Protein Concentration Determination (1)

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<p>FOTODISCO (WWW.PHOTODISC.COM)</p><p>Roger L. Lundblad e Nicholas C. Price</p><p>proteínas, glicoproteínas ou</p><p>bioconjugados como aqueles</p><p>modificados com polietilenoglicol (PEG).</p><p>Determinar a atividade específica do</p><p>ingrediente farmacêutico ativo (API) em tais</p><p>produtos finais requer medição</p><p>quantitativa da atividade biológica e</p><p>massa (concentração de proteína).</p><p>solução (1). Desde então, tem sido</p><p>necessário um rigor cada vez maior para</p><p>os processos de fabricação sob as condições</p><p>atuais de boas práticas de fabricação (cGMP)</p><p>(2–3), e a validação de tais procedimentos</p><p>de monitoramento tem se tornado</p><p>cada vez mais importante (4–6).</p><p>Esta atualização descreve e critica vários</p><p>ensaios que foram desenvolvidos</p><p>para determinar proteínas</p><p>concentração de proteína — como a</p><p>ligação de Coomassie Blue (CBB) (13) e o</p><p>ensaio de ácido bicinconínico (BCA) (14)</p><p>— mostram sensibilidade aumentada</p><p>sobre os ensaios de biureto e Lowry</p><p>(15, 16), análise de aminoácidos totais (17)</p><p>e o método de Kjeldahl (18) . Em</p><p>comparação, eles também são muito mais</p><p>fáceis de realizar.</p><p>concentração em solução. Também</p><p>consideramos questões relacionadas</p><p>à validação de ensaios colorimétricos de</p><p>proteínas para uso em processos cGMP</p><p>(7–9). Enfatizamos os desenvolvimentos</p><p>que foram relatados desde nossa revisão</p><p>anterior sobre métodos colorimétricos</p><p>(1). Outras revisões de métodos para</p><p>a determinação da concentração de</p><p>proteínas também surgiram recentemente</p><p>(10–12).</p><p>A maioria dos produtos biofarmacêuticos são</p><p>Certos métodos para determinar</p><p>consideração abrangente do status</p><p>atual dos métodos para estimativa</p><p>da concentração de proteínas em</p><p>Usando o Medline da National Library</p><p>of Medicine</p><p>(www.ncbi.nlm.nih.gov) no US National</p><p>Institutes of Health, pesquisamos literatura</p><p>de janeiro de 2000 a novembro de 2003</p><p>para artigos que referenciassem métodos para</p><p>a determinação da concentração</p><p>de proteína. Encontramos um</p><p>grande número de referências aos</p><p>ensaios de Lowry e de ácido bicinconínico.</p><p>No entanto, os ensaios CBB e BCA</p><p>dependem muito mais do que os outros da</p><p>composição de aminoácidos de uma proteína</p><p>alvo (1, 19), e eles não necessariamente</p><p>fornecem uma medida precisa da</p><p>concentração total de proteína.</p><p>Considerando isso, é surpreendente que</p><p>em dois periódicos de</p><p>biotecnologia que pesquisamos, poucos</p><p>artigos sobre o desenvolvimento e</p><p>caracterização de</p><p>biofármacos forneceram detalhes</p><p>experimentais significativos sobre o método</p><p>de determinação da concentração de</p><p>proteína. O método usado é geralmente,</p><p>mas nem sempre, referenciado</p><p>apropriadamente — mas apenas um</p><p>número limitado de artigos mencionou o</p><p>padrão de proteína (geralmente</p><p>albumina). Então, na melhor das hipóteses, a proteína</p><p>as informações de concentração fornecidas</p><p>em tais artigos deveriam ter sido</p><p>apresentadas como concentração relativa</p><p>a um padrão de albumina, o que é</p><p>apropriado com informações de validação</p><p>suficientes sobre a relação dos valores</p><p>obtidos com o material de teste e</p><p>aqueles obtidos com o material de</p><p>referência (conforme discutido em nossa</p><p>seção Validação abaixo).</p><p>O calcanhar de Aquiles do cGMP?</p><p>Em 1999, publicamos uma</p><p>Determinação</p><p>Concentração de Proteína</p><p>TÉCNICOB I O P ROCESSO</p><p>QUEM DEVE LER: PROJETO</p><p>GERENTES; QA/QC; BIOANALISTAS</p><p>PALAVRAS-CHAVE: MÉTODOS ANALÍTICOS,</p><p>CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNA, VALIDAÇÃO,</p><p>FOCO DO PROCESSO : PRÉ-CLÍNICO E</p><p>TESTES CLÍNICOS, FORMULAÇÃO</p><p>PROTEÍNAS E PRODUTOS CONJUGADOS</p><p>FOCO NO PRODUTO : RECOMBINANTE</p><p>CONFORMIDADE</p><p>NÍVEL: INTERMEDIÁRIO/REVISÃO</p><p>38 BioProcess International JANEIRO DE 2004</p><p>Machine Translated by Google</p><p>ESTUDOS USANDO COOMASSIE BRILLIANT BLUE G-250 PARA DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS</p><p>Khim.</p><p>Osso Humano Antigo</p><p>Albuminas e Globulinas:</p><p>Fitase e Ácido</p><p>Olhos com e sem</p><p>Células.</p><p>Resolução</p><p>Clínica.</p><p>Clínica.</p><p>E.</p><p>Clínica de Alergia.</p><p>da Anidrase Carbônica e</p><p>Purífico.</p><p>Inibição da Fosfodiesterase Tipo</p><p>III Antes da Aorta</p><p>sobre o teor de proteína de alérgeno traço</p><p>2001, 31:</p><p>a Uma tira de teste de urina, refratometria, CBB e o método do biureto foram</p><p>Preparação.</p><p>2001, 239:</p><p>Neurotoxina, sorotipo A,</p><p>et al. Expressão de alto nível e</p><p>Infecção do ouvido médio humano:</p><p>Proteína da lágrima humana:</p><p>Fitase de c:</p><p>Golovan, S; e outros.</p><p>E.</p><p>Expressar.</p><p>Pospiech, L; et al. L- Selectina</p><p>solúvel e interleucina-8 em</p><p>Al'tshuler, BI; et al. Determinação</p><p>2000, 21: 782–787.</p><p>al. Comparação de quatro métodos</p><p>61: 673–675.</p><p>Oftalmol.</p><p>Fosfatase Alcalina em Antigos</p><p>Escherichia coli</p><p>Exp.</p><p>Murakami, T. Receptor P2Y(2)</p><p>avaliados. Concluiu-se que o método do biureto foi mais</p><p>Escherichia</p><p>em óleo de girassol.</p><p>Plasma: Scorticiati, C; e outros.</p><p>Conservas de fixação cruzada</p><p>Síndrome de pseudoexfoliação.</p><p>Preparação.</p><p>Atividades da fosfatase.</p><p>2000, 46: 59–71.</p><p>Purificação do Recombinante</p><p>Concentração e Bioquímica</p><p>(Buenos Aires) 2001,</p><p>c O CBB subestimou a concentração de proteína por um fator de 14.</p><p>Proteínas: Berlau, J; e outros. Análise</p><p>Resolução</p><p>Difteria recombinante</p><p>Machos de Fertilização In Vitro</p><p>Vopr.</p><p>de Proteínas Encapsuladas em</p><p>Atual.</p><p>App-A codificado</p><p>Viabilidade e liberação de citocinas de</p><p>Peritoneal canino e</p><p>N; et al. Anidrase carbônica</p><p>Áuris</p><p>Arco.</p><p>Arco de Graefes.</p><p>Geneta.</p><p>Proteína de miócitos</p><p>Estudo)b: Waugh, J; et al. Efeito de</p><p>Purificação da Cadeia Pesada</p><p>Levedura</p><p>Analg.</p><p>cloreto de benzetônio apresentou o maior valor, e Coomassie</p><p>Enzima bifuncional que exibe</p><p>Mesotelial Peritoneal Humano</p><p>33–47.</p><p>Toxina de fusão DTGM: Frankel, AE;</p><p>de Proteínas do Humor Aquoso de</p><p>Plasma Seminal Humano: Leigo,</p><p>Implantes cilíndricos de poli(lactídeo-</p><p>co-glicídeo): mecanismo de</p><p>Proteína: Demir, Y. As Atividades</p><p>Médio.</p><p>Olho</p><p>de osso bovino.</p><p>Óleo de Girassol: Zitouni, N;</p><p>et al. Influência das Etapas de Refino</p><p>Fragmento C de Botulinum</p><p>Derrames pleuraisa: Braun, JP; et</p><p>.</p><p>2001, 20: 205–217.</p><p>294–296.</p><p>Casais.</p><p>2001, 18: 144–150.</p><p>Concentração: Janelle, GM; et</p><p>Líquido cefalorraquidiano de rato e</p><p>O Azul Brilhante G-250 apresentou um valor intermediário.</p><p>Resolução</p><p>2000, 27: 213–217.</p><p>E.</p><p>393–402.</p><p>Neurotoxina botulínica: Potter,</p><p>Fluido peritoneal de cães.</p><p>Sistema Nervoso Periférico</p><p>b A extensão da proteinúria no grupo de estudo variou de acordo com o</p><p>Secreção em coelhos.</p><p>Potencial de fertilização in vitro: bioquímico</p><p>Monofosfato DurantePressão arterial renal Res.</p><p>Hipertensão Gravidez</p><p>Microbiologia.</p><p>Schwendeman, SP. Estabilização</p><p>Periférico, Citosólico, Interno</p><p>Estabilização por aditivos básicos.</p><p>Expressar.</p><p>Tabelas Matemáticas).</p><p>2001, 47: 426–438.</p><p>Anestesia.</p><p>Ajudar.</p><p>Constituintes do Plasma Seminal de</p><p>Veterinário.</p><p>Bypass cardiopulmonar. 2001,</p><p>92: 1377–1383.</p><p>Níveis em adultos normais:</p><p>Peritoneal Humano</p><p>Urina Humana (Proteinúria</p><p>Graefes</p><p>Superprodução do</p><p>Gravidez.</p><p>Massa de células mesoteliais: Plum, J;</p><p>et al. Influência da uremia na célula</p><p>Ratos Hipertensos Portais.</p><p>método utilizado. Um método de “vareta” deu o menor valor,</p><p>Humor Aquoso Humano</p><p>Proteína óssea humana: Demir,</p><p>Variação entre dias.</p><p>Reproduzir.</p><p>2002, 25: 195–201.</p><p>Medicina</p><p>KJ; et al. Produção e</p><p>2001, 62:</p><p>CA periférico e integral. 2001, 31:</p><p>190–201.</p><p>2000, 17: 351–357.</p><p>Proteína</p><p>Ossos humanos: purificação e</p><p>Exp.</p><p>Imunol.</p><p>Oftalmol.</p><p>1999, 16:</p><p>Bioquímica. Biotecnologia.</p><p>2000, 19:</p><p>Expresso no Metilotrófico</p><p>de Determinação de Proteína Total</p><p>Lisados de células de levedura —</p><p>Nasus</p><p>Toxina de fusão diftérica DTGM</p><p>Ensaio sobre a precisão da urina</p><p>Alterações funcionais na região central</p><p>coli</p><p>A estimulação aumenta o fluido lacrimal</p><p>Otite média com efusão.</p><p>Proteína</p><p>da Baixa Concentração de Proteína</p><p>Proteína da lágrima humana: Ng, V;</p><p>mais preciso que o método CBB.</p><p>Pode.</p><p>Proteína (Soro Bovino</p><p>Fragmento H(C) recombinante de</p><p>Laringe</p><p>Concentração em Pleural e</p><p>Caracterização do Exterior</p><p>2000, 238: 892–899.</p><p>MF; et al. Plasma seminal e</p><p>Pichia pastorisPurific.</p><p>Adenosina Cíclica Intramiocárdica</p><p>Farmacêutica.</p><p>743–746.</p><p>Amer.</p><p>E.</p><p>Albumina, BSA) de implantes de</p><p>poli(lactídeo-co-glicolídeo): Zhu, G;</p><p>para ensaios clínicos de Fase I.</p><p>Caracterização e</p><p>Varetas de medição em hipertensos</p><p>2000, 106: 962–967.</p><p>et al. Variabilidade da proteína lacrimal</p><p>291–304.</p><p>Bioquímica. Biotecnologia.</p><p>em Fluidos Biológicos. Aspectos</p><p>Metodológicos (Uso de</p><p>DE MÉTODOS ESPECÍFICOS</p><p>APLICAÇÕES</p><p>método. Embora isso possa provar</p><p>bandas de proteínas em eletroforese em gel.</p><p>(20) descrever uma modificação do</p><p>o uso de Coomassie Blue G-250</p><p>biofármacos.</p><p>(1), a sensibilidade da precisão</p><p>outras questões relacionadas ao ensaio</p><p>desenvolvimento e fabricação.</p><p>correções nos seus dados (21) e</p><p>refere-se apenas às instruções fornecidas</p><p>Surpreendentemente, poucas referências foram</p><p>a ser desenvolvido (23, 24) que</p><p>450 nm contra proteína</p><p>através da busca por algo específico</p><p>e sensibilidade não necessariamente</p><p>(22). Conforme observado em nossa revisão anterior</p><p>ser de valor na indústria biofarmacêutica</p><p>para possível validação do ensaio (4–6),</p><p>Ensaio Kjeldahl: O ensaio Kjeldahl</p><p>grau de rigor exigido para uma</p><p>precisão e sensibilidade do</p><p>em reconhecimento a um artigo seminal sobre</p><p>absorbância em 590 nm para aquela em</p><p>examinou muitos artigos obtidos</p><p>tenta aplicar matemática</p><p>pode ser melhorado. Os métodos continuam</p><p>aqueles obtidos com um diferente</p><p>o uso do corante para tingir</p><p>menção específica. Zor e Selinger</p><p>caracterização e fabricação de</p><p>a própria experiência sugere que a facilidade</p><p>alguns problemas (como a linearidade do ensaio)</p><p>lhes faltam as informações necessárias para</p><p>na fabricação biofarmacêutica</p><p>padrões utilizados e geralmente</p><p>encontrado no método do biureto.</p><p>técnica que melhora a</p><p>para o método Bradford. Isto é</p><p>certamente não se aproxima do</p><p>usado em um ambiente cGMP. Nosso</p><p>para determinação de proteínas (13). Nós</p><p>modificação plota a razão de</p><p>aqueles envolvidos com o rigoroso</p><p>método para ser intercambiável com</p><p>Vários estudos recentes valem a pena</p><p>a maioria deles estava preocupada com</p><p>útil para comparação casual de dados,</p><p>Azul brilhante Coomassie G-250</p><p>No entanto, muitas referências mostraram</p><p>a precisão persiste. Alguns fizeram</p><p>Menções pouco frequentes são feitas à</p><p>Como esperávamos, poucas referências foram</p><p>métodos para análise de proteínas totais</p><p>pelo “fabricante”.</p><p>feito para Coomassie Blue — e</p><p>permitir valores obtidos por um</p><p>processo de ensaio validado adequado a ser</p><p>ensaio comercial. Seus</p><p>foi desenvolvido em 1883 (18) e é</p><p>concentração. Embora aborde</p><p>métodos e descobriram que a maioria deles</p><p>traduzir para um ensaio validado para uso</p><p>merecem consideração séria por</p><p>JANEIRO 2004 BioProcess International 39</p><p>Machine Translated by Google</p><p>sua utilização na alimentação e no meio ambiente</p><p>descreveu recentemente um sistema de ensaio</p><p>surgem na análise de proteínas com</p><p>proteínas como um método para</p><p>concentração.biofármacos (por exemplo, crescimento</p><p>o método Kjeldahl continua sendo um</p><p>quantidades de nitrogênio, ou em</p><p>precisão com grande melhoria</p><p>em 1976. Combinando sensibilidade eA análise (AAA) certamente oferece a</p><p>da proteína em solução pode ser</p><p>encontrei mais referências ao Lowry</p><p>composição ácida. O usual</p><p>extremamente popular dentro de um relativamenteanalisando concentração de proteína</p><p>quantidades específicas estáveis e</p><p>ensaios (14) do que o ensaio CBB</p><p>sensibilidade, o que torna o uso rotineiro</p><p>amônia após hidrólise de um</p><p>Existem inúmeras fontes comerciais</p><p>compila estudos recentes sobre o usouma abordagem para a determinação de</p><p>e lisina) com referência a um</p><p>íons cúpricos por uma proteína. No caso</p><p>referências a este método referem-se a</p><p>indústria. Além disso, os problemas podem</p><p>Ensaio Kjeldahl (31–35). Zellmer et al.</p><p>Encadernação Azul Brilhante G-250 para</p><p>para a determinação de proteínas</p><p>formam um complexo com BCA, que</p><p>ciências (25–29). É nossa opinião que</p><p>impurezas que contêm significativa</p><p>que parece ter o Kjeldahl</p><p>determinação da concentração de proteínatecnologia para aminoácidos totais</p><p>fatores ou citocinas), concentração</p><p>“padrão ouro” para ensaios de proteínas</p><p>analisando proteínas de aminoácidos incomuns</p><p>facilidade de execução, este ensaio cresceusensibilidade necessária para uso em</p><p>determinado pela medição do</p><p>(16) e à base de ácido bicinconínico</p><p>com base na determinação de</p><p>complexidade técnica e falta de</p><p>fatores de conversão podem não se aplicar.</p><p>curto espaço de tempo. A primeira barra lateral</p><p>aminoácidos abundantes (por exemplo, alanina</p><p>(13). Ambos envolvem redução de</p><p>amostra em ácido sulfúrico. Mais recente</p><p>difícil para a indústria biofarmacêutica</p><p>disponível para suporte com o</p><p>desenvolveu o uso de Coomassie</p><p>de Coomassie Brilliant Blue G-250</p><p>padrão interno adicionado, como</p><p>do ensaio baseado em BCA, esses íons</p><p>40 BioProcess International JANEIRO DE 2004</p><p>E.</p><p>Proteína Lowry Diferencial</p><p>Precipitação de proteínas por filtração</p><p>de anticorpo lipossomal</p><p>Reproduzir.</p><p>variam de acordo com o ensaio e o padrão utilizados.</p><p>Tórax.</p><p>Dalefield, RR: et al. Colinesterase</p><p>Broncoalveolar Humano</p><p>Correlacionar com a massa molecular.</p><p>Investir.</p><p>Tratado com glutaraldeído</p><p>Fluxo de humor aquoso,</p><p>Adesão de</p><p>2001, 47: 426–438.</p><p>Zumbir.</p><p>Diferenciando Não Alérgico</p><p>norleucina (12).</p><p>Bioquímica.</p><p>Níveis em adultos normais: variação</p><p>entre dias.</p><p>Substitutos por testes in vitro. 2002,</p><p>57: 83–91.</p><p>Frações do cérebro canino:</p><p>Albumina e Globulina:</p><p>a Comparado Lowry, vermelho de pirogalol, biureto e ácido sulfossalicílico</p><p>com fosfato de alumínio</p><p>Oftalmol.</p><p>Ensaio (DLA), Concentrados de</p><p>Imunoglobulina-Lipossoma:</p><p>no formato de 96 poços.</p><p>Português Sweeney, JA; Hennessey, JP, Jr.</p><p>Nutrição Vacinas contra Hepatite B: Dogar,</p><p>Pericárdio Ovino e Suíno</p><p>Atividade: Proporções do receptor de muscarina</p><p>Fluidos de lavagem: Kerr, MH; PATON, JY.</p><p>Desenvolvedor.</p><p>Al'tshuler, BI; et al. Determinação</p><p>c Este estudo relata que o tiomersal interfere na enzima Lowry</p><p>Macacos cinomolgos: Tian, B; et</p><p>al. Efeitos agudos de H-7 em</p><p>Neutrófilos polimorfonucleares</p><p>Proteína da Câmara Anterior:</p><p>Tóxico.</p><p>Ciência.</p><p>Eficiência de conjugação.</p><p>2001, 300: 46–52.</p><p>Cirúrgico.</p><p>Arco de Graefes.</p><p>Proteína na dieta: Magee, EA.</p><p>Antigenicidade residual e</p><p>Entrega</p><p>Polipeptídeo de origem biodegradável</p><p>Alergia Asma Imunol.</p><p>e DOCA/Induzido por Sal</p><p>Estudo de alimentação controlada emEndotélio da córnea. 2000,</p><p>41:</p><p>Folicular pré e pós-morte</p><p>Proteínas plasmáticas: Biddlecombe,</p><p>2001, 22: 109–120.</p><p>200, 238:</p><p>d Este estudo comparou o ensaio CBB e o ensaio</p><p>Lowry usando um</p><p>E.</p><p>Tecidos. 2001,</p><p>Iguchi, Y; e outros. Uma característica</p><p>Cuidados Med.</p><p>39, 40). Para bem caracterizado</p><p>113–119.</p><p>Alergia</p><p>E.</p><p>Res. ocular.</p><p>Perturbação. 2002, 295:</p><p>Pneumocócica Hepavalente</p><p>Liberação de calcitonina de</p><p>padrão de albumina sérica bovina ou padrão de IgA. Os resultados obtidos</p><p>Ana.</p><p>et al. Variabilidade da proteína lacrimal</p><p>Alergenicidade do leite de vaca</p><p>Animação.</p><p>Fluidos são semelhantes e não</p><p>por métodos imunoenzimáticos.</p><p>257–265.</p><p>Humanos.</p><p>2000, 72: 1488–1494.</p><p>RA; Pleasance, S. Automatizado</p><p>Proteína na secreção nasal</p><p>284–288.</p><p>Analista.</p><p>Vacina Conjugada Formulada</p><p>Partículas de adenovírus:</p><p>71 (5 Supl): S408–S409.</p><p>Clínica.</p><p>Microesferas.</p><p>2002, 9: 195–198.</p><p>2000, 85: 77–83.</p><p>Ratos hipertensos.</p><p>2000, 18: 703–707.</p><p>Khim.</p><p>Hipertensão</p><p>Vopr.</p><p>40: 13–17.</p><p>Avaliação comparativa de in vitro</p><p>Infecção.</p><p>Estimativa. 2000, 30:</p><p>Absorção a 260 nm sob</p><p>1999, 734:</p><p>Virologia</p><p>Leucócitos polimorfonucleares</p><p>Biológicos</p><p>Efeitos na pressão intraocular,</p><p>Docena, GH; e outros. Identificação</p><p>Cromatog.</p><p>Extratos de Precipitado</p><p>Fatores de coagulação selecionados em</p><p>Bovino Preservado com Glutaraldeído</p><p>1999, 159: 1115–1118.</p><p>Respirar.</p><p>Conjugado pneumocócico</p><p>(PMNs) Função em SHR, L-NAME</p><p>Cinética de liberação de calcitonina</p><p>1749–1758.</p><p>Fluxo de humor aquoso e</p><p>Médio.</p><p>Ana.</p><p>Veterinário.</p><p>sensibilidade (23).</p><p>não significativamente diferente.</p><p>Endotélio em olhos de macaco.</p><p>Oftalmol.</p><p>Intestino: Um In Vitro e um</p><p>Docena, G; et al. Avaliação da</p><p>Medicamento</p><p>Crítico.</p><p>concentração total de proteína (15, 16,</p><p>Vacinas. 2000, 103:</p><p>de proteínas alergênicas em preservativos</p><p>B.</p><p>Atual.</p><p>Condições de DNA completo</p><p>Amer.</p><p>Pericárdio e Válvula Suína</p><p>271–275.</p><p>Secreção nasal humana:</p><p>Adsorção de proteína valvular: Shen,</p><p>em Cérebros Caninos e Felinos.</p><p>2001, 43: 19–21.</p><p>Adjuvante: Katkocin, DM.</p><p>(30), mas também apreciamos a sua</p><p>Vis.</p><p>Rinossinusite crônica de</p><p>Poli(lactídeo-co-glicolídeo)</p><p>Avaliação da Precisão e</p><p>Níveis de proteína surfactante em casos graves</p><p>V. Interferência do tiomersal em</p><p>Rinologia</p><p>Clínica.Contribuição da proteína dietética para</p><p>E.</p><p>da Baixa Concentração de Proteína</p><p>Biologia.</p><p>892–899.</p><p>Klegerman, ME; et al. Quantitativo</p><p>determinação de proteína em vacinas contra hepatite B.</p><p>Amer.</p><p>2000, 63:</p><p>Fluido Folicular Equinob:</p><p>Vírus sincicial respiratório</p><p>Biológicos durante a proteína</p><p>Precisão do Adenovírus</p><p>Proteínas da lágrima humanad: Ng, V;</p><p>M; et al. Adsorção de proteínas em</p><p>Substitutos do leite de vaca:</p><p>para Microplate: Ohmori, M; et al.</p><p>Peterson, JA; e outros. Latrunculinas</p><p>Epitélio ciliar e córnea</p><p>Rinite Alérgica. 2002,</p><p>Microesferas: Prabhu, S; et al.</p><p>177–185.</p><p>Semotok, CA; et al. Quantidades de</p><p>b Os resultados com o ensaio de biureto, o ensaio de Lowry e o ensaio de CBB foram</p><p>em Fluidos Biológicos.</p><p>Exp.Produção de Sulfetos em Grandes Áreas</p><p>Caracterização de Multivalentes</p><p>(36–38). AAA foi sugerido como</p><p>Ciência.</p><p>Produtos de borracha de látex:</p><p>Ensaio de imunoblot para avaliação</p><p>Azul brilhante Coomassie G-250</p><p>Lowry e ácido bicinconínico</p><p>Análise de aminoácidos totais: atual</p><p>ESTUDOS QUE UTILIZAM O MÉTODO DE LOWRY PARA DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS</p><p>Encadernação (Ensaio de Bradford): Bradford</p><p>Ensaios: De forma um tanto inesperada, nós</p><p>Machine Translated by Google</p><p>técnica ou método do biureto para</p><p>método foram marcadamente mais baixos,</p><p>sobre a validação de ensaios utilizados em</p><p>problema ao desenvolver e</p><p>Ensaio CBB no qual o corante é ligado a</p><p>intermediários. Tais ensaios validados</p><p>laboratório (48) demonstrou que</p><p>(em termos de homogeneidade e amino</p><p>em 1985. Mostrou alguma variação de proteína</p><p>para proteína. A quarta caixa</p><p>matriz experimental pode ser</p><p>determinado por Lowry</p><p>Sua vantagem significativa sobre</p><p>ensaios de vermelho de pirogalol (45) para proteína</p><p>ensaio para determinação de proteína</p><p>processo concentrando-se em pontos críticos</p><p>pode ser aplicado a esses</p><p>Trabalho subsequente do mesmo</p><p>Reagente Folin-Phenol. Qualidade da proteína</p><p>introduzido por Smith e colaboradores</p><p>Resultados obtidos com o CBB</p><p>ensaio de biureto nos últimos vários</p><p>a tinta uniformemente.</p><p>estimando proteínas ligadas a superfícies</p><p>caracterização funcional do final</p><p>aplicações recentes do Lowry</p><p>significativamente diferente quando</p><p>determinação de proteínas.</p><p>biofármacos licenciados. O</p><p>dele — ao contrário, por exemplo, do</p><p>Pode-se encontrar considerável literatura</p><p>Deve-se considerar isso</p><p>monitoramento da biofabricação</p><p>cloreto de benzetônio, CBB e</p><p>O ensaio de proteína usando BCA foi</p><p>desenvolvido e validado para APIs</p><p>fragmentos de albumina na urina.</p><p>ensaio, os íons cuprosos reagem com um</p><p>do que com o ensaio CBB (1, 19, 41).</p><p>foram feitas sobre o uso do</p><p>fragmentos de proteínas moleculares para ligar</p><p>e os ensaios de BCA podem ser usados para</p><p>processos (2–6). Estruturais e</p><p>ensaios, e também são necessários para</p><p>segunda e terceira barras laterais compiladas</p><p>intermediários e para a API final.</p><p>urina de controle ou diabética.</p><p>liberado da proteína é separado</p><p>fabricação biofarmacêutica</p><p>validando os ensaios.</p><p>refletindo uma diminuição da capacidade de pequenas</p><p>a molécula de proteína. Então o Lowry</p><p>concentração subestimada de soro</p><p>a concentração de proteína não era</p><p>composição ácida) é um fator menos importante</p><p>compila estudos recentes usando-o para</p><p>são necessários na fabricação de</p><p>outros ensaios de proteínas é que o sinal</p><p>como luvas de borracha de látex.</p><p>As APIs são executadas com uma variedade de</p><p>anos (42–47). Eppel e colaboradores</p><p>concentração.</p><p>intermediários de processo. Ensaios</p><p>absorve a 562 nm. No Lowry</p><p>diferente para processo crítico</p><p>VALIDAÇÃO DE PROTEÍNA</p><p>ENSAIOS DE CONCENTRAÇÃO</p><p>E.</p><p>Fluidos de lavagem nasal:</p><p>Ensaios de Proteínas, Capilar</p><p>Munster, AM. Jato e Ultrassônico</p><p>Alergenicidade residual de parcialmente</p><p>Alergia Asma Proc.</p><p>Imunoensaio Imunochem.</p><p>Enterotoxina A.</p><p>2001, 294: 141–147.</p><p>Síndrome da Fadiga Crônica</p><p>Mitocôndria: Strack, A: et</p><p>Proteínas por imunoblotting.</p><p>Mecanismos da Erva Chinesa</p><p>Inibição para a quantificação de</p><p>h Método padronizado para concentração de proteínas DIN EN 455-3</p><p>Complexos: Eo, SK; et al.</p><p>204–211.</p><p>pH, capacidade de tamponamento e cáries</p><p>.</p><p>de Nervos Intrínsecos e</p><p>Cromatog.</p><p>Anticorpo Monoclonal</p><p>1999, 9:</p><p>Imunoensaio Imunochem.</p><p>Eletroforese e Assistida por Matriz E.</p><p>A; Roley, L. Integridade da barreira em uso</p><p>Chabane, H; et al. Competitivo</p><p>Mundo J.</p><p>Assuntos.</p><p>2002, 23: 185–190.</p><p>Internacional.</p><p>Identificação de Neurotransmissores</p><p>B.Eletroforese com laser induzido</p><p>ELISA</p><p>Proteína antigênica em natural</p><p>Análogos de emodina e somatostatina</p><p>Fórmulas infantis hidrolisadas. 1999,</p><p>88: 394–398.</p><p>Nebulização de cadeia única</p><p>E.</p><p>Índices em indivíduos com Síndrome de Down</p><p>Res. Cerebral.</p><p>175–181.</p><p>Fórmulas: Niggemann, B. In Vivo</p><p>Saída em Fluidos Biológicos e</p><p>Hiperreatividade das vias</p><p>aéreas. 2002, 128:</p><p>Saliva: Yarat, A; e outros. Siálico Salivar</p><p>2002,</p><p>Proteína–Polissacarídeo</p><p>Proteína Adsorvida em Filtros,</p><p>de Placentário Alcalino Humano</p><p>Pediatr.</p><p>65–71.</p><p>Variação da Óxido Nítrico Sintase</p><p>2002, 23: 261–278.</p><p>E.</p><p>Fragmento e estafilocócica</p><p>Métodos de inibição de IgE.</p><p>Produtos de borracha de látex :</p><p>Imunoalergia.</p><p>e ASTM padrão modificado Lowry</p><p>Identificação de antígenos e</p><p>Administração de</p><p>Oral.</p><p>Saliva: Shugars, DC; et al.</p><p>Frascos. 2001, 34: 5–12.</p><p>Membrana: Niimi, Y; et al. A</p><p>Microbiologia.</p><p>Adsorção de proteínas para</p><p>EO; et al. Adesão de Lágrima</p><p>Apolipoproteínas: Grant, GA.</p><p>Antígenos de subunidade rV e rF1 de</p><p>Próstata</p><p>Deposição de proteínas.</p><p>2001, 22: 3257–3260.</p><p>Fungo (Trichoderma reesei)</p><p>Proteína, é diminuída com</p><p>Proteína Celular Total: Wataha,</p><p>Diogo, MM; et al. Purificação de</p><p>Bioquímica.</p><p>Farmacêutico.</p><p>Sintético</p><p>Bebês de muito baixo peso ao nascer:</p><p>Proteína Celular Total:</p><p>Choi, IS. Relação entre</p><p>MJ; et al. Adaptação de</p><p>Concentrações de Odontologia</p><p>Microesferas: Youan, BB; et al.</p><p>Determinação por</p><p>permeação de gel de alto desempenho</p><p>et al. Estudo de RMN de voláteis</p><p>Antígeno de membrana: Sokoloff, RL;</p><p>Timersol no Bicinconínico</p><p>Yersinia pestisJ.</p><p>Biologia Oral.</p><p>E.</p><p>573–579.</p><p>A; et al. Análise quantitativa de</p><p>2001, 46:</p><p>Anestesia.</p><p>Distrofina Muscular–</p><p>Aplicação</p><p>Adsorção de Lágrima Humana</p><p>Complexo em Rato Lento e Rápido</p><p>Protease secretora de leucócitos</p><p>Estudos sobre o Co-Encapsulamento,</p><p>Adesão e Adsorção de Proteínas.</p><p>Células Acinares.</p><p>2002, 18: 429–443.</p><p>Soro Humano</p><p>Relação entre contato</p><p>Bioengenharia.</p><p>Demonstrar ausência de</p><p>Bactérias Planctônicas Marinhas</p><p>Ter.</p><p>págs. 220–291.</p><p>Mater.</p><p>Pacientes.</p><p>2001, 16: 411–416.</p><p>Citometria.</p><p>1999, 65: 3251–3257.</p><p>E.</p><p>Proteína Total: Lefebvre, CA; e outros.</p><p>Poli(D,L-lactídeo-co-glicolídeo),</p><p>Bile e homogeneizados de tecidos:</p><p>Vesículas) Nicotínico Ligado Fluido seminal e urina. 2000, 43:</p><p>150–157.</p><p>313–326.</p><p>Presença de Thimersol: Chattaraj,</p><p>Chim.</p><p>44 BioProcess International JANEIRO DE 2004</p><p>USO DE ÁCIDO BICINCONÍNICO PARA DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS</p><p>os critérios para validar uma proteína</p><p>com os métodos colorimétricos baseados</p><p>eliminar todas as impurezas não proteicas</p><p>A menos que o padrão seja o mesmo</p><p>marcadamente influenciado pelo ensaio</p><p>detalhes em outro lugar (2–4, 22). Desejamos</p><p>obtido por um dado colorimétrico</p><p>ensaio nem AAA depende do uso</p><p>o valor obtido para essa proteína</p><p>precisão. As proteínas são heterogêneas</p><p>ensaios (o ensaio de Kjeldahl e o ensaio total</p><p>Qualquer método de proteína</p><p>contaminantes ou impurezas.</p><p>albumina. Outros ensaios discutidos</p><p>valores para determinação de proteínas.</p><p>unidades monoméricas (aminoácidos). Assim</p><p>absoluto (desde que uma proteína</p><p>com exceção do biureto</p><p>Conforme listado na caixa “Critérios”,</p><p>não visto, por exemplo, com mais simples</p><p>composição da proteína envolvida.</p><p>concentração de proteína — em contraste</p><p>raramente é fácil ou conveniente</p><p>uma proteína pode influenciar o valor</p><p>ensaio de concentração são discutidos em</p><p>em comparações, que podem ser</p><p>incluindo sais. Nem o Kjeldahl</p><p>qualidade da amostra a ser testada,</p><p>para discutir brevemente a importância de</p><p>de um padrão de proteína como</p><p>metodologia e a influência de</p><p>ensaio. Temos conhecimento de apenas dois</p><p>a amostra provavelmente será imprecisa.</p><p>polímeros compostos por diferentes</p><p>AAA) que fornecem informações inequívocas</p><p>Embora a análise gravimétrica seja</p><p>acima exigem tais padrões e,</p><p>amostra não contém impurezas),</p><p>eles fornecem um desafio analítico</p><p>Ambos permitem a medição direta de</p><p>reação, depende do aminoácido</p><p>homopolímeros. A composição de</p><p>Machine Translated by Google</p><p>INTERPHEX2004</p><p>Produzido e gerenciado por:</p><p>Patrocinado por:</p><p>HireHealth.com</p><p>para ter a chance de</p><p>ganhar um novo MINI Cooper.</p><p>Venha para a INTERPHEX2004</p><p>BioSpace.com</p><p>Provedor oficial de educação:Patrocinado por:</p><p>Conferência e Exposição</p><p>16 a 18 de março de 2004. Jacob K. Javits Convention Center, Nova York</p><p>INTERFEX</p><p>online para INTERPHEX2004. Basta visitar nosso</p><p>site em www.interphex.com para obter informações ou</p><p>ligar para 1.888.334.8704.</p><p>,</p><p>as necessidades do mercado para incluir os</p><p>produtos, ideias e soluções mais recentes</p><p>apresentados por mais de 950 expositores. Agora,</p><p>na INTERPHEX2004, quatro eventos simultâneos</p><p>oferecem soluções tecnológicas e educação</p><p>para cada fase do ciclo de desenvolvimento e</p><p>fabricação de medicamentos: Drug Discovery &</p><p>Development, Outsourcing & Contract Services,</p><p>Information Technology e Process Manufacturing & Packaging.</p><p>em produtos farmacêuticos não mudou –</p><p>é a INTERPHEX! E na INTERPHEX2004™ você</p><p>encontrará soluções</p><p>industriais completas</p><p>– da descoberta ao mercado.</p><p>É o nosso 25º aniversário! Registre-se agoraDurante 25 anos, a receita para o sucesso</p><p>evoluiu e expandiu-</p><p>se no encontro</p><p>Apoiador da mídia:</p><p>Código fonte: XBI</p><p>Solvente: A proteína padrão deve</p><p>ser dissolvida no mesmo solvente usado com</p><p>a amostra. Isso atenuará qualquer viés</p><p>do solvente no valor obtido para a amostra.</p><p>Verificação: A concentração da solução</p><p>padrão de proteína não pode ser verificada</p><p>por preparação; ela deve ser verificada</p><p>por análise. Em outras palavras, a</p><p>dispensação precisa da proteína padrão e</p><p>a dissolução subsequente para um</p><p>determinado volume não garantem um padrão</p><p>preciso. Em vez disso, a concentração</p><p>final da solução padrão deve ser</p><p>verificada por análise.</p><p>Homogeneidade: Um padrão de proteína</p><p>deve ser homogêneo ou, se isso não for</p><p>possível, bem caracterizado por sua</p><p>composição (aminoácidos e glicosilação)</p><p>para que os lotes individuais sejam idênticos</p><p>em seu desempenho com o</p><p>sistema de ensaio relevante. A homogeneidade</p><p>é mais facilmente verificada pela análise</p><p>SDS-PAGE (eletroforese em gel de</p><p>poliacrilamida com dodecil</p><p>sulfato de sódio).</p><p>CRITÉRIOS DE VALIDAÇÃO DE ENSAIO</p><p>Descoberta para o mercado</p><p>Conferência e Exposição</p><p>Precisão</p><p>Robustez</p><p>Serviço de Leitura do Círculo nº 127</p><p>(2–4) descrevem um ensaio para</p><p>determinar a concentração de proteína:</p><p>Faixa</p><p>Especificidade</p><p>A espectroscopia ultravioleta funciona para</p><p>proteínas bem caracterizadas usando o coeficiente de</p><p>extinção conhecido para a proteína padrão. Assim, o</p><p>A280 de uma amostra de 1 mg/mL de BSA é igual a</p><p>0,66 em uma cubeta de comprimento de</p><p>caminho de 1 cm (49). É importante corrigir qualquer</p><p>dispersão de luz (resultante de material agregado,</p><p>poeira e assim por diante) registrando a linha de</p><p>base em um intervalo de 400 a 310 nm, onde a proteína</p><p>não absorve.</p><p>Várias características de validação</p><p>a determinação é usada rotineiramente, o</p><p>método deve ser calibrado com</p><p>referência a um método inequívoco.</p><p>Sensibilidade a contaminantes</p><p>fragmentos de peso molecular podem</p><p>resultar em valores errôneos de ensaios de</p><p>ligação de corantes. Além disso, um estudo</p><p>recente (49) mostrou, por exemplo, que a</p><p>presença de fármacos de baixo peso molecular</p><p>pode afetar os diferentes métodos de determinação</p><p>de proteínas em extensões marcadamente</p><p>diferentes.</p><p>Linearidade</p><p>A preparação da solução de</p><p>proteína padrão não é uma questão</p><p>trivial. A albumina sérica bovina (BSA)</p><p>é a mais amplamente usada, então é nosso</p><p>exemplo. As seguintes questões devem ser</p><p>abordadas na preparação do</p><p>padrão.</p><p>Limite de detecção</p><p>Limite de quantificação</p><p>Idealmente, a identidade da proteína deve</p><p>ser confirmada por espectrometria de</p><p>massa, que também revela a ocorrência de</p><p>quaisquer modificações pós-traducionais. A</p><p>presença de baixa</p><p>Precisão</p><p>INTERPHEX2004™</p><p>Melhor quando tomado anualmente.</p><p>INTERPHEX2004</p><p>FARMÁCIA</p><p>PHARMASOURCING&SERVIÇOS</p><p>DESCOBERTA FARMACÊUTICA</p><p>FARMACÊUTICA</p><p>Machine Translated by Google</p><p>PERGUNTAS IMPORTANTES</p><p>Considere cuidadosamente sua escolha de método</p><p>para determinar a concentração de proteína.</p><p>Pergunte a si mesmo estas perguntas: É</p><p>apropriado dado o estado físico e a pureza da amostra?</p><p>Tem a sensibilidade e resposta necessárias?</p><p>É prontamente aplicado e calibrado? Documente o</p><p>método que você escolher claramente e descreva o</p><p>método de calibração usado com ele. Atenção</p><p>especial deve ser dada aos padrões de proteína: sua</p><p>caracterização, preparação e armazenamento. O</p><p>equipamento e os instrumentos que você usa</p><p>devem ser mantidos e calibrados apropriadamente</p><p>por um especialista em metrologia. Negligenciar a</p><p>determinação adequada de proteína pode levar</p><p>a uma falha fatal na documentação de um</p><p>processo de fabricação — lembre-se</p><p>de que o calcanhar de Aquiles foi criado</p><p>apenas por acidente!</p><p>46 BioProcess International JANEIRO DE 2004</p><p>Desenvolver. Biol. 2002, 109: 59–69.</p><p>Análise de Hidrólise e Composição de Aminoácidos</p><p>de Proteínas. J. Chromatog. A 1998,</p><p>39 Smith, BJ; Chapeman JR. Proteína</p><p>8 Código de Regulamentações Federais, Título</p><p>21, Boas Práticas de Fabricação de Alimentos e</p><p>Medicamentos (US FDA, Washington, DC,</p><p>www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/</p><p>cfcfr/ cfrsearch.cfm).</p><p>Bioquímica. 1985, 150: 76–85.</p><p>24 Guermont, C; et al. Sob controle adequado,</p><p>a oxidação de proteínas com estrutura química</p><p>conhecida fornece um método preciso e absoluto para</p><p>a determinação de sua concentração molar. 2000 ,</p><p>277: 46–57.</p><p>21 Ng, V; Cho, P. A relação entre as</p><p>concentrações totais de proteína lacrimal determinadas</p><p>por diferentes métodos e padrões. Graefes</p><p>Arch. Clin. Exp.</p><p>Português B 2002, 37: 493–505.</p><p>2 Diretrizes para a Indústria: Analítica</p><p>36 www.biochrom.co.uk/amino.htm 37 Weiss,</p><p>M; et al. Efeito da hidrólise</p><p>5 Mire-Sluis, AR. Desafios com a tecnologia</p><p>atual para detecção, medição e caracterização</p><p>de anticorpos contra terapêuticas biológicas.</p><p>7 Validação de Biofármacos</p><p>12 Price, NC. (1996) A Determinação</p><p>PCR na Avaliação de Biossegurança e Estabilidade</p><p>Genética de Produtos Biotecnológicos.</p><p>26 Belloque, J; Ramos, M. Determinação do teor de</p><p>caseína do leite bovino por 31P-NMR. J. Dairy Research</p><p>2002, 69: 411–418.</p><p>30 Johnson, AM; et al. Proteínas. Em Teitz</p><p>370–376.</p><p>Português Analítico. Bioquímica. 1996, 236: 302–308.</p><p>Tratamento de águas residuais de laticínios. J. Environ.</p><p>REFERÊNCIAS 1</p><p>Sapan, CV; Técnicas de ensaio de proteína</p><p>colorimétrica. 1999, 29: 99–108.</p><p>40 Knight, MI; Chambers, PJ. Problemas</p><p>16 Lowry, OH; et al. Medições de</p><p>proteínas com o reagente de fenol Folin.</p><p>Validação de Procedimentos e Métodos —</p><p>Química, Fabricação e Documentação de</p><p>Controle. FDA/CDER/CBER, agosto de 2000,</p><p>www.fda.gov.cber/guidelines.htm.</p><p>11 Brush, M. Conjunto de ensaios: Padrão</p><p>o Método Kjeldahl e Dumas para a Determinação</p><p>de Proteína em Alimentos, Usando Dados de um Esquema</p><p>de Teste de Proficiência. Analyst 2002, 127: 1666–</p><p>1668.</p><p>34 www.slrsystems.com/products.htm 35</p><p>www.voigtglobal.com/</p><p>kjeldahl_flasks.htm</p><p>Validação para o Desenvolvimento de</p><p>Biofármacos. Biotechnol. Appl. Biochem. 2001, 34: 195–</p><p>197.</p><p>14 Smith, PK; et al. Medição de proteína</p><p>usando ácido bicinconínico. Analyt.</p><p>38 Fontoulakis, M; Lahm, H.ÿW.</p><p>826: 109–134.</p><p>Processos de Fabricação. Kelley, BD;</p><p>Ramelmeier, RA; eds. ACS Symposium Series 698</p><p>(American Chemical Society: Washington, DC, 1998), p.</p><p>199.</p><p>19 Jenzano, JW. Comparação de cinco</p><p>técnicas para a determinação da concentração de</p><p>proteína. Analyt. Biochem. 1989, 159:</p><p>Processos, outubro de 1994. Conferência</p><p>Internacional sobre a Harmonização de Requisitos</p><p>Técnicos para Registro de Produtos</p><p>Farmacêuticos para Uso Humano, www.ich.org</p><p>23: 19–28.</p><p>31 www.labconco.com/pdf/kjeldahl/index.shtml</p><p>20 Zor, T; Selinger, Z. A linearização do ensaio de</p><p>proteína de Bradford aumenta sua sensibilidade.</p><p>Técnicas e Novos Métodos Fornecem</p><p>Alternativas para a Quantificação de Proteínas em</p><p>Solução. The Scientist. 2000, 14: 23–27.</p><p>Conteúdo de Aminoácidos de Cogumelos</p><p>Cultivados na Finlândia. J. Agricul. Food Chem. 2002,</p><p>50: 6419–6422.</p><p>(Human Press: Totowa, NJ 1998), Capítulo 41, pp.</p><p>503–525.</p><p>10 Rosenberg, IM. Análise e purificação de</p><p>proteínas: técnicas de bancada. Birhauser: Boston,</p><p>MA, 1996, pp. 110–117.</p><p>Proteínas séricas por meio da reação do biureto.</p><p>J. Biol. Chem. 1949, 177: 751–756.</p><p>18 Kjeldahl, JZ (1883), Neue Methode zur</p><p>Bestimmung des Stickstoffs em Organischen Körpern.</p><p>Zeitschrift für Analytische Chemie, 22:</p><p>366–382.</p><p>Associado à Determinação da Concentração</p><p>de Proteína: Uma Comparação de Técnicas para</p><p>Estimativa de Proteína. Mol. Biotechnol. 2003,</p><p>25 McPherson, TN; et al. Comparação das Cargas Poluentes</p><p>no Escoamento de Tempo Seco e Úmido em uma Bacia</p><p>Hidrográfica Urbana do Sul da Califórnia. Water Science</p><p>Technology 2002, 45: 255–261.</p><p>29 Thompson, M; et al. Uma comparação de</p><p>6 Lovatt, A. Aplicações da Quantitativa</p><p>13 Bradford, MM. Um método rápido e sensível</p><p>para quantificação de quantidades de microgramas</p><p>de proteínas utilizando o princípio de ligação proteína-</p><p>corante. Analyt. Biochem. 1976, 72: 248–254.</p><p>Cromatog. A 1998, 795: 263–275.</p><p>Português Analista. Bioquímica. 1999, 273: 163–167.</p><p>17 Anders, JC: et al. Usando Análise de</p><p>Aminoácidos para Determinar Constantes de Absorção:</p><p>Um Estudo de Caso de Validação Usando Albumina de</p><p>Soro Bovino. BioPharm International 2003,</p><p>fevereiro: 30–37.</p><p>Sequenciamento, em Molecular Biomethods</p><p>Handbook, Rapley, R; Walker, JM; eds.</p><p>9ª Conferência Internacional sobre</p><p>Harmonização de Requisitos Técnicos para o Registro</p><p>de Produtos Farmacêuticos para Uso Humano, Q7A ICH</p><p>Good Manufacturing Practice Guidance for Active</p><p>Pharmaceutical Ingredients, www.ich.org.</p><p>15 Gornall, AG; e outros. Determinação de</p><p>Revista Brasileira de Biotecnologia. 2002, 82: 279–300.</p><p>28 Mattila, P. Composição Básica e</p><p>32 www.buchi-analytical.com/ haupt.asp?</p><p>nv=3759 33</p><p>www.storesonline.com/site/ 251298.page/</p><p>73181</p><p>Oftalmologia. 2000, 238: 571–576.</p><p>23 Zellmer, S; et al. Quantificação de lipídios,</p><p>lipossomas, aminoácidos e proteínas por ultramicrodigestão</p><p>térmica e um ensaio ultramicrocoulométrico, com</p><p>base na reação de hipobromito com amônia.</p><p>de Concentração de Proteína. Em Enzimologia</p><p>(série LabFax). Engel, PC, ed. (Bios Scientific Publishers:</p><p>Oxford, Reino Unido, 1996), pp. 34–41.</p><p>do Método de Determinação da Composição de</p><p>Aminoácidos de Proteínas. J.</p><p>Português J. Biol. Química. 1951, 193: 265–275.</p><p>3 Orientação para a indústria: Validação de</p><p>método bioanalítico. FDA/CDER/CVM, maio de 2001,</p><p>www.fda.gov/cder/guidance/4252fnl.htm</p><p>Português Livro-texto de Química Clínica, Burhs,</p><p>CA; Ashwood, ER; eds. (WB Saunders Company:</p><p>Filadélfia, PA. 1999), Capítulo 20, pp. 524–525.</p><p>4 Lundblad, RL. Abordagem para Ensaio</p><p>22 Texto sobre a Validação de Análises</p><p>27 Shan, SB. Desempenho de</p><p>temperatura fria de um biofiltro de palha de trigo para</p><p>Suas condições precisas de</p><p>armazenamento, é claro,</p><p>exigiriam validação.</p><p>Embora o procedimento descrito</p><p>acima possa parecer um tanto tedioso,</p><p>ele é necessário. Você pode preparar</p><p>uma solução padrão para usar ao longo do</p><p>tempo. Essas soluções padrão são melhor</p><p>armazenadas congeladas em pequenas</p><p>alíquotas, cada uma usada uma vez para calibrar um ensaio.</p><p>Machine Translated by Google</p><p>Ciência na divisão IBLS de</p><p>departamento de patologia</p><p>Autor correspondente Roger L.</p><p>Glasgow, Glasgow G12 8QQ, Escócia;</p><p>consultor e professor na área</p><p>Edifício Joseph Black, Universidade de</p><p>Hill, Carolina do Norte); Caixa Postal 16695, Chapel Hill,</p><p>fax</p><p>na</p><p>Universidade da Carolina do Norte (Chapel</p><p>44-141-330-2889,</p><p>Nicolau C. Price é Professor de Proteína</p><p>NC 27516-6695; 1-919-929-5082, fax</p><p>1-919-960-8889; r.lundblad@att.net.</p><p>44-141-330-6447; n.price@bio.gla.ac.uk.</p><p>Lundblad é uma indústria de biotecnologia</p><p>bioquímica e biologia molecular,</p><p>Serviço de Leitura do Círculo nº 128</p><p>Relatórios do BPI sobre</p><p>Português Clin. Exp. Oftalmol. 2000, 238: 738–745.</p><p>44 Mendler, MH. Em pacientes com</p><p>Líquido cefalorraquidiano sem concentração</p><p>Ensaios clínicos de proteínas na análise de um</p><p>Deve ser realizado por</p><p>Subestimado por vários ensaios de proteínas.</p><p>Os expansores de plasma podem levar a resultados inesperados</p><p>161–164.</p><p>Ionização de hidroxila em proteínas: I. Bovinos</p><p>Albumina . 2000, 33: 487–494.</p><p>49 Williams, KM; et. al. Uma avaliação de</p><p>J. Laboratório Clin. Invest. 1999, 59: 133–137.</p><p>Eletroforese. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.</p><p>74: 2509–2515.</p><p>Composição da Proteína Urinária Total</p><p>Modo de cultivo em um bioprocesso para</p><p>de Medicamentos. J. Biochem. Biophys. Métodos. 2003,</p><p>45 Guobing, X; et al. Aplicação de um</p><p>Ligação de corante vermelho de pirogalol e Vitros</p><p>41 Ng, V; et al. Proteínas lacrimais de indivíduos normais</p><p>Jovem chinês de Hong Kong. Graefes Arch.</p><p>Arch. 2000, 439 (3 Supl): R73–R75.</p><p>Determinação de proteína total na urina e</p><p>46 Eppel, GA; et al. Variabilidade do Padrão</p><p>42 de Keijzer, MH; e outros. Infusão de</p><p>A urina foi consideravelmente</p><p>Cirrose, Determinação de Albumina Sérica</p><p>Passo a passo do uso do Auto-Analyzer Hitachi</p><p>7170. J. Clin. Lab. Anal. 2001, 15:</p><p>50 Tanford, C; Roberts, GL Jr. Fenólico</p><p>Solução de urina modelo fragmentada</p><p>Química Clínica 2001, 47: 1717–1719.</p><p>Albumina sérica. J. Amer. Chem. Soc. 1952,</p><p>Imunonefelometria em vez de por proteína</p><p>Resultados em Ensaios de Proteína Urinária. Scand.</p><p>47 Lefevre, G; et al. Influência da proteína</p><p>Ensaios de proteínas para determinação quantitativa</p><p>43 Batic, M; Raspor, P. Efeito de</p><p>1999, 11: 1405–1411.</p><p>Determinado por Pirocatecol-Violeta (UPRO</p><p>Método Biureto Aprimorado para o</p><p>57: 45–55.</p><p>Enriquecimento de biomassa de levedura de cromo. Pflugers</p><p>Métodos. J. Clin. Lab. Anal. 2001, 15: 40–42.</p><p>48 Greive, KA; e outros. Fragmentos de Proteína em</p><p>avanços na tecnologia,</p><p>iniciativas governamentais,</p><p>descobertas de pesquisa,</p><p>desenvolvimento econômico</p><p>resultados de ensaios clínicos,</p><p>associação e mundial</p><p>liberações (ou retrocessos),</p><p>Enviar notícias do produto</p><p>iniciativas e reuniões</p><p>editor em editores@</p><p>bioprocessintl.com.</p><p>relatórios para o assistente</p><p>você!</p><p>Machine Translated by Google</p>exigiriam validação.
Embora o procedimento descrito 
acima possa parecer um tanto tedioso, 
ele é necessário. Você pode preparar 
uma solução padrão para usar ao longo do 
tempo. Essas soluções padrão são melhor 
armazenadas congeladas em pequenas 
alíquotas, cada uma usada uma vez para calibrar um ensaio.
Machine Translated by Google
Ciência na divisão IBLS de
departamento de patologia
Autor correspondente Roger L.
Glasgow, Glasgow G12 8QQ, Escócia;
consultor e professor na área
Edifício Joseph Black, Universidade de
Hill, Carolina do Norte); Caixa Postal 16695, Chapel Hill,
fax
na 
Universidade da Carolina do Norte (Chapel
44-141-330-2889,
Nicolau C. Price é Professor de Proteína
NC 27516-6695; 1-919-929-5082, fax 
1-919-960-8889; r.lundblad@att.net.
44-141-330-6447; n.price@bio.gla.ac.uk.
Lundblad é uma indústria de biotecnologia
bioquímica e biologia molecular,
Serviço de Leitura do Círculo nº 128
Relatórios do BPI sobre
Português Clin. Exp. Oftalmol. 2000, 238: 738–745.
44 Mendler, MH. Em pacientes com
Líquido cefalorraquidiano sem concentração
Ensaios clínicos de proteínas na análise de um
Deve ser realizado por
Subestimado por vários ensaios de proteínas.
Os expansores de plasma podem levar a resultados inesperados
161–164.
Ionização de hidroxila em proteínas: I. Bovinos
Albumina . 2000, 33: 487–494.
49 Williams, KM; et. al. Uma avaliação de
J. Laboratório Clin. Invest. 1999, 59: 133–137.
Eletroforese. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.
74: 2509–2515.
Composição da Proteína Urinária Total
Modo de cultivo em um bioprocesso para
de Medicamentos. J. Biochem. Biophys. Métodos. 2003,
45 Guobing, X; et al. Aplicação de um
Ligação de corante vermelho de pirogalol e Vitros
41 Ng, V; et al. Proteínas lacrimais de indivíduos normais
Jovem chinês de Hong Kong. Graefes Arch.
Arch. 2000, 439 (3 Supl): R73–R75.
Determinação de proteína total na urina e
46 Eppel, GA; et al. Variabilidade do Padrão
42 de Keijzer, MH; e outros. Infusão de
A urina foi consideravelmente
Cirrose, Determinação de Albumina Sérica
Passo a passo do uso do Auto-Analyzer Hitachi 
7170. J. Clin. Lab. Anal. 2001, 15:
50 Tanford, C; Roberts, GL Jr. Fenólico
Solução de urina modelo fragmentada
Química Clínica 2001, 47: 1717–1719.
Albumina sérica. J. Amer. Chem. Soc. 1952,
Imunonefelometria em vez de por proteína
Resultados em Ensaios de Proteína Urinária. Scand.
47 Lefevre, G; et al. Influência da proteína
Ensaios de proteínas para determinação quantitativa
43 Batic, M; Raspor, P. Efeito de
1999, 11: 1405–1411.
Determinado por Pirocatecol-Violeta (UPRO
Método Biureto Aprimorado para o
57: 45–55.
Enriquecimento de biomassa de levedura de cromo. Pflugers
Métodos. J. Clin. Lab. Anal. 2001, 15: 40–42.
48 Greive, KA; e outros. Fragmentos de Proteína em
avanços na tecnologia,
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