Reações de Caracterização de Proteínas

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ROTEIRO AULA PRÁTICA – BIOQUÍMICA GERAL
Profª. Ayd Mary Oshiro
AULA PRÁTICA - 04
DESENVOLVIMENTO DA PRÁTICA TRABALHANDO DE 2 EM 2 COLEGAS
LEVAR CANETA PERMANENTE PARA IDENTIFICAR VIDRARIA
REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
As proteínas são constituídas por aminoácidos ligados através da ligação peptídica. Este tipo de 
ligação corresponde ao grupo funcional amida. Então as reações que caracterizam as proteínas, são 
reações gerais que acabam por identificar o grupo amida.
As reações denominadas de Biureto e Ninhidrina são gerais e o produto formado apresenta cor 
lilás que caracteriza a presença de proteína na amostra pesquisada. A primeira é realizada a frio e a 
segunda depende do aquecimento em banho Maria fervente.
I. REAÇÃO DE BIURETO
Soluções alcalinas que contenham biureto desenvolvem uma coloração violeta, quando em 
presença de sulfato de cobre (CUSO4). Esse fenômeno deve-se à formação de um complexo entre o íon 
Cu2+ e os átomos de nitrogênio presentes na molécula do biureto. O esquema abaixo representa um 
modelo da formação desse complexo: 
Interação biureto / Cu2+
Observe o esquema abaixo, que representa a 
interação entre as ligações peptídicas de uma 
proteína ou peptídeo com íons Cu2+: 
Interação ligação peptídica / Cu2+
2 COLEGAS FAZEM TUBOS 1 E 2 e 2 COLEGAS FAZEM TUBOS 3 E 4
Enumerar os tubos conforme a tabela abaixo;
Pipetar para cada tubo 2,0 mL do reagente de Biureto
Proceder com as amostras em cada tubo conforme mostra a tabela abaixo
2 COLEGAS 2 COLEGAS
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4
Reagente BIURETO (mL) 2 2 2 2
Leite (mL) 2 - - -
Clara de ovo (mL) - 1 - -
Carne moída - - 1 pitada -
Pele de frango - - - 1 pedaço
Antes de iniciar a aula, começar identificando:
Os ERLENMEYERS como A1, A2, A3, A4 e A5;
Os beckeres com R1, R2, R3, R4 e R5;
As pipetas Pasteur como A1, A2, A3, A4 e A5 colocando dentro dos ERLENMEYERS
As pipetas Pasteur como R1, R2, R3, R4 e R5 colocando dentro dos BECKERES
Homogeneizar, observar e anotar.
O aparecimento de coloração violeta indica que os íons Cu2+ provenientes do CuSO4 formaram 
complexo com ligações peptídicas presentes na amostra, indica que se trata de uma proteína ou 
peptídeo. 
II) REAÇÃO DA NINHIDRINA Profª. Ayd Mary Oshiro
Quando os aminoácidos são aquecidos em solução contendo excesso de ninhidrina, todos 
aqueles que têm grupamento amino livre produzem um composto púrpura, conhecido como Púrpura de 
Rüehmann. Essa reação também pode ser utilizada na detecção de peptídios e proteínas que apresentem 
essa característica.
Em condições apropriadas, a intensidade da cor produzida é proporcional à concentração de 
espécies (aminoácidos, peptídeos ou proteínas) presentes. 
O mecanismo da reação:
PROCEDIMENTO: (Primeiro, acender o bico de Bunsen e colocar Becker com água para 
aquecer)
2 COLEGAS 2 COLEGAS
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4
Reagente NINHIDRINA (mL) 2 2 2 2
Carne moída 1 pitada - - -
Pele de frango 1 pedaço
Clara de ovo (mL) - 1 -
Leite (mL) - - 2
Homogeneizar os tubos, e colocar em BM. Aquecer, observar e anotar.
O desenvolvimento de coloração púrpura indica presença de grupamentos amino, revelando a 
existência de aminoácidos, peptídeos ou proteínas na amostra.