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REPLICAÇÃO DO DNA ANNA ROCHA è O que é: -Processo de duplicação da molécula de DNA -Ocorre na fase S do ciclo celular -Assegura que a célula entre no processo de divisão celular com dobro do seu material genético -Essa replicação é importante para dar origem a novas células que devem ter a capacidade de produzir RNA mensageiro + proteínas. Características gerais da replicação: -Ela requer várias enzimas, proteínas e sequencias de DNA -É semiconservativa (a fita recém sintetizada preserva a fita molde de DNA) -Inicia com sequencias chamadas – Origem (ricas em Adenina e Timina, por possuir 2 pontes de hidrogênio) -A síntese de DNA é iniciada por pequenos fragmentos de RNA – os Primers -Replicação bidirecional -Modelo Semiconservativo è Origem: Procariotos: uma origem de replicação. Eucariotos: múltiplas origens de replicação è Onde inicia: Replicons: início da replicação em várias origens ao longo do genoma. è Em qual direção acontece? A replicação é bidirecional. Vai de um ponto de origem (replicon) e se propaga até o replicon vizinho. Envolve crescimento de duas novas fitas em sentidos opostos à forquilha de replicação, que avança em duas direções. è Como acontece a iniciação: 1. Abertura da fita de DNA pela enzimas Helicases Topoisomerase (DNA girase): evitam a super helicoidização na ponta da forquilha ainda com a fita fechada. 2. Estabilização das fitas abertas, impedindo o seu fechamento pelas proteínas: SSB (Single- stranded DNA binding ) è Principais enzimas: -DNA polimerase DNA polimerase: adição de desoxirribonucleotídeos à ponta 3’ (OH) de uma cadeia de nucleotídeos em crescimento. dATP-T dGTP-C dCTP-G dTTP-A Molde: um único filamento de DNA que foi exposto pela abertura da dupla hélice. DNA polimerases: realizam a síntese de DNA na forquilha de replicação sempre no sentido 5’ - 3’. -DNA polimerase III (pol III) Realiza a síntese de DNA na forquilha de replicação através da incorporação de nucleoídeos nas fitas contínua(sem interrupção 5’-3’) e descontínua (mais lenta 3’-5’) ANNA ROCHA -DNA polimerase I (pol I) Atividade de exonuclease de 3’ para 5’: remoção das bases mal pareadas Muito lenta (20 nucleotídeos/s) e dissocia- se do DNA após incorporar 20-50 nucleotídeos. è Como a DNA polimerase inicia a incorporação de nucleotídeos? A partir de iniciadores (primers) adicionados previamente à fita de DNA aberta Primers- pedaços de RNA è Replicação 1. Início da síntese de uma nova cadeia: adição de um primer (filamento curto de RNA), realizado pela enzima primase. 2. No filamento contínuo (leading), apenas um primer é adicionado. 3. No filamento descontínuo (lagging), cada fragmento de Okazaki (trechos de DNA formados durante a replicação descontinua) precisa de um primer. 4. A cadeia é estendida pela Pol III; 5. A Pol I remove os primers de RNA (atividade exonuclease 5’ – 3’) e preenche os espaços com a atividade polimerase 5’ – 3’; 6. A DNA ligase une a ponta 3’ do DNA que preencheu o espaço à ponta 5’ do fragmento de Okazaki posterior. 7. Precisão (fidelidade): menos de 1 erro a cada 1010 nucleotídeos Atividade exonuclease 3’ – 5’ da DNA polimerase I - atua na correção de pareamento incorretos. è RESUMÃO DE COMO OCORRE A REPLICAÇÃO: • Inicia-se com a abertura das fitas de DNA (helicases) • Fitas estabilizadas (SSB ) e relaxadas (toposiomerases) • Incorporação de primers - primase • Incorporação de nucleotídeos (DNA polimerase III: ( direção 5'-3') • Ligação dos fragmentos de Okazaki na fita descontínua ( DNA ligase) • Revisão das fitas formadas - DNA pol I
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