Ap3 - Introdução À Biologia Celular e do Desenvolvimento AULA PRATICA 3

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23/06/2021
Introdução à 
Biologia Celular e do 
Desenvolvimento
Aula Prática 03
Prof. Dra. Ana Paula Scaramal Ricietto
• Compreender como ocorre a extração do DNA e
análise laboratorial desse material genético.
Extração de DNA 
do morango: parte I
 Os alunos deverão escolher 3 morangos (ou banana) e remover as folhas,
deixando somente o pseudofruto;
 Peça que coloquem os morangos dentro de um saco plástico limpo (com
fecho – tipo ziploc) para macerá-los com as mãos até que resulte em uma
pasta homogênea;
 Transferir a pasta homogênea de morangos para um Becker;
 Em outro Becker, misturar: 150 mL de água destilada, uma colher de sopa
de detergente líquido neutro e uma colher de chá de sal de cozinha.
Mexer com bastão de vidro para misturá-los. Esse procedimento deve ser
realizado em baixa velocidade para não obter espuma;
 Deixar a mistura em repouso por 30 minutos, mexendo levemente com
bastão de vidro de vez em quando;
Extração de DNA do 
morango: parte I
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DNA
Célula vegetal
Fonte: Adaptado de LadyofHats / Wikimedia Commons. Disponível em https://pt.m.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula_vegetal#/media/Ficheiro%3APlant_cell_structure_pt.svg. Acesso
em 22 mai. 2021.
Núcleo celular
Cromatina e estrutura do cromossomo condensado
Telômero
Centrômero
Braço
Cromossomo
condensado
Histonas
Nucleossomo
s
Solenoides
Poro 
nuclear
Fonte: adaptado de Stackexchange. Disponível em https://biology.stackexchange.com/questions/47944/the-human-has-46-double-chromosomes-or-simple-chromosomes. Acesso em 
22 mai. 2021. 
DNACÉLULA
NÚCLEO CROMOSSOMO
DNA
Fonte: Adaptado de LadyofHats / Wikimedia Commons. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Eukaryote_DNA.svg#/media/File:Eukaryote_DNA.svg. Acesso em 20 jul.
2020. 
Fonte: Wikimedia Commons / Sponk. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Difference_DNA_RNA-ES.svg#/media/File:Difference_DNA_RNA-ES.svg. Acesso em 22 mai 2021.
Evolução da estrutura do DNA
Fonte: PIERCE, B. A. Genética: umenfoque conceitual. 5. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017.
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Estrutura do DNA
1.Análise química: Quando analisaram a composição do
DNA de muitos organismos diferentes, Erwin Chargaff e
colaboradores constataram que a concentração de timina
era sempre igual à de adenina e que a concentração de
citosina era sempre igual à de guanina.
Fonte: SNUSTAD, D. P. Fundamentos de genética. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2020.
Estrutura do DNA
2.Estudos de difração por raios X: Watson e Crick usaram
dados de difração de raios X sobre a estrutura do DNA
apresentados por Maurice Wilkins, Rosalind Franklin e seus
colaboradores. Esses dados indicaram que o DNA era uma
estrutura bifilamentar, altamente organizada, com
subestruturas repetidas a intervalos de 0,34 nanômetro (1
nm = 10–9 m) ao longo do eixo da molécula.
Fonte: SNUSTAD, D. P. Fundamentos de genética. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2020.
Etapas de
extração
Etapas da extração
1. LISE CELULAR
• Rompimento da célula e remoção de membranas
• Detergente: rompem as membranas devido à natureza anfipática
2. PURIFICAÇÃO DO DNA
• Remoção de componentes celulares como proteínas, organelas e restos 
celulares
• Adição de protease
• Acetato de sódio ou amônio
• Fenol/clorofórmio
Etapas da extração
3. PRECIPITAÇÃO DO DNA
• Separação do DNA e remoção dos sais
• Etanol ou isopropanol (gelado)
• Centrifugação (pellet) 
4. REIDRATAÇÃO 
• DNA solubilizado em água ultrapura ou tampão
• Armazenamento -20°C
Células são 
lisadas usando 
um detergente 
que rompe a 
membrana 
celular.
Conteúdos 
tratados com 
proteases e 
RNAse. 
Debris celulares são 
centrifugados formando o 
pellet. O sobrenadante 
contendo DNA é transferido 
para um novo tubo.
O DNA é precipitado 
com etanol. Sua 
forma viscosa 
permite que seja 
enrolado em um 
bastão. 
Fonte: Adaptado de Reading: Basic Techniques to Manipulate Genetic Material. Disponível em https://courses.lumenlearning.com/bio1/chapter/reading-biotechnology-and-genetic-
information/. Acesso em 22 mai. 2021.
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Extração de DNA 
do morango: parte II
 Após 30 minutos, colocar uma peneira sobre um Becker limpo e filtrar a
solução preparada para separar o líquido da pasta do morango;
 Colocar 25 mL da solução filtrada em um tubo de ensaio;
 Depois, colocar 50 mL de álcool comum, sem misturar o álcool com a
solução. O álcool deve ser colocado lentamente pela parede do tubo de
ensaio;
 Aguardar aproximadamente 3 minutos para que ocorra a precipitação
do DNA;
 Visualizar o material no tubo de ensaio.
Extração de DNA do 
morango - II
 Verificar se todos os alunos conseguiram preparar a solução utilizada;
 Verificar se os alunos conseguiram executar todas as etapas da extração
do DNA do morango/banana, compreendendo a função de cada uma das
etapas;
 Verificar se todos os alunos conseguiram obter o material contendo o
DNA do morango/banana;
 Esclarecer as possíveis dúvidas dos alunos quanto à extração do DNA em
célula vegetal.
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