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A
B
C
D
E
1 Marcar para revisão
A curva padrão desempenha
um papel essencial na
quantificação absoluta de um
DNA alvo em uma amostra.
Qual é a finalidade da curva
padrão em quantificação
absoluta de DNA alvo?
Determinar a
temperatura ótima de
amplificação do DNA
alvo.
Calibrar a
concentração de
reagentes na reação
de amplificação.
Estabelecer a
linearidade e
eficiência da
amplificação para
cálculos precisos.
Identificar a
sequência específica
do DNA alvo.
Avaliar a presença de
contaminantes na
amostra.
Questão 1 de 10
Em branco �10�
Finalizar exercício
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
Feedback
Exercício
Amplificação In
Vitro De Dna
Sair e
finalizar
depois
A
B
C
2 Marcar para revisão
A Biotecnologia utiliza
conceitos das áreas da Biologia
Molecular e da Genética
Molecular, que têm uma ampla
gama de técnicas, métodos e
equipamentos específicos para
cada objetivo.
Com relação à análise e
identificação de material
genético utilizando técnicas de
biologia molecular, assinale a
opção correta.
A eletroforese em gel
de agarose é
preferencialmente
utilizada para separar
fragmentos de DNA,
como produtos de
PCR.
Quando uma solução
aquosa de DNA é
aquecida até 100 °C
ou exposta a um pH
maior ou igual a 13, a
hélice da molécula
rapidamente se
dissocia em duas fitas
duplas.
Cromossomos inteiros
não podem ser
individualizados por
meio de técnicas de
Biologia Molecular.
D
E
Para análise de perfil
genético, por
exemplo, na Biologia
forense, utiliza-se a
tecnologia do DNA
recombinante, ou por
clonagem gênica.
A hibridação de
sondas de DNA com
RNAs celulares em
uma qPCR permite
determinar se um
gene sofreu ou não
uma mutação.
3 Marcar para revisão
Em algumas situações, a
obtenção de DNA a partir de
RNA transcrito é importante,
como, por exemplo, na
construção de bibliotecas.
Considerando os conceitos
relacionados a essa estratégia
e a figura acima, que mostra
uma das possíveis estratégias
para síntese de DNA a partir de
RNA, assinale a opção correta.
A
B
C
D
E
A reação mostrada na
etapa 3 ilustra a
atividade da enzima
transcriptase reversa.
A reação mostrada na
etapa 4 ilustra a
atividade da enzima
DNA polimerase.
Na etapa 4, para que
ocorra a reação, é
suficiente a adição
dos nucleosídios
representados por A,
U, C, G.
O DNA obtido pelo
método ilustrado é
denominado tDNA.
A reação mostrada na
etapa demonstra a
desnaturação da fita
de mRNA.
4 Marcar para revisão
No diagnóstico clínico-
molecular, a reação em cadeia
da polimerase �PCR) em tempo
real pode ser utilizada para a
avaliação da carga viral ou
bacteriana, para a
determinação da resistência a
antibióticos e, até mesmo, para
o prognóstico de tumores
malignos. A figura abaixo
apresenta ciclos de
amplificação de amostras por
PCR em tempo real, sendo �A�
uma amplificação de um
determinado segmento gênico
que identifica um determinado
marcador tumoral em células
neoplásicas e �B) uma
amplificação do mesmo
segmento gênico em células
não neoplásicas.
A partir das informações
apresentadas, conclui-se que:
A
B
C
o Ct (ciclo threshold)
pode ser determinado
pela intersecção da
linha do limiar de
detecção da reação
threshold, com a linha
da amplificação
gênica de cada
amostra.
O aumento da
fluorescência indica
que a amplificação da
sequência-alvo está
ocorrendo, pois a
cada ciclo, durante a
desnaturação da
dupla fita, ocorre
liberação da
fluorescência.
A linha paralela ao
eixo referente ao
número de ciclos, na
altura em que se inicia
a fase exponencial da
amplificação gênica,
denominado
threshold, representa
falsos sinais positivos
por contaminação das
amostras por DNA
genômico.
D
E
A análise comparativa
das duas amostras
deve ser realizada a
partir da estabilização
da amplificação, que
ocorre na fase platô,
sendo alcançada no
ciclo 28 para a
amostra A, e no ciclo
40, para a amostra B.
O maior Ct �26) é
observado no início
da fase exponencial
de amplificação em
células não
neoplásicas ( B ), e
indica maior
expressão
comparativamente às
células neoplásicas (
B ), que apresentam
Ct = 17, não sendo
esta sequência-alvo
um bom marcador
tumoral.
5 Marcar para revisão
Ao se analisar a evolução das
estratégias para determinação
de identidade genética, que se
tornaram um procedimento
sensível e informativo, pode-se
notar três fases: uma inicial,
após a descrição de um
marcador voltado ao
polimorfismo genético em
1980, que deu origem às
A
B
impressões digitais de DNA,
com a aplicação de técnicas de
polimorfismo de tamanho dos
fragmentos de restrição -
restriction fragment length
polymorphism �RFLP� -; uma
segunda fase de incorporação
de novas técnicas, no final da
década de 80 do século XX,
como a reação em cadeia da
polimerase �PCR�, que permitiu
um significativo aumento na
sensibilidade dos métodos e a
consequente identificação de
indivíduos com amostras
colhidas de fragmentos de
unhas, goma de mascar etc.; e
uma terceira etapa, mais
recente, cuja ênfase foi a
padronização metodológica e
estatística e a geração de
bancos de dados.
Considerando as aplicações da
PCR, assinale a opção correta.
Amplificação de
conjuntos de
repetições em tandem
curtas (short tandem
repeats) facilita a
identificação de
indivíduos.
O uso correto da PCR
requer cuidados para
evitar a desnaturação
do DNA na etapa em
que as fitas são
separadas.
C
D
E
A RT-qPCR permite a
amplificação por meio
da adição de
aminoácidos a novas
fitas de polímero
sintetizadas.
Uma das limitações da
PCR é a
impossibilidade de se
amplificar diferentes
sequências
simultaneamente.
Ao se planejar um
experimento para
identificação de
indivíduos, deve-se
ter o cuidado de
escolher sondas para
qPCR em regiões que
não contenham
mutações.
6 Marcar para revisão
A Reação em Cadeia da
Polimerase �PCR) desempenha
um papel fundamental na
biologia molecular,
possibilitando a amplificação
seletiva de segmentos
específicos de DNA. Qual é a
diferença central entre a PCR
qualitativa e a PCR quantitativa
(em tempo real)?
A
B
C
A PCR qualitativa
requer ciclos
adicionais para
quantificar o produto,
enquanto a PCR
quantitativa não
necessita de
revelação posterior.
A PCR quantitativa é
mais rápida e não
exige revelação
posterior, enquanto a
PCR qualitativa é mais
lenta.
A PCR qualitativa
ocorre em um
termociclador
especializado (tempo
real), enquanto a PCR
quantitativa utiliza um
termociclador comum.
D
E
A PCR quantitativa é
mais sensível na
detecção de alvos
específicos
necessitando de
amplificação em
tempo real, enquanto
a PCR qualitativa é
mais rápida na
amplificação.
A PCR qualitativa não
requer amplificação
do produto alvo,
enquanto a PCR
quantitativa quantifica
a presença do alvo
em tempo real.
7 Marcar para revisão
SNPs são empregados
amplamente para a
identificação humana e
possuem diferenças relevantes.
A análise dos SNPs também
pode estar associada aos
fenótipos individuais, havendo
uma possibilidade futura de
identificação de traços físicos
como, por exemplo, a cor da
íris. Os SNPs são:
A
B
C
D
E
A
B
Elementos repetitivos
do genoma nuclear
Sequências presentes
somente no DNA
mitocondrial
Homozigotos
Polimorfismos de
nucleotídeo único;
uma variação na
sequência de DNA
Heterozigotos
8 Marcar para revisão
A principal função do PCR
multiplex é permitir a detecção
simultânea de múltiplos alvos
de DNA em uma única reação.
Qual é a principal função da
técnica de PCR multiplex no
diagnóstico de doenças
genéticas?
Amplificar regiões
próximas de
repetições de DNA.
Identificar a presença
de infecções virais.
C
D
E
Determinar a estrutura
tridimensional de
proteínas.
Avaliar a expressão
gênica em diferentes
tecidos.
Detectar pequenas
mutações em alelos
distintos.
9 Marcar para revisão
A importância primordial da
sensibilidade da PCR
transcende diversoscenários
biomoleculares, incluindo
diagnósticos clínicos,
pesquisas genéticas e análises
de patógenos. Nesse contexto,
qual é exatamente o conceito
subjacente à sensibilidade da
PCR?
A
B
C
D
E
Sensibilidade da PCR
refere-se à
capacidade de
amplificar DNA em
altas temperaturas, o
que facilita a
detecção.
Sensibilidade da PCR
representa a
habilidade da enzima
Taq polimerase em se
ligar ao DNA-alvo.
Sensibilidade da PCR
é a quantidade
máxima de DNA que
pode ser amplificada
em uma reação.
Sensibilidade da PCR
é a capacidade de
detectar o sinal do
DNA-alvo em
amostras contendo-o
na realidade.
Sensibilidade da PCR
é a velocidade com
que os produtos de
amplificação são
gerados.
10 Marcar para revisão
A
B
C
A Biotecnologia trabalha
predominantemente
manipulando material genético
de seres vivos; para a maioria
dos organismos, o material
genético é a molécula de DNA.
Acerca da estrutura da
molécula de DNA, assinale a
opção correta.
O DNA é composto
por quatro tipos de
bases nitrogenadas:
adenina, citosina,
timina e uracila.
O açúcar contido na
molécula de DNA é a
ribose.
Em uma cadeia de
DNA, os nucleotídeos
se ligam aos açúcares
e fosfatos por pontes
de hidrogênio.
D
E
As duas fitas que
compõem a molécula
de DNA são ligadas
por pontes de
hidrogênio entre suas
bases nitrogenadas.
Há
complementaridade
entre as bases
nitrogenadas adenina
e timina e entre
guanina e uracila.