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Proteínas e sua síntese: tradução Prof. Dr. Allisson Benatti Justino IBTEC - UFU Universidade Federal de Uberlândia Curso de graduação em Medicina Veterinária Introdução • Vimos que o RNA transcrito dos genes é classificado como mensageiro (mRNA) ou funcional (tRNA e rRNA) • As duas classes estão envolvidas na síntese proteica • O processo de tradução em procariotos e eucariotos é muito similar, embora o local da tradução ocorra em compartimentos diferentes dentro da célula Estrutura das proteínas • Proteína é um polímero composto por monômeros chamados aminoácidos (aa) • Proteína = cadeia de aa = polipeptídeos • Todos os aa têm uma cadeia lateral: grupo R • Existem 20 aa conhecidos nas proteínas e cada um tem um grupo R diferente Estrutura das proteínas • Aminoácidos são unidos por ligações covalentes chamadas ligações peptídicas • Ligação peptídica formada pela união de extremidade amino (NH2) de um aa com extremidade carboxila (COOH) de outro aa • Cadeia polipeptídica sempre tem extremidade amino e extremidade carboxila Estrutura das proteínas Estrutura das proteínas • Níveis de organização das estruturas das proteínas - Estrutura primária: sequência linear de aa em cadeia polipeptídica - Estrutura secundária: regiões locais da cadeia polipeptídica dobram-se em formas específicas, por forças de ligações fracas. Ex: α-hélice e conformação β - Estrutura terciária: produzida por dobramento da secundária - Estrutura quaternária: composta de dois ou mais polipeptídeos separados dobrados, também chamadas subunidades, unidos por pontes fracas Estrutura das proteínas Estrutura das proteínas • Muitas proteínas são estruturas compactas, chamadas proteínas globulares – enzimas e anticorpos • Proteínas com forma linear são chamadas proteínas fibrosas – componente da pele, pêlo e tendões • Forma da proteína relacionada com sua função • Sequências de aa’s ou dobras na proteína que estão associadas a determinadas funções são chamadas de domínio Estrutura das proteínas Estrutura das proteínas Código genético • Como a sequência de nucleotídeos do DNA dita a sequência de aa’s da proteína? • Nucleotídeos são as “letras” em um código, e uma combinação de letras pode formar “palavras” que representam aa’s diferentes • Sendo assim, quantas letras no mRNA constituem uma palavra, ou codon, e quais codons representam um aa? • Segundo Francis Crick, Sidney Brenner e colaboradores (1961): 3 bases codificam um aa tRNA • O aa precisa ser levado para o molde do mRNA por uma molécula adaptadora • Os aa’s estão ligados aos RNA transportadores ou de transferência (tRNA) • Os tRNA levam o aa para o ribossomo, para que o aa seja ligado ao polipeptídeo crescente • Estrutura do tRNA - Especificidade entre um códon do mRNA e aa que ele designa - Tem forma de trevo que consiste em 4 hastes de dupla hélice e 3 alças unifilamentares - A alça do meio é chamada alça do anticódon (trinca de nucleotídeos anticódon) - Anticódon no tRNA e o códon no mRNA se ligam por pareamento específico de bases RNA com RNA tRNA tRNA • Os aa’s são ligados aos tRNA por enzimas chamadas aminoacil-tRNA sintetases • Existem 20 dessas enzimas, uma para cada aa • Sintetases têm dois sítios de ligação: um para o aa e outro para seu tRNA correspondente tRNA tRNA Ribossomos • Síntese de proteínas ocorre quando o tRNA e as moléculas de mRNA se associam aos ribossomos • Função tRNA e ribossomos é traduzir a sequência de códons de nucleotídeos em uma sequência de aa’s na proteína • Sítio de síntese de proteínas: ribossomos • Ribossomos consistem em uma subunidade pequena e uma grande, cada uma feita de RNA (RNA ribossômico=rRNA) • Cada subunidade é composta de um a três tipos de rRNA e até 50 proteínas • As subunidades foram caracterizadas pela sua velocidade de sedimentação quando centrifugadas - Procariotos: subunidades 30S e 50S (indicação de tamanho molecular) – ribossomo completo 70 S - Eucariotos: subunidades 40S e 60S – ribossomo completo 80S Ribossomos • Características dos ribossomos - Sítios de interação: - Sítio de ligação ao mRNA está totalmente dentro da subunidade menor - Três sítios de ligação para os tRNAs – A, P, E -Cada tRNA ligado une as subunidades 30S e 50S – anticódon posicionado na subunidade 30S e extremidade aminoacil na subunidade 50S Ribossomos Ribossomos • Centro decodificador: está na subunidade 30S e garante que apenas os tRNAs que levam anticódons que se ajustam aos códons serão aceitos no sítio A • Centro peptiltransferase: está na subunidade 50S e é o local onde a formação da ligação peptídica é catalisada Ribossomos Processo de tradução • Início, alongamento e término • Diferenças procariotos e eucariotos • Tradução feita pelos ribossomos sentido 5’ – 3’ • Conjunto de tRNAs leva os aa’s para o ribossomo e seus anticódons ligam-se aos códons do mRNA expostos no ribossomo • O aa que chega é ligado a extremidade amino do polipeptídeo crescente no ribossomo • Início - Colocar primeiro aminoacil-tRNA no sítio P do ribossomo - Na maioria dos procariotos e em todos os eucariotos, primeiro aa em qualquer polipeptídeo recém-sintetizado é a metionina especificada pelo códon AUG - Inserida não pelo tRNA-met, mas por um tRNA especial chamado iniciador – tRNA-met i Processo de tradução Procariotos Eucariotos • Alongamento - Sítio P: reconhecimento do tRNA iniciador – torna sítio A pronto para aceitar outro tRNA - Sítio A: novo tRNA com aa ligado – duas extremidades aminoacial são justapostas no centro peptidiltransferase - Translocação dos tRNAs dos sítios A e P para P e E - Sítio E: tRNA desacilado deixa o sítio Processo de tradução Processo de tradução • Término - Ciclo continua até o códon no sítio A ser um dos três códons de fim: UGA, UAA ou UAG - Fatores de liberação (RF1, RF2 e RF3) reconhecem códons de fim - Levam a liberação do polipeptídeo do tRNA no sítio P e as subunidades ribossômicas separam-se Processo de tradução • Eventos pós-tradução: - Quando liberadas dos ribossomos, a maioria das proteínas recém- sintetizadas é incapaz de funcionar - Proteínas recém-sintetizadas precisam dobrar-se corretamente em forma tridimensional: auxílio das chaperonas em uma câmara na máquina de dobramento - Aa’s de algumas proteínas precisam ser modificados quimicamente: fosforilação (ativação proteína) e ubiquitinização (degradação) de cadeias laterais Processo de tradução Processo de tradução • Vídeo Slide 1: Proteínas e sua síntese: tradução Slide 2: Introdução Slide 3: Estrutura das proteínas Slide 4: Estrutura das proteínas Slide 5 Slide 6: Estrutura das proteínas Slide 7: Estrutura das proteínas Slide 8: Estrutura das proteínas Slide 9: Estrutura das proteínas Slide 10: Estrutura das proteínas Slide 11: Estrutura das proteínas Slide 12: Código genético Slide 13 Slide 14: tRNA Slide 15: tRNA Slide 16: tRNA Slide 17: tRNA Slide 18: tRNA Slide 19: Ribossomos Slide 20: Ribossomos Slide 21 Slide 22: Ribossomos Slide 23: Ribossomos Slide 24: Ribossomos Slide 25: Processo de tradução Slide 26: Processo de tradução Slide 27: Procariotos Slide 28: Processo de tradução Slide 29: Processo de tradução Slide 30: Processo de tradução Slide 31 Slide 32: Processo de tradução Slide 33: Processo de tradução