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Jardel C. Bordignon Farmacêutico pela UFSC Habilitação em Análises Clínicas pela UFSC Especialista em Microbiologia Clínica pela PUC-PR Professor no curso de Farmácia do IFPR Professor no curso de Medicina do UNIDEP Diretor Técnico do Grupo Plátano. Data: 17/08/2022 Email...: jardel.bordignon@unidep.edu.br Celular: (46) 98801-6994 IMUNODIAGNÓSTICO mailto:jardel.bordignon@unidep.edu.br Imunodiagnóstico? ´ O que é? ´ Utilidade ´ Doenças infecciosas ´ Detecção e quantificação de diversos parâmetros Ferramentas para diagnóstico de processos infecciosos ´ Visualização do patógeno ´ Cultura ´ Pesquisa de antígeno ´ Pesquisa de anticorpos ´ Detecção do material genético Visualização do patógeno Cultura Pesquisa de antígeno Pesquisa de anticorpos PCR Bactérias +++ +++ + + Grande potencial. Pouco uso. Fungos +++ +++ + + Grande potencial. Pouco uso. Protozoários +++ Exceção: Toxoplasma gondii - + Exemplo: Giardia lamblia + Exemplo: Toxoplasma gondii Grande potencial. Pouco uso. Vírus - - +++ Exemplos: HIV, Hepatite B, rotavírus, Sars-CoV-2 +++ Exemplos: HIV, Hep B, Hep C Sars-CoV-2, sarampo, caxumba, rubéola, CMV... +++ Exemplos: HIV, Hep B, Hep C, Sars-CoV- 2 e outros vírus respiratórios... Helmintos +++ - - - - Alguns métodos utilizados em imunodiagnóstico ´ ELISA: Enzyme linked immuno sorbent assay ´ Quimioluminescência ´ Eletroquimioluminescência ´ Imunocromatografia ´ Imunofluorimetria ´ Imunofluorescência ´ O médico precisa especificar qual metodologia deve ser utilizada? Qual é o real significado de um resultado??? Sensibilidade e Especificidade ´ A sensibilidade de um teste diagnóstico corresponde ao percentual de resultados positivos dentre as pessoas que tem uma determinada doença ou condição clínica. ´ A especificidade é a capacidade do mesmo teste ser negativo nos indivíduos que não apresentam a doença que está sendo investigada VPP = a / (a+b) VPN = c / (c+d) A B Considerações ´ Sensibilidade e especificidade ´ Janela de detecção ´ Independente do método ´ Reações cruzadas ´Anticorpos parecidos ´Ex: HIV e vacina contra H1N1 ´Anticorpos heterófilos O que é melhor pesquisar: ´ Antígeno? ´ Anticorpos? ´ Material genético (PCR)? ´ Visualização (Gram, por exemplo)? ´ Cultura? Pesquisa de anticorpos ´ Qual o significado da presença de anticorpos IgG e/ou IgM contra determinado patógeno? Diagnóstico laboratorial da dengue Diagnóstico laboratorial da toxoplasmose E nem sempre é possível pesquisar IgG e IgM separadamente Em que tipo de amostra biológica é realizada: ´ Bacterioscopia de Gram ´ Cultura ´ Pesquisa de antígeno ´ PCR ´ Pesquisa de anticorpos Caso clínico 29/12/2019 02/01/2020 Toxo IgG + (13,7) + (23,8) Toxo IgM + (14,7) + (16,4) EBV IgG + (62,1) + (61,8) EBV IgM IND (0,6) + (3,4) CMV IgG + (218) + (215) CMV IgM + (3,3) + (4,5) Início dos sintomas em 20/12/2019 Diagnóstico laboratorial da COVID-19 ´ Vírus: Sars-Cov 2 ´ Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 ´ Doença: COVID-19 ´ Coronavirus disease 2019 Princípio dos testes Tipos de exames laboratoriais ´ PCR (reação em cadeia de polimerase) para o Sars-Cov 2: ´ Detecta o material genético do vírus (naso e orofaringe, aspirado traqueal, LBA) ´ Altamente sensível e específico ´ Positivo durante todo o período sintomático, podendo já positivar um pouco antes e permanecer por alguns dias após as manifestações ´ Realizado em laboratório de apoio ´ Método “gold standard” ´ Disponível: SIM ´ Pesquisa de ANTÍGENO do Sars-Cov 2 ´ Detecta antígenos do vírus (naso e orofaringe) ´ Altamente sensível e específico ´ Positivo durante todo o período sintomático, podendo já positivar um pouco antes e permanecer por alguns dias após as manifestações ´ Realizado em nosso laboratório. Resultado em 1 hora após chegada ao laboratório ´ Disponibilidade: segunda quinzena de abril ´ Pesquisa de ANTICORPOS IgM e IgG contra o Sars-Cov 2 ´ Detecta anticorpos (no sangue) ´ Janela de detecção ´ IgM aparece 4 a 7 dias após o início dos sintomas ´ IgG aparece 14 dias após o início dos sintomas ´ É um teste rápido. Resultado em 30 minutos após chegada ao laboratório ´ Disponibilidade: SIM PCR Pesquisa de antígeno viral Pesquisa de anticorpos IgM/IgG Amostra TRS ou TRI TRS (TRI também?) Sangue Direto ou indireto? Direto Direto Indireto (anticorpos) Sensibilidade e especificidade Alta, o melhor de todos Alta Alta Positivo em que momento? Durante sintomas Durante sintomas IgM após 4-7 dias de sintomas Prazo para resultado 4 dias Mesmo dia Mesmo dia Disponibilidade SIM 2a quinzena de abril SIM Cobertura por convênios SIM Ainda sem informações Ainda sem informações Vantagens É o “gold standard”; Diagnostica durante sintomas Rápida realização; Diagnostica durante sintomas Rápida realização; Identifica contato prévio e imunidade Desvantagens Demora para resultado Precisa de confirmação por PCR?? Não é útil para diagnóstico durante sintomas; Precisa de confirmação por PCR?? Período assintomáti co Início dos sintoma s IgM detectáve l Início da produçã o de IgG IgG permanece detectável por anos. Imunidade??? Dias desde a infecção 0 5 9 14 21 28 35 Redução dos sintomas Janela de detecção Declíni o Convalescen ça SARS-Cov 2 RNA e antígeno Anticorpos IgM Anticorpos IgG Sintoma s Interpretação ´ Considerações: ´ Os resultados só podem ser interpretados por um médico ´ Qualquer análise está sujeita há ocorrência de resultado falso-positivo ou falso-negativo, principalmente as pesquisas de anticorpos ´ Esta é um doença de notificação compulsória ´ Essa tabela foi montada com base em dados da literatura e, em alguns casos, na opinião do apresentador, devido à escassez de estudos de desempenho dos testes. PCR Antígeno IgM IgG - - - - Paciente não infectado ou infecção muito recente + - - - Paciente infectado (primeiros dias) + + - - Paciente infectado (primeiros dias) + + + - Paciente infectado já há alguns dias + + + + Paciente infectado há aproximadamente 14 dias - - + - Paciente infectado, possivelmente com baixa carga viral e poucos sintomas OU IgM falso-positivo - - + + Paciente com baixa carga viral, provavelmente assintomático OU Remissão recente da infecção - - - + Infecção ocorrida há, pelo menos, duas semanas Solicitação médica ´ Especificar qual tipo de teste deve ser realizado
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