microscópio óptico (Olympus BX41®, Japão) com um QColor3®
al., 2011]. O consumo de oxigênio mitocondrial foi medido polarograficamente
e expresso como nmol·minÿ1·(mg proteína)-1. As taxas de respiração foram
iniciado pela adição de 0,4 µM de peroxidase de rábano e a fluorescência foi
A análise morfológica e morfométrica é realizada usando imagens
mistura contendo 250 mM de manitol, 1,36 µM de DCFA-DA, 10 mM de tampão Hepes
Produção e respiração mitocondrial de ROS
concentração final de 0,125 mM, foi adicionada em tempos apropriados. Taxas de
imagens por grupo. Para quantificar as áreas de hepatócitos, 200 hepatócitospor
plasma [Bradley et ai., 1982].
concentração de 10 mM, foram usados como substratos doadores de elétrons para o complexo I
estimado medindo o aumento de fluorescência linear devido à formação de DCF
Plus® 4.5 (Cibernética de Mídia). Para o número de hepatócitos, 50 imagens por
contendo 0,25 M de manitol, 5 mM de difosfato de sódio, 10 mM de KCl, 0,2 mM
A razão ADP/O foi determinada de acordo com Chance & Williams [1955].
usando um eletrodo de platina blindado com Teflon [Saling et al., 2011]. Mitocôndria
câmera (Olympus American INC, Canadá), acoplada ao software Q-Capture®.
medido sob duas condições: (a) antes da adição de ADP (substrato
23
da região próxima à veia central do parênquima hepático. As imagens foram
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removidos e pesados para permitir cálculos metabólicos precisos.
foi aplicado com nível de significância de 5% (p < 0,05).
registrados durante 10 minutos sob agitação. Os resultados foram expressos como
fluido foi tampão Krebs/Henseleit-bicarbonato (pH 7,4), saturado com uma mistura
ajuste simultâneo da temperatura a 37ºC. O fluxo foi mantido
glicose e piruvato [Bergmeyer, 1974]. Ao final da perfusão, o fígado foi
de oxigênio e dióxido de carbono (95:5) por meio de um oxigenador de membrana com
Perfusão hepática e gliconeogênese
entre 30 e 33 mLÿminÿ1. A concentração de oxigênio na veia
Análise estatística
erros dos meios. A análise estatística foi feita por meio do GraphPad
nmol·min-1·(mg proteína)-1.
constante por uma bomba peristáltica (Minipuls 3, Gilson, França) e foi ajustado
Os parâmetros apresentados em gráficos e tabelas são médias ± padrão
A perfusão hepática não recirculante e livre de hemoglobina foi realizada como anteriormente
estabilização do consumo de oxigênio, L-lactato (2 mM) foi adicionado ao
analisado por meio de ANOVA ONE-WAY e o teste post-hoc de Newman-Keuls
A gliconeogênese foi medida nos fígados perfundidos de ratos em jejum de 12 h.
perfusato foi monitorado por um eletrodo de platina blindado com teflon. Depois
Software Prisma (versão 5.0). A significância estatística dos dados foi
o fígado foi removido e posicionado em uma câmara de plexiglass. A perfusão
líquidos foram coletados em intervalos de dois minutos e analisados quanto ao seu conteúdo de
24
descrito [Comar et al., 2003]. Após a canulação das veias porta e cava,
fluido de perfusão como substrato gliconeogênico. Amostras da perfusão do efluente
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RESULTADOS
ineficaz. As lesões secundárias apareceram no dia 10 e atingiram o maior
indução) dos animais foi de 202±4,0 g. O peso corporal de não tratados
tratados e controles tratados. O peso do fígado de ratos artríticos não tratados foi
linfonodos inguinais em 50 e 42%, respectivamente (comparado ao grupo
leucócitos polimorfonucleares foram predominantes. Tratamento de animais com
grupos de controles. Em termos práticos, ratos artríticos não tratados e tratados não
A Tabela I mostra o peso do fígado, linfonodos, peso corporal e
aumentado em ratos artríticos quando comparados aos controles. O tratamento de
ratos artríticos aumentaram 307% em relação ao seu volume inicial. Este aumento
O peso corporal foi monitorado antes da injeção do adjuvante e no dia
ratos com 430 mg·Kg-1 de ÿ-cariofileno ou ibuprofeno diminuíram esses aumentos
No dia 18, o número de leucócitos totais no sangue em pacientes artríticos não tratados
mg·Kg-1 ÿ-cariofileno (210%) ou ibuprofeno (174%). O volume do
na pata injetada foram observados no primeiro dia e foram iguais em todos os
pontuações no dia 18. Apenas o ibuprofeno (controle positivo) diminuiu a pontuação de
50% maior (comparado aos controles) e os tratamentos não o modificaram. o
25
parâmetros inflamatórios devido ao desenvolvimento de artrite. O volume inicial do
ratos foi mais de quatro vezes maior do que inicialmente (dia 0) e, além disso,
para 70 e 84%, respectivamente. A dose de 215 mg·Kg-1 ÿ-cariofileno foi
ganhar peso corporal durante este período. O peso do fígado foi semelhante no não
pata contralateral de ratos artríticos aumentou em 160%. Tratamento da artrite
Efeitos do ÿ-cariofileno na indução e desenvolvimento de artrite adjuvante
controles foi 44% maior no dia 18. O ganho de peso corporal foi semelhante em todos
artrite).
foi consideravelmente menos pronunciada em ratos artríticos tratados com 215 e 430
18 após a indução da artrite. O peso inicial médio (minutos antes da artrite
ratos controle não modificou os linfonodos, mas o tratamento de ratos artríticos com 430 
mg·Kg-1 ÿ-cariofileno diminuiu o peso do poplíteo e
artrite no dia 18.
grupos artríticos (não mostrados). No dia 18 o volume da pata injetada de
pesos do poplíteo e linfonodos inguinais (direito e esquerdo) foram muito
patas traseiras antes da injeção do adjuvante foi de 1,43±0,03 mL. Reações inflamatórias
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grupos no fígado foram 40% maiores em ratos artríticos (em comparação com os controles; Fig.1C). 
O tratamento com 430 mg·Kg-1 ÿ-cariofileno ou ibuprofeno
Fig.1D). O tratamento de animais artríticos com 215 e 430 mg·Kg-1 ÿ
A atividade da MPO, a capacidade antioxidante total (TAC), os níveis de proteína
ratos artríticos. Os níveis de grupos carbonila de proteínas, um parâmetro pró-oxidante,
26
30%.
de leucócitos totais recrutados para a cavidade articular (articulação da pata injetada)
tratamento de ratos artríticos com 215 e 430 mg·Kg-1 ÿ-cariofileno ou
articulação direita. Nenhuma diferença foi encontrada entre o tratamento com solução salina e óleo de milho e,
carbonilas. A lesão oxidativa tecidual é normalmente causada por EROs, cujo fígado
mg·Kg-1 ÿ-cariofileno ou ibuprofeno (controle positivo) diminuiu a atividade da MPO
controles; Figura 2C). O tratamento de ratos artríticos com ÿ-cariofileno nas doses de 215 e 430 
mg·Kg-1 diminuiu os níveis de grupos proteicos carbonílicos
215 e 430 mg·Kg-1 de ÿ-cariofileno ou ibuprofeno causaram uma diminuição de
Estresse oxidativo hepático e estado inflamatório
cariofileno causou uma diminuição de aproximadamente 77% deste parâmetro. Apenas
diminuiu os grupos carbonila da proteína em ratos artríticos para níveis próximos ao
grupos carbonil e tiol são mostrados na Fig. 2. A atividade de MPO foi cinco vezes
foi aproximadamente duas vezes maior quando comparado ao contralateral
(-20%). Os grupos plasmáticos de TAC e tiol, dois parâmetros antioxidantes, foram 38
para níveis próximos aos valores de controle (Fig. 1B). Os níveis de proteína carbonil
Estado oxidativo e inflamatório plasmático
A atividade da MPO foi maior no fígado de ratos artríticos (37%) e 430
aproximadamente 40% no número de leucócitos totais no sangue. O número
cariofileno ou ibuprofeno diminuíram o conteúdo hepático de ROS em aproximadamente
foram 50% maiores no plasma de ratos artríticos não tratados (em comparação com o
portanto, os dados obtidos com óleo de milho foram omitidos nos próximos resultados.
os teores foram 100% maiores nos ratos artríticos (comparados aos controles;
ibuprofenodiminuiu a atividade da MPO em aproximadamente 35% no plasma de
valores de controle. O tratamento dos controles não modificou os níveis de proteína hepática
ibuprofeno diminuiu o número de leucócitos recrutados para o fêmurotibial
maior no plasma de ratos artríticos (em comparação com os controles; Fig. 2A). o
articulação. Tratamento de animais com ibuprofeno ou 215 e 430 mg·Kg-1 ÿ
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diminuiu GSSG para níveis próximos aos valores de controle. A relação GSH/GSSG em
adjuvante e apenas o ibuprofeno reverteu isso.
os níveis foram avaliados como um parâmetro de inflamação sistêmica. Os resultados são
ÿ-cariofileno ou ibuprofeno diminuíram AST e ALP para níveis próximos ao
Considerando que o conteúdo de ROS do fígado foi modificado por ÿ-cariofileno em
As atividades plasmáticas de AST, ALT e ALP foram medidas para avaliar
ratos artríticos não modificaram os grupos tiol plasmáticos. Tratamento dos controles
níveis de albumina (-30%). O tratamento de ratos artríticos com 215 e 430 mg·Kg
na metade superior da Tabela II. Os níveis de GSH no fígado de ratos artríticos foram
23% disso nos ratos de controle. O tratamento de ratos controle e artríticos não
Os níveis de GSSG no fígado de ratos artríticos foram 150% superiores aos do
albumina no plasma. O tratamento dos controles não modificou esses parâmetros.
e 53% menor em animais artríticos. Apenas tratamento com 430 mg·Kg-1 ÿ
430 mg·Kg-1 ÿ-cariofileno ou ibuprofeno aumentaram GSH para níveis próximos ao
Estado antioxidante do fígado
o fígado artrítico foi apenas um quinto daquele nos controles e o tratamento com 430 mg·Kg-1 de ÿ-cariofileno 
ou ibuprofeno aumentou esse valor em 280 e
mostrado na parte inferior da Tabela II. A indução de artrite aumentou a atividade
27
animais com ÿ-cariofileno não causaram nenhuma alteração na oxidação plasmática
Respiração e produção de ROS em mitocôndrias hepáticas isoladas
controles. O tratamento de ratos artríticos com ÿ-cariofileno ou ibuprofeno
se o tratamento com ÿ-cariofileno causar danos no fígado. albumina plasmática
valores de controle. O tratamento dos controles não modificou os níveis de GSH hepático.
cariofileno aumentou o TAC plasmático em ratos artríticos. O tratamento de
Parâmetros bioquímicos plasmáticos
valores de controle, mas apenas o ibuprofeno (controle positivo) aumentou os níveis de
63% menor do que nos controles. O tratamento de ratos artríticos com 215 e
modificar a atividade da catalase. A atividade da SOD foi reduzida em 42% pela
210%, respectivamente. A atividade da catalase no fígado de ratos artríticos foi apenas
Os níveis de glutationa e as atividades de catalase e SOD são mostrados
de AST e ALP plasmáticos em 100 e 150%, respectivamente, e diminuiu a
Estado.
1
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dispostos em cordões com núcleo central e citoplasma preservado. Não tratado
focos inflamatórios encapsulados particularmente menores quando comparados a não
controles). O tratamento com ÿ-cariofileno não modificou o número ou
tratamento com ÿ-cariofileno na gliconeogênese foram avaliados em
1999]. A parte superior da Fig. 5 mostra os cursos de tempo da produção de glicose,
parte inferior da Fig.4. O número e a área dos hepatócitos foram, respectivamente,
mitocôndria. Os resultados são mostrados na Fig. 3. A atividade respiratória foi medida
A via gliconeogênica é extremamente sensível a alterações na
Análises morfológicas e morfométricas foram realizadas no fígado para
seta na Fig.4). Nenhuma modificação na morfologia hepática foi verificada em
com hematoxilina-eosina. Ratos de controle não tratados apresentaram um resultado histológico normal
substratos em humanos e roedores e além disso permite avaliar a
ratos artríticos, a taxa de produção de ROS (produção de ROS em tempo real) e a
alterações na estrutura do parênquima. Apenas a dose de 430 mg·Kg-1 ÿ
mitocôndrias hepáticas de ratos controle não tratados e tratados e ratos artríticos.
ratos artríticos apresentaram algumas alterações, como dilatação sinusóide, distorção do
área de hepatócitos em ratos controle e artríticos.
produção de piruvato e consumo de oxigênio de não tratados e tratados
em mitocôndrias de ratos tratados com ÿ-cariofileno apenas na dose de 430
maquinaria gliconeogênica completa de piruvato até glicose [Fedatto et al.,
estrutura como observado pela veia central típica e espaço portal, e hepatócitos
23% menor e 18% maior em ratos artríticos não tratados (comparado ao
cariofileno foi usado. A Fig.4 mostra a morfologia das seções do fígado coradas
atividade respiratória associada foram medidos em recém-isolados hepáticos
ratos artríticos tratados. Os resultados da análise morfométrica são mostrados na
fígados utilizando como substrato o L-lactato, que é um dos principais agentes gliconeogênicos
avaliar se o aumento do peso do fígado em ratos artríticos está associado
controles tratados e apenas modificações discretas em ratos artríticos tratados,
integridade e função celular [Soares et al., 2013]. Portanto, os efeitos de
arquitetura normal dos hepatócitos e focos inflamatórios encapsulados (amarelo
Histologia do fígado
Gliconeogênese em fígados perfundidos
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mg·Kg-1. Nenhuma modificação na respiração e produção de ROS foi verificada em
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ratos artríticos. A parte inferior da Fig. 5 mostra o incremento em cada parâmetro
ratos artríticos não tratados quando comparados aos controles. O tratamento de
ratos artríticos não melhoraram a produção de glicose. O aumento da glicose
as taxas de produção de glicose e piruvato foram mínimas e semelhantes para todos
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devido à infusão de L-lactato 2 mM. Os valores de incremento foram calculados como [final
No entanto, o consumo basal de oxigênio foi menor nos grupos tratados e não
ratos artríticos tratados. Após a introdução do L-lactato, todos os parâmetros foram
valores no final do período de infusão com L-lactato] - [taxas basais antes
infusão de L-lactato]. O incremento da produção de glicose foi 41% menor em
a produção não foi diferente para controles tratados e não tratados. O incremento
estimulada, mas apenas a produção de glicose foi aumentada de forma diferente no controle e
de consumo de oxigênio e produção de piruvato foi semelhante para todos os grupos.
controle e ratos artríticos, e ilustra o protocolo experimental. A base
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DISCUSSÃO
Um dos objetivos deste trabalho foi avaliar o efeito anti-inflamatório de
o sesquiterpeno é responsável por aproximadamente 37% do óleo de copaíba. As doses de ÿ-cariofileno no 
presente estudo (215 e 430 mg·Kg-1) foram equivalentes a
ÿ-cariofileno e óleo de copaíba reduziram na mesma proporção o
nas articulações esquerdas. A atividade da MPO hepática não foi modificada e circulante e
os efeitos anti-inflamatórios do óleo de copaíba foram ligeiramente superiores aos do ÿ
g·Kg-1) utilizado no estudo anterior conduzido por nosso grupo de pesquisadores [Castro
é considerado um modelo de artrite grave em ratos e compartilha característicasde
Além disso, o ÿ-cariofileno reduziu a atividade da MPO hepática (no nível mais alto
atividade de MPO plasmática e hepática, edema de pata, lesões secundárias graves a
Ghizoni et al., 2017]. A Tabela III mostra os valores (%) de alguns parâmetros para
de ratos artríticos e corroboram achados anteriores [Sá-nakanishi et al., 2018;
o edema na pata contralateral em ambas as doses, por outro lado, ÿ
no sangue periférico e nas articulações. Além disso, alterações histológicas,
apresentam caquexia e manifestações inflamatórias generalizadas [Stolina et al.,
ÿ-cariofileno na artrite em ratos e compará-lo com o efeito da copaíba
edema nas patas injetadas e contralaterais (na maior dose) e, na
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artrite reumatóide [Stolina et al., 2009]. Neste modelo, os animais desenvolvem uma
cariofileno foi eficaz apenas na dose mais alta. Esses resultados mostram que
Castro-Ghizoni et al., 2017; Comar et al., 2013; Fedatto et ai., 1999].
Ghizoni et al., 2017; Ziech et al., 2013].
aumento do estresse oxidativo e redução da gliconeogênese foram verificados no fígado
O modelo experimental de inflamação crônica usado no presente estudo
o volume de ÿ-cariofileno presente nas doses do óleo (0,58 e 1,15
leucócitos articulares não foram medidos para o óleo de copaíba. Óleo de copaíba melhorado
artrite, aumento do peso dos gânglios linfáticos e aumento do número de leucócitos
comparar os efeitos do ÿ-cariofileno e do óleo de copaíba em ratos artríticos. o
dose), o número de leucócitos totais no sangue periférico e os recrutados
óleo (C. reticulata) previamente verificado para este mesmo modelo experimental [Castro
2009]. Neste estudo, essas manifestações foram evidenciadas pelo aumento
dose mais baixa, o peso dos linfonodos poplíteos e a atividade da MPO plasmática.
intensa resposta inflamatória ao adjuvante nas patas (poliartrite) e
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a dose mais alta reduziu os grupos de proteínas carbonila e ROS no fígado artrítico
Nesse sentido, o ÿ-cariofileno apresentou maior capacidade inibitória sobre os lipídios
No entanto, o óleo de copaíba foi associado a ações nocivas no fígado, condição
O ÿ-cariofileno pode diminuir o estresse oxidativo por três
indicador de infiltração de células polimorfonucleares e ÿ-cariofileno reduziu
ÿ-humuleno [Calleja et al., 2013]. Por outro lado, na dose mais baixa, apenas
edema induzido e a liberação de mediadores inflamatórios na pata de ratos
estresse no plasma de ratos artríticos, que poderia ser melhorado por ÿ
al., 2007]. Algumas ações anti-inflamatórias do óleo de copaíba não foram verificadas com
Ghizoni et al., 2017]. Esses resultados sugerem fortemente que o ÿ-cariofileno é
peso corporal de ratos artríticos.
sistema antioxidante endógeno (2), ou atuando como radicais livres diretos
expressão de ciclooxigenase 2 (COX 2), TNF-ÿ, IL-6 e IL-1ÿ em vários em
cariofileno, que pode ser atribuído a algum constituinte menor do óleo
[Castro-Ghizoni et al., 2017]. Por outro lado, tanto o ÿ-cariofileno quanto o
(C. reticulata). O ÿ-cariofileno não é o único, mas é o principal anti-
para níveis próximos aos valores de controle (Tabela III). Além disso, em ambas as doses, eles
que deve prejudicar uma ação antioxidante efetiva [Castro-Ghizoni et al., 2017].
no fígado e plasma de ratos artríticos. Além dos parâmetros verificados no
[Fernandes et. al., 2007]. Como esses efeitos foram iguais ou menores que os de
catador (3). Com relação ao mecanismo (1), a atividade do MPO é um
Em relação ao estado oxidativo, ÿ-cariofileno e óleo de copaíba na
O ÿ-cariofileno reduziu os níveis de ROS e GSSG em fígados artríticos.
óleo de copaíba não melhorou as lesões secundárias (escore artrítico) e
agindo sinergicamente. A este respeito, o ÿ-humuleno reduziu a carragenina
peroxidação dos microssomas hepáticos do que o ÿ-tocoferol e ainda muito maior do que
mecanismos: diminuindo o processo inflamatório (1), estimulando a
a dose mais alta e foram anteriormente atribuídas à ação nociva do óleo
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responsável pela ação antioxidante do óleo de copaíba no fígado de ratos artríticos.
cariofileno (430 mg·Kg-1).
aumentou GSH no fígado artrítico para níveis próximos aos valores de controle [Castro
constituinte inflamatório deste óleo de copaíba [Ziech et al., 2013; Fernandes et.
Este fato é corroborado pela ação ineficaz do óleo de copaíba sobre
No presente estudo, foi relatado que o ÿ-cariofileno regula negativamente a
O ÿ-cariofileno e o ÿ-humuleno representam menos de 5% do óleo de copaíba
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C6 células de glioma e em ratos com lesão de isquemia-reperfusão cerebral [Assis et
Calleja et al., 2013]. A atividade sequestrante do ÿ-cariofileno tem sido
ponto que merece comentários adicionais é o status antioxidante plasmático. Dentro
mesma proporção pela artrite e o tratamento com ÿ-cariofileno não
por meio de todos os três mecanismos listados acima.
no anel de ambos os sistemas olefínicos favorecendo a geração de radicais terciários
os efeitos do ÿ-cariofileno envolvem a ativação do receptor canabinóide 2 (CB2)
e depende principalmente de grupos tiol de albumina [Braccht et al., 2016]. No
[Fukuda et al., 2014].
apresentam ação antioxidante através da eliminação de radicais livres contra os radicais hidroxila,
translocação do fator nuclear eritróide 2 relacionado 2 (Nfr2), que regula positivamente
atividade antioxidante plasmática em si como um sequestrador de radicais livres. Portanto, é
comentários. As mitocôndrias são o principal local de produção de ROS na célula e
modelos in vitro e animais de neuroinflamação [Ojha et al., 2016; Guo et ai.,
componente do sistema antioxidante endógeno (mecanismo 2). Contribuindo
foi relatado para inibir a produção de IL-6 e matriz metaloproteinase-3 em
al., 2014; Lou et al., 2016].
ratos artríticos, o ÿ-cariofileno (430 mg·Kg-1) aumentou a capacidade antioxidante
A respiração mitocondrial e a produção de ROS de ratos tratados foram
e da via do receptor ÿ ativado por proliferador de peroxissoma (PPARÿ) [Bento
provável que o ÿ-cariofileno tenha melhorado o estado oxidativo de ratos artríticos
genes de defesa antioxidante, e melhorar o sistema antioxidante celular GSH em
e o sistema alílico de alta estabilidade (Fig. 1A) [Ojha et al., 2016]. Outro
para este achado, foi relatado que o ÿ-cariofileno induz
2014; Cheng et al., 2014]. Estudos recentes relataram que anti-inflamatórios
explicado pela estrutura apresentando anéis duplos que permitem a inserção radical
aumentá-los. Assim, é possível que o ÿ-cariofileno tenha melhorado a
Além disso, o ÿ-cariofileno aumentou o conteúdo hepático de GSH, um
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ânions superóxido e peróxidos lipídicos [Ojha et al., 2016; Guo et al., 2014;
presente estudo, os níveis plasmáticos de albumina e tióis foram reduzidos no
Com relação ao mecanismo (3), o ÿ-cariofileno foi relatado para
Sinoviócitos semelhantes a fibroblastos estimulados por TNFÿ derivados das articulações reumatóides
do plasma, onde as enzimas antioxidantes e a glutationa contribuem pouco
não modificadopor artrite ou ÿ-cariofileno e este ponto merece alguns
et al., 2011; Cheng et al., 2014]. A este respeito, os agonistas dos receptores CB2 têm
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A gliconeogênese reduzida do L-lactato nos fígados perfundidos de
ratos artríticos. O mesmo efeito foi verificado na gliconeogênese de artríticos
função hepática devido à colestase hepática [Castro-Ghizoni et al., 2013]. No entanto,
cariofileno, o que reforça a hipótese de que, diferentemente do óleo de copaíba, não é
ácidos caurenóico e hardwickiic, que estão entre os principais diterpenos em
no fígado de ratos controle [Castro-Ghizoni et al., 2017]. Este último foi atribuído
esperavam uma menor produção de ROS após o tratamento com ÿ-cariofileno. Dentro
função do fígado. Nesse sentido, marcadores plasmáticos de dano hepático não foram
respiração de mitocôndrias isoladas (Fig. 3) não refuta que o
enzimas [Fedatto et al., 1999]. O tratamento de ratos artríticos com ÿ
ratos e para tratamento com óleo de copaíba [Castro-Ghizoni et al., 2017; Comar et ai.,
o sesquiterpeno [Calleja et al., 2013; Varga et al., 2018]. Uma justificativa para
O ÿ-cariofileno não foi associado à hepatotoxicidade, mas foi
seria esperado uma maior produção de ROS em mitocôndrias isoladas de
reproduzir essas condições, como mediadores inflamatórios e ÿ-cariofileno, por
a respiração de mitocôndrias isoladas, que é modificada por mudanças na
ratos artríticos já foi verificado anteriormente, inclusive de outros substratos,
O ÿ-cariofileno não modificou a gliconeogênese de ratos controle no
óleo de copaíba (C. reticulata) e, portanto, podem estar associados
Além disso, o ÿ-cariofileno adicionado exogenamente inibiu a ERO mitocondrial
a ação tóxica do óleo é que, a atividade citotóxica tem sido atribuída ao
2013].
aos efeitos nocivos do óleo, que foi associado a um comprometimento da
exemplo, estão ausentes. O mesmo fenômeno já foi relatado para artrite
fígados artríticos, onde o teor de ROS foi maior. Da mesma forma, seria
ratos tratados com óleo de copaíba. O óleo também reduziu a gliconeogênese
associada à hepatotoxicidade. A ação hepatoprotetora tem sido atribuída a
fenômeno ocorre in vivo porque as incubações de organelas isoladas não
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cariofileno foi praticamente sem efeito sobre a gliconeogênese reduzida em
alterado ou mesmo aumentado pelo tratamento de ratos controle com ÿ
e foi relatado que ocorre devido à menor atividade da chave gliconeogênica
estado redox. O fato de não ter ocorrido nenhuma mudança na produção de ROS e
presente estudo, o que permite concluir que o sesquiterpeno não prejudica a
ações nocivas do óleo [Soares et al., 2013; Veiga Jr et al., 2007].
produção em células BV2 murinas [Guo et al., 2014]. O mesmo pode ser dito sobre
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alargamento, fenômeno conhecido como “inchaço nublado” [Del Monte, 2001]. Dentro
observado em hepatócitos inchados [Del Monte, 2001]. Esta condição é verificada
complicações graves da doença [Tiger et al., 1976].
artrite é grave e na literatura, é relatado que mesmo o ibuprofeno,
longo prazo tem sido relatado para diminuir a transcrição de
& Roubenoff, 2002]. O aumento do fígado não é uma característica apreciada de
A consequência da artrite decorre provavelmente do inchaço dessas células. Por
níveis, que mostram que a inflamação crônica inerente a este modelo de
incapacidade das células para manter a homeostase do fluido e é relatado para ser
não se acumulam dentro dos hepatócitos, no entanto, sua síntese
modulação do metabolismo hepático [Del Monte, 2005]. Acumulação de
peso [Bendele et al., 1999]. Além disso, a gliconeogênese reduzida em
Em resumo, os resultados do presente estudo revelaram que ÿ
praticamente sem efeito sobre as alterações no número e tamanho de
Monte, 2005]. É fácil de ser observado em órgãos parenquimatosos, principalmente
encontrados no presente estudo (Tabela I).
desperdiçando a inflamação crônica, o fígado desvia a síntese de proteínas do
O ÿ-cariofileno não reduziu os hepatócitos e o aumento do fígado em
fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK) e glicose 1,6 bisfosfatase
ocupando mais espaço, menos hepatócitos são encontrados por unidade de área hepática, uma
ratos artríticos parece ocorrer como consequência do inchaço dos hepatócitos, que em
biomoléculas no citosol está normalmente associada a hepatócitos
artrite reumatóide, no entanto, a hepatomegalia não está necessariamente relacionada
fígado, onde pode ocorrer inclusive como resposta adaptativa normal envolvida na
hepatócitos em ratos artríticos. A maior área de hepatócitos observada em
mesmo na artrite reumatóide, que a longo prazo pode causar caquexia [Walsmith
o tratamento com indometacina e dexametasona melhorou o fígado e o corpo
uma alteração resultante como uma resposta a lesões não letais e estressores [Del
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contribui para o aumento acentuado na absorção de aminoácidos derivados do músculo
artrite não melhorou completamente. No entanto, o adjuvante induzido
albumina e para um aumento da produção de proteínas de fase aguda. O último
O inchaço celular é um acúmulo intracitoplasmático de água devido à
ratos artríticos, mas também não aumentou o peso corporal e a albumina plasmática
[Meijer, 2000].
condição que aumenta o tamanho e o peso do fígado (fígado inchado), como de fato
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cariofileno apresenta atividades anti-inflamatórias articulares e sistêmicas sobre
não melhorou o inchaço dos hepatócitos induzido por adjuvante, diminuiu
mesmo os anti-inflamatórios não esteroides não melhoraram alguns destes
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gliconeogênese, hepatomegalia e baixo peso corporal de ratos artríticos, no entanto,
estresse oxidativo no fígado. Essas ações foram na mesma extensão de
parâmetros não foram modificados em ratos saudáveis tratados e, portanto, ÿ
artrite induzida por adjuvante em ratos e que foi eficaz na diminuição
modificações. No entanto, diferentemente do estudo com óleo de copaíba, esses
cariofileno parece ser o responsável por essas ações do óleo de copaíba. ÿ
cariofileno pode ser um bom candidato como adjuvante para potencializar os efeitos
óleo de copaíba (C. reticulata) em ratos artríticos, em trabalho anterior e, portanto, ÿ
cariofileno não foi associado com hepatotoxicidade. Com isso em vista, ÿ
atividade hepatoprotetora. Por outro lado, ÿ-cariofileno (e óleo de copaíba)
desenvolvimento de novos anti-inflamatórios.
O cariofileno apresenta ainda ação antioxidante plasmática e
de tratamento convencional para a artrite reumatóide ou mesmo um ponto de partida para
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Lista de abreviações
Interesses competitivos
Contribuições dos autores
Agradecimentos
induziu artrite e tratou os animais. APAS e FMSS realizaram a
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receptor 2; Nfr2, fator nuclear eritróide 2 relacionado 2; TAC, antioxidante total
interleucina 1 e 6; NFkB, fator nuclear kapa B; SOD, superóxido dismutase;
JFC e AB conceberam e projetaram os experimentos. CABA e APAS
MPO, mieloperoxidase; COX 2, ciclooxigenase 2; Receptor CB2, canabinóide
Aperfeiçoamento de Pessoal