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Prévia do material em texto

Protocolo de processamento de amostras para MEV 
1. Após a coleta do material, fixá-lo em glutaraldeído 2,5% em tampão fosfato 0,1M pH 7,3 
por 4 horas no mínimo. 
 
Preparo do Tampão Fosfato Monosódico/Dissódico – 0,2M pH 7,3 
Solução A 
2,76g de fosfato monossódico (Na2H2PO4 . H2O) 
100 ml de água destilada 
Solução B 
5,66g de fosfato dibásico (Na2HPO4 . 7H2O) 
100 ml de água destilada 
OU (depende do fosfato que se tem em estoque: verificar a fórmula no frasco) 
7,17g de fosfato dibásico (Na2HPO4 . 12H2O) 
100 ml de água destilada 
 Para obter o tampão fosfato de sódio a 0,2M pH 7,3, misturar 23 ml da solução A e 77 ml da 
solução B. 
OBS: Para obter o tampão fosfato na concentração de 0,1M, basta diluir o volume obtido da 
solução a 0,2M com água destilada. 
 
2. Retirar as amostras do fixador e lavar 3 vezes de 5 minutos cada em água destilada. 
3. Colocar o material imerso em tetróxido de ósmio 0,5% em água destilada por cerca de 
30 a 40 minutos. OBS: o ósmio é um metal pesado, portanto devem-se usar luvas de 
nitrila para manipulá-lo. Usar apenas o suficiente para cobrir a amostra. 
 
Preparo do tetróxido de ósmio 0,5% em água destilada 
Lavar a ampola de tetróxido de ósmio com detergente para que se remova todo possível 
resíduo existente. Deixar de molho em mistura água + detergente neutro por cerca de 2 horas. 
OBS: colocar a água + detergente em um béquer de 250ml, mergulhar a ampola de ósmio e 
usar um funil para manter a ampola imersa na solução. 
Quebrar a ampola de 1g de tetróxido de ósmio dentro de um frasco escuro contendo 50 ml de 
água destilada. 
 Misturar bem com um bastão de vidro e quebrar o restante da ampola que sobrou no interior 
do frasco. 
 Completar para um volume final de 200 ml com água destilada. 
4. Lavar o material por 3 vezes de 10 minutos cada em água destilada. 
 
5. Iniciar a desidratação em série crescente de álcool: 
 
 2 vezes de 10 minutos em álcool 7,5% 
 2 vezes de 10 minutos em álcool 15% 
 2 vezes de 10 minutos em álcool 30% 
 2 vezes de 10 minutos em álcool 50% 
 3 vezes de 15 minutos em álcool 70% 
 2 vezes de 15 minutos em álcool 90% 
 2 vezes de 10 minutos em álcool 100% 
 
6. Levar ao ponto crítico. 
7. Montar nos “stubs”. 
8. Metalizar.