1 MEIOS DE CULTURA - noturno (1)

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Crescimento microbiano
Prof.ª Talita Sartori
Bactérias 
Gram;
UNICELULAR;
CULTURA;
PROCARIONTE;
COLONIA;
PLACA DA PETRI;
ÁGAR;
MEIO SELETIVO;
 
A maior parte das bactérias causa doença?
São seres procariontes, unicelulares que podem causar doenças
Procarionte
Antes da carioteca
Eucarionte
Núcleo verdadeiro
Carioteca
TODAS
Não causa doença 
Vivemos com as bactérias em uma relação
Benéfica MUTULISMO
Flora
microbiota
intestino
Microbiota
Patogênica
Microbiota
Dificulta o crescimento das patogênicas
Por competir por espaço e nutrientes
Fibra é um carboidrato, nós humanos não temos enzima para digerir esse carboidrato
Porém a microbiota digere!
Alimentação modula a microbiota
Parto 
“Yakultão de piriquita”
O que e crescimento microbiano?
ou
1
2
COLÔNIAS - grupos de células (visualização sem utilização de microscópio). 
https://www.scienceinschool.org/pt/content/pinturas-em-placas-de-petri
Placa de Petri
Meio de cultura
http://docente.ifsc.edu.br/melissa.kayser/MaterialDidatico/Microbiologia/Aula%204%20Crescimento%20e%20Metabolismo%20Bacteriano%20-%20Aula%20hj.pdf
Crescimento microbiano = aumento do NÚMERO de células e NÃO DO TAMANHO!
As bactérias se multiplicam por fissão binária, um processo que ocorre devido à formação de septos, que se dirigem da superfície para o interior da célula, dividindo a bactéria em duas células filhas. 
Tempo de geração
Curva de crescimento bacteriano
O que necessitam os microrganismos, para seu crescimento no 
ambiente artificial de laboratório?
Químicos 
Meios de cultura 
Água;
Nutrientes;
Fatores de crescimento 
Temperatura;
pH;
Oxigênio;
Pressão osmótica.
Físicos 
Temperatura
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Classificação de bactéria de acordo com a temperatura ótima para crescimento.
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Curiosidade
Thermus aquaticos(Taq polimerase) - PCR 
https://pt.wikipedia.org/wiki/Rea%C3%A7%C3%A3o_em_cadeia_da_polimerase
pH
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Bactérias não gostam de grandes variações de pH
pH
http://www.unirio.br/ib/dmp/microbiologia/nutricao-integral/aulas-teoricas/7%20%20Caracteristicas%20Fisiologicas%20e%20do%20Crescimento%20Bacteriano%2001-2017.pdf
Oxigênio
Aeróbias obrigatórias (estritas) 
Dependem, para a sua atividade, do oxigênio livre do ar 
Anaeróbias obrigatórias (estrito)
 Só crescem na ausência do oxigénio livre, sendo a presença de vestígios de oxigénio tóxicos para estes organismos 
Aeróbios facultativos 
A maioria das bactérias crescem entre necessidades extremas de oxigénio. A maioria destas bactérias têm preferência pelas condições de aerobiose
Microaerófilas 
Estas têm necessidade de oxigénio mas em concentrações consideravelmente inferiores à do ar
Aeróbios
Anaeróbios
Aerotolerante
 Não necessitam de O2, porém crescem melhor sem O2
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Zona óxica
Zona microóxica
Zona anóxica
Tensão de oxigênio
Diminuição
http://www.unirio.br/ib/dmp/microbiologia/nutricao-integral/aulas-teoricas/7%20-%20Caracteristicas%20Fisiologicas%20e%20do%20Crescimento%20Bacteriano%2001-2017.pdf
As culturas são introduzidos na câmara através de um vedador de ar, e o técnico faz uso de luvas acopladas para manipular as culturas.
Pressão osmótica
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Pressão osmótica
https://www.ufjf.br/microbiologia/files/2013/10/Fisiologia-e-crescimento-bacteriano-BIO-e-BAC.pdf
Ágar manitol (7,5 de NaCl)
O ágar manitol é um meio de cultura seletivo. 
• A fermentação do manitol pelas bactérias, leva a produção de ácidos, o que determina a mudança de cor do vermelho para o amarelo. 
• Positivo para Staphyloccus aureus.
Fermentação do Manitol
S. aureus
http://www.profbio.com.br/aulas/ac2_02.pdf
Meios de Cultura
Meio de cultura é um substrato nutritivo capaz de permitir a nutrição e o crescimento dos microrganismos (bactérias, fungos, algas, parasitas) fora do seu ambiente biológico natural, ou seja, é uma preparação de nutrientes utilizada para o crescimento de microrganismos em laboratório.
Os microrganismos introduzidos em um meio de cultura são chamados de inóculo. 
Os microrganismos que crescem dentro ou sobre um meio de cultura são denominados de cultura.
MANOBRAS ASSÉPTICAS PARA SEMEADURA DOS MICRORGANISMOS NOS MEIOS DE CULTURA
As manobras assépticas são técnicas que impedem a entrada de microrganismos presentes no ar ou depositados sobre as diversas superfícies com a poeira, venham a contaminar materiais estéreis do laboratório como meios de cultura, soluções e equipamentos. Também impedem que os microrganismos com que estamos trabalhando nos contaminem ou ao ambiente.
Trabalhar em áreas submetidas a limpeza e desinfecção apenas posteriormente ao uso; 
Trabalhar dentro da “zona de segurança” do bico de Bunsen, ou seja, os recipientes (tubos de ensaio, placas de Petri, pipetas, etc) com meio de cultura devem ser abertos o mais distante possível da chama do bico sem que haja perigo de superaquecimento ou queimaduras;
Flambar ao rubro a alça de platina ou agulha após cada inoculação;
Não deixar esfriar o instrumento antes de obter o inóculo,pois assim garantimos que bactérias oportunistas não contaminem a cultura;
Flambar rapidamente o fundo dos tubos contendo microrganismos ou meio estéril, imediatamente após abri-los, ou antes de fechá-los. 
A tampa do tubo deve ser colocada sobre a bancada, pois assim garantimos que microrganismos da mão do profissional não contaminem a cultura.  
ODD ONE OUT
Manobras assépticas 
Trabalhar em áreas submetidas previamente a limpeza e desinfecção; 
Trabalhar dentro da “zona de segurança” do bico de Bunsen, ou seja, os recipientes (tubos de ensaio, placas de Petri, pipetas, etc) com meio de cultura devem ser abertos o mais próximo possível da chama do bico (uma área de 10cm ao redor da chama do Bico de Bunsen) sem que haja perigo de superaquecimento ou queimaduras;
Flambar ao rubro alça ou agulha antes e após cada inoculação;
Deixar esfriar o instrumento antes de obter o inóculo, dentro da zona de segurança, preferencialmente na parte interna do recipiente que contém o meio de cultura;
Flambar rapidamente a boca dos tubos contendo microrganismos ou meio estéril, imediatamente após abri-los, ou antes de fechá-los. A tampa nunca deve ser colocada sobre a bancada, sendo retirada e mantida segura pelo dedo mínimo da mão, que detém a alça ou agulha durante a inoculação.
 
Métodos microbiológicos
Meios de culturas
Classificação por características funcionais
Meios de transporte:
Carência de fonte de nitrogênio.
São meios inertes, compostos por substâncias que preservam a viabilidade bacteriana e ao mesmo tempo evitam a proliferação desses microrganismos
Exemplos:
Meio Cary Blair ( transporte de coprocultura)
Meio Stuart (transporte de materiais diversos)
Métodos microbiológicos
Meios de culturas
Classificação por características funcionais
Meios de seletivos:
Compostos por substâncias que inibem o crescimento de DETERMINADOS tipos bacterianos
Exemplos:
Ágar Salmonella Shiguella (ASS)- inibe crescimento de bactérias GRAM POSITIVAS
Mac Conkey- inibe o crescimento de bactérias GRAM POSITIVAS
Métodos microbiológicos
Meios de culturas
Classificação por características funcionais
Meios de diferenciais:
Compostos por substâncias que diferem microrganismos que são parecidos
Exemplos:
Mac Conkey- tem na sua composição lactose, portanto, por meio de alteração da cor do meio, o Mac Conkey difere bactérias que conseguem degradar a lactose e bactérias que não conseguem degradar lactose.
Bactérias que possuem a enzima lactase (degradamlactose), são lactose positivas;
Bactérias que não possuem a enzima lactase (não degradam lactose), são lactose negativas
https://br.pinterest.com/pin/5207355794562258/
Métodos microbiológicos
Meios de culturas
Mais utilizados em microbiologia
Ágar Sangue
Meio composto por base rica , bastante nutritivo, o que facilita o crescimento de quase a maior parte dos microrganismos.
Meio característico por apresentar HEMÁCIAS CONSERVADAS, utilizado portanto para análise de hemólise (quebra das hemácias)
Tipos de hemólise observadas no Ágar sangue:
α hemólise – degradação parcial das hemácias
β hemólise- degradação total das hemácias
γ hemólise – ausências de hemólise
Hemólise 
 α caracterizada por uma hemólise parcial, associada com a perda parcial de hemoglobina pelas hemácias, ocorrendo uma zona cinza-esverdeada no meio de cultura ao redor da colônia
  β caracterizada pela lise completa das hemácias que rodeiam a colônia, ocorrendo uma zona transparente (zona de lise total) ao redor da colônia. 
 γ caracterizada pela ausência de hemólise
https://pt.slideshare.net/AlexandraSantos14/princpios-do-diagnstico-microbiolgico
Técnicas de SEMEADURA
Conceito de semear em microbiologia:
Procedimento no qual há transferência de bactérias de uma amostra (secreções, alimentos) para um outro meio de cultura. 
Tipos de SEMEADURA
Estria sinuosa: semear com alça bacteriológica, em zig-zag, o objetivo dessa semeadura é obtenção de intensa massa de microorganismos.
Picada Central: semear com agulha bacteriológica, no centro do Agar, essa semeadura tem o objetivo de verificar fermentação e motilidade em algumas técnicas.
Superfície
Profundidade
1- Quantitativo
2- Esgotamento