Aula 3 Parasitologia

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Universidade Estácio de Sá
Unidade: Madureira
Prof. Dr. Aldo Rodrigues da Silva
PARASITOLOGIA CLÍNICA
TÉCNICAS PARASITOLÓGICAS UTILIZANDO AMOSTRA SANGUÍNEA E 
MÉTODOS INDIRETOS
DIAGNÓSTICOS PARASITÁRIOS NO MEIO TECIDUAL
Os parasitas que podem ser identificados nas amostras de sangue são:
Figura: Plasmodium sp., corado com Giemsa; (b) microfilárias observadas em três dimensões 
(3D); (c) Leishmania sp. corado com Giemsa; (d) Trypanosoma sp. em imagem 3D. Fonte: (a) 
Chadsikan Tawanthaisong/Shutterstock.com; (b, d) Kateryna Kon/Shutterstock.com; (c) 
Anestial/Shutterstock.com.
Figura: Formas promastigotas de cultura de Leishmania sp. em meio LIT (infusão de fígado 
e triptose), coradas pelo método de Giemsa. Aumento de 1.000×. 
Figura: Esfregaço por aposição (imprint) de biópsia de lesão, demonstrando formas
amastigotas intracelulares de Leishmania sp. em macrófagos. (b) Formas amastigotas de
Leishmania chagasi em célula mononuclear de medula óssea. Esfregaços corados pelo
método de Giemsa. Aumento de 1.000×.
Exame parasitológico de sangue
 Exame direto
 Esfregaço sanguíneo
Examinar uma gota de sangue em um 
microscópio e observar o parasita vivo
Parasita fixado e corado.
Método direto
• É aquele feito a fresco, ou seja, executado imediatamente após a coleta do sangue;
• Uma pequena gota de sangue é colocada em uma lâmina e examinada ao
microscópio, utilizando-se a lente objetiva de poder ampliador (recomenda-se a
lente de 40×);
• Esse método requer várias repetições ao longo do dia ou em dias consecutivos, até
que o parasita seja identificado, devido aos pequenos volumes de sangue
examinados;
• Esse método é um método bastante sensível e é o mais recomendado em suspeitas
de infecções agudas, porém, não apresenta uma visualização adequada quanto às
características morfológicas do agente parasitário;
• O método direto ou a fresco permite a visualização do parasita vivo,
movimentando-se;
Método direto
é necessário repetir o 
exame para se ter 
certeza do diagnóstico.X
Vantagens
• Facilidade
• Rapidez de manuseio
Desvantagens
É necessário repetir o
exame para se ter
certeza do diagnóstico.
Método indireto, ou esfregaço
• Consiste na técnica de esfregaço, também conhecida como distensão sanguínea;
• É realizado com a finalidade de se realizar a contagem e a identificação de
anormalidades nas células do sangue;
• O esfregaço permite a avaliação dos parasitas no sangue — em especial, dos
tripanossomos, das microfilárias e da malária;
• A técnica do esfregaço sanguíneo possibilita analisar a morfologia das células e
fornece informações a respeito da quantidade de glóbulos brancos e plaquetas no
sangue;
• Há dois formatos de esfregaços: o esfregaço em camada fina (gota estirada) e o
esfregaço em camada espessa(gota espessa);
Método indireto, ou esfregaço
Figura: Técnica para o preparo de um esfregaço delgado, em lâmina de microscopia, para posterior coloração e pesquisa de
hemoparasitos. (1) Duas gotas de sangue, geralmente obtidas de punção da polpa digital, são transferidas para uma lâmina de
microscopia. (2 a 4) A amostra de sangue é estendida sobre a lâmina, com o auxílio de uma segunda lâmina, formando um
esfregaço delgado. A parte inferior da figura mostra alguns problemas técnicos frequentemente observados no preparo de
esfregaços sanguíneos: (a) esfregaço excessivamente espesso; (b) esfregaço preparado com sangue parcialmente
coagulado; (c) estiramento inadequado da amostra ou volume de amostra muito pequeno; (d) amostra oleosa; (e)
esfregaço tecnicamente adequado.
Esfregaço em camada fina 
Método indireto, ou esfregaço
• Apresenta uma menor sensibilidade ao diagnóstico, devido à
quantidade da concentração sanguínea utilizada para a execução da
técnica;
• Permite ao profissional a classificação e a identificação
morfológica do parasita e da sua espécie, permitindo que haja uma
melhor visualização;
Esfregaço em camada espessa 
Método indireto, ou esfregaço
• É mais simples e também mais eficaz no diagnóstico da parasitose;
• Esse método é bastante utilizado para o diagnóstico da malária;
• Essa técnica é baseada na visualização do parasita, por meio de microscopia
óptica, depois da realização da coloração com método de Giemsa ou Walker;
• A técnica do esfregaço espesso permite uma diferenciação mais específica dos
parasitas após a coloração do material, permitindo também a identificação do
estágio de desenvolvimento do parasita no sangue periférico;
Para a execução do esfregaço de camada espessa:
• Deve-se colocar pequenas gotas de sangue nas posições relativas aos vértices de
um quadrado imaginário de aproximadamente 1 cm2
• Em seguida deve-se uni-las com um movimento circular, utilizando um palito
descartável ou o vértice de uma lâmina comum.
• Deve-se deixá-las secar em temperatura ambiente por 10 a 12 horas antes do
procedimento de coloração
Esfregaço em camada espessa 
Método indireto, ou esfregaço
Esfregaço em camada espessa 
Método indireto, ou esfregaço
Técnicas de concentração de sangue
Procedimentos de concentração são utilizados quando os parasitas não 
são diagnosticados nos esfregaços espessos e quando a taxa de 
parasitismo é baixa.
• Centrifugação em tubo micro-hematócrito
• Técnica de Strout
Doença de Chagas
• Técnicas de Knott
• Filtração em membrana 
Filariose linfática
Técnicas de concentração de sangue
• Centrifugação em tubo micro-hematócrito
Coleta da amostra de sangue 
capilar ou do venoso em um 
tubo micro-hematócrito
Centrifugado em baixa rotação de 160 g
Técnicas de concentração de sangue
• Centrifugação em tubo micro-hematócrito
os tripomastigotas presentes se concentram 
na interface entre o plasma e os eritrócitos, 
em cima do creme leucocitário
Pode-se observar o movimento do flagelo em uma
lupa entomológica
Técnicas de concentração de sangue
• Técnica de Strout
https://www.youtube.com/watch?v=F9xp-PRYsGo
Técnicas de concentração de sangue
• Técnicas de Knott
A técnica consiste na
mistura de 1 ml de
sangue coletado com
10 ml de formalina 2%.
Centrífugar
Sedimento
Esfregaço e Análise 
ao microscópio
Técnicas de concentração de sangue
• Filtração em membrana 
Técnicas de concentração de sangue
• Filtração em membrana 
Diagnósticos parasitários no meio tecidual
Nos tecidos humanos, é possível encontrar diversos parasitas; entre 
eles, destacam-se os dos gêneros:
Músculo cardíaco infectado por T. cruzi. 
Formas amastigotas (seta preta).
Fragmento de pele
Diagnósticos parasitários no meio tecidual
As amostras teciduais que apresentam o objetivo de identificar 
parasitas são sempre enviadas ao laboratório em diferentes formas: 
• Espécimes frescos, materiais de biópsias usados para o exame 
direto a fresco;
• Preparações prensadas; 
• Esfregaços em lâmina por aposição; 
• Tecidos triturados para a semeadura em meios de cultura 
apropriados ou para a inoculação em animais de experimentação.
Esfregaço por aposição
Diagnósticos parasitários no meio tecidual
Na pele, é possível diagnosticar parasitas como
Leishmania spp., Entamoeba histolytica, Acanthamoeba
spp., Onchocerca volvulus e Mansonella streptocerca
Esfregaço por aposição
Diagnósticos parasitários no meio tecidual
Método do fragmento superficial da pele
As microfilárias abandonam o fragmento da 
pele e podem ser observadas de modo ativo 
em uma lente objetiva 10x (coloração de 
Giemsa)
Amostra= fragmento + salina 0,85%
30 a 60 min
Avaliação parasitológica por método de imagem
Tipos de colorações utilizadas para esfregaços 
sanguíneos e para exames de biópsia
Giemsa
• É utilizada para se diferenciar a morfologia nuclear e citoplasmática de 
eritrócitos, leucócitos, parasitos e plaquetas; 
• Essa coloração é indicada em esfregaços estirados, os quais são 
fixados em álcool metílico, e em esfregaços espessos, que não 
necessitam de fixador, uma vez que a lise das hemácias é importante 
para facilitar a visualizaçãoda amostragem;
Tipos de colorações utilizadas para esfregaços 
sanguíneos e para exames de biópsia
Giemsa
Leishman
Tipos de colorações utilizadas para esfregaços 
sanguíneos e para exames de biópsia
• Apresenta em sua composição eosina amarelada e produtos
da oxidação do azul de metileno.
• As lâminas preparadas com essa coloração não apresentam
durabilidade e muito menos qualidade quando comparadas
com o método de Giemsa; porém, é uma técnica muito
utilizada
• Fácil execução e rapidez
Leishman
Tipos de colorações utilizadas para esfregaços 
sanguíneos e para exames de biópsia
Field
A coloração de Field é utilizada para analisar esfregaços espessos na suspeita de
malária. Nesse caso, o esfregaço não é fixado, porém, precisa estar seco, para que
seja facilitada a observação
Wright
A coloração de Wright é indicada em esfregaço estirado de sangue, para a detecção
de parasitas no sangue. Esse método não apresenta a mesma qualidade que a
Giemsa no caso de esfregaços espessos. Nessa coloração, os esfregaços não
precisam de fixador, mas a fórmula do corante precisa ter álcool metílico
Tipos de colorações utilizadas para esfregaços 
sanguíneos e para exames de biópsia