SDS PAGE - Análise de expressão da proteína de interesse

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Aula 06/02
SDS PAGE
Objetivo: Analisar se a nossa proteína foi expressa nas células.
Para isso, precisamos num primeiro momento ressuspender as células coletadas na aula passada para fazer uma alíquota para o gel de proteína. Ressuspendemos em 4,5mL de tampão para cromatografia e passamos 100uL dessas células ressuspendidas para novo eppendorf. Centrifugamos para obter somente as células. 
Agora então recuperamos nossa alíquota sem indução de IPTG, que vai servir como nosso controle, e adicionamos 20uL de água e 4uL de tampão de amostra, tanto nessa amostra quanto na amostra com as células induzidas com IPTG. Essas células foram então fervidas em banho-maria para que pudessem liberar o conteúdo protéico e então centrifugadas para que todo o resto celular fosse decantado no fundo do eppendorf e pudéssemos recuperar apenas as proteínas celulares. Essa amostra foi pipetada em eletroforese em gel de poliacrilamida para separação das bandas e confirmação da expressão da proteína (Figura 6). 
	Figura 6. Na imagem está indicado o extrato protéico das células antes e após a indução por IPTG. Enquanto todas as bandas permanecem mais ou menos parecidas, podemos observar que a indicada pela seta - que é a da nossa proteína - ficou significativamente mais forte após a indução, o que indica que a indução funcionou como esperado.