VIROLOGIA DIAG

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METÓDOS DE DIAGNOSTICO
DETECÇÃO DE ANTIGENOS VIRAIS
CARACTERISTICAS BIOLOGICAS DO VIRUS
HEMAGLUTINAÇÃO- TESTE DIRETO 
PROTEÍNAS DE SUPERFICIE VIRAIS CAPAZES DE AGLUTINAR ERITRÓCITOS DE ALGUMAS ESPÉCIES
ORTOMIXOVIRUS E PARAMIXOVIRUS
HEMAGLUTININAS-> VIRUS HEMAGLUTINANTES
OBS: LIMITAÇOES
NÃO DETECTA PEQUENAS QUANTIDADES DE VIRUS
RESTRITO
- INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO- TESTE INDIRETO (SOROLOGIA)
A PROPRIEDADE DE HEMAGLUTINAÇÃO É UTILIZADA PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS CAPAZES DE INIBIR A HEMAGLUTINAÇÃO
ANTICORPOS SE LIGAM NAS HEMAGLUTINAS VIRAIS E INIBEM SUA ATIVIDADE HEMAGLUTINANTE.
· DETECÇÃO DE ANTÍGENOS VIRAIS
-IMUNOFLUORESCENCIA DIRETA
A TECNICA BASEIA-SE NA REAÇÃO DE ANTICORPOS ESPECIFICOS (CONJUGADOS COM SUBSTANCIA FLUORESCENTE) COM O ANTÍGENO PRESENTE NO MATERIAL SUSPEITO.
PODE SER APLICADA EM MONOCAMADA DE CELULAS, EM ESFREGAÇOS CELULARES, TECIDOS FRESCOS, CONGELADOS OU INCLUIDOS EM PARAFINA.
-IMUNOFLUORESCENCIA INDIRETA – RECONHECE O ANTICORPO CONTRA AQUELE VIRUS E NÃO O ANTIGENO VIRAL
A TÉCINCA BASEIA-SE NA REAÇÃO DE ANTICORPOS ESPECIFICOS (CONJUGADOS COM SUBSTANCIA FLUORESCENTE) COM COMPLEEXO ANTIGENO -ANTICORPO PRESENTE NO MATERIAL SUSPEITO
PODE SER APLICADA EM MONOCAMADA DE CELULAS, ESFREGAÇOS CELULARES, TECIDOS FRESCOS.
-ENSAIO IMUNOENZIMATICO DIRETO (ELISA)
PARVO, GIARDIA, VIRUS DA IMUNO FELINA, INFLUENZA FELINA, 
- ENVIANDO P O LAB
-KITS RAPIDOS
(ELISA DIRETO- ANTIGENO)
INDIRETO- ANTICORPOS SEMPRE ERÁ ANTICORPOS COM ANTICORPOS)
-RADIOIMUNOENSAIO
MENOS UTILIZADO ATUALMENTE APÓS O ELISA
USA ISOTOPO RADIOATIVO AO INVES DE ENZIMA.
MÉTODO SENSÍVEL E PODE SER AUTOMATIZADO, PORÉM OS EQUIPAMENTOS REQUERIDOS SÃO CAROS.
-IMUNOCROMATOGRAFIA
KITS DE TESTES RAPIDOS
É BASEADA NA REAÇÃO ANTIGENO-ANTICORPO
AMOSTRA SUSPEITA É PASSADA ATRAVES DE UM FILTRO E ENTAO IMPREGNADA EM UMA MEMBRANA ONDE REAGIRÁ COM O ANTICORPO ESPECIFICO PREVIAMENTE IMOBILIZADO
FALSOS NEGATIVOS POR CONTA DOS TESTES INFERIORES
RESULTADO DEPENDE ESSENCIALMENTE DA QUALIDADE DOS REAGENTES
A PRESENÇA DO ANTICORPO É REVELADA PELO APARECIMENTO DE 
AGLUTINAÇÃO EM LATEX
BAIXA SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE -> FALSOS NEGATIVOS
PODE SER FEITO EM NUMEROS GRANDES DE ANIIMAIS É INTERESSANTE
A LEITURA DA REAÇÃO É VISUAL
-IMUNOBLOTS
OS ANTICORPOS ANTIVIRAIS SÃO DETECTADOS PELO USO DE COMPLEXOS AG-AC MARCADOS COM ENZIMAS PROVOCANDO MUDANÇA DE COR
*OUTROS TESTES SOROLOGICOS 
-SORONEUTRALIZAÇÃO (SN) E IMUNODIFUSÃO EM GEL DE AGAR
SN- UTILIZADO PARA DETECTAR ANTICORPOS QUE POSSUEM CAPACIDADE DE NEUTRALIZAR A INFECTIVIDADE DO VIRUS
AG-AC SE ENCONTRAM E SE LIGAM E A JUNÇÃO DELES FICA VISIVEL, QUANDO NÃO HÁ MIGRACAO A BANDA NÃO FICA VISIVEL
SORONEUTRALIZAÇÃO QUALITATIVA- MAIS SENSÍVEL E ESPECIFICO
EXAMINA-SE O SORO- AMOSTRA SUSPEITA FRENTE A UM VIRUS -PADRAO PREVIAMENTE CONHECIDO E QUANTIFICADO
SE HOUVER ANTICORPOS PRESENTES 
SORONEUTRALIZAÇÃO QUANTITATIVA - IMPORTANTE
TESTE REALIZADO EM MICROPLACAS QUE INCUBAM DILUIÇOES CRESCENTES DO SORO A SER TESTADO.
TESTA-SE VARIAS DILUIÇOES DA AMOSTRA- HAVENDO UMA TITULAÇÃO DE ANTICORPOS.
-DETECÇÃO/IDENTIFICAÇÃO DE ACIDOS NUCLEICOS 
>HIBRIDIZAÇÃO 
>PCR- PROCURA DNA OU RNA- POSITIVO OU NEGATIVO
>RT-PCR- ALGUNS VIRUS RNAS QUE SEVREM PARA ENZIMA CRIPTITASE REVERSE
>Qpcr- pcr quantitativo – ( PCR EM TEMPO REAL) 
-> PCR
A TECNICA BASEIA-SE NAS SEQUENCIAS UNICAS DE NUCLEOTIDEOS DO GENOMA DOS VIRUS, ASSOCIADAS COM TECNICAS DE AMPLIFICAÇÃO E HIBRIDIZAÇÃO DE ÁCIDOS NUCLEICOS, PERMITINDO DETECÇÃO E IDENTIFICAÇÃO DE AGENTES VIRAIS
A DISPONIBILIDADE DAS SEQUENCIAS GENOMICAS DO VIRUS EM BANCOS DE DAODS POSSIBILITOU 
PROTEINAS SÃO DESNATURADAS EM TEMP ALTAS, MAS A TAQ POLIMERASE CONSEGUE SOBREVIVER
DESCOBERTA DA ENXIMA TAQ POLIMERASE
AMPLIFICA EM MILHARES DE COPIAS DO MATERIAL GENÉTICO- DETECTA NA AMOSTRA SE O ANIMAL TEM OU NÃO O VIRUS
A AMOSTRA É COLOCADA EM UM GEL QUE VAI FORMAR BANDAS E SERÁ VISUALIZADA 
PCR QUANTITATIVO NÃO PRECISA DO GEL, POIS A CADA CICLO DEMONSTRA O GRÁFICO (EM TEMPO REAL)
ATUALMENTE É O MAIS UTILIZADO NO DIAGNOSTICO 
VIRUS EM LATENCIA
BOA SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE
CUIDADO COM ERROS DE TECNICAS HUMANAS
O QUE É HIBBRIDIZAÇÃO?
A TECNICA BASEIA-SE NA COMPLEMENTARIDADE DAS MOLECULAS DE DNA E RNA
SONDA LIGADA A ISOTOPO RADIOATIVO OU ENZIMA É COMPLEMENTAR Á SEQUENCIA ALVO
MATERIAL POSITIVO – BOLINHAS EM MARCAÇÃO
MATERIAL NEGATIVO- NÃO APARECEM BOLINHAS
- MULTIPLICAÇÃO DE VIRUS
UTILIZADO EM LAB DE PESQUISA
PRODUÇÃO DE SORO – INOCULAÇAO EM ANIMAIS
PRODUÇÃO DE VACINAS
· VACINAS VIRUS VIVO DIFICADAS- AINDA VIVO MAS PERDE A INFECTIVIDADE- MAIS RISCO, EFEITOS COLATERAIS
· VIRUS INATIVADO – MORTO, MAS POSSUI RESPOSTA IMUNOLOGICA
· VACINAS MODERNAS: RECOMBINANTES- PARTICULAS GEN DESSSES VIRUS PARA ORMAÇÃO DA VACINA, , FACILITA A SUA MELHORA ( PRECISA DE UMA SEQ GEN ESPECIFICA DO VIRUS, CARREGADA DENTRO DA CEL QUE EXPRESSA UMA RESPOSTA IMUNOLOGICA, APENAS A EXPRESSAM DAS PROTEINAS) MUITO BOAS, BOA RESPOSTA IMUNOLOGICA E NÃO HÁ O RISCO DE VIRUS ATIVADO