AULA 04 ELETROFORESE, HORIZONTAL, VERTICAL E PCR EM TEMPO REAL

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<p>Técnicas de</p><p>Eletroforese</p><p>by Roberta Godone</p><p>Princípios Básicos da Eletroforese</p><p>A eletroforese baseia-se na migração de moléculas carregadas através de um gel poroso sob a</p><p>influência de um campo elétrico.</p><p>Gel</p><p>O gel atua como um meio de</p><p>suporte que retarda o movimento</p><p>das moléculas.</p><p>Campo Elétrico</p><p>O campo elétrico é gerado por uma</p><p>fonte de corrente, criando um</p><p>gradiente de potencial que</p><p>impulsiona as moléculas</p><p>carregadas.</p><p>Migração</p><p>As moléculas migram através do</p><p>gel em direção ao polo oposto à</p><p>sua carga, com a velocidade</p><p>dependendo do tamanho e da</p><p>carga.</p><p>Aplicações da Eletroforese Horizontal</p><p>A eletroforese horizontal é uma técnica versátil com diversas aplicações em áreas como biologia molecular, bioquímica e medicina.</p><p>1 Análise de Proteínas</p><p>Identificação e quantificação de proteínas em amostras</p><p>biológicas, como soro ou tecido.</p><p>2 Análise de Ácidos Nucléicos</p><p>Determinação do tamanho e integridade de DNA e RNA, e</p><p>separação de fragmentos de DNA para sequenciamento.</p><p>3 Diagnóstico de Doenças</p><p>Identificação de mutações genéticas ou proteínas anormais</p><p>associadas a doenças específicas.</p><p>4 Controle de Qualidade</p><p>Verificação da pureza de produtos farmacêuticos e</p><p>biotecnológicos.</p><p>Preparação da Amostra e do Gel</p><p>A preparação da amostra e do gel são etapas cruciais para garantir a precisão e a</p><p>qualidade dos resultados da eletroforese.</p><p>1 Preparo da Amostra</p><p>A amostra deve ser adequadamente processada para garantir a</p><p>solubilidade e a estabilidade das moléculas.</p><p>2 Preparo do Gel</p><p>O gel é preparado com diferentes porcentagens de acrilamida para</p><p>controlar o tamanho dos poros, permitindo a separação de diferentes</p><p>faixas de peso molecular.</p><p>3 Carregamento da Amostra</p><p>A amostra é cuidadosamente carregada nos poços do gel, geralmente</p><p>com um corante de rastreamento para visualizar o progresso da</p><p>migração.</p><p>Montagem do Aparato de</p><p>Eletroforese</p><p>O aparato de eletroforese horizontal consiste em uma cuba com tampão de corrida, o</p><p>gel, os eletrodos e um sistema de alimentação.</p><p>Cuba</p><p>A cuba contém o tampão de corrida e o gel, e possui eletrodos</p><p>conectados à fonte de alimentação.</p><p>Gel</p><p>O gel é inserido na cuba, com os poços de carregamento posicionados</p><p>para a aplicação das amostras.</p><p>Eletrodos</p><p>Os eletrodos são imersos no tampão de corrida e conectados à fonte de</p><p>alimentação para gerar o campo elétrico.</p><p>Condições de Corrida</p><p>Eletroforética</p><p>As condições de corrida da eletroforese, como voltagem, corrente e tempo, são</p><p>cuidadosamente controladas para garantir resultados otimizados.</p><p>Voltagem Determina a força do campo</p><p>elétrico, afetando a velocidade de</p><p>migração das moléculas.</p><p>Corrente Refere-se à quantidade de carga</p><p>que flui através do circuito,</p><p>influenciando o aquecimento do</p><p>sistema.</p><p>Tempo A duração da corrida determina a</p><p>distância que as moléculas</p><p>percorrem no gel.</p><p>Visualização e Análise dos Resultados</p><p>Após a corrida, as bandas separadas no gel são visualizadas usando diferentes métodos, dependendo do tipo de molécula analisada.</p><p>Corantes</p><p>Corantes específicos podem ser utilizados</p><p>para corar as bandas, tornando-as visíveis à</p><p>luz visível ou UV.</p><p>Radioatividade</p><p>Moléculas marcadas radioativamente</p><p>podem ser detectadas por autoradiografia,</p><p>revelando bandas correspondentes.</p><p>Fluorescência</p><p>Moléculas marcadas com fluoróforos</p><p>podem ser visualizadas sob iluminação UV,</p><p>mostrando bandas fluorescentes.</p><p>Slide 1</p><p>Slide 2</p><p>Slide 3</p><p>Slide 4</p><p>Slide 5</p><p>Slide 6</p><p>Slide 7</p><p>Slide 8</p><p>Slide 9</p><p>Slide 10</p><p>Slide 11</p><p>Slide 12</p><p>Slide 13</p><p>Slide 14</p><p>Slide 15</p><p>Slide 16</p><p>Slide 17</p><p>Slide 18</p><p>Slide 19</p><p>Slide 20</p><p>Slide 21</p><p>Slide 22</p><p>Slide 23</p><p>Slide 24</p><p>Slide 25</p><p>Slide 26</p><p>Slide 27</p><p>Slide 28</p><p>Slide 29</p><p>Slide 30</p><p>Slide 31</p><p>Slide 32</p><p>Slide 33</p>