Estudo dirigido 8 - Marisa Camargos

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Nome: Marisa Camargos Barbosa 
Matrícula: 814003 
Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais – Campus Betim 
Estudo Dirigido 8 – Sequenciamento de Nova Geração 
 
1) Julgue as frases a seguir e coloquei V para as verdadeiras e F para as falsas: 
( V ) Os métodos de nova geração de sequenciamento de DNA (next generation 
sequencing) permitem realizar sequenciamento de alto desempenho, sendo um desses 
métodos o pirosequenciamento. A leitura da sequência de DNA por esse método é 
realizada a partir de uma combinação de reações enzimáticas, iniciada com a liberação 
de uma molécula de pirofosfato, quando um desoxinucleotídeo é incorporado à cadeia 
de DNA 
( F ) Metodologias de segunda e terceira geração de NGS são baseadas na amplificação 
dos ácidos nucléicos a serem sequenciados, sendo essa amplificação essencial para a 
captação do sinal de leitura em equipamentos de ambas as gerações 
( V ) Sequenciar um genoma por métodos NGS é mais barato e rápido do que 
sequenciar o mesmo genoma pelo o método Sanger. 
 
2) A técnica de sequenciamento de DNA consiste em determinar exatamente a sequência 
de nucleotídeos que compõe um fragmento de DNA. Uma das primeiras metodologias 
foi desenvolvida na década de 1970 e ficou conhecida como sequenciamento de Sanger. 
Atualmente, com a evolução da metodologia, o sequenciamento é conhecido por nova 
geração, o que possibilitou a diminuição considerável do tempo necessário para 
obtenção de resultados, além de reduzir seus custos. Qual item a seguir indica a 
diferença entre o sequenciamento de Sanger e o de nova geração? 
a) Não há diferença técnica entre as metodologias, o que ocorreu foi simplesmente um 
avanço na área da informática que permitiu maior agilidade na obtenção dos resultados 
no sequenciamento de nova geração. 
b) Utilização de di-deoxi-ribonucleotídeos radioativos no de Sanger, diferindo da 
capacidade de automação com a utilização de di-deoxi-ribonucleotídeos fluorescentes 
no de nova geração. 
c) A diferença entre os métodos baseia-se simplesmente na quantidade de 
nucleotídeos que são registrados por cada uma delas. Enquanto numa única reação 
de Sanger são registrados aproximadamente 1.000 nucleotídeos, no 
sequenciamento de nova geração mais de 1.000.000 de nucleotídeos são registrados 
em cada poço de reação. Portanto, há uma considerável otimização no segundo 
caso. 
d) O método de Sanger era todo manual, o que tornou o processo bastante demorado. Já 
o de nova geração foi automatizado com a utilização de equipamentos 
computadorizados, aumentando a velocidade de processamento das amostras. 
e) O método de Sanger utiliza nucleotídeos com a substituição do grupo hidroxila por 
hidreto no carbono 3' da ribose. Já no de nova geração, diversos princípios foram 
desenvolvidos, porém todos eles compartilham algumas características, como 
multiplexing (análise de diversas amostras ao mesmo tempo) e capacidade de registrar 
sequências menores em relação ao de Sanger. 
 
3) Os estudos de sequenciamento genético iniciaram-se na década de 1970. Desde 
então, as tecnologias de sequenciamento vêm evoluindo e permitindo expressivos 
avanços nas mais deferentes áreas do conhecimento. Analise as seguintes afirmativas 
referentes às metodologias de sequenciamento de ácidos nucleicos atualmente 
disponíveis. 
I - As tecnologias de sequenciamento de ácidos nucleicos denominadas de NGS (Next 
Generation Sequencing) apresentam como grande diferencial o processamento massivo 
de amostras, que é possível pelo uso de adaptadores específicos e determinados para 
cada tecnologia. 
II - Metodologias de segunda e terceira geração de NGS são baseadas na amplificação 
dos ácidos nucleicos a serem sequenciados, sendo essa amplificação essencial para a 
captação do sinal de leitura em equipamentos de ambas as gerações. 
III - A tecnologia de sequenciamento por terminadores reversíveis tem como principal 
característica, frente a outras tecnologias, o fundamento da fragmentação de DNA com 
alta integridade e posterior ligação de terminadores reversíveis à porção 5’ e 3’ dos 
fragmentos gerados. 
IV - A base do processo, em todas as metodologias de sequenciamento, para a obtenção 
da sequência de um genoma bacteriano completo é a fragmentação do DNA, a 
construção das bibliotecas e a leitura das bases. Posteriormente, o sucesso na montagem 
do conjunto de dados obtido, com fechamento do genoma bacteriano, está 
primariamente vinculado à qualidade das sequências geradas. 
Quais estão corretas? 
a) Apenas I. 
b) Apenas I e III. 
c) Apenas I e IV. 
c) Apenas II e III. 
d) Apenas II e IV.