Relatorio Aula Pratica 1 - AC II

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Relatório aula prática I
Análises Clínicas II
NOME: Helena Haydée Rezek de Sá Pereira Cossiello			RA: 2646913
NOME: Larissa Lisum Cavasini Fernandes					RA: 2161499
NOME: Janeslay Suellen Silva						RA: 2507630
NOME: Simone Grazziotin Foss 						RA: 1848648 
NOME: Karina Silva 							RA: 1792087
1) Materiais e equipamentos: 
· Luvas de procedimento;
· Jaleco;
· Álcool 70%;
· Álcool éter;
· Papel toalha;
· Algodão;
· Luvas de Procedimento;
· Material biológico (Urina e bactérias já semeadas);
· Bico de Bunsen;
· Fósforo;
· Alça microbiológica calibrada 1µL;
· Agulha de inoculação;
· Ágar MacConkey (meio de cultura);
· Ágar Cled (meio de cultura);
· Solução salina;
· Estante;
· Estufa Microbiológica;
· Lâminas;
· Suporte coloração de gram;
· Garra de madeira;
· Corantes da coloração de gram;
· Macroscópio;
· Óleo de imersão;
· Cloreto férrico 10%;
· Pipeta Pasteur;
· Peróxido de hidrogênio 3%;
· Tubos de ensaio para provas bioquímicas;
· Caneta permanente para vidro;
2) Materiais e equipamentos: 
2.A) Urocultura: Coleta da urina (jato médio) após higienização adequada. Transporte: temperatura ambiente (20-25°C) processadas até 2horas. Após esse tempo: Refrigeração 2-8 °C até 24h. Volume mínimo: 2mL. Escrever nome, data e horário da coleta no pote estéril.
Neste método utilizamos uma amostra de urina fresca, coletado em pote estéril, com a higienização adequada e devidamente nomeada.
Para iniciarmos a análise foi realizada a desinfecção da bancada com álcool 70% de forma circular para limpar e no método varredura para eliminar possíveis endosporos.
Após a desinfecção, acender com o auxílio do fosforo, o bico de Bunsen em chama oxidativa. Semear primeiramente no meio de cultura enriquecedor, ágar Cled (semeadura quantitativa), que deve ser devidamente identificado com nome, data e horário.
Homogeneizar a amostra de urina. Em seguida, com uma alça de semeadura calibrada de 1µL flambada e fria, coletar a amostra biológica em silêncio, sempre respeitando o halo do perímetro do bico de Bunsen para que não haja contaminação. Fazer um risco central para descarregar a amostra no centro da placa de petri e complementar com movimentos em estrias, virar a placa e repetir o movimento no sentido contrário em toda a placa.
Depois utilizamos o ágar MacConkey (semeadura seletiva) repetindo o mesmo processo. Na sequência, os meios de cultura devem ser levados para uma estufa microbiológica a 37°C, por 24 a 48 horas.
2.B) Esfregaço bacteriano:
Fazer a desinfecção da bancada e acender novamente o bico de Bunsen. Identificar a lâmina e colocá-la na garra de madeira. Pegar a solução salina a 0,9%, flambar o bico e com o auxílio da alça de semeadura também flambada, colocar uma gota na lâmina. Flambar e fechar o tubo com a solução salina.
Flambar novamente a alça, esperar esfriar para não matar as colônias de bactéria e na sequência coletar um pequeno inóculo já crescidas no meio de cultura. Com a alça, colocamos as bactérias na lâmina, homogeneizando com a solução salina. Passamos a lâmina na chama por 3 vezes do bico de Bunsen para fixar o esfregaço. Aguardar a lamina secar no suporte de coloração de gram.
2.C) Coloração de Gram:
· Cristal violeta (1 min.)
· Lavar com água corrente
· Lugol (1 min.)
· Lavar com água corrente
· Descorar com Álcool-acetona
· Lavar com água corrente
· Safranina ou Fucsina diluída 1/10 (30 segs.)
· Lavar com água corrente
· Secar e examinar ao microscópio em objetiva de imersão (1000X). 
Com o esfregaço concluído, utilizamos a lâmina para fazer a identificação da bactéria através da coloração gram.
No suporte de coloração, corar a lâmina com cristal violeta, por 1 minuto. Lavar em água corrente, na sequência, utiliza-se o Lugol por mais 1 minuto. Novamente, lavar em água corrente. Usar o descorante com álcool-acetona por 15 segundos. Lavar a lâmina em água corrente. Por último, adicionar o corante Fucsina por 30 segundos. Lavar novamente e esperar a lâmina secar. Caso core de rosa, sabemos que são bactérias bacilos gram-negativos.
Para concluir esse processo, pingar uma gota de óleo de imersão e observar a bactéria no macroscópio, num aumento de 1000x. Após visualizar, limpar a lente com álcool éter e algodão e descartar a lâmina. 
2.D) Semeadura em série bioquímica: 
Repetir o mesmo critério de desinfecção da bancada e com auxílio da alça microbiológica em agulha, sempre flambada e fria para não matar as colônias ao longo dos procedimentos, coletar de 3 a 4 amostras de bactéria e colocá-la nos 6 tubos de ensaios pré-preparados para as provas biológicas.
Iniciar pelo citrato (tubo verde), inserir a alça microbiológica agulha até o final e retirar em movimentos de estrias, na sequência colocar a amostra no tubo de TSI (vermelho) repetindo o processo. No tubo de fenilalanina (transparente) a alça deve ser inserida ao centro e retirada em movimentos de estria. No caldo lisina (roxo) a alça deve ser inserida de forma reta, homogeneizando no tubo, na motilidade+indol (transparente semi-sólido) a alça deve ser inserida no centro e retirada rapidamente e por último, no tubo de uréia (laranja claro), adicionar a alça e retirar em movimentos de estrias. Nunca esquecendo de flambar a alça entre as séries bioquímicas, flambar a boca dos tubos para a desinfecção, e deixando-as levemente abertas por serem anaeróbias facultativas.
3) Resultados: 
3.A) Leitura Urocultura (alça de 10µl):
1 colônia = 102 UFC/mL 
1 a 9 colônias = 102 UFC/mL
10 a 99 colônias = 103 UFC/ml 
100 a 999 colônias = 104 UFC/mL
a partir de 1000 colônias = 105 UFC/ml (ITU)
3.B) Desenhe a bacterioscopia: 
3.C) Leitura da série bioquímica: 
Foi utilizado os resultados das provas bioquímicas em teste realizado em laboratório durante a aula pratica. Resultado: Esherichia coli
CITRATO – 
CALDO LISINA +
UREIA –
FENILALANINA –
INDOL +
MOTILIDADE + 
TSI = GLICOSE +
SACAROSE + 
LACTOSE +
GÁS GLICOSE +
H2S –
 
4) Discussão: O paciente analisado possui infeção de urina? Justifique. 
Apesar de apresentar o crescimento de colônias nas amostras da paciente H., o índice de leitura foi de 103 UFC/ml bactérias, considerando os dois meios de Cultura, Cled e MacConkey. Portanto o valor não sugere infecção.