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BIOLOGIA E GEOLOGIA Autora: Luana Gomes Data de realização da atividade: 12/10/2020 Ano Letivo: 2020-2021 Extração e observação de DNA de células eucarióticas vegetais Relatório de Trabalho Prático Laboratorial 2 Índice Introdução…………………………………………………………………………………………………………………3 1) Procedimento Experimental ............................................................................... 4 2) Resultados .......................................................................................................... 6 Discussão ..................................................................................................................... 7 Conclusão .................................................................................................................... 8 Bibliografia e Webgrafia .............................................................................................. 9 3 Introdução A célula é a unidade estrutural e funcional de todos os seres vivos. Esta semelhança também se revela a nível molecular. As células podem ser eucarióticas (por exemplo as das frutas) ou procarióticas, sendo as primeiras mais complexas. O DNA (ácido desoxirribonucleico) é constituído por monómeros denominados nucleótidos, sendo cada um deles formado por um grupo fosfato, uma base azotada e uma pentose (desoxirribose). Enquanto que nas células procarióticas o DNA se encontra disperso no citoplasma, nas células eucarióticas este localiza-se no interior do núcleo. A estrutura da molécula de DNA é universal porque é comum a todos os seres vivos, sendo constituída por duas cadeias polinucleotídicas em hélice, antiparalelas unidas por ligações de hidrogénio nas bases azotadas complementares. Sendo o DNA a molécula responsável pela manutenção e diversidade de vida, visto que intervém na síntese proteica e é responsável pelo armazenamento e transmissão da informação genética. Os objetivos deste trabalho são extrair e observar “in vitro” o DNA do material biológico e descobrir a sua localização na célula. 4 1) Procedimento Experimental Materiais: Material biológico - kiwi Faca Almofariz Água Sal (cloreto de sódio) Balança Detergente da loiça 1 colher de chá Coador Gaze Álcool a 96% frio 1 tubo de ensaio Suporte de tubos de ensaio 1 gobelé 1 vareta de vidro Fucsina Básica Execução: 1. Com uma faca, descascou-se e cortou-se em pedaços o kiwi. 2. Num almofariz, esmagou-se o kiwi. 3. Adicionou-se ao almofariz 100ml de água, 2 colheres de chá de detergente da loiça e 2g de sal (anteriormente pesou-se na balança). 4. Misturou-se com cuidado. 5. Preparou-se um dispositivo de filtração, dispondo um coador de cozinha com uma gaze, sobre um gobelé. 6. Coou-se para o gobelé com o auxílio do dispositivo de filtração o homogeneizado obtido. 7. Verteu-se o líquido do gobelé para um tubo de ensaio até 1/3 da sua capacidade com o auxílio de um funil. 8. Inclinou-se o tubo de ensaio e lentamente adicionou-se uma igual quantidade de álcool, fazendo o álcool escorrer pelas paredes do tubo de modo a que fique por cima do líquido do fruto. Fig.1- Materiais utilizados no trabalho prático laboratorial 5 9. Usou-se uma vareta de vidro para mover o líquido do fruto para cima em direção ao álcool, para que o DNA precipite. 10. Observou-se atentamente a superfície de interface entre o líquido do fruto e o álcool. 11. Adicionou-se gotas de fucsina básica (indicador da presença de DNA, adquirindo este a tonalidade avermelhada na sua presença). Fig.2- Passo 1 Fig.3- Passo 2 Fig.4- Passo 3 e 4 Fig.5- Passo 5 Fig.6- Passo 6 Fig.8- Passo 10 Fig.9- Passo 11 Fig.7-Passo 7 6 2) Resultados Ao realizar o procedimento experimental, observou-se a precipitação e sucessiva ascensão de uma camada gelatinosa chamada “medusa de DNA”, formada por um grande aglomerado de moléculas de DNA. No final, depois de se adicionar fucsina básica o DNA ficou com uma tonalidade avermelhada, sendo mais fácil de o distinguir dos restantes componentes presentes no tubo de ensaio. Fig.11- Reação da fucsina básica com moléculas de DNAFig.10- Tubo de ensaio com a mistura heterogénea de filamentos de DNA, de álcool e de solução aquosa do kiwi e a sua esquematização. Álcool Filamentos de DNA Solução aquosa do kiwi 7 Discussão Nesta experiência, o material biológico utilizado foi o kiwi, fruto constituído por células eucarióticas vegetais com núcleo individualizado. Como o DNA está dentro do núcleo das células, tem de se separar os constituintes celulares, logo foi necessário macerar o kiwi de maneira a destruir as paredes celulares, aplicar detergente para que penetrasse nas membranas celulares e desagregasse a bicamada fosfolipídica em moléculas mais pequenas, destruindo-a. O sal é composto por Na+ e Cl-, na presença de água estes iões dissociam-se. O catião Na+ vai estabilizar a molécula de DNA, visto que tem carga negativa devido ao seu grupo fosfato, neutralizando a molécula, fazendo com que várias moléculas se agreguem entre si e tornando os filamentos mais visíveis. A filtração foi essencial pois evita a passagem de grandes pedaços de kiwi, permitindo uma melhor visualização das moléculas de DNA no final. O álcool etílico foi utilizado porque faz com que ocorra a precipitação do DNA, visto que o DNA é insolúvel neste, especialmente a baixas temperaturas. O DNA apareceu na zona de separação entre o líquido do fruto e camada de álcool, já que é menos denso que o álcool etílico frio, e o líquido do kiwi é mais denso que estes. Um erro experimental que ocorreu durante a execução foi a adição de gotas a mais de fucsina básica, mesmo assim conseguiu-se indicar a presença e diferenciar o DNA. 8 Conclusão Com esta experiência, conseguiu-se comprovar a existência de DNA nas células do kiwi, extraí-lo e observar a “medusa de DNA”, que se distinguiu dos restantes componentes celulares. Concluindo, verificou-se que DNA encontra-se/localiza-se no interior do núcleo nas células eucarióticas vegetais, devido aos procedimentos efetuados. 9 Bibliografia e Webgrafia SILVA, JOÃO CARLOS; et al (2020), Desafios 11, 1a Edição, ASA, LeYa https://pt.slideshare.net/margaridabt/relatrio-extrao-dna (consultado em 18/10/2020) http://eddtavares.blogspot.com/2015/10/atividade-laboratorial-extracao- de-dna.html (consultado em 18/10/2020) http://06fabiocastrobg11.blogspot.com/2014/10/extracao-de-dna-do- kiwi.html (consultado em 18/10/2020) http://www.aeplegua.pt/comunidade-educativa/pessoal- docente/departamentos/departamento-de-ciencias-experimentais/ciencia- mais/extracao-e-isolamento-de-dna/extracao-de-dna-poster-1 (consultado em 18/10/2020) https://pt.slideshare.net/margaridabt/relatrio-extrao-dna http://eddtavares.blogspot.com/2015/10/atividade-laboratorial-extracao-de-dna.html http://eddtavares.blogspot.com/2015/10/atividade-laboratorial-extracao-de-dna.html http://06fabiocastrobg11.blogspot.com/2014/10/extracao-de-dna-do-kiwi.html http://06fabiocastrobg11.blogspot.com/2014/10/extracao-de-dna-do-kiwi.html http://www.aeplegua.pt/comunidade-educativa/pessoal-docente/departamentos/departamento-de-ciencias-experimentais/ciencia-mais/extracao-e-isolamento-de-dna/extracao-de-dna-poster-1 http://www.aeplegua.pt/comunidade-educativa/pessoal-docente/departamentos/departamento-de-ciencias-experimentais/ciencia-mais/extracao-e-isolamento-de-dna/extracao-de-dna-poster-1 http://www.aeplegua.pt/comunidade-educativa/pessoal-docente/departamentos/departamento-de-ciencias-experimentais/ciencia-mais/extracao-e-isolamento-de-dna/extracao-de-dna-poster-1 Índice Introdução A célula é a unidade estrutural e funcional de todos os seres vivos. Esta semelhança também se revela a nível molecular. As células podem ser eucarióticas (por exemplo as das frutas) ou procarióticas, sendo as primeiras mais complexas. O DNA (ácido desoxirribonucleico) é constituído por monómeros denominados nucleótidos, sendo cada um deles formadopor um grupo fosfato, uma base azotada e uma pentose (desoxirribose). Enquanto que nas células procarióticas o DNA se encontra dispers... Os objetivos deste trabalho são extrair e observar “in vitro” o DNA do material biológico e descobrir a sua localização na célula. 1) Procedimento Experimental 2) Resultados Discussão Conclusão Bibliografia e Webgrafia