ATIVIDADE DE ANÁLISES TOXICOLÓGICAS 2

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Universidade Federal do Piauí
Centro de Ciências da Saúde - Curso de Farmácia
Profa. Dra. Hercília Ma. L. Rolim.
Análises Toxicológicas
ATIVIDADE DE VALORIZAÇÃO DE APRENDIZAGEM 2
Grupo: Luiz Fernando, Paulo Sousa e Rayara Sousa. Data:31/01/2021
Baseado no artigo: Determinação de bisfenol com atividade estrogênica em embalagens plásticas, amostras de comida para bebês usando extração sólido-líquido e limpeza com solvente dispersor seguidos por cromatografia gasosa e espectrometria de massa em análise em tandem.
1. Identificar o método de extração
O método de tratamento de amostra, foi a extração SLP (solid-liquid phase) com acetonitrila, com base no método QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged e safe) e foi aplicado para remover substâncias interferentes, como proteínas, açúcar ou lipídios, para reduzir o tempo total de análise e para aumentar a sensibilidade do método.
	Este método consiste em ser rápido, fácil, econômico, efetivo, robusto e seguro, explorando as possibilidades oferecidas pela instrumentação analítica moderna.
Etapas: 1) Adicionar amostra homogeneizada ao tubo, 2) Adicionar 2 homogeneizadores de cerâmica, 3) Adicionar ACN e depois levar ao vórtex, 4) Adicionar pacote de extração, agitar, agitar, agitar! 5) Centrifugar, transferir para um tubo SPE dispersivo, 6) Centrifugar, 7) Analisar
Fonte: Godfrey et al., 2020
Para a extração, uma porção de 2 g de cada amostra de alimento foi pesada em um tubo de vidro de 10 mL contendo 5 μL de uma solução de metanol (10 mg/L-1) com o substituto BPA-d16 (a concentração final do substituto foi 50 mg/L-1). A amostra foi homogeneizada com 2 mL de água e 6 mL de acetonitrila em um misturador vortex por 1 min e sonicada por 30 min em banho ultrassônico. Depois disso,1g de NaCl foi adicionado a cada tubo e centrifugado por 5 min a 4000 rpm. A camada orgânica era então transferida para um tubo de vidro de 10 mL. A fim de remover interferências (proteínas, açúcar ou lipídios) um procedimento de limpeza, com 600 mg de MgSO4 e 150 mg de adsorvente PSA dispersivo. A mistura era agitada em vórtice por 1 min e centrifugada por 5 min a 4000 rpm. O sobrenadante foi então transferido para um tubo de vidro de 10 mL e evaporado para secura em um evaporador centrífugo a 2.000 rpm (760×g) e 25°C. Finalmente, o resíduo foi derivatizado (sililação) usando 100 μL de uma mistura de acetato de etila / BSTFA (1% TMCS) 90:10 (v/v).
2. Matriz e analitos
O preparo de amostra é parte crucial do procedimento analítico, pois reduz os interferentes que podem comprometer a seletividade e sensibilidade ao analito de interesse na matriz biológica. 
Com isso, a matriz foram 15 produtos de comida infantil “pronta para comer”, incluindo leite em pó, cereais com leite, sucos, iogurte e mix de frutas, carnes e peixe; embalados em recipientes de plástico, foram adquiridos de supermercados em Granada, Espanha, e armazenados a 4°C até a análise laboratorial. 
Os analitos foram os vários análogos de bisfenois, onde, para preparo das soluções padrão para comparação, foram advindos da empresa sigma-aldrich. Soluções de estoque de BPA, BPS, BPF, BPAF, BPE, BPB e BPP (100 mg L − 1) foram preparados em etanol e padrão (BPA-d16) também foi preparado (10 mg L − 1) em etanol.
3. Métodos de identificação
Espectrometria de massa em tandem: a MS/MS é um sistema em que dois espectrômetros de massa são colocados em seqüência e separados por uma câmara de colisão. A matriz é coletada, logo após, eluída e ionizada por eletrospray. Os íons são separados por carga no primeiro espectrômetro, selecionados por um programa de computador e passam para a câmara de colisão, onde são fragmentados. Os fragmentos passam para o segundo espectrômetro, onde são analisados e identificados de acordo com a sua massa (LEAO et al., 2008).
De maneira simples, a utilização de um GC-MS/MS foi aplicada para a identificação dos vários análogos do bisfenol A nestas matrizes. O GC utilizado possui um triplo sistema quadrupolo GC-MS / MS Agilent 7890 A (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, EUA) acoplado a um detector Quattro Micro GC Waters (EUA) espectrômetro de massa triplo quadrupolo com impacto de elétron inerte a fonte de íons.
Em relação as condições de identificação temos uma coluna capilar ZB-5MS a temperatura de 250°C.
Fonte: www.phenomenex.com
O gás de arraste utilizado foi o Hélio 99.99999%, com volume de injeção de 1 μL. Com isso, temos a determinação e quantificação de sete bisfenóis com demonstrado atividade estrogênica, por GC-MS / MS em amostras de comida para bebês foi realizada com sucesso em uma coluna capilar ZB-5MS, usando uma abordagem QuEChERS para tratamento, extração e limpeza da amostra para análise posterior.
	
Referências:
GODFREY, A. Ruth et al. QuEChERS: a simple extraction for monitoring quaternary ammonium biocide pollution in soils and antimicrobial resistance. Analytical Methods, v. 12, n. 35, p. 4387-4393, 2020.
LEAO, Letícia Lima; AGUIAR, Marcos José Burle de. Triagem neonatal: o que os pediatras deveriam saber. J. Pediatr. (Rio J.), Porto Alegre, v. 84, n. 4, supl. p. S80-S90, Aug.  2008.