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Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Rio Grande do Sul Campus Bento Gonçalves Aluno: Eduardo Antonio Molon Professora: Larissa Dias Ávila Microbiologia Geral Viticultura e Enologia - 2016 Resumo: Recomendação gerais do emprego para os meios de cultura desidratados e preparados Geralmente os meios de cultura são preparados através da mistura do pó em água destilada e um leve aquecimento para ocorrer a completa diluição, frisa-se a importância de não aquecer demais o meio a fim de que ele não perca suas propriedades e utilidades. Alguns meios de cultura não são capazes de diluírem completamente, por isso no momento da utilização devem ser espalhados de forma uniforme na placa, após o preparo e diluição, o meio de cultura deve ser esterilizado. O pH do meio de cultura, geralmente, se ajusta durante a preparação, de forma natural, porém dependendo da solução e da água utilizada é necessário corrigi-lo, o ajuste pode ser realizado depois da esterilização com soluções ácidas ou básicas. Para a esterilização, o método mais utilizado é a autoclave no qual a amostra permanece 15 minutos a 121 ºC, os meios de cultura que não resistam a altas temperaturas devem ser esterilizados conforme indica o rótulo do produto, já que todos os meios têm no seu rótulo a descrição de como realizar a esterilização. Na autoclave, os microrganismos serão eliminados. Quando os meios possuírem carbono na sua composição, a temperatura não deve exceder os 118 ºC, para não ocorrer a formação de compostos indesejados. Um opcional à autoclave como método esterilização é a filtração, esta utilizada quando os produtos são lábeis, ou seja, compostos químicos pouco estáveis, notadamente ao calor, como certas proteínas, as vitaminas que escorrega ou desliza facilmente; este método consiste em filtrar a solução utilizando uma membrana de celulose. Outro método é a tindalização, que expõe a amostra a 100 ºC por 30 minutos, eliminando, assim, as células vegetativas, mas não os endoesporos. No momento da preparação é importante cuidar pois alguns meios de cultura são tóxicos, por isso devem ser utilizados os equipamentos de proteção. A recomendação é utilizar o meio de cultura logo após seu preparo, mas caso seja necessário guarda-lo questões de umidade, temperatura e recipiente devem ser adequadas para que ele não perca suas propriedades, caso após o armazenamento seja percebido algum tipo de desidratação, o mesmo não deve ser utilizado. Os meios desidratados devem ser armazenados em locais frescos, secos e com luz direta do sol. Quando o meio for aberto para preparo, é necessário evitar deixa-lo muito tempo aberto e no momento de fechar, tapar todas as entradas de ar. Os meios de cultura já prontos podem ser armazenados e, dependendo da sua composição, podem durar meses desde que mantidos em locais e condições adequadas, como regra geral abaixo de 20 ºC e fora do alcance da luz, se existir necessidade de a temperatura ser mais baixa, entre 2 e 8 ºC, haverá um aviso no rótulo. Quando dar-se a utilização do meio em placas é recomendado que ele esteja no estado líquido, para isso se submete a um aquecimento em banho maria, ao utilizar-se da adição o meio deve estar com uma temperatura inferior a 50 ºC, não se deve aquecer o meio mais de uma vez ou manter ele por muito tempo sobre altas temperaturas, por este motivo geralmente se utiliza micro-ondas a fim de que o aquecimento não seja muito intenso. Quando o meio for descartado, é necessário autoclavar por 30 minutos a 121 ºC e apenas depois descarta-lo, assim como as demais vidrarias utilizadas. As composições do meio de cultura descritas são aproximadas, uma vez que o produto sofre muitas mudanças devido a sua composição biológica. Para manter a qualidade do meio, uma análise física, de solubilidade e de pH deve ser realizada.
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