Métodos de visualização da célula

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<p>Métodos de visualização da célula</p><p>Técnica citológica</p><p>-Analisa as células de forma individual, descamadas,</p><p>expelidas ou retiradas da superfície de órgão de</p><p>diferentes partes do organismo. Ex: Exame</p><p>citopatológico (papanicolau).</p><p>Formas de obtenção de amostras:</p><p>• Distenção celular (esfregaço)</p><p>◦ Raspagem (swab) → colposcopia</p><p>◦ Imprint ou decalque → Lesões cutâneas,</p><p>biópsias</p><p>◦ Punção aspirativa → sangue, liquor</p><p>espinhal</p><p>• Amostras pastosas</p><p>◦ Expectoração → Escarro</p><p>◦ Punção ou drenagem → massas</p><p>necróticas, abscessos</p><p>• Amostras líquidas</p><p>◦ Espontânea ou por cateter → urina</p><p>◦ Escovação → L. sinoval</p><p>◦ Escovação ou lavado → L. peritonial</p><p>◦ Punção → Lavado vesical, L. peritonial,</p><p>brônquico</p><p>Métodos Histológicos</p><p>São procedimentos diversos que no final os</p><p>fragmentos de tecidos ou órgãos tornam-se</p><p>examináveis ao microscópio óptico. Os métodos de</p><p>exame podem ser divididos em imediato (in vivo) e</p><p>mediato</p><p>• Método imediato</p><p>◦ Simples;</p><p>◦ Não requer processamento;</p><p>◦ Só se aplica a materiais finos e</p><p>transparentes;</p><p>◦ Permite a observação de estruturas “in</p><p>vivo”</p><p>◦ Pode se observar manifestações funcionais</p><p>como a ciclose;</p><p>◦ Exame a fresco → sem coloração ou</p><p>reativos modificadores, pois se baseia nas</p><p>diferenças de índice de refração das</p><p>células ou tecidos;</p><p>◦ Não permite a observação prolongada;</p><p>◦</p><p>◦ Visualiza apenas uma parte dos detalhes</p><p>das estruturas;</p><p>◦ Relativamente grosseiro e leva,</p><p>eventualmente, a morte celular;</p><p>◦ Podem apresentar coloração o que</p><p>aumenta o índice de refração de algumas</p><p>estruturas, realçando-as</p><p>▪ Coloração intravital: introdução de</p><p>corante vital no animal vivo pela</p><p>ingestão, injeção do corante no</p><p>sangue, linfa ou tecido subcutâneo ou</p><p>imersão nos corantes;</p><p>▪ Coloração vital: são soluções diluídas</p><p>de corantes naturais ou artificias</p><p>atóxicos;</p><p>• Método mediato</p><p>◦ Pode ser chamado de post-mortem;</p><p>◦ Requer processamento → necessita de</p><p>coleta de material de fixação, obtenção de</p><p>cortes histológicos e coloração;</p><p>◦ Permite a preparação de cortes</p><p>histológicos permanentes;</p><p>◦ Ex: técnica de parafina</p><p>Microscopia</p><p>Conjunto de técnicas que permite a investigação</p><p>científica por meio do microscópio</p><p>• Microscopia de luz</p><p>◦ Fonte luminosa é a luz → lâmpada com</p><p>filamento de tungstênio</p><p>◦ Composto de partes mecânicas e ópticas;</p><p>◦ Componente óptico consiste em três</p><p>sistemas de lentes:</p><p>▪ Condensador: concentra a luz e projeta</p><p>um feixe luminoso sobre o espécime</p><p>▪ Objetiva: recebe a luz que atravessou o</p><p>espécime e projeta uma imagem</p><p>aumentada em direção a ocular</p><p>▪ Oculares: ampliam novamente a</p><p>imagem que é projetada na retina</p><p>◦ No caso de imagens projetadas na retina,</p><p>a ampliação total é calculada</p><p>multiplicando-se o aumento da objetiva</p><p>pelo aumento da ocular</p><p>◦ Parte mecânica: base, braço, revólver,</p><p>platina, charriot, parafusos macro e</p><p>micrométrico e parafuso de regulagem do</p><p>condensador</p><p>H I S T O L O G I A</p><p>◦ Sistema de iluminação: fonte luminosa,</p><p>diafragmas, filtros e condensador</p><p>Sistema de lentes</p><p>Aberração cromática</p><p>A luz se refrata em feixes luminosos de variadas cores,</p><p>cada qual com o seu respectivo ponto focal que</p><p>gerará imagens com tamanhos que dependerão da</p><p>cor. Por isso, a solução é utilizar lentes acromáticas,</p><p>semiapocromáticas e apocromáticas.</p><p>• Lente Acromática: limitam os efeitos das</p><p>aberrações cromática e esférica. Essa correção</p><p>consiste em dois comprimentos de onda</p><p>tipicamente o vermelho e azul terem o mesmo</p><p>foco no mesmo plano. E corrigem alterações</p><p>esféricas em uma cor de verde.</p><p>• Lente semiapocromática: limitam os efeitos</p><p>das aberrações tipicamente do vermelho e</p><p>azul, mas corrigem em duas ou três cores as</p><p>alterações esféricas</p><p>• Lentes apocromáticas: promovem uma</p><p>correção cromática de três cores o vermelho,</p><p>verde e azul. Além de corrigir a aberração</p><p>esférica em duas ou três cores.</p><p>Lentes secas ou de imersão: que mudam o índice de</p><p>refração da luz</p><p>Aumento:</p><p>• Marrom (2x ou 2,5x);</p><p>• Vermelho (4x ou 5x);</p><p>• Amarelo (10x);</p><p>• Verde (16 ou 20x);</p><p>• Azul-claro (40x ou 50x);</p><p>• Azul cobalto (60x);</p><p>• Branco (100x);</p><p>• Preto (imersão em óleo);</p><p>• Laranja (imersão em glicerina);</p><p>• Branco (imersão em água);</p><p>Partes de um microscópio</p><p>•</p><p>• Tubo ou canhão: Tubo cilíndrico, no qual se</p><p>encontra uma lente de vidro, chamada ocular</p><p>• Oculares: duas lentes convergentes, simples ou</p><p>compostas que servem para ampliar a imagem</p><p>dada pela objetiva</p><p>• Coluna: peça na qual estão articuladas todas</p><p>as outras partes do microscópio. A coluna</p><p>permite, também, transportar o microscópio</p><p>• Revólver: Peça giratória que suporta as</p><p>objetivas</p><p>• Objetivas: Lente que serve para ampliar a</p><p>imagem do objeto observado</p><p>• Platina: Local onde se coloca o material</p><p>observado, que pode ser fixado por meio de</p><p>duas pinças</p><p>• Pinças: Ajuda a ficar a preparação que vai ser</p><p>observada</p><p>• Parafuso macrométrico: permite mover a</p><p>platina com movimentos rápidos, para focar a</p><p>imagem</p><p>• Parafuso micrométrico: permite mover a</p><p>platina com movimentos lentos, para focar a</p><p>imagem</p><p>• Diafragma: regula a intensidade da luz que</p><p>atinge o objeto observado</p><p>• Fonte de luz: tem a função de iluminar a</p><p>preparação</p><p>• Condensador: coletar a luz e direcionar para o</p><p>objeto a ser examinado</p><p>• Pé ou base: suporte que permite assentar o</p><p>microscópio sobre a mesa</p><p>Ampliação do microscópio ótico</p><p>O aumento total do objeto observado é calculado por</p><p>meio da fórmula:</p><p>Aumento final: poder de aumento da objetiva x poder</p><p>de aumento da ocular</p><p>Ex: ocular de 10x com objetiva de 50x, a imagem final</p><p>do objeto estará aumentada em 500x.</p><p>• O poder de resolução depende</p><p>essencialmente da objetiva, já que a ocular</p><p>não tem a propriedade de acrescentar</p><p>detalhes à imagem, ela apenas amplia a</p><p>imagem</p><p>Formação da imagem no MO</p><p>• A fonte de luz emite um raio de luz que</p><p>passará pelo condensador, pelas objetivas e</p><p>pelas oculares, chegando ao olho do</p><p>observador;</p><p>• Entre o condensador e as objetivas é</p><p>posicionado o objeto a ser observado, a</p><p>imagem final será maior do que o tamanho</p><p>real do objeto. Sendo o aumento final</p><p>determinado pela capacidade de aumento da</p><p>objetiva e ao aumento da ocular</p><p>• A lente condensadora agirá formando um</p><p>cone de luz que passa pelo objeto e chega até</p><p>a objetiva que então, projeta uma imagem</p><p>aumentada no plano focal das oculares que,</p><p>por sua vez, irão novamente ampliá-la. As</p><p>imagens fornecidas pelas oculares, por fim,</p><p>podem ser percebidas pela retina.</p><p>Tipos de corante</p><p>Diversos corantes podem ser empregados, mas a</p><p>maioria se comporta como compostos acidófilos</p><p>(afinidade por ácidos) e basófilos (afinidade por bases)</p><p>• Hematoxilina: é um corante básico, que tem</p><p>atração a substâncias ácidas. Essas substâncias,</p><p>ácidas são coradas pela hematoxilina, e</p><p>recebem o nome de basófilas (que fixam</p><p>corantes básicos, pois “gostam” de básicos);</p><p>• Eosina: tem caráter ácido e, sendo assim, atrai</p><p>substâncias básicas conhecidas como</p><p>acidófilas (que fixam corantes ácidos)</p><p>Corante Substância</p><p>corada</p><p>Característic</p><p>a por</p><p>afinidade</p><p>Coloração</p><p>Hematoxilina</p><p>(básica)</p><p>Ácida Basófila Azul-</p><p>Púrpura</p><p>Eosina (ácida) Básica Acidófila Vermelho</p><p>Microscopia de campo claro</p><p>• É o tipo de microscopia básica, em que não</p><p>interferências no caminho óptico</p><p>• A luz é concentrada pelo condensador,</p><p>interage com a amostra e é coletada pela</p><p>objetiva</p><p>Contraste de fase</p><p>• As amostras são observadas ao</p><p>microscópio sem coloração (cultura de</p><p>células);</p><p>• Utilizada na observação de amostras</p><p>muito finas que não podem ser coradas;</p><p>• Baseia-se no atraso que raios difratados</p><p>apresentam em relação a raios não</p><p>difratados</p><p>Microscopia de fluorescência</p><p>• Substâncias que apresentam propriedades</p><p>fluorescentes,</p><p>quando excitadas com uma</p><p>fonte de energia, emitem luz</p><p>• A fluorescência ocorre quando elétrons de</p><p>uma molécula são excitados e mudam de</p><p>camada eletrônica, passando a ocupar</p><p>uma camada mais energética e quando</p><p>voltam ao seu estado original liberam</p><p>energia emitindo luz</p><p>Microscopia eletrônica</p><p>• Possuem lentes eletromagnéticas → ímãs</p><p>capazes de concentrar os elétrons, assim</p><p>como o condensador da microscopia</p><p>óptica</p><p>• É necessário uma coluna de alto-vácuo,</p><p>onde fica todo o sistema de lentes</p><p>eletromagnéticas, que são as verdadeiras</p><p>bobinas</p><p>Microscopia eletrônica de varredura (MEV)</p><p>• As amostras são revestidas por uma fina</p><p>película de metal (como a platina).</p><p>• Mede as diferenças relativas na reflexão de</p><p>elétrons para produzir imagens de</p><p>superfícies tridimensionais</p><p>Microscopia eletrônico de transmissão (MET)</p><p>• Cortes de tecidos ultrafinos que são</p><p>corados com metais pesados (tetóxido de</p><p>ósmio, urânio ou sais de chumbo) para</p><p>aumentar o contraste</p><p>• Mede as diferenças relativas na</p><p>transparência (contraste) de um espécime</p><p>para elétrons</p><p>Diferenças entre MET X MEV</p><p>Microscópio</p><p>eletrônico de</p><p>transmissão (MET)</p><p>Microscópio</p><p>eletrônico de</p><p>varredura (MEV)</p><p>Elétrons Elétrons passam</p><p>através da</p><p>amostra antes de</p><p>formar a imagem</p><p>Elétrons batem na</p><p>superfície da</p><p>amostra e, então</p><p>são refletidos,</p><p>sendo formada a</p><p>imagem</p><p>Tamanho</p><p>da</p><p>amostra</p><p>Necessita de</p><p>cortes finos para</p><p>observação da</p><p>amostra</p><p>É possível</p><p>observar</p><p>estruturas</p><p>intactas. Ex:</p><p>cabeça de</p><p>mosquito</p>