[Fluorimetria] Roteiro

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FLUORIMETRIA
Bibliografia 
Sotomayor, M. D. P. T.; Dias, I. L. T.; Lanza, M. R. V.; Moreira, A. 
B.; Kubota, L. T. Quím. Nova, 31(7) p.1755, 2008 
O’Reilly, J.E., J.Chem Education, 52 (9) p. 610, 1975. 
Objetivo 
Familiarização com a técnica de fluorimetria. Utilização das 
técnicas de calibração externa e adição de padrão para a 
determinação de quinino (sulfato de quinina) em amostra-problema. 
Instruções gerais 
1. Ligar o fluorímetro Turner e a lâmpada UV, deixando aquecer por 
quinze minutos. 
2. Escolher os filtros primário e secundário. Os filtros primários 
disponíveis são identificados como NB360, NB405, NB440, NB490 
e NB540, sendo que o número coincide com o λ de máxima 
transmitância do filtro. Os filtros secundários são identificados 
como SC415, SC430, SC515, SC535, SC585 e SC668, sendo que o 
número coincide com o λ a partir do qual o filtro é transparente. 
Escolha um filtro primário e outro secundário para a análise de 
quinino, pela observação dos espectros de excitação e emissão. 
3. Justifique sua escolha no relatório. 
Determinação de quinino em amostras 
sintéticas por calibração externa 
4. Partindo de soluções estoque 2,0 mg/L de quinino, preparar 
soluções contendo 0,00 (branco); 0,20; 0,40; 0,60 e 0,80 mg/L em 
balões de 10,0 mL, completando o volume com H2SO4 0,2 mol/L. 
5. Utilizar o branco para o ajuste de zero do fluorímetro e a solução 
de maior concentração para ajustar o fundo de escala. 
6. Fazer a leitura dos padrões e construir uma curva de calibração de 
intensidade de emissão por concentração. 
7. Medir a intensidade de emissão das amostras A e B. Caso o valor 
de emissão fique acima dos valores obtidos na construção da curva 
de calibração, faça diluições apropriadas da amostra com H2SO4 
0,2 mol/L, usando balão de 10,0 mL e repita a leitura. 
8. Calcular a concentração de quinino em cada amostra. 
Apresentar os resultados e os cálculos no relatório. 
Estudo do efeito do íon cloreto 
9. Repetir a preparação das soluções do item 4, incluindo, porém, 
a adição de 0,2 mL da solução estoque de NaCl 0,1 mol/L. 
10. Fazer as leituras de fluorescência nas mesmas condições 
instrumentais utilizadas anteriormente. 
11. Construir nova curva de calibração sobrepondo-a à anterior 
(item 6) e avaliar o efeito do cloreto. 
Determinação de quinino em amostra 
sintética contento cloreto por adição de 
padrão 
12. Em 5 balões de 10,0 mL, pipetar 1,0 mL da amostra C. 
Adicionar volumes apropriados de uma solução estoque de sulfato 
de quinino 2,0 mg/L, para que a concentração adicionada de 
padrão seja, ao final, 0,00; 0,20; 0,40, 0,60 e 0,80 mg/L. 
Completar o volume com a solução 0,2 mol/L de H2SO4 e 
homogeneizar. 
13. Utilizar o branco para o ajuste de zero do fluorímetro. Em 
seguida, medir a fluorescência das demais soluções padrão. 
14. Plotar os valores obtidos em papel milimetrado e determinar a 
concentração de quinino na amostra. Apresentar os resultados e os 
cálculos no relatório. 
Curva de calibração para uma ampla faixa 
de concentrações 
15. Partindo de soluções estoque 100 mg/L de quinino, preparar 
soluções contendo 0,0 (branco); 10,0; 20,0; 30,0; 50,0 e 70,0 mg/L 
em balões de 10,0 mL, completando o volume com H2SO4 
0,2 mol/L. 
16. Utilizar o branco para o ajuste de zero do fluorímetro e a 
solução de maior concentração para ajustar o fundo de escala. 
17. Fazer a leitura dos padrões e construir uma curva de calibração 
de intensidade de emissão por concentração. Comparar com as 
curvas obtidas anteriormente.