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!!"#$"%!& %& Carolina A. Araujo Depto de Patologia (FMB) Laboratório de Imunologia de Tumores (IBB) carolina.almeida.araujo@gmail.com As fitas servem de molde para a síntese de novas moléculas !!"#$"%!& !& Propostas dos esquemas alternativos de replicação Modelo proposto por Watson e Crick Cada duplex filha deveria ser composta de uma fita completa herdada da duplex parental e uma fita completa recém- sintetizada. Comprovado por Meselson e Stah (1958). !!"#$"%!& '& Genoma bacteriano: uma única origem para a replicação Genoma eucarionte: muitas origens de replicação Pontos de origem = Regiões do DNA ricas em bases A-T !!"#$"%!& (& DNA polimerases – presentes em procariotos e eucariotos atividade catalítica = adicionam desoxirribonucleotídeos à extremidade em crescimento de um primes de fita simples. Garantia de alta fidelidade durante a duplicação = discrimina os 4 diferentes nucleotídeos possíveis DNA polimerase I – Remove os primers de RNA no final 5’ de cada fragmento de Okasaki e os repõem com DNA. DNA polimerase II – Função ainda é incerta. DNA polimerase III – Sintetiza fitas de DNA durante a replicação Somente sintetiza uma nova fita a partir de uma extremidade 3’. Taq DNA polimerase DNA polimerase termoestável amplamente utilizada em rotinas de laboratórios de biologia molecular em reações de PCR. Thermus aquaticus !!"#$"%!& $& 5’ 3’ A DNA polimerase necessita de extremidade 3’-OH livre para adicionar novos nucleotídeos. 5’ 3’ Nova fita Fita primer Síntese de DNA é assimétrica !!"#$"%!& )& http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P0 RNA primase - substitui fragmentos de primers RNA-DNA Topoisomerase I e II - Auxiliam o enrolamento positivo da origem de replicação Helicase - Separação da dupla hélice Proteína ligadoras do DNA de fita simples Exonucleases DNA polimerase III - síntese da fita molde líder 5’ – 3 DNA polimerase I – síntese da fita molde tardia – 3’ – 5’ DNA ligase - liga os fragmentos de Okazaki Fragmentos de Okazaki - Pequenos fragmentos de DNA da região 5’ sintetizados na cadeia tardia durante a síntese de DNA. !!"#$"%!& *& http://www.youtube.com/watch?v=AJNoTmWsE0s
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