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Mestrado Profissional em Tecnologia das Radiações em Ciências da Saúde 
INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGÉTICAS E NUCLEARES – IPEN-CNEN/SP 
Roteiro Plano de Trabalho – Apresentação e roteiro – V1 
 
 
 
 
 
Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares 
Av. Prof. Lineu Prestes, nº 2242 - Cidade Universitária - CEP: 05508-000 - São Paulo - SP 
Secretaria do Programa Mestrado em Tecnologia da Saúde- E-mail: smp@ipen.br - Telefones: (11) 3133-9956 
PLANO DE TRABALHO PARA MESTRADO PROFISSIONAL 
 
Candidato(a): Vanesa Maciel Xavier da Silva 
 
Orientador(a): Dr. Emerson Soares Bernardes 
 
Título do Plano de Trabalho: Caracterização biológica do PSMA expresso no câncer de prótata e nas glândulas 
salivares. 
 
Resumo (até 30 linhas):A utilização de radioligantes direcionados ao Antígeno de Membrana Específico da 
Próstata (PSMA) no diagnóstico na terapia do câncer de próstata (CaP) tem-se mostrado bastanteefetiva nos 
últimos tempos. Além de possuir uma boa acurácia diagnóstica em imagens PET com a utilização de 
radiofármacos como 68Ga-PSMA11 e 18F- PSMA1007, na terapia também tem se mostrado promissora. Estudos 
com pacientes com câncer de próstata metastático resistente à castração (CaPMRC) que utilizaram o 177Lu -
PSMA-617 demonstraram um aumento na sobrevida desses pacientes e uma melhora na qualidade de vida, 
devido a diminuição dos sintomas relacionados a doença. Entretanto, os pacientes podem sofrer com efeitos 
adversos após a utilização desses radiofármacos, principalmente com a radiotoxicidade nas glândulas salivares 
(GS)tendo um potencial de desencadear xerostomia, sendo esse um fator limitante para a dose do radiofármaco. 
Alguns autores têm demonstrado que a captação de radioligantes para PSMA não se encontra relacionada à 
expressão de PSMA nas GS, ao contrário do que acontece no tecido de CaP. A captação desses radiofármacos nas 
GS é diferente dos outros tecidos que também expressam PSMA, principalmente com a utilização do 225Ac-
PSMAque na dosimetria demonstra um alto acúmulo do radiotraçador nas GS mas, tem uma baixa captação em 
outros tecidos que também expressam o PSMA fisiologicamente. Outro estudo também demonstrou um acúmulo 
relativamente inespecífico do PSMA na GS,utilizando amostras de tecido biológico de pacientes com 
metodologias como autoradiografia e imunohistoquímica com a aplicação de anticorpos anti-PSMA. Nessas 
técnicas a GS teve uma baixa captação, entretanto, quando foi utilizado o radiofármaco 68Ga-PSMA11 foi 
captado um alto acumulo na GS nas imagens PET. Mediante aos fatos, mais estudos devem ser desenvolvidos 
para uma melhor compreensão da ligação relativamente inespecífica dos radiofármacos com ligantes alvo-
específico para PSMA na GS, sendo o objetivo deste projeto a investigação e caracterização das diferenças 
biológicas do receptor PSMA expressos em tumores de CaP e nas GS, com a finalidade de entender os conceitos 
relacionados à captação inespecífica dos radioligantes PSMA. Para isso, nesse projeto propomos: 1)A avaliação 
dos níveis de expressão protéica e gênica do receptor PSMA nas células tumorais de próstata e daGS através de 
ensaios de Western Blot e PCR eRT-PCR. 2)Avaliação da localização celular do receptor PSMA nas diferentes 
linhagens celulares através de estudos de imunofluorescência. 3)Avaliação da interação do receptor PSMA nas 
diferentes linhagens celulares com outras proteínas através de ensaio de co-imunoprecipitação 4) Identificação 
das proteínas que interagem com o ligante PSMA através de espectroscopia de massa (LC/MS). Este projeto 
poderá trazer um novo olhar na obtenção de ligantes de PSMA mais específicos assim como abrir portas para a 
criação de novas estratégias para evitar xerostomia em pacientes com CaP submetidos ao tratamento com 
radioligante específico para PSMA. 
I. INTRODUÇÃO
1.1. Câncer de próstata 
O câncer de próstata (CaP) tem uma alta prevalência na população masculina, sendo o segundo 
mais predominante entre os homens e o responsável por cerca de 1 em 5 novos diagnósticos de câncer 
nomundo. 1, 2 Um estudo de revisão epidemiológica com dados de 185 países evidenciou que no mundo 
em 2020 foi estimado por volta de 1,4 milhões de novos casos de CaP, com 375 mil mortes e sendo essa, 
 
 
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a quinta causa de morte por neoplasias malignas no mundo.3 E de acordo com Instituto Nacional do 
Câncer (INCA), o CaP atinge por volta de 66 mil pessoas por ano, equivalente a quase 30% das 
ocorrências de novos casos de câncer em homens no Brasil.4 
Os fatores de risco para desenvolvimento de CaP são: idade avançada (75% dos diagnósticos 
mundiais ocorrem geralmente em homens a partir dos 65 anos de idade), hereditáriedade, obesidade e 
exposição a alguns produtos químicos como: arsênio, aminas aromáticas, hidrocarbonetos policíclicos 
aromáticos e produtos de petróleo. 4,5 
O progresso dos últimos anos no rastreamento, diagnóstico e tratamento aumentaram cerca de 5 
anos da sobrevida de aproximadamente 98% dos pacientes com essa doença, e na busca de marcadores 
mais específicos para melhorar o diagnóstico, prognóstico eestadiamento da doença, novas técnicas mais 
precisas e protocolos foram desenvolvidos. 6,7 
 
1.2. Antígeno de Membrana Específico da Próstata (PSMA) 
O antígeno de membrana específico da próstata (PSMA) é uma glicoproteína transmembrana de 
100 kDa codificada pelo gene FOLH1, ele foi identificado em 1987 em uma linhagem celular humana de 
adenocarcinoma da próstata sensível a andrógenos (LNCaP) como alvo para o anticorpo (AC) 
monoclonal 7E11-mAb, um AC que após lise celular interage com um epítopo do domínio intracelular do 
PSMA.8,9Posteriormente, esses AC foi categorizado como um agente de imagem molecular e 
radiomarcado com índio-111 (emissor de raios γ) para comercialização como ProstaScint (111In-7E11-
mAb) para utilização no diagnóstico por imagem de metástases do CaP.10 
O PSMA é altamente expresso na maioria dos CaP e na neovasculatura de vários tipos de tumores 
sólidos. 11,12 Em células normais da próstata, o PSMA é expresso como uma proteína citoplasmática 
chamada PSM´, contudo, pelo splicing no mRNA distinto em células do CaP, a expressão tumoral é como 
uma glicoproteína de membrana integral do tipo II com cerca de 750 aminoácidos (aa), sendo composta 
por um fragmento citoplasmático de 19 aa, um domínio transmembrana de 24 aa e uma parte extracelular 
constituída por 707 aa. 11,13,14 
O PSMA também é conhecido como glutamato carboxipeptidase II (GCPII) e N-acetyl-L-aspartyl-
L-glutamate peptidase I (NAALADase I), possuindo atividade enzimática como folatohidrolase e 
neurocarboxipeptidase, 15,16 sendo também expresso em células normais como: glândulas salivares (GS), 
células do túbulo renal proximal, subpopulação de células neuroendócrinas, sistema nervoso central e 
mucosa intestinal do duodeno, tendo um papel enzimático fisiológico nesses tecidos. No CaP a 
 
 
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expressãodo PSMA aumenta conforme ocorre à progressão da doença, mas o papel enzimático na 
transformação tumoral e metastático ainda não foram esclarecidos. 17,141.3. Radiofármacos para câncer de próstata 
Desde a sua descoberta, vários inibidores PSMA-direcionados (pequenas moléculas) foram 
elaborados, esses inibidores a base de uréia foram desenvolvidos como estrutura química básica o 
glutamato-uréia-lisina (Glu-Ureia-Lis) e são utilizados na maior parte dos ligantes inibidores de PSMA. 
18,19 Após a interação com o PSMA, esses ligantes são internalizados, sendo essa uma boa característica 
para ser utilizado na medicina nuclear principalmente na terapia radionuclídica. 20 
Esses inibidores PSMA-específicos sãoradiomarcados e utilizados no diagnóstico e terapia 
radionuclídica (par teranóstico), como a radiomarcação com gálio-68 (68Ga) um emissor de pósitrons 
utilizado no diagnóstico para aquisição de imagens na tomografia por emissão de pósitrons (PET) e a para 
terapia, a radiomarcação é realizada com o Lutécio-177 (177Lu) um radionuclídeo emissor de partículas β 
e raios γ. 21,22 
Os ligantes de PSMA como o peptídeo PSMA-11 radiomarcado com 68Ga-PSMA11 pode ser 
utilizado na tomografia computadorizada por emissão de pósitrons (PET / CT) para determinar o 
diagnóstico nos casos de câncer de próstata recorrente (CaPR). 22 Em outro estudo, a utilização do 
radiotraçador PSMA-1007 marcado com Fluor-18 (18F- PSMA1007) no PET/CT detectou quase 95% (18 
de 19) das metástases de linfonodos na pelve de pacientes recém-diagnosticados com câncer de próstata 
de alto risco.23 Já o 177Lu-PSMA 617, tem se mostrado promissor na terapêutica e a versão do peptídeo 
PSMA 617 radiomarcado com 68Ga (68Ga-PSMA 617), na aquisição de imagens nos pacientes com 
câncer de próstata metastático resistente à castração (CaPMRC).21,23,24 
 
1.4. Radiotoxicidade associada à radioterapia dirigida ao PSMA 
A utilização de agentes moleculares de imagem no diagnóstico e terapia é favorável, pois 
aumentam a sobrevida dos pacientes e melhoram a qualidade de vida pela diminuição dos sintomas após a 
terapia. 25,3 Entretanto, os pacientes podem sofrer com efeitos adversos após a utilização de radiofármacos 
PSMA- específico, principalmente com a radiotoxicidade nas GS tendo um potencial de desencadear a 
xerostomia, sendo esse um fator limitante para a dose do radiofármaco. 25,26 
A xerostomia induzida pela radiação é debilitante, pois causam problemas na mastigação, 
deglutição, risco aumentado de cáries e infecções na boca o que reduz à qualidade de vida dos pacientes. 
25,27 Logo, algumas estratégias foram desenvolvidas para tentar minimizar os efeitos da radiotoxicidade 
 
 
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nas GS, como o uso de resfriamento local e utilização de vitamina C e suco de limão, porém, essas 
técnicas não foram promissoras. 25,28,29 
Com relação aos ligantes direcionados a PSMA, estudos têm demonstrado que o uso do AC 
monoclonal J591 (AC esse que reconhece um epítopo específico do domínio extracelular do PSMA e que 
após é internalizado), sendo marcado com radionuclídeos Zircônio-89 (Zr-89) e Lu-177 têm se mostrado 
eficiente na redução da radiotoxicidade da GS, pois a captação na glândula nesses estudos não foi 
importante. Contudo, a utilização desses compostos aumenta a mielotoxicidade. 30,31 
Outras táticas para minimizar a radiotoxicidade nas GS estão sendo estudadas, recentemente um 
estudo em modelo animal utilizou o radiofármaco 177Lu -PSMA-617 concomitante com PSMA-11 frio 
para reduzir a atividade molar efetiva. Essa técnica demonstrou poder auxiliar na diminuição da captação 
na GS e nos rins, porém, diminuiu o tempo da captação tumoral, que se recupera com um aumento da 
dose sem induzir efeitos colaterais, segundo os pesquisadores. No entanto, mais estudos pré-clínicos e 
clínicos ainda são necessários. 32 
 
1.5. A captação de radioligantes dirigidos ao PSMA pelas glândulas salivares é específica? 
As pequenas moléculas radioligantes de PSMA têm se demonstrando efetivas na captação 
tumoral, porém, tem uma maior captação na GS em relação aos AC direcionados ao PSMA. Uma 
explicação seria a diferença do peso molecular entre eles. Os AC têm em média 150 kD e os peptídeos 
(pequenas moléculas) ligantes PSMA em média 1,4 kD, isso facilita em uma maior biodistribuição dos 
peptídeos. Outra questão proposta é em relação à carga iônica dos peptídeos ligantes de PSMA que pode 
auxiliar na captação na GS, mas, mudanças dessa carga podem repercutir na afinidade tumoral desses 
peptídeos. 25,26,28 
Entretanto, alguns autores têm demonstrado que a captação de radioligantes para PSMA não se 
encontra relacionada à expressão de PSMA nas glândulas salivares, ao contrário do que acontece no 
tecido de CaP. 33,34Pois a captação dos radiofármacos dirigido ao PSMA nas GS é diferente dos outros 
tecidos que também expressam PSMA fisiologicamente, principalmente com a utilização do PSMA-
617 radiomarcado com Actínio-225 (225Ac-PSMA-617) um emissor de partículas α utilizado na terapia, 
mostrando uma dosimetria de 1 MBq do radiofármaco com um alto acúmulo do radiotraçador nas GS. 
Tendo doses médias na GS de 2,3 Sv e doses médias nos rins de 0,05 Sv. 35 
Outro estudo também demonstrou um acúmulo relativamente inespecífico do PSMA na GS, ele 
utilizou amostras de tecido biológico de pacientes com metodologias como autoradiografia e 
imunohistoquímica com a aplicação de AC anti-PSMA. Nessas técnicas a GS teve uma baixa captação, 
 
 
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todavia, quando foi utilizado o radiofármaco 68Ga –PSMA11 foi captado um alto acumulo na GS nas 
imagens PET. 33 
Mediante aos fatos, mais estudos devem ser desenvolvidos para uma melhor compreensão da 
ligação relativamente inespecífica dos radiofármacos com ligantes alvo-específico para PSMA na GS, 
para criação de novas estratégias para evitar xerostomia e posteriormente serem 
desenvolvidos radioligantes PSMA que não tenham ligações inespecíficas na glândula, e não sendo mais 
esse um fator limitante para a dose do radiofármaco. 
II. OBJETIVOS
O objetivo geral deste projeto é investigar e caracterizar as diferenças biológicas do receptor 
PSMA entre tumores positivos para PSMA e as glândulas salivares com a finalidade de entender os 
conceitos relacionados à captação inespecífica dos radioligantes PSMA. 
 
2.1. Objetivos específicos 
Utilizando células tumorais de câncer de próstata humano (LNCAP-1 e PC-3) e células de 
glândula salivar humana (UM-HMC1 ou UM-HMC2) será realizado: 
1. A avaliação dos níveis de expressão protéica e gênica do receptor PSMA nas células tumorais de 
próstata ou de glândula salivar através de ensaios de Western Blot e PCR em tempo real (RT-PCR). 
2. Avaliação da localização celular do receptor PSMA nas diferentes linhagens celulares através de 
estudos de imunofluorescência. 
3. Avaliação da interação do receptor PSMA nas diferentes linhagens celulares com outras proteínas 
através de ensaio de co-imunoprecipitação e identificação dessas proteínas através de espectrometria de 
massa (LC/MS). 
4. Identificação das proteínas que interagem com o ligante PSMA através de espectroscopia de massa 
(LC/MS). 
III. JUSTIFICATIVA
O intenso acúmulo de radioligantesespecíficos para o antígeno de membrana específico da 
próstata (PSMA) nas glândulas salivares ainda não se encontra bem compreendido até ao momento. Esse 
fato é uma preocupação para as aplicações terapêuticas de radioligantes de PSMA, porque a radiação 
terapêutica irá danificar essas glândulas. Dessa forma, é fundamental um melhor entendimento do 
mecanismo de captação das pequenas moléculas de PSMA nas glândulas salivares, a fim de encontrar 
soluções para reduzir a toxicidade associadas a essa terapia. Este projeto visa entender o comportamento 
 
 
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biológico do receptor PSMA em tumores e compará-lo com as glândulas salivares a fim de entender o 
mecanismo pelo qual o ligante PSMA se acumula inespecificamente nas glândulas salivares. 
 
Descreva brevemente as contribuições pretendidas em cada um dos seguintes quesitos: 
1) Impacto: Este projeto poderá trazer um novo olhar na obtenção de ligantes de PSMA mais específicos 
assim como abrir portas para a criação de novas estratégias para evitar xerostomia em pacientes com 
câncer de próstata submetidos ao tratamento com radioligante específico para PSMA. 
 
2) Aplicabilidade: A aplicação desse presente estudo será a publicação de um artigo científico que 
auxiliará a comunidade científica a ter uma melhor compreensão dos conceitos relacionados àcaptação 
inespecífica dos radioligantes PSMA nas glândulas salivares. 
 
3)Inovação: Criação de conhecimento inédito sobre o receptor PSMA que auxiliará na criação 
edesenvolvimento de novos produtos radiofarmacêuticos visando o diagnóstico e tratamento de câncer de 
próstata. 
 
4)Complexidade: A complexidade da pesquisa está baseada na análise das variáveis do tema de pesquisa 
proposto. Até a data não se encontra claramente definido de qual forma o ligante de PSMA reconhece as 
glândulas salivares, e se essa ligação é específica. Este projeto se propõe a procurar uma resposta para que 
novos radiofármacos específicos possam ser desenvolvidos. 
IV.MATERIAL E MÉTODOS
4.1. Cultura de células 
A linhagem celular humana de câncer de próstata (PSMA positiva) LNCaP (ATCC CRL-1740) 
será mantida em cultura em meio RPMI-1640 (Life Technologies), com 10% de soro fetal bovino 
(GIBCO) e gentamicina (50 µg/ mL) (GIBCO). As linhagens humanas UM-HMC1 ou UM-HMC236 da 
glândula salivar serão cultivadas em DMEM (Life Technologies) suplementada com 10% de soro fetal 
bovino (GIBCO), 20 ng/ml EGF (Sigma-Aldrich), 400 ng/ml hidrocortisona (Sigma-Aldrich), 5 μg/ml 
insulina (Sigma-Aldrich), 50 ng/ml nistatina (Sigma-Aldrich), e uma solução de antibiótico 
e antimicótico (Sigma). As células serão mantidas a 37ºC com 5% CO2. 
 
 4.2 Extrações de RNA e Transcrição reversa 
 
 
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A extração de RNA total das células será realizada com o reagente Trizol (Sigma), segundo o 
protocolo do fabricante. Resumidamente, um pedaço do tumor será ressuspenso reagente Trizol (Sigma). 
A seguir à extração com clorofórmio (Sigma), as amostras serão centrifugadas a 12.000 x g durante 15 
minutos a 4 ºC. O RNA total na fase aquosa será precipitado com 250 μL de isopropanol (Sigma) e, 
subsequentemente lavado com etanol 75%. Por fim, o RNA 
será ressuspenso em àgua desionizada autoclavada e armazenado a -80 ºC. 
O RNA total será convertido em cDNA por transcrição reversa, sendo cada reação preparada num 
volume total de 20 µL. Inicialmente, 5 μg de RNA serão linearizados durante 10 min a 65 ºC na presença 
de 1 μL de “random primers” (100 ng/μL) (Invitrogen) e água desionizada e autoclavada num volume 
final de 11 μL. Após este passo, será adicionada às amostras, 4 μL de buffer 5X, 2 μL de DTT (0,1 M), 
2,1 μL de dNTPs (dATP + dCTP + dGTP + dTTP, 10 mM), 0,5 μL de RNase OUT (40 U/μL) 
(Invitrogen) e 0,5 μL de transcriptase reversa Superscript II (200 U/μL) (Invitrogen). A mistura será 
submetida a 40 ºC (60 min) para a conversão a cDNA. A inativação da enzima será realizada a 70 ºC (10 
min) e o cDNA guardado a -20 ºC. 
 
4.3. PCR em tempo real 
Para a amplificação de cada amostra serão utilizados, 1 μL de cDNA, 1 μL de 
primers forward/reverse específicos (10 μM), 7 μL de água desionizada e autoclavada, 10 μL de SYBR 
Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), obtendo-se um volume final de 20 μL. A reação será 
realizada no equipamento ABI Prism 7000 (Applied Biosystems) e os parâmetros de ciclos térmicos 
obedecerão às instruções do fabricante. Os níveis de GAPDH (controle endógeno) será usado para a 
normalização das amostras e a quantificação relativa 2^-∆∆Ct será usada para analisar as mudanças de 
expressão genica. 
 
Tabela 1. Sequência nucleotídica dos primers utilizados para a análise de PCR em tempo real. 
Gene Primer Forward Primer Reverse 
GAPDH TCTGCTCCTCCTGTTCGACA CCGTTGACTCCGACCTTCAC 
PSMA TCTCACACCAGGTTACCCAG AGGTCCAACATTGTAGGGCA 
 
4.4. Extração protéica 
 
 
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As linhagens celulares serão ressuspendidas em 200 μL de tampão de lise RIPA (50 mM Tris-
HCCl pH 8, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,5% deoxicolato de sódio e 0,1% de SDS), 8 μL de 
um cocktail de inibidores de proteases Complete (Roche) e 2 μL de Na2VO4 (100 mM). As amostras 
serão mantidas sob agitação durante 30 min a 4 ºC e centrifugadas a 12.000 g durante 20 min. O 
sobrenadante será recolhido e quantificado através do kit de ensaio de proteína BCA (Pierce). 
 
4.5. Western Blot 
50 ug de amostra em tampão RIPA será adicionado tampão de amostra 4X (50% 0,5 M de Tris-
HCl pH 6,8 (BioRad), 46% glicerol 87% (Merck), 9,2 % SDS (National Diagnostics), 0,05% de azul de 
bromofenol 0,25% p/v e 0,05% de β-mercaptoetanol (Sigma). As amostras serão fervidas a 95 ºC durante 
5 min e aplicadas em gel SDS-PAGE (gel stacking a 4% e gel resolving a 10%). A corrida será realizada 
a 125 V, seguindo-se a transferência para uma membrana de nitrocelulose (Hybond, GE Healthcare). A 
membrana será bloqueada com uma solução de 5% de BSA em tampão PBS-Tween 0,01% (Sigma) 
durante 1 hora sob agitação. Após bloqueio, a membrana será incubada com os seguintes anticorpos: anti-
PSMA (DAKO) e anti-actina (sigma). Após a incubação com os respectivos anticorpos secundários-HRP, 
as membranas serão incubadas com ECL (GE Healthcare) durante 5 min e posterior revelação. 
 
4.6. Imunoprecipitação seguida de LC/MS 
A 500 μg de extrato celular será adicionado 1 µg de anticorpo anti-PSMA (DAKO). O volume 
será ajustado com o tampão de lise RIPA e o cocktail de inibidores de proteases, para um volume final de 
500 μL. Esta mistura será incubada sob agitação a 4 ºC “overnight”. No dia seguinte, serão adicionadas à 
mistura 100 µL debeads conjugadas com proteína G (Sigma) e incubada a 4ºC, sob agitação durante 4 
horas. A seguir ao tempo de incubação, as amostras serão centrifugadas e o sobrenadante rejeitado. 
Alternativamente, 500 µg de extrato celular serão adicionados a uma resina contendo o ligante PSMA 
previamente imobilizado (CarboxyLink coupling resin, Invitrogen) e incubada sob agitação a 4 ºC 
“overnight”. 
As amostras serão lavadas com tampão RIPA e por fim será adicionado 50 μL de tampão de 
amostra 4X (50% 0,5 M de Tris-HCl pH 6,8 (BioRad), 46% glicerol 87% (Merck), 9,2 % SDS 
(National Diagnostics), 0,05% de azul de bromofenol 0,25% p/v e 0,05% de β-mercaptoetanol (Sigma). 
As amostras serão fervidas a 95 ºC durante 5 min e aplicadas em gel SDS-PAGE (gel stacking a 4% e 
gel resolving a 12%). O gel será corado com Brilliant Blue G-250 e as bandas de interesse serão 
analisadas por LC/MS. 
 
 
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V. CRONOGRAMA DE ATIVIDADES
 2º semestre de 
2021 
1º semestre de 
2022 
2º semestre de 
2022 
1º semestre de 
2023 
Elaboração e entrega 
do plano de trabalho 
X 
Obtenção de créditos X X 
Redação da 
dissertação e 
levantamento 
bibliográfico 
 X X X 
Avaliação dos níveis 
de 
expressão protéica e 
gênica do receptor 
PSMA pelos ensaios 
de Western Blot e 
RT-PCR. 
 X 
Avaliação da 
localização celular do 
receptor PSMA pelos 
ensaios de 
imunofluorescência. 
 X 
Avaliação da 
interação do 
receptor PSMA 
através de ensaio 
de co-
imunoprecipitação. 
 X 
Identificação das 
proteínas que 
interagem com o 
ligante PSMA através 
de espectroscopia de 
massa (LC/MS) 
 X 
Discussão dos 
resultados 
 X X 
Seminário da área X 
Defesa da dissertação. X 
 
 
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