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BIOENERGÉTICA E ATP PRINCÍPIOS DE BIOENERGÉTICA E TERMODINÂMICA Os organismos vivos desenvolveram formas de transdução/transformação de energia, da conversão de uma forma de energia em outra. A energia química é a utilizada para a realização de trabalho biológico, sendo utilizada para a síntese de macromoléculas, trabalho mecânico, manutenção do gradiente químico/elétrico/osmótico, então a grande preocupação da bioquímica é em examinar os processos pelos quais a energia é extraída, canalizada e consumida. Os físicos e químicos, a partir da observação das transformações de energia, formularam duas leis da termodinâmica: A primeira lei é o princípio da conservação de energia; e a segunda é o Princípio da Entropia. Embora os organismos vivos tenham uma organização molecular muito maior que o ambiente que os cercam, eles não violam a segunda lei da termodinâmica, pois a desorganização que eles geram nesse ambiente “compensa” a organização que eles possuem. O Universo é formado pelo sistema reagente (esse sistema pode ser entendido como um organismo, uma célula, substratos de uma reação) e também pelos seus arredores (tudo que está ao redor daquele sistema reagente). Alguns processos físicos e químicos podem ocorrer em SISTEMAS FECHADOS (onde não ocorre troca de matéria ou energia com o ambiente) ou em SISTEMAS ABERTOS (onde há troca de matéria ou energia com o ambiente – é o caso das células e os organismos vivos). Nós, seres humanos, somos sistemas abertos. Retiramos a energia dos nutrientes, uma parte dessa energia é transformada/resgatada como energia química (capaz de realizar o trabalho biológico/celular - como a manutenção do gradiente elétrico/osmótico, síntese de biomoléculas, transferência de informação genética, trabalho mecânico) e outra parte dessa energia será dissipada como calor ou entropia. Apesar de trocar matéria ou energia com o ambiente, os seres vivos NUNCA/JAMAIS estão em equilíbrio com o ambiente. As membranas plasmáticas das células é que vão manter a constituição e a organização celular, possibilitando assim a vida. São três parâmetros que descrevem as transformações de energia que ocorrem durante as reações químicas. A energia livre de Gibbs expressa a quantidade de energia útil, capaz de realizar trabalho biológico. ΔG é a Variação de Energia livre do sistema. Quando ΔG possuir um valor NEGATIVO ocorre LIBERAÇÃO de energia pelo sistema, e a reação é dita EXERGÔNICA. Quando o ΔG possuir um valor POSITIVO ocorre GANHO de energia pelo sistema, e a reação é dita ENDERGÔNICA. No gráfico vemos a representação da transformação do substrato inicial A no produto final C. Entre A e C ocorre a formação do intermediário metabólico B. A, B e C contém, cada um, uma certa quantidade de energia potencial, que está relacionada à natureza e ao número de ligações de cada uma dessas moléculas. De A para B ocorre o GANHO de energia pelo sistema (porque o conteúdo de energia de B é maior que o conteúdo de energia de A). Portanto a variação de energia livre será POSITIVA e a reação é ENDOERGÔNICA. De B para C, ocorre PERDA de energia pelo sistema. O conteúdo de energia de C será menor que o conteúdo de energia de B. Portanto a variação de energia livre é NEGATIVA, ocorrendo uma reação do tipo EXERGÔNICA. Toda reação para ser ESPONTÂNEA no sentido de formação do produto final deve liberar energia, deve ser EXERGÔNICA. A transformação de A em B só será possível porque B será utilizado na reação seguinte transformando-se em C, ou seja, pelo acoplamento das duas reações. Somando-se o valor de ΔG de A→B e B→C, nós observamos que a variação de energia livre total é muito negativa, possibilitando assim a transformação de A em C. Essa estratégia de acoplamento é muito utilizada pelas células quando há numa rota metabólica uma ou mais reações que tenham um ΔG positivo ou zero, ou seja, essas reações serão acopladas à outras reações que tenham um ΔG bastante negativo, de forma que o somatório do ΔG TOTAL será negativo, possibilitando assim a formação do produto final dessa rota. A Variação de Energia Livre (ΔG) é a diferença entre o conteúdo de energia livre dos Produtos e o conteúdo de energia livre dos Reagentes. Quando o ΔG tem um valor negativo, os produtos terão menos energia livre que os reagentes. Quando o ΔG apresentar o valor positivo significa que os produtos têm um maior conteúdo de energia livre que os reagentes. TODAS AS REAÇÕES OCORREM NA DIREÇÃO QUE RESULTA EM UM DECRÉSCIMO DE ENERGIA LIVRE DO SISTEMA. Ou seja, as reações, para serem ESPONTÂNEAS no sentido de formação do produto final, devem ter um ΔG NEGATIVO. Se a reação não apresentar um ΔG Negativo, ela deverá, necessariamente, acoplar-se a uma outra reação que o tenha, de forma que o somatório dos valores de ΔG de cada uma das reações dê um valor de ΔG TOTAL NEGATIVO, possibilitando assim a formação do produto final da reação. Outro parâmetro termodinâmico que descreve as transformações de energia que ocorrem durante as reações químicas é a Entalpia. A Entalpia é o conteúdo de calor do sistema reagente. Também reflete o tipo e o número de rações químicas nos reagentes q nos produtos. O ΔH é a variação de calor do sistema reagente. Quando o ΔH for POSITIVO, significa que a reação química ABSORVE CALOR, ou seja, a reação química é do tipo ENDOTÉRMICA. O conteúdo de calor dos produtos é maior do que o dos reagentes. Quando o ΔH é NEGATIVO significa que a reação química LIBERA CALOR, isto é, a reação química é do tipo EXOTÉRMICA. O conteúdo de calor dos produtos é menor do que o dos reagentes. Entropia é a expressão quantitativa da aleatoriedade ou desordem do sistema. É uma medida de energia devido à dispersão dos produtos. Um ΔS POSITIVO significa que a reação ocorreu com ganho de entropia, ou seja, os produtos são MENOS COMPLEXOS e MAIS DESORDENADOS que os reagentes. Relembrando a segunda lei da termodinâmica que diz que o universo sempre tende para uma desordem cada vez maior. Em todos os processos naturais, a Entropia do universo vai aumentar. Tomemos como exemplo a oxidação total da glicose em CO2 e H2O. A glicose é uma molécula complexa rica em energia. CO2 e H2O são moléculas mais simples, pobres em energia. Parte-se de 7 moléculas: 1 no estado sólido e 6 no estado gasoso, chega-se então a 12 moléculas: 6 no estado gasoso e 6 no estado líquido. Portanto, aumentou-se o número de moléculas e modificou-se o estado físico dessas moléculas, que agora são mais dispersas e ocupam mais espaço, além disso elas são mais pobres em energia. Essas moléculas serão devolvidas ao ambiente, aumentando assim a entropia. As moléculas que compõem um organismo, uma célula, não estão ali ao acaso ou aleatoriamente, elas desempenham uma função, possuem um propósito e uma finalidade, elas são ricas em informação, interagem entre si para manter a homeostasia. São, portanto, pobres em entropia/desordem. Para preservar a sua ordem interna, os organismos vivos desorganizam o ambiente, devolvendo para esse ambiente produtos simples, pobres em energia, e devolvendo também calor (energia que não pode ser aproveitada), ou seja, aumentam a entropia do ambiente para poderem organizar-se internamente. Nas condições existentes nos sistemas biológicos, a variação de energia livre, a entalpia e a entropia estão Quantitativamente relacionadas, conforme mostrado nessa equação. As reações espontâneas no sentido de formação do produto final, ou seja, energéticamente favoráveis, são exergônicas, ou seja, elas têm um ΔG NEGATIVO. Para isso devem ser EXOTÉRMICAS e AUMENTAREM A ENTROPIA. Em Bioquímica utiliza-seo ΔG˚’ que é a variação de energia livre padrão onde a concentração dos reagentes é 1 molar (M) e o pH é 7. A composição do sistema reagente (mistura de produtos e reagentes) continua variando até que o equilíbrio seja atingido. No equilíbrio as velocidades das reações direta ou inversa são iguais e não há nenhuma mudança adicional no sistema. A concentração dos produtos e dos reagentes no equilíbrio é definida pela Constante de Equilíbrio. A variação de Energia Livre padrão (ΔG˚’) está diretamente relacionada à constante de Equilíbrio. Quando um sistema não está em equilíbrio, a tendência pra ele se deslocar em direção ao equilíbrio pode ser representada por uma força na qual a magnitude é expressa como ΔG (variação de Energia Livre), isto é, o ΔG é a força do sistema em direção ao equilíbrio. A magnitude da variação de energia livre para o processo que se encaminha ao equilíbrio depende do quão afastado o sistema está desse equilíbrio. Portanto o ΔG é a expressão quantitativa de quao afastato o sistema está do equilíbrio químico. Ele vai dar a direção das reações e a posição exata que o sistema está do equilíbrio quimico. A variação da Energia Livre Padrão (ΔG˚’) está diretamente relacionada com a Constante de Equilíbrio, e essa equação nos mostra que há uma relação simples entre as duas. Para o cálculo do ΔG˚’ leva-se em consideração a Keq, portanto, a Energia Livre Padrão (ΔG˚’) é uma outra forma matemática de expressar a constante de Equilíbrio (Keq). Quando a Constante de Equilíbrio for MAIOR que 1, o valor de ΔG será NEGATIVO. Quando a Constante de Equilíbrio for MENOR que 1, o valor de ΔG será POSITIVO. E quando A Constante de Equilíbrio for 1, o ΔG será ZERO. ΔG é a diferença entre o conteúdo de energia dos produtos e o conteúdo de energia dos reagentes/substratos. Quando ΔG for negativo, significa que o conteúdo de energia livre do Substrato vai ser MAIOR que o conteúdo de energia livre dos Produtos. Ou seja, houve perda de energia pelo sistema. A reação é EXERGÔNICA. Portanto ela vai se processar expontâneamente no sentido direto, de formação do produto final. O produto então se acumula, a Concentração se produto será maior que a concentração de Substrato, portanto o valor da Constante de Equilíbrio (Keq) será maior que 1. Agora, quando o ΔG for positivo, significa que a quantidade de energia livre do substrato vai ser MENOR que a quantidade de energia livre do produto. Portanto, houve ganho de energia pelo sistema. A reação é ENDERGÔNICA. Ou seja, ela vai se processar espontaneamente no sentido inverso acumulando Substrato. A Concentração de Produto será menor que a concentração de Substrato e a Contante de Equilíbrio terá um valor menor que 1. Retomando a sequência de reações hipotéticas onde A→B→C, a transformação de A→B que tem um ΔG Positivo só foi possível porquê houve o acoplamento dessa reação com a reação seguinte B→C e a reação possui um ΔG bastante Negativo, de forma que o ΔG Total resulta em um ΔG Total bastante negativo. Essa estratégia é bastante comum nas nossas rotas metabólicas quando se tem uma reação com ΔG Positivo ou ΔG Zero, essa reação para poder acontecer no sentido de formação do produto final deverá ser acoplada à uma outra que tem o ΔG Negativo, e essa reação então vai utilizar-se de um produto em comum, um reagente em comum entre as duas reações e o ΔG Total deverá ser um ΔG Negativo, possibilitando assim que a Rota metabólica ocorra. Vamos agora examinar o ciclo de energia nas células e o papel do ATP como moeda energética. Os seres Heterotróficos obtém energia livre na forma de energia química pelo catabolismo dos nutrientes. Essa energia será usada para sintetizar ATP a partir de ADP e Fosfato Inorgânico. O ATP é a moeda energética das células. Ele doa parte de sua energia química para a síntese de biomoléculas, transporte ativo, contração muscular, neurotransmissão e até bioluminescência. A transferência de energia do ATP que possibilita a realização de todos esses processos é resultado da sua conversão em ADP + Pi ou AMP + 2 Pi. Isso ocorre porque o ΔG de hidrólise do ATP é muito negativo. O ATP possui 4 cargas negativas, que provocam uma repulsão eletrostática na molécula. A hidrólise dessa ligação terminal separa um dos grupos Fosfato, aliviando parte da repulsão entre as cargas, além disso, os produtos de hidrólise do ATP são muito mais estáveis que o próprio ATP. O Fosfato Inorgânico será estabilizado por ressonância, onde a ligação Fosfato-Oxigênio (cada uma delas) têm um mesmo grau do caráter de dupla ligação, e o Hidrogênio não vai ficar permanentemente associado a nenhum dos Oxigênios. Além disso, o ADP que é o outro produto da Hidrólise é estabilizado por ionização (ele se ioniza muito rapidamente) em um meio onde a concentração de prótons H+ é baixa. Outro fator importante que favorece a hidrólise do ATP é o maior grau de Solvatação (Hidratação) do ADP e do Pi em relação ao ATP, o que estabiliza ainda mais esses produtos, favorecendo assim a hidrólise do ATP. A Acetil-CoA que é o produto de degradação comum das diferentes biomoléculas e que vai entrar no ciclo de Krebs para ser totalmente oxidada é um Tioéster e também possui um ΔG de hidrólise bastante negativo. O 1,3-Bifosfoglicerato e o Fosfoenolpiruvato ssão intermediários da via glicolítica e a função destes compostos é liberar energia a aprtir da hidrólise do seu fosfato para a formação de ATP. Então eles vão entregar esse fosfato para o ADP gerando ATP. São as duas reações da via glicolítica de produção de energia, então a função desses compostos é a de produção de ATP, chamamos essa produção de Fosforilação em nível de Substrato. A fosfocreatina entrega seu fosfato para o ADP gerando rapidamente ATP. Também é um tipo de Fosforilação chamada de Fosforilação em nível de Substrato. Esses compostos apresentam ΔG bastante negativos porque seus produtos de hidrólise são mais estáveis. No caso do 1,3-Bifosfoglicerato os produtos de Hidrólise são o Fosfato Inorgânico e o 3-Fosfoglicerato, ambos estabilizados por ressonância. No caso do Fosfenolpuruvato (PEP), os produtos de Hidrólise são o Fosfato Inorgânico (estabilizado por ressonância) e o Piruvato, que pode estar na forma Enólica ou na forma Cetônica (estabilizado por Tautomerização) A Acetil-CoA é um tioéster, portanto ele contém um átomo de enxofre na posição onde os ésteres de oxigênio possuem um átomo de Oxigênio. A quebra dessa ligação entre a Coenzima A e o Acetato da Acetil-CoA libera Coenzima A e Acetato (estabilizado por ressonância). Os Tioésteres não são compostos fosforilados, então diferentemente do que ocorria com os compostos anteriores onde a hidrólise produzia ATP em nível de substrato, no caso da Acetil-CoA a hidrólise serve para introduzir o grupamento Acetato no Ciclo de Krebs onde ele será totalmente oxidado. O ATP fornece energia por TRANSFERÊNCIA DE GRUPOS (mais comum) ou por HIDRÓLISE DIRETA (contração muscular). Quando o ATP fornece energia por transferência de grupos, ele vai participar covalentemente da reação enzimática para qual ele deve fornecer energia livre. Essas reações têm um ΔG positivo, são Endergônicas. Essa transferência de grupos pode envolver a transferência de grupo Fosforil, Pirofosforil ou Adenilil. Temos um substrato A mais um substrato B que vão se unir formando um produto AB. Essa é uma reação Endergônica que necessita então da hidrólise do ATP para o fornecimento de energia para que a reação se processe no sentido de formação de AB. Primeiramenteocorre então a hidrólise do ATP, gerando ADP e liberando o grupo fosforil, que vai unir-se covalentemente ao substrato A, aumentando o conteúdo de energia dessa molécula. Num segundo momento, o Substrato B irá deslocar o grupo fosforil e ele então vai ligar- se ao substrato A no lugar do grupo fosforil, formando então o produto final AB. Na transferência de grupo Pirofosforil, o ATP vai ser quebrado em AMP e pirofosfato, que será incorporado ao substrato. A adenilação é usada quando a hidrólise do ATP em ADP e Pi não libera energia suficiente para impulsionar a reação. É o caso da ativação dos acidos graxos para ativar o ácido graxo para o metabolismo celular. O ácido graxo para ativar-se precisa ser incorporado à Coenzima A, formando o Acil-CoA graxo. Esse processo é muito Endoergônico e vai necessitar de energia extra. A contração muscular é um dos poucos casos em que a Hidrólise do ATP por si e não a transferência de grupos será a fonte de energia para um processo biológico. Embora o ATP seja o principal composto de fosfato de alta energia produzido pelo catabolismo, todos os ribonucleosídeos-trifosfato e desoxiribonucleosídeos-trifosfato são energeticamente equivalentes ao ATP. Em situações de alta demanda energética, alem de contar com a Creatina-cinase que forma ATP a partir da fosfocreatina e ADP, a célula muscular pode contar também com a Adenilato-Cinase, que forma ATP a partir de dois ADPs produzidos durante a contração muscular intensa. Reações de transferência de elétrons, reações de oxirredução, que também são uma das características centrais do metabolismo. A transferência de elétrons pode ocorrer entre moléculas ou entre íons. As moléculas doam/recebem um PAR de elétrons e os íons doam/recebem UM elétron. Durante a transferência de elétrons, a molécula ou íons doador de elétrons doa o seu elétron/par de eletróns para um aceptor de elétrons. Quem doou o elétron agora está na forma de Aceptor de elétrons e quem recebeu o e- está agora na sua forma doadora de elétrons. Cada par de molécula ou íon doador/aceptor de elétrons forma um Par Conjugado Redox. Quem DOA elétrons se OXIDA, quem RECEBE elétrons se REDUZ. O DOADOR de elétrons é chamado de AGENTE REDUTOR, ou REDUTOR, porque ele promove a redução de quem recebeu os elétrons. E o ACEPTOR de elétrons é chamado de AGENTE OXIDANTE, ou OXIDANTE, porque ele promove a doação/oxidação de quem está doando o elétron. A transferência pode ser feita diretamente com elétrons (oxidação do íon ferroso pelo íon cúprico); Pode ser feita por meio de átomos de H (que contém um próton e um elétron), existem desidrogenages que utilizam essa forma de transferência de elétrons; Na forma de íon hidreto (um próton e dois elétrons), as desidrogenases que trabalham com o NAD realizam esse tipo de transferência de elétrons; Ou ainda pela combinação de um redutor orgânico com o Oxigênio, dando um produto no qual o Oxigênio está incorporado Covalentemente. A transferência de elétrons de um par Redox para o outro ocorre de acordo com a afinidade que os pares Redox têm pelos elétrons. A medida da afinidade dos pares redox pelos elétrons é dada pelo Potencial de Redução Padrão. Um par Redox com Potencial de Redução Padrão NEGATIVO significa que esse par têm menor afinidade pelos elétrons, ele tem tendência em perder os elétrons. Um par Redox com Potencial de Redução Padrão POSITIVO significa que esse par Redox têm maior afinidade pelos elétrons, ele tem tendência em receber os Elétrons. Existe uma relação direta entre a variação do Potencial de Redução Padrão e a Variação de Energia Livre do sistema. Os elétrons sempre vão fluir do componente/par redox que possui o Potencial de Redução Padrão mais NEGATIVO, ou seja, com menor afinidade pelos elétrons, para o componente/par Redox que possui o Potencial de Redução Padrão mais POSITIVO, ou seja, com maior afinidade pelos elétrons. Quando os elétrons fluem de um par redox para outro, há sempre liberação de energia. Quanto maior for a variação de Potencial de Redução Padrão entre dois pares Redox, maior será a quantidade de energia liberada pela transferência de elétrons. As desidrogenases catalisam a maior parte das reações de oxidação dos carbonos e elas precisam de coenzimas para elas funcionarem. O NAD e o seu análogo fosforilado NADP são importantes coenzimas de muitas desidrogenases. Eles têm origem na vitamina B3 (Niacina), mas também podem ser sintetizados a partir do Triptofano (só que em uma quantidade bem menor). O NAD e o NADP transportam ÍON HIDRETO. A forma reduzida do NAD é NADH + H⁺. E a forma reduzida do NADP é NADPH + H⁺. O par NAD/NADH participa das reações de Oxidação, então ele participa mais do Catabolismo celular onde o NAD será o aceptor de elétrons. O par NADP/NADPH participa das reações de Redução, do Anabolismo Redutor. Então é o NADPH que será o fornecedor de Hidrogênio para aquelas reações anabólicas redutoras. Outras desidrogenases trabalham com o FAD ou com a FMN. Ambos são sintetizados a partir da VITAMINA B2 ou Riboflavina. O FAD e a FMN transportam átomos de Hidrogênio, e esse transporte é feito pelo anel complexo que tem origem na vitamina B2. A forma reduzida do FAD é chamada de FADH2. O FAD e a FMN são grupos prostéticos das suas enzimas, sendo o FAD bem mais comum que a FMN. A FOSFORILAÇÃO A NÍVEL DE SUBSTRATO ENVOLVE A TRANSFERÊNCIA DE FOSFATO DE UM COMPOSTO DE ALTA ENERGIA DIRETAMENTE PARA O ADP. Então existe um composto fosforilado de alta energia, que será hidrolisado e este fosfato terminal será entregue para o ADP gerando diretamente o ATP. Esta é a primeira reação de formação de ATP da via glicolítica. A segunda e ultima fosforilação em nível de substrato na via glicolítica envolve a hidrólise do fosfato terminal do PEP. Outro composto de alta energia de hidrólise é a fosfocreatina. Esta reação é catalisada pela CPK (Creatina Fosfo Cinase) essa enzima faz tanto a transformação da creatina-fosfato em Creatina, quanto o inverso. A formação de ATP em nível de substrato não é a única forma gerar ATP pela célula. A forma mais comum é a fosforilação oxidativa, que vai depender do NADH e do FADH2. Os elétrons que foram resgatados durante o Catabolismo celular a partir da oxidação de moléculas reduzidas como a Glicose e os ácidos graxos serão então transferidos para a cadeia respiratória, que é um conjunto de moléculas que estão presentes na membrana mitocondrial interna. Esses elétrons então vão fluir pelos componentes da cadeia respiratória de acordo com a afinidade que esses componentes têm pelos elétrons, até que esses elétrons sejam entregues para o último aceptor que é o Oxigênio molecular, que será reduzido à água. Daí que vem a necessidade do Oxigênio pela célula, para receber os elétrons provenientes do NAD e do FAD reduzidos e que por sua vez têm origem nas reações catabólicas. Então durante esse fluxo de elétrons existe a liberação de energia e essa energia liberada vai ser utilizada para formar ATP no processo de fosforilação oxidativa. Vemos os componentes da cadeia respiratória na membrana mitocondrial Interna. O NADH será o doador de elétrons para a cadeia respiratória. Aqui mostra o Oxigênio molecular como o último aceptor sendo reduzido à Água. O fluxo de elétrons gera liberação de energia que é utilizada para bombear prótons H+ da matriz mitocondrial para o espaço Inter membranas, criando um gradiente eletroquímico de prótons entre o espaço Inter membranas e a matriz. Quando essa diferença eletroquímicaé muito grande, esses prótons são forçados a voltarem para a matriz, e esse retorno ocorre pela enzima que sintetiza o ATP. Quando esses prótons retornam existe a liberação de energia que vai ser utilizada para ligar o ADP com o Pi, formando o ATP.