Citologia: Observações e Técnicas

Prévia do material em texto

Citologia
As primeiras observações
 1. As observações de Hooke forneceram a base para o desenvolvimento da teoria celular (Schleiden Schwann), o conceito de que todos os seres vivos são compostos de células.
 2. Anton van Leeuwenhoek, usando um microscópio simples, foi o primeiro a observar os microrganismos (1673).
 • Descoberta de protozoários flagelados
 • Glóbulos vermelhos
 • Espermatozoide
 • Bactéria
O debate sobre a geração espontânea
 3. Até a metade da década de 1880, muitas pessoas acreditavam na geração espontânea, a ideia de que todos os organismos vivos poderiam surgir de matéria inanimada (Jan Baptista Helmont)
 4. Francesco Redi demonstrou que larvas de insetos surgiam na car-ne em decomposição somente quando moscas depositavam seus ovos sobre a carne (1668).
 5. John Needham declarou que os microrganismos poderiam surgir espontaneamente em caldo nutriente fervido (1745).
 6. Lazzaro Spallanzani repetiu os experimentos de Needham e sugeriu que os resultados de Needham eram devido à entrada de microrganismos presentes no ar no caldo nutriente (1765).
7. Rudolf Virchow introduziu o conceito de biogênese: células vivas somente podem surgir a partir de células preexistentes (1858).
 8. Louis Pasteur demonstrou que os microrganismos estão no ar e em todos os lugares e ofereceu provas para a teoria da biogênese (1861).
9. Robert Koch provou que os microrganismos causam doenças. Ele usou uma sequência de procedimentos, hoje chamados de postulados de Koch (1876), para provar que um determinado microrganismo é o causador de uma doença específica.
10. Robert Brown: Núcleo Celular
11. Albert vo Kölliker: Mitocôndria
12. Camillo Golgi: Complexo de Golgi
13. Walter Flemming: Cromossomo e Mitose
14. Paul Ehrlich:
 • Desenvolvimento das técnicas de coloração
 • Corantes: básicos, ácidos ou neutros
 • Coloração de células sanguíneas
 • Fundador da quimioterapia
Microscopia
Microscopia de contraste de fase
 A microscopia de contraste de fase é especialmente útil, uma vez que por meio desta técnica as estruturas internas de uma célula se tornam mais nitidamente definidas, permitindo um exame detalhado dos microrganismos vivos. Além disso, não é necessária fixação (fixar os micróbios à lâmina microscópica) ou coloração da amostra – procedimentos que poderiam distorcer ou destruir os microrganismos.
Microscopia óptica
 Microscopia óptica se refere ao uso de qualquer tipo de microscópio que utilize luz visível para observar amostras.
Microscopia eletrônica 
· Em vez de luz, um feixe de elétrons é utilizado em um microscópio eletrônico.
· Em vez de lentes de vidro, eletromagnetos controlam o foco, a iluminação e a ampliação.
· Cortes delgados de organismos podem ser observados em uma microfotografia eletrônica
produzida utilizando-se um microscópio eletrônico de transmissão (MET). Ampliação: 10.000 a 100.000x. Potência de resolução: 10 pm.
· Imagens tridimensionais das superfícies de um microrganismo podem ser obtidas com um microscópio eletrônico de varredura (MEV). Ampliação: 1.000 a 10.000x. Resolução: 10 nm.
Microscopia de fluorescência
 A microscopia de fluorescência tira vantagem da fluorescência, a capacidade das substâncias de absorverem curtos comprimentos de onda (ultravioleta) e produzirem luz em um comprimento de onda maior (visível). Alguns organismos fluorescem naturalmente sob iluminação ultravioleta; se a amostra que será visualizada não florescer naturalmente, ela pode ser corada com um grupo de corantes fluorescentes, de-nominados fluorocromos
Células que autoflorescem:
• Organelas como mitocôndrias 
• Tecidos ricos em fibras de colágeno
• Lisossomos 
• Células vivas em cultura, como fibroblastos
Confecção de cortes para estudo no microscópio
1. Fixação
• Evitar a autólise
• Endurecer as células
• Aumentar a afinidade das estruturas celulares pelos corantes utilizados na microscopia
2. Microtomia: É um processo em que o espécime contido num bloco de cera passa por um aparelho chamado micrótomo para ser "fatiado" em micrômetros. Na prática da microtomia cortam-se delgadas seções de tecido orgânico para posteriormente olhar no microscópio.
3. Coloração: Os corantes são sais compostos por um íon positivo e um íon negativo, um dos quais é colorido e conhecido como cromóforo. A cor dos chamados corantes básicos está no cátion; a dos corantes ácidos, está no ânion.
Básicos (+): DNA ou RNA
o Azul de toluidina
o Hematoxilina (roxo)
o Azul de metileno
Ácidos (-): Algumas proteínas
o Eosina (rosa)
o Fucsina ácida
o Orange G