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Fisiologia Bacteriana Prof. André Luiz S. Domingues Fisiologia bacteriana • Estudo das funções orgânicas, dos processos e at ividades vitais METABOLISMO (catabolismo – anabolismo)NUTRIÇÃO CRESCIMENTO METABOLISMONUTRIÇÃO CRESCIMENTO NUTRIENTES – Materiais orgânicos e inorgânicos retirados do meio ambiente, necessários para obtenção de energia e síntese de moléculas necessárias ao crescimento bacteriano - Macronutrientes - Micronutrientes - Fatores de crescimento Macronutrientes – Carbono : Síntese de todos os compostos orgânicos; metade do peso seco de uma célula bacteriana é composto de carbono • obtido de fontes orgânicas tais como carboidratos (D-glicose), aminoácidos, lipídios, álcoois, amido, celulose – Nitrogênio : Síntese dos ácidos nucléicos e proteínas • obtido a partir de aminoácidos – Íons inorgânicos : • Fósforo : Síntese dos ácidos nucléicos, fosfolipídios de membrana e é componente das ligações ricas em energia do ATP, entre outros compostos • Enxofre : Síntese de aminoácidos e de vitaminas • Potássio: Ativa enzimas, regula a pressão osmótica • Magnésio: Ativa enzimas extracelulares, síntese protéica • Ferro : Síntese de citocromos e pigmentos • Cálcio , Sódio : Co-fatores para reações enzimáticas. Micronutrientes – Cobre , zinco , cromo , cobalto , etc. • Co-fatores para atividade de algumas enzimas; • Normalmente presentes na água. Fatores orgânicos de crescimento – Indispensáveis a um determinado microrganismo, mas que ele não consegue sintetizar • Vitaminas (co-enzimas), aminoácidos, bases nitrogenadas, ácidos graxos Água – Solvente universal – As bactérias se nutrem pela passagem de substâncias em solução através da membrana citoplasmática – Regulação da pressão osmótica – Regulação térmica Meios de Cultura • Conjunto de substâncias necessárias ao crescimento de microrganismos no laboratório, em ambiente artificial. Componentes básicos dos meios de cultura Meios de cultura sólidos: • Usados para isolamento. Os microrganismos se desenvolvem na superfície dos meios formando colônias. Também têm emprego na conservação de cultivos por tempo mais longo, pois o acesso lento aos elementos nutritivos limita a reprodução. Meios de cultura líquidos: • Para obter crescimento mais abundante do microrganismo, pois o contato com o material nutritivo é mais fácil. Meios de cultura semi-sólidos: • São utilizados para verificação da motilidade, uma vez que oferecem menos resistência à célula. Critérios considerados para o crescimento de microrganismos em meios de cultura Necessidades dos microrganismos em relação à composição dos meios de cultura – Algumas bactérias menos exigentes crescem normalmente em meios de cultura simples , outras são mais exigentes e necessitam de meios complexos para o crescimento; – Existem também bactérias que duplicam-se apenas dentro da célula hospedeira. São intracelulares obrigatórias . Ex: Chlamydia trachomatis. – Outras, apesar de multiplicarem-se extracelularmente no hospedeiro, não crescem em meios artificiais , feitos no laboratório. Ex: Treponema pallidum (causador da sífilis) e Mycobacterium leprae (causador da lepra). METABOLISMONUTRIÇÃO CRESCIMENTO Metabolismo • Soma de todas as reações químicas que ocorrem em um organismo vivo – Catabolismo : Quebra de moléculas orgânicas complexas em substâncias simples (liberam energia) – Anabolismo : Moléculas simples são combinadas para formar moléculas complexas (requerem energia) Enzimas • São proteínas globulares com forma tridimensional específica, produzidas pelas células vivas, que realizam reações químicas – Componentes: Porção protéica + Co-fator • Co-fatores: Íon metálico (F, Cu, Mg, Mn, Zn, Co) • Coenzima (NAD, NADP, FMN, FAD e coenzima A) Fatores que afetam as reações enzimáticas: • Temperatura • pH • Concentração do substrato • Concentração do produto • Concentração da enzima pH (Acidez ou Alcalinidade) • Cada microrganismo possui um pH ót imo • 6,5 a 7,5 • A alteração de 1 unidade de pH representa uma variação de 10 vezes na concent ração de íons hidrogênio • O pH das soluções sempre deve ser conferido • Soluções Tampão Concentração de sais (Pressão osmótica) • Meios hipertônicos (plasmólise) – Halofílicos toleram maiores concentrações de sais • Meios hipotônicos (lise) • Meios isotônicos Temperatura - Temperaturas cardeais Classes de microrganismos quanto à temperatura VIAS METABÓLICAS DE PRODUÇÃO DE ENERGIA: CATABOLISMO – Reações químicas catalisadas por enzimas – Ocorre armazenamento e liberação de energia a partir de moléculas orgânicas – A maior parte da energia produzida por uma célula vem da oxidação de carboidratos (glicose é o mais comum) • Respiração • Fermentação Respiração aeróbica Oxidação total da glicose Aceptor final de elétrons é o O2 Consome: 1 glicose (C6H12O6) 38 ADP + 38 P 6 O2 Produz: 6 CO2 6 H2O 38 ATP Fermentação • Não requer O2, mas algumas vezes pode ocorrer na presença deste • Não usa o Ciclo de Krebs ou cadeia de transporte de e- • O aceptor final de e- é uma molécula orgânica • Produz menos ATPs (2), pois a energia fica acumulada nas ligações químicas dos produtos finais • EX: Fermentação do ácido lático ou fermentação alcoólica Fermentação VIAS METABÓLICAS DE USO DE ENERGIA: ANABOLISMO • Moléculas simples produzidas no catabolismo são combinadas para formar moléculas complexas – Polissacarídeos (glicogênio e peptideoglicana): – Lipídeos – Aminoácidos – Purinas e Pirimidinas Resposta ao Oxigênio – Aeróbios obrigatórios : Necessitam de oxigênio para crescer; realizam a respiração aeróbica • Ex: Mycobacterium tuberculosis – Anaeróbios facultativos : Na presença de oxigênio, realizam a respiração; na ausência do mesmo, realizam a fermentação ou respiração anaeróbica – Crescem melhor na presença de oxigênio. – A maioria das bactérias de importância médica. Ex: E. coli e outras bactérias do intestino. Resposta ao Oxigênio – Anaeróbias estritas ou obrigatórias: Não podem crescer na presença de oxigênio. Realizam fermentação • Ex: Clostridium botulinum e Clostridium tetani. – Anaeróbias aerotolerantes: Crescem na presença de oxigênio, porém sem utilizá-lo. Realizam fermentação • Ex: Streptococcus pyogenes Resposta ao Oxigênio – Microaerófilos: Necessitam de oxigênio, porém em nível inferior ao atmosférico. Realizam a respiração – Ex: Neisseria gonorrhoeae Resposta ao oxigênio A. Aeróbios obrigatórios B. Anaeróbios obrigatórios C. Anaeróbios facultativos D. Microaerófilos E. Anaeróbios aerotolerantes Diversidade metabólica dos microrganismos - Considerando a fonte de energia x fonte de carbono METABOLISMONUTRIÇÃO CRESCIMENTO Divisão celular em microrganismos procarióticos • A maioria das bactérias se multiplicam pelo processo de reprodução assexuada, através da FISSÃO BINÁRIA , onde as células-mãe dividem- se individualmente em 2 células-filhas idênticas. Divisão bacteriana • O período necessário para uma célula se dividir ou uma população duplicar é chama do Tempo de Geração – Escherichia coli = 20 min – M. tuberculosis = 24 horas Cultura bacteriana em meio líquido Cultura bacteriana em meio sólido FASES DO CRESCIMENTO BACTERIANO • Fase Lag (A) : – Fase de adaptação – Intensa atividade metabólica (síntese de DNA, proteínas e enzimas) – Sem divisão celular Tempo (horas) 7 6 5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 A B C D Lo g d o nú m er o d e b ac té ri as FASES DO CRESCIMENTO BACTERIANO • Fase Exponencial ou Log (B) : – Início da divisão celular – Fase de crescimento exponencial – Final : depleção de nutrientes, diminuição de O2 em culturas aeróbicas, cúmulo de produtos tóxicos Tempo (horas) 7 6 5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 A B C D Lo g d o nú m er o d e b ac té rias FASES DO CRESCIMENTO BACTERIANO • Fase Estacionária (C) : – Decréscimo de crescimento celular – N º de células em divisão = nº de morte celular – Energia de manutenção é obtida através da degradação de produtos de armazenamento celular (Glicogênio, Amido, Lipídeos) Tempo (horas) 7 6 5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 A B C D Lo g d o nú m er o d e b ac té ri as FASES DO CRESCIMENTO BACTERIANO • Fase de Morte ou Declínio (D): – Condições desfavoráveis para o crescimento – Diminui o nº de células em divisão; aumenta o nº de células mortas – Aumento de toxinas Tempo (horas) 7 6 5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 A B C D Lo g d o nú m er o d e b ac té ri as Fisiologia bacteriana x identificação • As bactérias sobrevivem e crescem em uma grande variedade de ambientes devido as suas diferentes capacidades metabólicas; estas diferenças podem ser utilizadas para caracterizar as muitas espécies existentes.
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