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THIEME Abstrato Resumo Valéria Aguiar Gomes1 Camila de Moraes Bonocher1 Júlio César Rosa-e-Silva1 Cláudia Cristina Paro de Paz2 Rui Alberto Ferriani1 Juliana Meola1 Artigo original606 Palavras -chave ÿ endometriose ÿ expressão gênica ÿ genética molecular ÿ fisiopatologia ÿ PCR em tempo real Métodos Foi realizado um estudo caso-controle com 40 mulheres com diagnóstico de endometriose e 15 mulheres férteis e saudáveis. Amostras pareadas de endométrio eutópico e lesões endometrióticas (implantes endometrióticos peritoneais e ovarianos) foram obtidas de mulheres com endometriose nas fases proliferativa (n ¼ 20) ou secretora (n ¼ 20) do ciclo menstrual. Como controles, amostras pareadas de biópsia endometrial foram coletadas de mulheres saudáveis nas fases proliferativa (n ¼ 15) e secretora (n ¼ 15) do mesmo ciclo menstrual. Analisamos os níveis de expressão dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1 por reação em cadeia da polimerase em tempo real. Conclusão Esses achados sugerem que os genes CD63, S100A6 e GNB2L1 podem estar envolvidos na patogênese da endometriose, uma vez que participam de mecanismos como inibição da apoptose, angiogênese e proliferação celular, que levam à perda da homeostase celular no endométrio ectópico , contribuindo assim para a implantação e sobrevivência do tecido no meio extrauterino. Objetivo O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1, que participam em negociação relacionada à fisiopatologia complexa da endometriose. Objetivo O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1, que participam de mecanismos relacionados à complexa fisiopatologia da endometriose. Resultados Um aumento nos níveis de transcrição dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1 foi observado nos implantes ectópicos em comparação com o endométrio eutópico das mulheres com e sem endometriose, independentemente da fase do ciclo menstrual. A proliferação apoptótica, angiogênica e celular Genes CD63, S100A6 e GNB2L1 são alterados em Pacientes com Endometriose Os genes apoptóticos, angiogênicos e de células externas CD63, S100A6 e GNB2L1 estão alterados em pacientes com endometriose Endereço para correspondência Juliana Meola, PhD, Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Escola de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Bandeirantes, 3900, HC/FMRP, 14049900, Monte Alegre, Ribeirão Preto, SP, Brasil (e-mail: jumeola@yahoo.com.br). Rev Bras Ginecol Obstet 2018;40:606–613. Publicações Ltda, Rio de Janeiro, Brasil3 de fevereiro de 2018 aceito 2Departamento de Genética, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, ISSN 0100-7203. 21 de junho de 2018 Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil 1Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Faculdade de Medicina de DOI https://doi.org/ 10.1055/s-0038-1673364. recebido Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil Copyright © 2018 por Thieme Revinter Machine Translated by Google Métodos Um estudo caso-controle foi realizado com 40 mulheres diagnosticadas com endometriose e 15 mulheres férteis e saudáveis. Amostras pareadas de endomé trio eutópico e de lesões endometrióticas (implantes endometrióticos peritoneais e ovarianos) foram registradas por mulheres com endometriose nas fases proliferativa (n ¼ 20) ou secretora (n ¼ 20) do ciclo menstrual. Como controle, amostras pareadas de biópsia endometrial foram coletadas de mulheres saudáveis nas fases proliferativa (n ¼ 15) e secretora (n ¼ 15) no mesmo ciclo menstrual. Foram analisados os níveis de expressão dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1 por reação em cadeia da polimerase em tempo real. Conclusão Estes achados sugerem que os genes CD63, S100A6 e GNB2L1 podem estar envolvidos na patogênese da endometriose, pois participam de mudança como apoptose, angiogênese e experiências celulares, os quais levam à perda da homeostase celular no endométrio ectópico e, portanto, para o implantar e a sobrevivência do tecido no ambiente extrauterino. ÿ expressão genética ÿ genética molecular ÿ fisiopatologia ÿ PCR em tempo real Resultados Foi observado um aumento nos níveis de transcritos dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1 em implantes ectópicos quando comparados ao endométrio eutópico de mulheres com e sem endometriose, independente da fase do ciclo menstrual. ÿ endometriose Métodos Introdução Palavras-chave Os Genes Apoptóticos, Angiogênicos e de Proliferação Celular cd63, s100a6 e gnb2l1 Gomes et al. 607 Estudos recentes demonstraram as diferenças moleculares entre o endométrio eutópico e o ectópico, sugerindo que padrões distintos de expressão gênica estão envolvidos no desenvolvimento da endometriose.3–10 As alterações na expressão de certos genes-chave em momentos específicos podem determinar e processos fisiológicos anormais e desregulam as vias metabólicas relevantes que influenciam a formação de lesões. Portanto, estudos genéticos são necessários para melhor entender e definir a etiologia molecular desta doença. A endometriose é uma doença ginecológica benigna que afeta pelo menos 10% das mulheres em idade reprodutiva.1 É definida pelo crescimento de tecido endometrial fora da cavidade uterina, conhecido como tecido ectópico. Embora a endometriose seja considerada um distúrbio benigno, existem algumas semelhanças com o câncer; ambos compartilham potencial invasivo para implantação e manutenção de tecido ectópico. Resposta imune alterada, adesão, invasão, proliferação celular, inibição da apoptose, angiogênese, produção local de estrogênio e resposta a lesões são eventos importantes na patogênese da endometriose.2 Participantes e Critérios de Elegibilidade Foram incluídas mulheres com idade entre 18 e 40 anos, índice de massa corporal (IMC) < 30 kg/m2 , não menopausadas, sem uso de terapia hormonal por pelo menos 3 meses antes da coleta da amostra, sem distúrbio reprodutivo ou tumor, e tinha um ciclo menstrual regular. Outros critérios de exclusão incluíram tabagismo, alcoolismo, uso recreativo de drogas, Ética, Cenário e Duração Um estudo de caso-controle foi realizado em pacientes com e sem endometriose nas fases proliferativa e secretora do ciclo menstrual. O presente estudo foi realizado no período de 2010 a 2012 no Setor de Reprodução Humana do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (FMRP-USP), estado de São Paulo, Brasil. O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da FMRP- USP, protocolo HCRP nº 11736/2004, e está vinculado a um banco de tecidos de endometriose, também aprovado, protocolo HCRP nº 9699/2006. Todos os indivíduos (aqueles com endometriose e os controles) assinaram um consentimento informado por escrito para participar do estudo. O presente trabalho foi realizado de acordo com os padrões éticos da Declaração de Helsinque. Estudos anteriores mostraram a desregulação de algunsgenes na endometriose. Esses genes também estão envolvidos em diversas vias, como inibição da apoptose, sobrevivência celular, angiogênese e proliferação celular, o que sugere sua participação na fisiopatologia da endometriose.3,4 Além disso, nosso estudo anterior demonstrou a desregulação do Genes CD63, GNB2L e S100A6 na endometriose. O objetivo do presente estudo foi comparar os níveis de expressão dos genes CD63, GNB2L1 e S100A6 no tecido endometrial de mulheres sem endometriose, no endométrio eutópico e ectópico (implantes endometrióticos pélvicos e ovarianos), no endométrio proliferativo e secretor fases do ciclo menstrual das pacientes com endometriose. Seu envolvimento nos processos mencionados e a correlação com o câncer sugerem que a expressão desses genes possivelmente leva ao estabelecimento e sobrevivência de implantes endometrióticos.3,4 Portanto, a avaliação desses genes pode esclarecer alguns dos mecanismos subjacentes à complexa fisiopatologia de endometriose. Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 Machine Translated by Google Métodos estatísticos As análises estatísticas foram realizadas com o auxílio do software SAS 2003 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Os valores de RQ dos genes foram transformados em log (log10 [2-ÿÿCT t þ10]). Os dados, que são log10 (2-ÿÿCT þ10) transformados, são ilustrados na ÿFig. 1 com média e desvio padrão (DP). As análises foram satisfatórias, com poder de teste (1-ÿ) de pelo menos 80%, e os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando p < 0,05. Utilizamos o teste t para amostras pareadas (endométrio eutópico versus lesões ectópicas) e o teste Welch ANOVA para amostras não pareadas (endométrio controle versus endométrio eutópico de pacientes com endometriose, endométrio controle versus lesões de pacientes com endometriose e lesões peritoneais versus lesões ovarianas). Um pool de cDNA das amostras endometriais (n ¼ 30) obtido do grupo controle foi usado como amostra de referência (calibrador). Os genes de referência GAPDH e ACTB foram usados para normalizar as reações. A quantificação relativa dos genes analisados foi calculada para cada amostra (grupo controle ¼ 30; e grupo endometriose ¼ 40) pelo método 2-ÿÿCT.12 A reação em cadeia da polimerase em tempo real (é qRT-PCR. PCR de transcrição reversa quantitativa em tempo real. RT-PCR é reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa) foi realizada em triplicata para cada amostra usando uma mistura de reação com um volume final de 20 µL consistindo dos seguintes: 10 µL TaqMan Universal PCR Master Mix (2x) (Applied Bio systems, Foster City, CA, EUA), 1 µL TaqMan Gene Expression Assay Mix (20x) (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e 9 µL de cDNA diluído 1:50. As condições da reação foram 50°C por 2 minutos, 95°C por 10 minutos, 40 ciclos de 95°C por 15 segundos e 60°C por 1 minuto. As pacientes do grupo endometriose foram diagnosticadas por laparoscopia e análises histopatológicas. Um cirurgião experiente realizou a laparoscopia e o estágio da endometriose foi determinado de acordo com a classificação da American Society for Reproductive Medicine (1997).11 O grupo controle consistiu de mulheres em idade reprodutiva (18 a 40 anos), que foram submetida à laparoscopia para laqueadura tubária. Essas mulheres não tinham endometriose, fibrose, aderência pélvica ou infertilidade. O RNA foi armazenado a -80°C até processamento posterior. City, CA, EUA). As reações foram realizadas usando o sistema TaqMan Gene Expression Assay, sendo a sonda TaqMan com marcador de corante FAM na extremidade 5' e ligante do sulco menor (MGB) e quencher não fluorescente (NFQ) na extremidade 3'. Esta informação é uma explicação de qual TaqMan Gene Expressed Assay foi usado. (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). Os IDs de ensaio das sondas utilizadas foram CD63 (Hs00156390_m1), GNB2L1(Hs00272002_m1), S100A6 (Hs00170953_m1), GAPDH (Hs99999905_m1) e ACTB (Hs99999903_m1). Extração de RNA total As amostras foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) (1x) (8,50 g/L NaCl, 1,11 g/L Na2HPO4 e 2,81 g/L Na2HPO4,12H2O, 0,20 g/L e KH2PO4, pH 7.0) para remover a solução de RNAlater dos tecidos. Em seguida, o RNA total (50 mg de tecido) foi extraído com o reagente TRIzol (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Após o tratamento das amostras com DNase I (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA), a integridade do RNA foi confirmada pela presença das bandas ribossomais (28S e 18S) após análise por eletroforese em gel de agarose 1%. As concentrações totais de RNA foram determinadas usando um espectrofotômetro NanoDrop 2000c (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA) a 260 nm. qualquer doença sistêmica (hipertensão arterial sistêmica, diabetes mellitus, doenças do sistema imunológico ou doenças da tireoide). A análise de variância (ANOVA) foi realizada incluindo os efeitos das fases do ciclo menstrual (proliferativa e secretora), o tipo de tecido (lesão peritoneal, endometrioma, endométrio eutópico de pacientes com e sem endometriose), bem como as interações entre eles no modelo estatístico. Equipamento ABI PRISM 7500 FAST (Applied Biosystems, Foster Não houve diferença significativa entre os grupos endometriose e controle quanto à média de idade e desvio padrão (33,87 2,69 e 33,5 4,37 anos, A transformação logarítmica foi necessária, pois um dos pressupostos (linearidade) da análise do modelo linear não foi satisfeito. A quantificação relativa (RQ) da expressão dos genes selecionados nas amostras coletadas foi realizada usando um Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 Quantificação Relativa por Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real Uma alíquota (1 µg) de RNA total de cada amostra foi transcrita reversa usando primers aleatórios do kit High Capacity cDNA Archive (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante . A reação foi realizada em Piko Thermal Cycler (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA) por 10 minutos a 25° C; 2 horas a 37°C; 5 minutos a 85 °C e 5 minutos a 4 °C. Amostras de tecido As amostras de tecido pareadas do endométrio eutópico e das lesões endometrióticas (peritoneais ou ovarianas) foram coletadas de 40 mulheres com endometriose durante a laparoscopia, e as amostras endometriais eutópicas foram coletadas usando uma cureta endometrial Euro-Med Novak (CooperSurgical, Inc ., Trumbull, CT, EUA). Foi coletada apenas uma amostra por paciente. No grupo controle, foram coletadas duas amostras de tecido de biópsia pareadas de 15 mulheres saudáveis de acordo com a fase do ciclo menstrual. As fases do ciclo foram determinadas por datação histológica. As amostras foram armazenadas congeladas a -80°C para posterior análise após tratamento com RNAlater Stabilization Solution (Thermo FischerScientific, Waltham, MA, EUA). 608 Genes apoptóticos, angiogênicos e de proliferação celular cd63, s100a6 e gnb2l1 Gomes et al. Coleta e processamento de amostras Resultados Machine Translated by Google Fig. 1 Expressão relativa dos genes CD63, GNB2L1 e S100A6 no tecido endometrial humano ao longo do ciclo menstrual. (A) Expressão relativa do gene CD63 na fase proliferativa, (B) Expressão relativa do gene CD63 na fase secretora, (C) Expressão relativa do gene GNB2L1 na fase proliferativa, (D) Expressão relativa do gene GNB2L1 gene na fase secretora, (E) expressão relativa do gene S100A6 na fase proliferativa e (F) expressão relativa do gene S100A6 na fase secretora. Controlar ¼ do endométrio de mulheres sem endometriose; Endométrio eutópico ¼ de mulheres com endometriose; Lesões ¼ lesões endometrióticas (peritoneais e ovarianas). p < 0,05 versus grupo controle (análises não pareadas). #p < 0,05 versus grupo eutópico (análises pareadas). Os dados são apresentados como desvio padrão médio. Os Genes Apoptóticos, Angiogênicos e de Proliferação Celular cd63, s100a6 e gnb2l1 Gomes et al. 609 Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 Machine Translated by Google Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 610 Genes apoptóticos, angiogênicos e de proliferação celular cd63, s100a6 e gnb2l1 Gomes et al. Discussão Uma das possíveis explicações para as diferenças observadas entre o endométrio eutópico e ectópico das pacientes com endometriose é que a endometriose é uma doença multifatorial, influenciada por fatores genéticos e ambientais. Estudos demonstraram que diferentes ambientes endócrinos, como o líquido peritoneal e o microambiente intraovariano das lesões, são críticos para a implantação endometrial, sugerindo que a interação entre esses diferentes ambientes endócrinos e o endométrio ectópico é importante na fisiopatologia da endometriose.14 Em No presente estudo, detectamos o aumento da expressão do gene CD63 nas lesões endometriais em comparação com o tecido eutópico de mulheres com e sem endometriose. O gene CD63 humano, que codifica uma tetraspanina, foi mapeado na região cromossômica 12q13 e foi descoberto pela primeira vez como um antígeno de superfície abundantemente expresso em células no estágio inicial do melanoma e na superfície de plaquetas sanguíneas ativadas.15 O gene CD63 interage direta e indiretamente com várias moléculas, como integrinas, outras tetraspaninas, receptores de superfície celular, quinases, adaptadores de proteínas e outras proteínas, incluindo o antígeno L6, sintenina-1, TIMP 1 e MT1- MMP.16–27O gene CD63 foi recentemente identificado por se ligar à proteína TIMP-1, que sabidamente está envolvida em diversos processos celulares e no desenvolvimento tumoral.26 O complexo de CD63, TIMP-1 e integrina ÿ1 medeia a ativação de vias de sobrevivência celular por meio da ativação do quinase de adesão focal (FAK), bem como das vias PI3-K e quinase regulada por sinal extracelular (ERK), e à inibição da apoptose.26,28,29 Portanto, hipotetizamos que o aumento no ex a pressão do gene CD63 pode estar relacionada à promoção da sobrevivência de células endometriais ectópicas, favorecendo assim o desenvolvimento de lesões endometrióticas. Outro gene importante que foi sugerido por Meola et al3 e Dentillo et al4 como envolvido na fisiopatologia da endometriose é o GNB2L1, que é comumente chamado de RACK1 (receptor para C-quinase 1 ativada) e está localizado na região cromossômica 5q35.3 . Possui 7 domínios WD (triptofano- aspartato), o que confere à RACK1 o potencial de atuar como um adaptador ou proteína scaffold nas interações com várias moléculas.3,4,30 Muitas funções celulares são atribuídas à RACK1, como o crescimento celular , adesão quimiotática e migração, que são mediadas pela interação com integrina e Src, bem como a supressão da apoptose, anti-inflamação e angiogênese.31–35 O aumento da expressão dos genes CD63, GNB2L1 e S100A6 foi encontrado nas lesões endometrióticas independentemente das fases do ciclo menstrual estudadas (ÿFig. 1). respectivamente). O grupo controle consistiu de 15 mulheres em idade reprodutiva. Quinze amostras de biópsia foram obtidas durante a fase proliferativa e 15 durante a fase secretora do ciclo menstrual. O grupo de endometriose foi composto por 40 mulheres, sendo que dessas pacientes, 21 foram atendidas por infertilidade e 19 por dor pélvica nos ambulatórios de infertilidade conjugal, dor pélvica e endoscopia do hospital universitário da FMRP-USP. Em nosso estudo, a expressão do gene GNB2L1 foi consideravelmente maior nas lesões endometrióticas do que no endométrio eutópico de mulheres com e sem endometriose. Estudos Além disso, o aumento da expressão do CD63 e dos genes S100A6 (na fase proliferativa) e do gene GNB2L1 (na fase secretora) foi detectado no endométrio eutópico das pacientes do grupo endometriose em comparação com o endométrio controle ( ÿFigs. 1A, E e D; respectivamente). No entanto, quando as fases proliferativa e secretora foram comparadas entre si no controle endometrial (CD63 p ¼ 0,52; GNBL1 p ¼ 0,79; S100A6 p ¼ 0,052), endométrio eutópico (CD63 p ¼ 0,38; GNBL1 p ¼ 0,41; S100A6 p ¼ 0,44) e lesões endometrióticas (CD63 p ¼ 0,94; GNBL1 p ¼ 0,49; S100A6 p ¼ 0,24), nenhuma diferença foi observada. O presente estudo identificou o aumento da expressão dos genes CD63, GNB2L1 e S100A6 nas lesões ectópicas de mulheres com endometriose em comparação com o endométrio do grupo controle durante as fases proliferativa e secretora do ciclo menstrual. Além disso, a expressão desses genes aumentou nas lesões em comparação com o endométrio eutópico da mesma paciente com endometriose durante a fase secretora do ciclo menstrual. No entanto, quando o endométrio eutópico das mulheres com endometriose foi comparado com o endométrio das mulheres controle, a expressão dos genes CD63 e S100A6 aumentou apenas na fase proliferativa no endométrio das mulheres com endometriose, e o aumento da expressão do gene GNB2L1 foi observado apenas na fase secretora. O número de lesões peritoneais estudadas nos pacientes classificados como estágio I (n ¼ 6; na fase secretora), estágio II (n ¼ 11; 7 na fase proliferativa e 4 na fase secretora), estágio III (n ¼ 2 ; na fase proliferativa) e o estágio IV (n ¼ 1; na fase proliferativa) foi 20, e o das lesões de endometrioma ovariano estudadas nas pacientes classificadas como estágio III (n ¼ 8; 4 na fase proliferativa e 4 na fase secretora) e o estágio IV (n ¼ 12; 6 na fase proliferativa e 6 na fase secretora) foi 20. Esses resultados estão de acordo com nossos resultados obtidos anteriormente, que mostraram o aumento da expressão dos genes-alvo em lesões endometrióticas em larga escala estudo de hibridização baseado em bibliotecas subtrativas.3 No entanto, no presente estudo, utilizamos RT-PCR para quantificar e confirmar a expressãodesregulada desses genes durante as fases do ciclo menstrual. Essa técnica tem sido definida como o padrão ouro para quantificação de transcritos devido à sua alta sensibilidade e boa reprodutibilidade. Além disso, possíveis resultados falso-positivos podem ser revelados quando esta técnica é utilizada para a validação de metodologias de triagem.13 Os resultados obtidos confirmam o aumento da expressão desses genes em lesões endometrióticas. Os resultados da expressão gênica nos tecidos analisados são ilustrados na ÿFig. 1. Não houve diferença na expressão de genes-alvo entre as lesões peritoneais e ovarianas (dados não apresentados). Assim, as lesões do trioma peritoneal e do endome foram agrupadas para as análises restantes. Machine Translated by Google Referências Os Genes Apoptóticos, Angiogênicos e de Proliferação Celular cd63, s100a6 e gnb2l1 Gomes et al. 611 1 Yang WC, Chen HW, Au HK, et al. Marcadores séricos e endometriais. Não foram observadas diferenças nos níveis de expressão dos genes estudados quando as fases proliferativa e secretora O terceiro gene avaliado foi o S100A6, cuja expressão aumentou consideravelmente nas lesões endometrióticas em comparação com o endométrio eutópico de mulheres com e sem endometriose. O gene S100A6, cujo produto protéico também é conhecido como calciclina, possui sítios de ligação de Ca2+.45 Algumas das funções associadas a essa proteína e alterações na expressão desse gene incluem dinâmica do citoesqueleto, ciclo celular, apoptose, superexpressão em células com proliferação potencial e aumento da indução da proliferação celular.46-51 foram comparadas entre si no controle endometrial, no endométrio eutópico e nas lesões endometrióticas. No entanto, o endométrio eutópico de mulheres com endometriose apresentou expressão aumentada dos genes CD63 e S100A6 na fase proliferativa, enquanto a expressão aumentada do gene GNB2L1 foi observada na fase secretora quando comparada ao grupo controle; esses resultados poderiam ser explicados pelas alterações relacionadas à doença. Embora alguns autores relacionem as alterações da expressão gênica com flutuações hormonais, há poucos estudos e há controvérsias na literatura quanto aos genes estudados. Okada et al62 mostraram que os níveis de mRNA do gene CD63 foram substancialmente reduzidos durante a fase secretora do ciclo menstrual em comparação com a fase proliferativa, e que a expressão dos mRNAs é regulada negativamente pela progesterona, associando esse gene a funções como proliferação e diferenciação do endométrio (decidualização). Em contraste, Brar et al63 não encontraram alteração na expressão desse gene durante a decidualização. Tonget al64 estudou a expressão do gene S100A6 no endométrio humano ao longo do ciclo menstrual e nenhuma alteração foi detectada. Nossos resultados sugerem que a expressão alterada dos genes CD63, S100A6 e GNB2L1 pode estar envolvida na fisiopatologia da endometriose. Isso porque as proteínas CD63, RACK1 e calciclina participam da inibição da apoptose, da angiogênese e da proliferação celular, o que pode levar à perda da homeostase celular no endométrio ectópico. Estudos futuros são necessários para avaliar a função dos genes identificados e caracterizar seus papéis no desenvolvimento da doença. Outro aspecto que deve ser abordado é que nosso estudo partiu da premissa de que a invasão tecidual ocorre devido ao refluxo de células endometriais viáveis. Embora essa ideia ainda seja uma das mais aceitas atualmente, é apenas uma hipótese que não foi confirmada. Agradecimentos Agradecemos a todos os pacientes pela participação no presente estudo e à equipe multidisciplinar da Divisão de Reprodução Humana do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da FMRP- USP pela coleta de amostras e suporte técnico. Liu e cols.52 mostraram que a superexpressão do gene S100A6 em células do estroma endometrial promoveu a regulação positiva da expressão de ÿ-catenina. A ÿ-catenina é um componente essencial da via de sinalização Wnt/ÿ-catenina, que demonstrou ser ativada no endométrio secretor médio de pacientes inférteis com endometriose.53 Essa via está envolvida no controle da proliferação, migração e invasão, que são etapas importantes na patogênese da endometriose. Recentemente, Zhang et al54 demonstraram que a inibição da expressão do gene S100A6 reduziu significativamente a capacidade migratória de células estromais endometriais eutópicas, induziu sua apoptose e teve efeito antiproliferativo. Além disso, tanto os níveis aumentados de proteína quanto os níveis aumentados de transcrição do gene S100A6 foram observados em muitos tipos de tumores.54 Os níveis aumentados de proteína do gene S100A6 promovem a apoptose celular sob estresse oxidativo.55 No entanto, a função pró- apoptótica desse gene é contraditório, pois a expressão reduzida desse gene foi observada durante a apoptose de células de câncer de mama humano, e a expressão do gene S100A6 também demonstrou inibir a apoptose de miócitos cardíacos.56,57 Uma expressão aumentada desse gene aumenta a adesão celular e a inibição da invasão celular e promove a mobilidade de forma ainda não compreendida.58,59 No entanto, quando sua expressão é insuficiente ou regulada negativamente, esse gene inibe a proliferação de fibroblastos, osteoblastos e tumores pancreáticos células.46,60,61 Uma vez que o gene S100A6 está envolvido na progressão do ciclo celular, diferenciação celular, interações com o citoesqueleto e proliferação celular ção, é possível que as alterações na expressão desse gene observadas no presente estudo possam estar implicadas no desenvolvimento da endometriose. Conflito de Interesses Não há a declarar. indicaram que a superexpressão desse gene regula positivamente a adesão e a migração celular.36 O aumento da expressão do gene GNB2L1 e sua interação com o IGF-IR aumentaram a mobilidade das células MCF-7 transformadas, mostrando que esse gene promove o mecanismo independente de ancoragem crescimento de células tumorais ovarianas através da via do fator de crescimento da insulina 1R (IGF-1R)/STAT3, enquanto outros autores relataram resultados discordantes ao analisar a via Src.37-40 Além disso, o gene GNB2L1 também é superexpresso durante a angiogênese e na mama e tumores de cólon, carcinoma de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células escamosas oral e melanoma.31,41– 44 Assim, a regulação positiva da expressão do gene GNB2L1 sugere sua participação em processos como angiogênese, supressão de apoptose e proliferação, que são as etapas envolvidas na patologia da endometriose. Uma limitação do nosso estudo foi a pequena amostra avaliada devido aos critérios restritivos de elegibilidade adotados, limitando a generalização do estudo. Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 Patogênese da endometriose. Best Pract Res Clin Obstet Gynae col 2004;18(02):233–244 Doi:10.1016/j.bpobgyn.2004.01.005 Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2004;18(02):305–318 Doi: 10.1016/j.bpobgyn.2004.03.003 2 Nap AW, Groothuis PG, Demir AY, Evers JL, Dunselman GA. Conclusão Machine Translated by Google Rev Bras Ginecol Obstet Vol. 40 Nº 10/2018 Methods 2001;25(04):402–408 Doi: 10.1006/meth.2001.1262 13 Goodsaid FM, Smith RJ, Rosenblum IY. Desconstrução por PCR quantitativo de discrepâncias entre os resultados relatados por diferentes plataformas de hibridação. Perspectiva de saúde ambiental 2004;112(04): 456–460 A proteína tetraspan CD82 reside nos compartimentos do MHC de classe II, onde se associa às moléculas HLA-DR, -DM e -DO. 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