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NeuroRecurso
Otimizando o direcionamento de g
enes específicos do sistema 
nervoso com linhas de driver Cre: prevalência de recombinação de 
linhagem germinativa e fatores de influência
Destaques
d A maioria das linhagens de driver Cre de camundongos testadas exibiram taxas variáveis de 
recombinação da linhagem germinativa
d A recombinação da linhagem germinativa exibe viés de sexo parental e 
seletividade do locus alvo
d Princípios semelhantes se aplicam a múltiplos organismos e 
sistemas de recombinase
d Diretrizes são fornecidas para detectar e minimizar a 
recombinação germinativa indesejada
Luo et al., 2020, Neuron106,37–65 8 de abril de 
2020ª2020 Elsevier Inc. https://doi.org/10.1016/
j.neuron.2020.01.008
Autores
Lin Luo, Mateusz C. Ambrozkiewicz, 
Fritz Benseler, ..., Huda Yahya Zoghbi, 
Hiroshi Kawabe, Ann Marie Craig
Correspondência
kawabe@em.mpg.de (HK), 
acraig@mail.ubc.ca (AMC)
em resumo
Luo et ai. relatam taxas variáveis de recombinação da 
linhagem germinativa em linhagens de driver Cre de 
camundongo comumente usadas, influenciadas pelo 
sexo dos pais portadores de Cre e loci alvo.
Diretrizes são fornecidas para otimizar a 
recombinação específica do tipo de célula em
organismos geneticamente direcionados que 
expressam recombinases específicas de sítio.
mailto:kawabe@em.mpg.�de
mailto:acraig@mail.ubc.�ca
https://doi.org/10.1016/j.neuron.2020.01.008
http://crossmark.crossref.org/dialog/?doi=10.1016/j.neuron.2020.01.008&domain=pdf
https://www.onlinedoctranslator.com/pt/?utm_source=onlinedoctranslator&utm_medium=pdf&utm_campaign=attribution
neurônio
NeuroRecurso
Otimizando o direcionamento de genes específicos do 
sistema nervoso com linhas Cre Driver: Prevalência
de recombinação germinativa e fatores de influência
Lin Luo,1Mateusz C. Ambrozkiewicz,2,3Fritz Benseler,2Cui Chen,4Emília Dumontier,5Susanne Falkner,6
Elisabetta Furlanis,6Andrea M. Gomez,6Naosuke Hoshina,7Wei-Hsiang Huang,8,9Mary Anne Hutchison,10
Yu Itoh-Maruoka,11Laura A. Lavery,12,13Wei Li,4Tomohiko Maruo,11,14,15Junko Motohashi,16Emily Ling-Lin Pai,17,18
Kenneth A. Pelkey,19Ariane Pereira,20Tom Philips,21Jennifer L. Sinclair,22Jeff A. Stogsdill,23,24Lisa Traunmu €ller,6
Jiexin Wang,25Piada Wortel,26Wenjia Você,25,27,28Nashat Abumaria,4,29Kevin T. Beier,30Nils Brose,2
(A lista de autores continua na próxima página)
1Djavad Mowafaghian Center for Brain Health and Department of Psychiatry, University of British Columbia, 2211 Wesbrook Mall, Vancouver, BC V6T 
2B5, Canadá
2Departamento de Neurobiologia Molecular, Instituto Max Planck de Medicina Experimental, Hermann-Rein-Strasse 3, 37075 Göttingen, 
Alemanha
3Instituto de Biologia Celular e Neurobiologia, Charité-Universita €tsmedizin Berlin, membro corporativo da Freie Universita €t Berlim,
Humboldt-Universita€t zu Berlin, e Instituto de Saúde de Berlim, Charitéplatz 1, 10117 Berlim, Alemanha
4State Key Laboratory of Medical Neurobiology and MOE Frontiers Center for Brain Science, Institutes of Brain Science, Fudan University, 
Shanghai 200032, China
5Departamento de Neurologia e Neurocirurgia, Montreal Neurological Institute, McGill University, Montreal, QC H3A 2B4, Canadá
6Biozentrum da Universidade de Basel, Basel, Suíça
7FM Kirby Neurobiology Center, Departamento de Neurologia, Boston Children's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, EUA
8Departamento de Biologia, Howard Hughes Medical Institute, Stanford University, Stanford, CA 94305, EUA
9Centro de Pesquisa em Neurociência, Departamento de Neurologia e Neurocirurgia, Instituto de Pesquisa do Centro de Saúde da Universidade 
McGill, Montreal, QC H3G 1A4, Canadá
10Unidade de Pesquisa de Sinapse e Circuito Neural, Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame, Institutos Nacionais de Saúde, Bethesda, MD 
20892, EUA
11Divisão de Sinalização Patogenética, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Kobe University Graduate School of Medicine, 1-5-6 
Minatojima-minamimachi, Chuo-ku, Kobe, Hyogo 650-0047, Japão
12Departamento de Genética Molecular e Humana, Jan and Dan Duncan Neurological Research Institute no Texas Children's Hospital, Houston, TX 
77003, EUA
13Howard Hughes Medical Institute, Baylor College of Medicine, Houston, TX 77030, EUA
14Departamento de Bioquímica, Escola de Pós-Graduação em Ciências Médicas da Universidade de Tokushima, 3-18-15, Kuramoto-cho, Tokushima 770-8503, 
Japão
(Afiliações continuam na próxima página)
e
RESUMO
O sistema Cre-loxP é inestimável para o controle espacial 
e temporal de genes nocaute, knockin e expressão de 
repórter no sistema nervoso do camundongo. No 
entanto, relatamos probabilidades variáveis de
Recombinação de linhagem germinativa esperada em neurociência d
projetadas para recombinação específica do sistema nervoso
nação. A recombinação seletiva da linhagem germinativa materna ou 
paterna é apresentada com linhas Cre de amostra. Os dados agrupados 
revelam a recombinação da linhagem germinativa em mais da metade 
das 64 linhagens de driver Cre comumente usadas, na maioria dos casos 
com um viés de sexo parental relacionado à expressão de Cre em 
espermatozóides ou oócitos. Pequenas diferenças entre as linhas de 
driver Cre utilizando elementos de controle transcricionais comuns 
afetam as taxas de recombinação da linhagem germinativa. Loci-alvo 
específicos demonstraram recomendação diferencial
binação; assim, os repórteres não são proxies confiáveis para 
outro locus de interesse. Princípios semelhantes se aplicam a 
outros sistemas de recombinase e outros organismos 
geneticamente direcionados. Por meio deste, chamamos a 
atenção para a prevalência da recombinação germinativa e 
fornecemos diretrizes para informar pesquisas futuras para o
 driver Cre distinta e linhas genéticas moleculares mais amplas 
comunidades.
INTRODUÇÃO
Os avanços na pesquisa em neurociência moderna dependem de modelos 
animais geneticamente direcionados que incorporam a tecnologia de 
recombinase específica do local para obter manipulações de genes de 
maneira espacial e temporalmente controlada. Entre todas as ferramentas 
genéticas, o sistema Cre-loxP tem sido indiscutivelmente a abordagem mais 
utilizada desde a sua primeira descoberta no bacteriófago P1 (Sternberg
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020ª2020 Elsevier Inc.37
http://crossmark.crossref.org/dialog/?doi=10.1016/j.neuron.2020.01.008&domain=pdf
Harold A. Burgess,22Constança L. Cepko,27,28Jean-François Cloutier,5Cagla Eroglu,31Sandra Goebbels,32
Pascal S. Kaeser,25Jeremy N. Kay,20Wei Lu,10Liqun Luo,8Kenji Mandai,11,15Chris J. McBain,19Klaus-Armin Nave,32
Marco AM Prado,33,34Vânia F. Prado,33,34Jeffrey Rothstein,21John LR Rubenstein,17,18Gesine Saher,32
Kenji Sakimura,35Joshua R. Sanes,36Pedro Scheiffele,6Yoshimi Takai,11Hisashi Umemori,7Matthijs Verhage,26
Michisuke Yuzaki,16Huda Yahya Zoghbi,12,13Hiroshi Kawabe,2,11,37,*e Ann Marie Craig1,38,*
15Departamento de Bioquímica, Escola de Medicina da Universidade Kitasato, 1-15-1 Kitasato, Minami-ku, Sagamihara, Kanagawa 252-0374, Japão
16Departamento de Fisiologia, Keio University School of Medicine, 35 Shinanomachi, Shinjuku-ku, Tóquio 160-8582, Japão
17Nina Ireland Laboratório de Neurobiologia do Desenvolvimento, Departamento de Psiquiatria, UCSF Weill Institute for Neurosciences, University of 
California, San Francisco, San Francisco, CA 94158, EUA
18Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Universidade da Califórnia, San Francisco, San Francisco, CA 94158, EUA
19Seção de Fisiologia Celular e Sináptica, Eunice Kennedy Shriver Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano, Institutos 
Nacionais de Saúde, Bethesda, MD 20892, EUA
20Departamento de Neurobiologia e Departamento de Oftalmologia, Duke University School of Medicine, Durham, NC 27710, EUA
21Departamento de Neurologia e Instituto de Ciência do Cérebro, Escola de Medicina da Universidade Johns Hopkins, Baltimore, MD 21205, EUA
22Divisão de Biologia do Desenvolvimento,da linhagem 
germinativa em alguns loci alvo, mas não em outros. Na maioria (5/6) dos 
casos, ocorreu recombinação para genes repórteres noRosa26locus, mas não 
para outros genes alvo floxed. Outra linha mostrou recombinação da 
linhagem germinativa consistente com o alvo com Cre paterna, mas 
recombinou apenas noRosa26locus com Cre materna. Assim, no geral, a 
maioria das linhagens de driver Cre se comportou consistentemente em 
termos da presença de eventos de recombinação da linhagem germinativa e 
efeitos sexuais parentais em diferentes loci-alvo, mas os loci-alvo 
influenciaram as taxas de recombinação em uma ampla faixa. As diferenças 
específicas do locus-alvo na recombinação podem ser devidas a diferenças no 
comprimento das sequências flanqueadas por loxP, localização cromossômica, 
modificação epigenética e acessibilidade refletida pela atividade transcricional 
nas células germinativas.Liu et al., 2013; Long e Rossi, 2009; Zheng et al., 2000
). Com efeito, oRosa26O locus, que achamos particularmente propenso à 
recombinação germinativa, é amplamente utilizado para direcionamento de 
genes porque suporta forte expressão ubíqua e parece não ter efeitos de 
silenciamento de genes.Soriano, 1999).
Essas descobertas dissipam a crença comum de que um repórter pode ser 
usado como uma leitura de recombinação em outro locus alvo. Por exemplo, 
usando o Ai32rosaLSL-tglocus como um repórter para a recombinação mediada 
por Dlx5/6-Cre teria perdido quase metade das instâncias de recombinação da 
linhagem germinativa observadas noClstn3flocus. Por outro lado, o Ai9rosaLSL-
tglocus repórter mostrou linha germinativa
Figura 4. Estratégias de Reprodução e Genotipagem para Camundongos KO/KI Condicionais
(A) Um esquema de reprodução recomendado é descrito. AlvoDindica um alelo alvo que sofreu recombinação em células germinativas masculinas ou femininas (vermelho) ou mais raramente 
em zigotos (marrom); assim, alvo–ou AlvoKI. Alvof/+em vez de alvof/fcamundongos podem ser usados para o cruzamento F0, reduzindo a frequência de geração de Cre+; Alvof/+camundongos 
para o cruzamento F1. O uso rotineiro de cruzamentos F2 para gerar camundongos experimentais é recomendado para minimizar o número de animais necessários, mas cruzamentos F1 
também podem ser usados. Recomenda-se que a F1 cruze usando Cre masculino e feminino+; Alvof/+camundongos sejam estabelecidos e as taxas de recombinação da linhagem germinativa 
resultantes sejam rastreadas na prole. Então Cre masculino ou feminino+; Alvof/fcamundongos podem ser usados para os cruzamentos F2, dependendo de qual sexo deu a menor taxa de 
recombinação da linhagem germinativa nos cruzamentos F1. É importante que Cre+; Alvof/fcamundongos (ratos experimentais verdes) sejam validados por imunocoloração ouno local
hibridização para a proteína/RNA alvo na região de interesse para confirmar a recombinação consistente no tipo de célula esperado. Cre–; Alvof/fratos podem ser usados como controles; 
criação separada de Cre congênito+; Alvo+/+e controles WT também são recomendados. ''Cre+'' refere-se a camundongos com um alelo do transgene Cre. Nesses esquemas de reprodução 
recomendados, Cre+ratos não são criados para Cre+camundongos, pois isso resultaria em um subconjunto de descendentes com 2 alelos do gene driver Cre. Este cenário pode ser 
problemático. Para drivers Cre transgênicos de inserção aleatória, normalmente não é possível diferenciar entre camundongos com um ou dois alelos de driver Cre por genotipagem por 
PCR, levando a uma variação desconhecida nos níveis de expressão de Cre após a criação subsequente desses camundongos (o que pode resultar em mais variabilidade na linhagem 
germinativa taxas de recombinação). Para linhas de driver KI Cre, geralmente é possível diferenciar entre camundongos com um ou dois alelos de driver Cre. No entanto, a inserção 
homozigótica do driver Cre pode resultar em efeitos deletérios não observados com drivers Cre heterozigotos, devido à possível interrupção do gene nativo ao acaso ou
(lenda continua na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202057
recombinação por Sst-IRES-Cre e VIP-Cre não observada em vários outros loci 
alvo. Embora nos concentremos aqui na recombinação indesejável da 
linhagem germinativa, essa ressalva provavelmente se aplica de maneira mais 
geral, que a recombinação específica do tipo de célula em um locus não pode 
ser inferida da recombinação em um locus diferente. De fato, no exemplo 
discutido acima, o cruzamento de fêmeas Emx1-Cre;Wwp1f/f;Wwp2f/f
com machoWwp1f/f;Wwp2f/fcamundongos, a recombinação do mosaico 
no tecido da cauda ocorreu com frequência noWwp2locus com pouco ou 
nenhum noWwp1locus. Estratégias para amplificar a expressão de Cre 
podem ajudar a alcançar a recombinação em todos os loci alvo floxados 
em células Cre positivas. Por exemplo, em camundongos cruzados com
Tg(iSuRe-Cre)linha, que amplifica a expressão de Cre e usa MbTomato 
como um repórter de recombinação, as células MbTomato-positivas 
foram recombinadas em outros loci floxados com alta confiança (
Fernández-Chacón e outros, 2019).
Para demonstrar diretamente a sensibilidade diferencial dos loci-alvo 
à recombinação da linhagem germinativa mediada por Cre, analisamos a 
descendência de fêmeas Dlx5/6-Cre; Ai32rosaLSL-tg/+;Clstn3f/+
camundongos cruzados com WT. Nesta pequena amostra, a 
recombinação da linhagem germinativa ocorreu com mais frequência no
Clstn3f/+locus do que no Ai32rosaLSL-tg/+locus, como esperado a partir da 
diferença nas frequências relatadas emtabela 1. É importante ressaltar 
que um camundongo mostrou recombinação da linhagem germinativa 
noClstn3flocus, mas não no Ai32rosaLSL-tglocal (Figura 3, pista 2), 
implicando recombinação diferencial nas células germinativas maternas. 
Neste caso, usando Ai32 como repórter para avaliar se a recombinação 
ocorreu no locus de interesse (Clstn3f) seria enganoso.
Implicações mais amplas—Outros sistemas e organismos de 
recombinase
Os princípios discutidos aqui se aplicam a todos os sistemas de recombinase 
direcionados geneticamente, incluindo variantes lox, Flp-frt e sistemas Drerox. 
Por exemplo, a linha de camundongos En1-Dre KI mostra recombinação 
paterna variável da linhagem germinativa (Nouri e Awatramani, 2017). Além 
disso, o problema da recombinação indesejada pode ser agravado por 
estratégias interseccionais envolvendo recombinases múltiplas. Por exemplo, 
se a expressão gênica desejada requer a expressão específica da célula de Cre 
e Flp introduzida a partir de diferentes linhas condutoras, então a 
recombinação da linhagem germinativa por Cre resultará em expressão 
gênica regulada apenas por Flp e vice-versa. Tais estratégias interseccionais 
constituem uma ferramenta poderosa para alcançar especificidade celular 
requintada no direcionamento de genes (Huang e Zeng, 2013), mas requerem 
monitoramento vigilante para garantir a expressão específica da célula 
desejada.
Além disso, enquanto nos concentramos aqui em modelos de camundongos, as mesmas 
questões se aplicam a todos os organismos geneticamente direcionados usando site-spe-
local de inserção alvo. Uma exceção pode se aplicar a linhas de driver Cre de inserção direcionad
nível de expressão de Cre, pode-se criar Cre+com Cre+camundongos e selecione aqueles com 2 a
(B e C) As estratégias de genotipagem recomendadas são diagramadas para camundong
KI condicional. A genotipagem também deve ser feita para a presença do gene driver Cre
diagnósticas e as bandas cinzas são heteroduplexes adicionais que podem aparecer. Os 
condições típicas não são diagramados aqui, mas podem ser gerados em algumas condi
Flox) . Para camundongos com um alelo alvo, a presença das bandas Flox, WT e KO/KI ind
de recombinação ubíqua da linhagem germinativa (Targetf/+*). Para camundongos com d
germinativa (Targetf/–ou Alvof/KI) ou recombinação local no tecido utilizado para genotipa
alvof/–ou Alvof/KI, mas tal Cre+os camundongos teriam que ser criados posteriormente, ou
recombinação é da linhagemgerminativa.
58neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
sistemas de recombinase específicos. Recombinação semelhante de linha 
germinativa indesejada com um viés de sexo parental foi observada na linha tirosina 
hidroxilase-Cre de rato (Liu e outros, 2016). Neste caso, a recombinação ocorreu na 
descendência F2 quando o driver Cre e o locus alvo estavam juntos nas células 
germinativas femininas (18/18, incluindo descendência Crenegativa), mas não nas 
células germinativas masculinas (0/19) e não nos zigotos F1 . Recombinação de 
linhagem germinativa indesejada semelhante também foi observada em linhas de 
driver de armadilha de potenciador de cre de zebrafish com padrões de expressão 
diferencial no cérebro (mesa 2;Tabor e outros, 2019). Entre as 6 linhas pesquisadas 
aqui, 2 mostraram apenas deleção da linhagem germinativa paterna, 1 apenas 
materna e 2 com forte viés paterno. Assim, as linhagens de driver Cre de peixe-zebra 
mostram taxas variadas de recombinação de linhagem germinativa com um viés de 
sexo parental, semelhante às linhas de driver Cre de camundongo.
Existem alternativas para complementar as estratégias genéticas para 
alcançar a recombinação controlada espacial e temporalmente, 
principalmente vetores virais para entregar cassetes de expressão 
dependentes de recombinase para linhas de driver Cre ou para entregar 
recombinases para linhas alvo floxadas. Esta é uma abordagem 
poderosa e comumente usada que contorna qualquer potencial de 
recombinação da linhagem germinativa, mas tem outras limitações. 
Talvez a limitação mais séria seja a variabilidade de animal para animal 
na eficiência de recombinação e regiões cerebrais direcionadas devido a 
diferenças nos locais de injeção do vetor viral. Além disso, a pequena 
capacidade dos vetores virais adeno-associados, que são comumente 
usados no sistema nervoso, limita o potencial de especificidade do tipo 
de célula. Apesar das melhorias contínuas através da engenharia de 
elementos de controle transcricional e capsídeos (Bedbrook e outros, 
2018), é improvável que os vetores virais atinjam a maior especificidade 
e reprodutibilidade possível com métodos genéticos.
Diretrizes
Recomendamos que os pesquisadores considerem as seguintes 
sugestões ao usar linhas de driver Cre:
1. Sempre genotipe todos os animais para os alelos WT, floxed e 
recombinados no locus alvo de interesse. Esta é a única maneira de 
garantir que todos os animais tenham seus genótipos esperados. Se 
alelos recombinados forem observados, as preocupações com a 
expressão vazada de Cre na cauda ou no tecido da orelha podem ser 
abordadas testando animais Cre-negativos. Além do foco aqui na 
redução da recombinação germinativa indesejada, a sensibilidade 
diferencial de loci-alvo distintos para Cre recombinase implica que os 
padrões de recombinação específicos do tipo de célula também devem 
ser confirmados no locus de interesse e não apenas em um locus 
repórter separado. Assim, a validação porno localhibridização e/
a que mostraram ter expressão de gene nativo normal; então, se alguém quiser maximizar o 
lelos Cre para posterior reprodução.
os KO e KI condicionais, assumindo que uma estratégia de mini-gene foi usada para 
 (como emFiguras 1e2, não mostrado aqui). As bandas pretas de PCR são 
potenciais produtos de PCR que são muito grandes para serem gerados em 
ções (B com iniciadores a+c para alelos WT e Flox e C com iniciadores a+b para alelo 
ica a ocorrência de recombinação local no tecido usado para genotipagem, em vez 
ois alelos alvo, a presença das bandas Flox e KO/KI indica recombinação da linhagem 
gem (Targetf/f*). A ausência adicional de um driver Cre identifica esses mouses como 
 a recombinação local na genotipagem do tecido descartada, para determinar se a 
Figura 5. Estratégia de Reprodução e Genotipagem para Camundongos Repórter Condicional
(A) Para camundongos repórteres condicionais, é mais simples criar camundongos F0 e estudar F1 Cre+;LocusLSL-tg/+ratos. Assim, o gene driver Cre e o locus alvo não estão juntos na linhagem germinativa, de 
modo que a recombinação global indesejada só poderia ocorrer por recombinação no zigoto, o que não é tão comum quanto nas células da linhagem germinativa. É importante que Cre+;LocusLSL-tg/+
camundongos (ratos experimentais verdes) sejam validados por imunocoloração ouno localhibridação para a proteína transgênica/RNA na região de interesse para confirmar a recombinação consistente no 
tipo de célula esperado. O esquema opcional de reprodução F1 pode ser usado para aumentar o nível de expressão do repórter em Cre+; LocusLSL-tg/LSL-tgcamundongos, mas isso também resulta em possível 
recombinação germinativa. Se forem realizados cruzamentos de F1, ambos Cre masculino e feminino+; LocusLSL-tg/+os camundongos devem ser usados inicialmente para rastrear as taxas de recombinação da 
linhagem germinativa resultantes, de modo que o sexo que resulta na menor taxa de recombinação da linhagem germinativa possa ser usado em outros cruzamentos F1. LocusLSL-tg+indica um cassete lox-stop-
lox-transgene que expressa o transgene na recombinação mediada por Cre, mas nossa recomendação se aplica a outros loci dependentes de Cre, como aqueles que usam uma excisão invertida ou um 
mecanismo de orientação duplamente invertida. LocusL-tg+indica um locus globalmente recombinado resultante da recombinação em células germinativas masculinas ou femininas (vermelho) ou mais 
raramente no zigoto (marrom). ''Cre+'' refere-se a camundongos com um alelo do transgene Cre (verFigura 4lenda).
(B) Uma estratégia de genotipagem recomendada é diagramada para camundongos repórteres condicionais. Apenas as primeiras quatro pistas representando bandas de PCR são relevantes 
para camundongos F1 no esquema de reprodução acima. A genotipagem também deve ser feita para a presença do gene driver Cre (como emFiguras 1e2, não mostrado aqui). Produtos de 
PCR potenciais que são muito grandes para serem gerados em condições típicas não são diagramados aqui, mas podem ser gerados em algumas condições (com a+a0primers para alelos 
LSL-tg e L-tg, e d+b0primers para o alelo LSL-tg). Para camundongos com um alelo alvo, a presença das bandas WT, LSL, Tg e Rec indica a ocorrência de recombinação local no tecido usado 
para genotipagem, em vez de recombinação ubíqua da linhagem germinativa (LocusLSL-tg/+*). Para camundongos com dois alelos alvo, a presença das bandas LSL, Tg e Rec indica 
recombinação da linhagem germinativa (LocusLSL-tg/L-tg) ou recombinação local no tecido utilizado para genotipagem (LocusLSL-tg/LSL-tg*). A ausência adicional de um driver Cre identifica esses 
ratos como sendo LocusLSL-tg/L-tg, mas tal Cre+os camundongos teriam que ser criados posteriormente ou a recombinação local no tecido de genotipagem descartada para determinar se a 
recombinação é linha germinativa.
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202059
60n
ou a imunocoloração para o alvo de interesse na região de interesse é 
importante para confirmar a especificidade do tipo de célula e a 
eficiência da recombinação local.
2. Se houver várias linhas de driver Cre que possam fornecer o padrão de 
expressão Cre desejado, verifique as informações sobre as taxas de 
recombinação da linha germinativa. Verifique o banco de dados MGI para 
atividade de recombinase em células germinativas masculinas ou femininas, 
pois tal atividade é um bom preditor de recombinação germinativa. Se tal 
informação estiver faltando, normalmente as linhas condutoras KI tendem a 
ter menor recombinação indesejável da linha germinativa do que as linhas 
condutoras transgênicas de inserção aleatória, e ferramentas que atenuam a 
expressão de Cre, como um IRES, podem reduzir a recombinação da linha 
germinal.
3. Escolha uma estratégia de reprodução ideal para reduzir ou evitar a 
recombinação da linhagem germinativa. Se as informações sobre as 
frequências de recombinação da linhagem germinativa não estiverem 
disponíveis, teste as estratégias de reprodução com Crerecombinase 
transmitida exclusivamente pelo genitor masculino ou pela genitora 
feminina. Dados os efeitos sexuais parentais observados aqui para a 
maioria das linhas de driver Cre, muitas vezes há uma maneira melhor 
de mitigar ou mesmo evitar completamente a recombinação 
indesejada da linhagem germinativa. Estratégias detalhadas para 
criação e genotipagem são sugeridas emFiguras 4e5.
4. Ao publicar um artigo usando linhas de driver Cre, indique claramente 
que todos os alelos WT, floxed e recombinados foram avaliados por 
genotipagem, relate as frequências de recombinação de linhagem 
germinativa e viés de sexo parental e indique como a recombinação 
específica do tipo de célula no locus alvo foi avaliado. Deposite novas 
informações sobre frequências de recombinação germinativa e viés de 
sexo parental no banco de dados MGI.
ESTRELA+MÉTODOS
Métodos detalhados são fornecidos na versão online deste 
documento e incluem o seguinte:
dTABELA DE RECURSOS PRINCIPAIS
dCONTATO DE LEAD E DISPONIBILIDADE DE MATERIAIS
dMODELO EXPERIMENTAL E DETALHES DO SUJEITO
dDETALHES DO MÉTODO
BImagem de corte cerebral
dDISPONIBILIDADE DE DADOS E CÓDIGOS
INFORMAÇÃO COMPLEMENTAR
Informações suplementares podem ser encontradas online emhttps://doi.org/10.1016/j. 
neurônio.2020.01.008.
AGRADECIMENTOS
Agradecemos à Dra. Cynthia Smith, do Jackson Laboratory, por sua aceitação aberta de 
nossos dados no banco de dados MGI. Agradecemos ao Dr. Timothy Murphy por sua gentil 
doação da linha de mouse Ai32. Agradecemos aos Drs. Elizabeth M. Simpson, Sören 
Lukassen e o Cluster de Circuitos Cerebrais Dinâmicos da Universidade da Colúmbia 
Britânica para discussão. O trabalho de Lin Luo e AMC foi financiado pelos Institutos 
Canadenses de Pesquisa em Saúde (FDN-143206) e pela Iniciativa de Pesquisa em Autismo 
da Fundação Simons (SFARI 608066). O trabalho da MCA e HK foi financiado pela German 
Research Foundation (SPP1365/KA3423/1-1 e KA3423/3-1) e pela Japan Society for the 
Promotion of Science (JSPS) KAKENHI grant number 15K21769.
eurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
O trabalho de NB e FB foi financiado pelo European Research Council (ERC) Advanced Grant SYNPRIME 
e a German Research Foundation SFB 1286/A9 concede a N.B. Work by CC, W. Li e N.A. foi apoiado 
pela subvenção da Natural Science Foundation of China (81573408), Fudan University-Shanghai 
Institute of Materia Medica Chinese Academy of Science subvenção conjunta (FU-SIMM20174015) e 
pelo Projeto Principal de Ciência e Tecnologia Municipal de Xangai (nº 2018SHZDZX01). O trabalho da 
JLS e da HAB foi apoiado pelo Programa de Pesquisa Intramural do Instituto Nacional Eunice Kennedy 
Shriver de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano. O trabalho da KTB foi apoiado pela concessão 
F32 DA038913 do National Institutes of Health (NIH) e pela concessão K99/R00 DA041445 do NIH. O 
trabalho de WY e CC foi apoiado por um salário do Howard Hughes Medical Institute (HHMI) 
concedido ao CC Work por ED e J. -FC foi apoiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde e 
pelo Conselho de Pesquisa em Ciências Naturais e Engenharia do Canadá (NSERC). O trabalho da JAS e 
da CE foi apoiado pelos subsídios do NIH RO1DA031833 e F31NS092419. O trabalho de J. Wang e PSK 
foi financiado pelos subsídios do NIH R01NS083898, R01NS103484 e R01MH113349. O trabalho da AP 
e da JNK foi apoiado pelas concessões do NIH EY024694 para JNK e EY5722 para a Duke University. O 
trabalho de MAH e W. Lu foi financiado pelo Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame 
(NINDS) e pelo Programa de Pesquisa Intramural do NIH. O trabalho de W.-HH e Liqun Luo foi 
financiado pelo HHMI, SFARI Research Award 345098, e o NIH concede R01NS050580 para Liqun Luo e 
o NIH concede 5K99HD092545-02 para W.-HH O trabalho de TM e KM foi financiado pelo Ministério da 
Educação do Japão, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia KAKENHI concede 16H06463 e JPSP 
KAKENHI concede 18K06503. O trabalho da KAP e da CJM foi apoiado pelo Prêmio Intramural do 
Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano Eunice Kennedy Shriver. O trabalho 
de SG, GS e K.-AN foi apoiado pelos ERC Advanced Grants AxoGLIA e MyeliNANO, a German Research 
Foundation (SPP1757) e a Max Planck Society. O trabalho do MAMP e do VFP foi apoiado pelos 
subsídios do Canadian Institute of Health Research MOP136930, MOP89919, PJT 162431 e PJT 159781 
e do NSERC 06577-2018 RGPIN. O trabalho de EL-LP e JLRR foi apoiado pela concessão R01 NS099099 
do NIH NINDS, concessão R01 MH081880 do Instituto Nacional de Saúde Mental (NIMH) e concessão 
R01 MH049428 do NIMH. O trabalho do JRS foi apoiado pelo NIH R37NS029169. Trabalho de SF, EF, 
AMG, LT e PS foi apoiado pelo ERC Advanced Grant SPLICECODE; Swiss National Science Foundation 
para PS e European Molecular Biology Organization EMBO ALTF-70-2015 e aALTF-760-2016 para AMG 
O trabalho de YT foi financiado pela bolsa JPSP KAKENHI 26251013. O trabalho de HU foi financiado 
por NIH R01DA042744, R01MH111647, R01NS092578 e Subsídios SFARI. O trabalho de J. Wortel e MV 
foi apoiado por um ERC Advanced Grant (322966) da União Europeia. Trabalho de JM e M.Y. foi 
apoiado pela Agência Japonesa de Ciência e Tecnologia (JPMJCR1854) e KAKENHI (16H06461 e 
15H05772). O trabalho de LAL e HYZ foi financiado pelo NIH/NINDS grant 5R01NS057819-13, bem 
como HHMI para HYZ O trabalho da HU foi apoiado pelos subsídios NIH R01DA042744, 
R01MH111647, R01NS092578 e SFARI. O trabalho de J. Wortel e MV foi apoiado por um ERC Advanced 
Grant (322966) da União Europeia. Trabalho de JM e M.Y. foi apoiado pela Agência Japonesa de Ciência 
e Tecnologia (JPMJCR1854) e KAKENHI (16H06461 e 15H05772). O trabalho de LAL e HYZ foi financiado 
pelo NIH/NINDS grant 5R01NS057819-13, bem como HHMI para HYZ O trabalho da HU foi apoiado 
pelos subsídios NIH R01DA042744, R01MH111647, R01NS092578 e SFARI. O trabalho de J. Wortel e MV 
foi apoiado por um ERC Advanced Grant (322966) da União Europeia. Trabalho de JM e M.Y. foi 
apoiado pela Agência Japonesa de Ciência e Tecnologia (JPMJCR1854) e KAKENHI (16H06461 e 
15H05772). O trabalho de LAL e HYZ foi financiado pelo NIH/NINDS grant 5R01NS057819-13, bem 
como HHMI para HYZ
CONTRIBUIÇÕES DO AUTOR
Lin Luo, HK e AMC conceberam o projeto. Todos os autores contribuíram com dados 
inéditos paraTabelas 1ou2. Lin Luo e AMC geraram as figuras, reuniram e analisaram 
os dados e escreveram o manuscrito com contribuições de todos os autores.
DECLARAÇÃO DE INTERESSES
Os autores declaram não haver interesses conflitantes.
Recebido: 25 de julho de 2019 
Revisado: 12 de novembro de 2019 
Aceito: 10 de janeiro de 2020 
Publicado: 5 de fevereiro de 2020
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http://refhub.elsevier.com/S0896-6273(20)30008-8/sref112Eunice Kennedy Shriver Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano, Bethesda, MD 20892, EUA
23Departamento de Biologia Celular, Duke University Medical Center, Durham, NC 27710, EUA
24Departamento de Células Tronco e Biologia Regenerativa, Harvard University, Cambridge, MA 02139, EUA
25Departamento de Neurobiologia, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, EUA
26Departamento de Genômica Funcional e Departamento de Genética Clínica, Centro de Pesquisa Neurogenômica e Cognitiva (CNCR), VU 
University Amsterdam e University Medical Center Amsterdam, de Boelelaan 1085, 1081 HV Amsterdam, Holanda
27Departamentos de Genética, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, EUA
28Howard Hughes Medical Institute, Harvard Medical School, Boston, MA 02115, EUA
29Departamento de Ciência Animal de Laboratório, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China
30Departamento de Fisiologia e Biofísica, Centro de Neurobiologia da Aprendizagem e Memória, Universidade da Califórnia, Irvine, Irvine, CA 92697, 
EUA
31Departamento de Biologia Celular, Departamento de Neurobiologia e Duke Institute for Brain Sciences, Regeneration Next Initiative, Duke 
University Medical Center, Durham, NC 27710, EUA
32Departamento de Neurogenética, Instituto Max Planck de Medicina Experimental, Hermann-Rein-Strasse 3, 37075 Göttingen, Alemanha
33Robarts Research Institute, Departamento de Anatomia e Biologia Celular, e Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Schulich School of 
Medicine & Dentistry, University of Western Ontario, Londres, ON N6A 5B7, Canadá
34Brain and Mind Institute, The University of Western Ontario, Londres, ON N6A 5B7, Canadá
35Departamento de Neurobiologia Celular, Instituto de Pesquisa do Cérebro, Universidade de Niigata, Niigata 951-8585, Japão
36Centro de Ciência do Cérebro e Departamento de Biologia Molecular e Celular, Universidade de Harvard, Cambridge, MA 02138, EUA
37Departamento de Gerontologia, Laboratório de Ciências da Vida Molecular, Instituto de Pesquisa e Inovação Biomédica, Fundação para 
Pesquisa e Inovação Biomédica em Kobe, 2-2 Minatojima-minamimachi Chuo-ku, Kobe, Hyogo 650-0047, Japão
38Contato principal
* Correspondência:kawabe@em.mpg.de (HK),acraig@mail.ubc.ca (AMC) 
https://doi.org/10.1016/j.neuron.2020.01.008
e Hamilton, 1981) e desenvolvimento para manipulações genéticas em 
células de mamíferos (Sauer e Henderson, 1988) e em camundongos 
transgênicos (Gu et al., 1994; Tsien et al., 1996a). A recombinase Cre 
reconhece sítios loxP de 34 pares de bases, mediando a deleção de 
fragmentos de DNA entre dois sítios loxP da mesma orientação, ou 
inversão de fragmentos de DNA entre dois sítios loxP invertidos. A 
manipulação de material genético flanqueado por sítios loxP, em genes 
floxed, foi facilitada pela geração em larga escala de linhas de driver Cre 
de camundongos com diversos padrões de expressão no sistema 
nervoso e camundongos com genes-alvo floxed e repórteres (Daigle et 
al., 2018; Gerfen et al., 2013; Gondo, 2008; Taniguchi e outros, 2011). 
Assim, o sistema Cre-loxP tornou-se um esteio para nocaute condicional 
do gene (KO), knockin (KI) e expressão do gene repórter em 
camundongos e, recentemente, em ratos (BA €ck e outros,
2019; Witten e outros, 2011). No entanto, várias ressalvas foram 
observadas, incluindo toxicidade mediada por Cre e fenótipos 
metabólicos devido à recombinação ilegítima, mosaico e/ou 
atividade de recombinação inconsistente, efeitos de fundo genético 
e expressão inesperada de Cre em tipos de células indesejáveis.Gil-
Sanz et al., 2015; Harno et al., 2013; Heffner et al., 2012; Murray
38neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
e outros, 2012; Schmidt et al., 2000; Tachibana et al., 2018; Wojcinski 
et al., 2019).
Uma advertência particularmente subestimada e limitante em termos de 
grandes consequências indesejáveis é a recombinação não intencional da 
linhagem germinativa. Quando a expressão de Cre e a atividade de 
recombinase associada ocorrem em células germinativas, a excisão mediada 
por Cre do alelo floxed ocorrerá em todas as células, em vez do padrão 
específico de região e tipo de célula pretendido. Uma revisão recente descreve 
como a recombinação inesperada da linhagem germinativa pode acontecer e 
como detectar tais eventos (Canção e Palmiter, 2018), mas as informações 
sobre as linhas de driver Cre afetadas são escassas, com apenas alguns relatos 
esporádicos (Choi et al., 2014; Kobayashi e Hensch, 2013; Liput, 2018; Zhang e 
outros, 2013). A consciência da potencial recombinação da linhagem 
germinativa em linhas de driver Cre projetadas para serem específicas do 
sistema nervoso é essencial para a correta genotipagem e interpretação dos 
dados. Além disso, as informações sobre os efeitos do sexo parental na 
recombinação da linhagem germinativa e as comparações entre as linhagens 
de driver Cre relacionadas podem orientar os esquemas de reprodução ideais 
para economizar tempo e recursos valiosos dos pesquisadores. No entanto, tal 
meta-análise tem faltado.
mailto:kawabe@em.mpg.de
mailto:acraig@mail.ubc.ca
https://doi.org/10.1016/j.neuron.2020.01.008
(legenda na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202039
Neste relatório, usamos duas linhagens Cre, Dlx5/6-Cre e Gpr26-Cre, 
expressando Cre recombinase em populações neuronais distintas, como 
exemplos para demonstrar a recombinação indesejável da linhagem 
germinativa ocorrendo seletivamente nos pais portadores de Cre feminino ou 
masculino, respectivamente. Para gerar um recurso mais abrangente, 
compilamos informações sobre frequências de recombinação de linhagem 
germinativa de um total de 64 linhas diferentes de drivers Cre geralmente 
usadas para manipulações genéticas específicas do sistema nervoso. 
Prevemos que nosso breve relatório servirá como um recurso coletivo para 
orientar o uso ideal das linhas de driver Cre.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Recombinação de linhagem germinativa materna em 
camundongos Dlx5/6-Cre
A linha Dlx5/6-Cre (Tg(dlx5a-cre)1Mekk) (Zerucha et al., 2000) foi usado 
em mais de 70 artigos para atingir especificamente os interneurônios do 
prosencéfalo (banco de dados Mouse Genome Informatics [MGI];Bult e 
outros, 2019). Combinamos este transgene com oClstn3f/f
(B6-Clstn3tm1Amcr/J) alelo (Pettem et al., 2013) e depois cruzou Clstn3f/f; 
Dlx5/6-Cre comClstn3f/fcamundongos para gerar animais KO 
condicionais experimentais. Genotipamos a prole com três conjuntos de 
primers: o primeiro para oClstn3flalelos oxed e wild-type (WT), o 
segundo para o Cre-recombinedClstn3alelo KO, e o terceiro para Cre. 
Esperávamos observar apenas oClstn3 alelo floxed e nenhum alelo KO 
independente de Cre. No entanto, 88% (73/83) da prole expressaram 
umaClstn3Alelo KO quando o genitor feminino carregava Cre, sugerindo 
deleção da linha germinal. Em contraste, nenhum dos 114 descendentes 
que testamos tinha o alelo KO quando a recombinase Cre foi transmitida 
do pai masculino (figura 1A). Contando a descendência Cre-negativa para 
descartar quaisquer potenciais efeitos diretos de Cre na descendência, 
todos (54) descendentes de cruzamentos Cre paternos foramClstn3f/fmas 
85,3% (29/34) da prole de cruzamentos Cre maternos foramClstn3f/–. 
Esses resultados indicam que uma alta fração de camundongos fêmeas 
portadores dos genes Dlx5/6-Cre e floxed aparentemente expressaram 
Cre nas células germinativas, resultando em recombinação da linhagem 
germinativa materna e que essa deleção inesperada da linha 
germinativa poderia ser contornada pela transmissão de Cre 
estritamente paterna.
Para testar se esta recombinação da linhagem germinativa materna é 
específica do locus floxed, cruzamos o Dlx5/6-Cre com uma linha 
repórter Ai32 (B6;129S-Gt(ROSA)26Sor
(Madisen e outros, 2012). A linha de camundongos Ai32 contém um 
cassete LoxPstop-LoxP-EYFP-channelrodopsina2 (ChR2) no
tm32(CAG-COP4*H134R/EYFP)Hze/J)
Figura 1. Camundongos Dlx5/6-Cre mostram recombinação da linhagem germinativa materna
(A) Resultados de genotipagem de linhagem e amostrahttp://refhub.elsevier.com/S0896-6273(20)30008-8/sref112
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https://doi.org/10.1523/ENEURO.0207-17.2017
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ESTRELA+MÉTODOS
TABELA DE RECURSOS PRINCIPAIS
REAGENTE ou RECURSO
Modelos Experimentais: Organismos/Estirpes
FONTE IDENTIFICADOR
Rato:Adgrb3tm1Ksak Um presente do Dr. Kenji Sakimura MGI:5708584
Mouse: B6-Tg(Adora2a-Cre)KG139GSat Pesquisa e recursos para ratos mutantes
Centros (MMRRC)
MMRRC_036158-UCD
Rato:Atg5tm1Myok Riken BioResource Center MGI:3663625
Rato: B6;Bhlhe22tm3.1(cre)Meg Um presente da Dra. Sarah Ross (Michael E 
Greenberg Lab)
MGI:4440745
Rato:Cacna1atm1Kano Um presente do Dr. Masanobu Kano MGI:5140539
Rato: Tg(Camk2a-cre)159Kln Um presente do laboratório Klein (Minichiello et al., 1999) MGI:2176753
Mouse: B6-Tg(Camk2a-cre)T29-1Stl O Laboratório Jackson IMSR_JAX:005359
Rato: B6;129S6-Bater papotm2(cre)Lowl/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:006410
Rato: B6,129-Chat/Slc18a3tm1.2Vpra Laboratório Prado (Martins-Silva et al., 2011) MGI:1101061
Rato:Clstn3tm1Amcr/J Laboratório Craig (Pettem et al., 2013) MGI: 5521371
Rato: B6.Cg-Csf1rtm1.2Jwp/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:021212
Rato: B6.Cg-Cux2tm3.1(cre/ERT2)
Mull/Mmmh
MMRRC MMRRC_032779-MU
Rato:Cx3cr1tm2.1(cre/ERT2)Litt/WganJ O Laboratório Jackson IMSR_JAX:021160
Mouse: B6-Tg(dlx5a-cre)1Mekk/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:008199
Rato:Dnmt3atm3.1Enl Dra. Margaret Goodell, Baylor College of 
Medicine (pode ser adquirido na Riken 
BRC)
IMSR_RBRC03731
Mouse: B6-Tg(Drd1-Cre)EY262GSat MMRRC MMRRC_017264-UCD
Mouse: Tg(Drd2-cre)ER44Gsat/Mmucd MMRC MMRRC_017263-UCD
Rato: B6.129S2-Emx1tm1(cre)Krj/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:005628
Rato:En1tm2(cre)Wrst/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 007916
Rato:Epas1tm1Mcs/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 008407
Rato:Erc2tm1.1Sud/J Gerado por PS Kaeser e TC Sudhof, 
disponível no Jackson Laboratory
IMSR_JAX:015831
Rato:Fdft1tm1Kan Laboratório Saher (Saher e outros, 2005) MGI:3579504
Rato:Fgf22tm1a(EUCOMM)Hmgu Mutagênese Condicional Europeia em Camundongos
Programa (EUCOMM)
IMSR_EM:06822
Rato:Flrt2tm1c(EUCOMM)Wtsi Repositório EMMA MGI:6119416
Rato: B6;129S4-Foxd1tm1(GFP/cre)Amc/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:012463
Rato: 129(Cg)-Foxg1tm1(cre)Skm/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 006084
Rato: B6N.Cg-Gad2tm2(cre)Zjh/J O Laboratório Jackson IMSR _JAX:019022
Rato: FVB-Tg(GFAP-cre)25Mes/J O Laboratório Jackson IMSR _JAX:004600
Mouse: B6.Cg-Tg(Gfap-cre)77.6Mvs/2J O Laboratório Jackson IMSR _JAX:024098
Mouse: B6-Tg(Gpr26-cre) 
KO250Gsat/Mmucd
MMRRC MMRRC_036915-UCD
Rato:Gria1tm2Rsp Um presente do Dr. Rolf Sprengel IMRS_JAX: 019012
Rato:Gria2tm3Rsp Um presente do Dr. Rolf Sprengel MGI:3611335
Rato:Gria3tm1Rsp Um presente do Dr. Rolf Sprengel MGI:3611328
Rato:Grik2tm1.1Ksak Um presente do Dr. Kenji Sakimura MGI: 6117330
Mouse: B6-Tg(Grik4-cre)G32-4Stl/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:006474
(Continua na próxima página)
e1neurônio106, 37–65.e1–e5, 8 de abril de 2020
Contínuo
REAGENTE ou RECURSO FONTE IDENTIFICADOR
Rato:Grik4tm1(cre)Ksak Laboratório Sakimura (Akashi e outros, 2009) MGI: 4360478
Rato:Grin1tm2Stl O Laboratório Jackson IMRS_JAX:005246
Rato:Grin2ctm2(icre)Mwa Um presente do Dr. Masahiko Matanabe MGI:5306941
Rato: CBy.B6-Gt(ROSA) O Laboratório Jackson IMRS_JAX: 007900
26Sortm1(HBEGF)Awai/J
Rato:Gt(ROSA) O Laboratório Jackson MMRRC_ 32037-JAX
26Sortm1.1(CAG-EGFP)Fsh/Mmjax
Rato:Gt(ROSA)26Sortm2(CAG-tdTomato)Fawa Dr. Fan Wang (Duque) MGI:5305341
Rato:Gt(ROSA) O Laboratório Jackson IMRS_JAX:007676
26Sortm4(ACTB-tdTomate,-EGFP)Luo/J
Rato: B6.Cg-Gt(ROSA) O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 007909
26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze/J
Rato: Ai14: B6.Cg-Gt(ROSA) O Laboratório Jackson IMSR_JAX:007914
26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J
Rato: Ai32: B6;129S-Gt(ROSA) Um presente do Dr. Timothy Murphy,originalmente do The Jackson
Laboratório
IMSR_JAX:012569
26Sortm32(CAG-COP4*H134R/EYFP)Hze/J
Rato:Gt(ROSA)26Sortm32(CAG-tdTomato)Hze O Laboratório Jackson IMSR_JAX:007908
Mouse: Ai34: 129S-Gt(ROSA) Presente do Dr. David 
Ginty, disponível no Jackson 
Laboratory
IMSR_JAX:012570
26Sortm34.1(CAG-Syp/tdTomato)Hze/J
Rato: B6.Cg-H2afvTg(Wnt1-cre)11Rth O Laboratório Jackson IMSR_JAX:009107
Mouse: Tg(hs799-cre/ERT2,-GFP)405Jlr N / D MMRRC: 037574-UCD
Rato: Tg(Htr3a-cre)NO152Gsat/Mmucd MMRRC MMRRC_036680
Rato: Tg(I12b–cre)1Jlr N / D MMRRC_031698-UCD
Rato: B6;129S6- O Laboratório Jackson IMSR_JAX:024103
Igs7tm93.1(tetO-GCaMP6f)Hze/J
Rato:Isl1tm1(cre)Sev/J O Laboratório Jackson IMSR_Jax:024242
Rato:Isl1tm1.1Whk Xiuqian Mu MGI:3837972
Rato:Khdrbs3tm1.1Schei/J Gerado no Laboratório Scheiffele 
(depositado em Jackson)
IMSR_JAX:029273
Rato: B6;129P-Klf3tm1(cre/ERT2)Pzg/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:010985
Rato:maftm2.1Cbm Presente da Dra. Carmen Birchmeier MGI: 5316895
Rato:mafbtm1.1Bom Presente da Dra. Lisa Goodrich MGI:5581684
Rato:Megf10tm1c(KOMP)Jrs Laboratório Josh Sanes MGI:6194031
Rato:Neo1tm1.1Jfcl Laboratório Cloutier (Kam e outros, 2016) MGI:6285614
Rato: B6.Cg-Tg(Nes-cre)1Kln/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 003771
Rato:Neurod6tm1(cre)Kan laboratório Goebbels
(Goebbels e outros, 2006)
MGI:2668659
Rato:Neurog2tm1(cre/Esr1)E MMRRC MGI:2652037
Rato: Tg(Nkx2-1-cre)2Areia Presente do Dr. Stewart Anderson IMSR_JAX:008661
Rato: B6;SJL-Nlgn2tm1.1Sud/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:025544
Rato: B6.Cg-Tg(Ntsr1-cre)
GN220Gsat/Mmucd
MMRRC MMRRC_030648-UCD
Rato: B6.129-PCP2tm1(cre)Nobs Um presente do Dr. Noboru Suzuki MGI:3578623
Mouse: B6.129-Tg(Pcp2-cre)2Mpin/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:004146
Rato: PhotonSABER-LSL Gerado por S. Matsuda e 
M. Yuzaki
N / D
Rato:Ptf1atm3Cvw Christopher Wright MGI:5788429
Rato: B6.129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:017320
(Continua na próxima página)
neurônio106, 37–65.e1–e5, 8 de abril de 2020e2
Contínuo
REAGENTE ou RECURSO FONTE IDENTIFICADOR
Rato: B6.129S1(Cg)-Rai1tm2.1Luo/J Laboratório Luo (Huang e outros, 2016) IMSR_JAX:029103
Rato: B6.FVB(Cg)-Tg(Rbp4-cre) 
KL100Gsat/Mmucd/GENSAT
MMRRC MMRRC_037128-UCD
Rato:Aros1tm3Sud/J Gerado por PS Kaeser e TC Sudhof, 
disponível no Jackson Laboratory
IMSR_JAX:015832
Rato:Aros2tm1.1Sud/J Gerado por PS Kaeser e TC Sudhof, 
disponível no Jackson Laboratory
IMSR_JAX:015833
Rato: B6.129S-Rorbtm1.1(cre)Hze/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX_023526
Rato:Rpl22tm1.1Psam/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:011029
Rato: B6;C3-Tg(Scnn1a-cre)2Aibs/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX_009613
Mouse: Tg(Scx-GFP/cre)1Stzr Um presente da Dra. Jenna Lauren Galloway 
(Clifford Tabin Lab)
MGI:5317938
Rato: Tg(Sim1-cre)1Lowl/J Um presente do Dr. Bradford Lowell IMSR_JAX:006395
Mouse: Tg(Six3-cre)69Frty/GcoJ Um presente do Dr. Guillermo Oliver. 
Disponível no Laboratório Jackson
IMSR_JAX: 019755
Rato: Tg(Slc1a3-cre/ERT)1Nat/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX: 012586
Rato:Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Um presente do Dr. Thomas Hnasko, originalmente
do Laboratório Jackson
IMRS_JAX: 006660
Rato: B6.129(Cg)-Slc6a4tm1(cre)Xz/J Disponível no Laboratório Jackson IMRS_JAX# 014554
Rato:Slc16a1lox / lox Laboratório Rothstein (Jha et al., 2019) N / D
Rato:Slc17a6tm2(cre)Lowl/J O Laboratório Jackson IMSR _JAX: 016963
Rato: B6;129S-Slc17a7tm1.1(cre)Hze/J O Laboratório Jackson IMSR _JAX: 023527
Rato: Tg(Slc17a8-icre)1Edw/SealJ Um presente do Dr. Robert Edward. 
Disponível no Laboratório Jackson
IMSR_JAX: 018147
Rato: B6;129-Tg(Slc18a3-cre)KMisa/0 Riken BioResource Center RBRC_No.RBRC01515
Mouse: B6.FVB-Tg(Slc32a1-cre) 
2.1Hzo/FrkJ/
O Laboratório Jackson IMSR_JAX:017535
Rato: B6J.129S6(FVB)-Slc32a1tm2(cre)
Lowl/MwarJ
O Laboratório Jackson IMSR _JAX: 028862
Rato: B6;CBA-Tg(Sox10-cre)1Wdr/J O Laboratório Jackson IMSR _JAX: 025807
Rato:SSTtm2.1(cre)Zjh O Laboratório Jackson IMSR_JAX:013044
Rato:Stxbp1tm1Mver Laboratório Verhage (Heeroma e outros, 2004) MGI:5509149
Rato:Syktm1.2Tara O Laboratório Jackson IMSR_JAX:017309
Rato: B6.Cg-Tg(Syn1-cre)671Jxm/J Presente da Dra. Lisa Goodrich, 
disponível no Jackson Laboratory
IMSR_JAX:00396
Rato:Tgfb3tm1Moaz O Laboratório Jackson IMSR_JAX:024931
Rato: Tg(Thy1-cre/ERT2,-EYFP) 
HGfng/PyngJ
O Laboratório Jackson IMSR_JAX:012708
Rato:Trpm7tm1Clph/J O Laboratório Jackson IMRS_JAX:018784
Rato: B6-VIPtm1(cre)Zjh/J O Laboratório Jackson IMSR_JAX:031628
Rato:Wwp1tm1.1Hkb/N Laboratório Kawabe (Ambrozkiewicz e outros, 2018) MGI:6281946
Rato:Wwp2tm1.1Hkb/N Laboratório Kawabe (Ambrozkiewicz e outros, 2018) MGI:6281948
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre-2A-Cerúleo)y492
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–56
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1- 
Ocu.Hbb2:Cre)y547
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–80
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1- 
Ocu.Hbb2:Cre)y549
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–82
(Continua na próxima página)
e3neurônio106, 37–65.e1–e5, 8 de abril de 2020
Contínuo
REAGENTE ou RECURSO FONTE IDENTIFICADOR
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre)y559
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–92
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1- 
Ocu.Hbb2:Cre-2A-Cerulean)y546
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–79
ZebrafishD. rerio: Et(REX2-SCP1- 
Ocu.Hbb2:Cre)y555
Laboratório Burgess (Tabor e outros, 2019) ZFIN:ZDB-ALT-180717–88
Oligonucleótidos
Primários, consulteTabela S1
CONTATO DE LEAD E DISPONIBILIDADE DE MATERIAIS
Mais informações e solicitações de recursos e reagentes devem ser dirigidas e serão atendidas pelo contato principal, Dra. Ann Marie Craig 
(acraig@mail.ubc.ca). Consultas sobre os endereços de e-mail dos investigadores que contribuíram com informações sobre as linhas 
específicas do driver Cre emtabela 1deve ser direcionado ao contato principal.
MODELO EXPERIMENTAL E DETALHES DO SUJEITO
Todos os camundongos usados e as agências que aprovam os procedimentos são os seguintes: Canadian Council for Animal Care e 
University of British Columbia Animal Care Committee:Clstn3tm1Amcr/J (Pettem et al., 2013), Ai32 (Madisen e outros, 2012), B6-Tg(dlx5a-
cre)1Mekk/J (Zerucha et al., 2000), B6-Tg(Gpr26-cre)KO250Gsat/Mmucd (Projeto GENSAT); Associação para Avaliação e Credenciamento de 
Cuidados com Animais de Laboratório e Painel Administrativo da Universidade de Stanford sobre Cuidados com Animais de Laboratório: 
Tg(Sim1-cre)1Lowl/J (Balthasar e outros, 2005), B6.129S1(Cg)-Rai1tm2.1Luo/J (Huang e outros, 2016), B6.129S2-Emx1tm1(cre)Krj/J (Gorski e outros, 
2002), B6N.Cg- Gad2tm2(cre)Zjh/J (Taniguchi e outros, 2011), B6.Cg-Tg(Nes-cre)1Kln/J (Tronche et al., 1999), B6J.129S6(FVB)-Slc32a1tm2(cre)Lowl/
MwarJ (Vong e outros, 2011), B6;129S-Slc17a7tm1.1(cre)Hze/J (Harris e outros, 2014),Slc17a6tm2(cre)Lowl/J (Vong e outros, 2011); Centro de Pesquisa 
Animal de Laboratório da Universidade da Califórnia em San Francisco: Tg(Nkx2-1-cre)2Sand (Xu e outros, 2008), Tg(hs799-cre/ERT2,-
GFP)405Jlr (Silberberg e outros, 2016),Tg(I12b–cre)1Jlr(Potter e outros, 2009),mafbtm1.1Bom(Yu et al., 2013),maftm2.1Cbm(Wende et al., 2012),
Gt(ROSA) 26Sortm32(CAG-tdTomato)Hze, B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010),SSTtm2.1(cre)Zjh(Taniguchi e outros, 2011); O 
Conselho Canadense de Cuidados com Animais e o Comitê de Cuidados com Animais da Universidade de Western Ontario: Tg(Drd2-
cre)ER44Gsat/ Mmucd (Gong e outros, 2007),En1tm2(cre)Wrst/J (Kimmel e outros, 2000), 129(Cg)-Foxg1tm1(cre)Skm/J (Hébert e McConnell, 2000), 
C57BL/ 6J-Tg(Nkx2-1-cre)2Areia/J (Xu e outros, 2008), Tg(Seis3-cre)69Frty/GcoJ (Furuta et al., 2000), B6;129-Tg(SLC18A3-cre)KMisa/0 (Misawa 
e outros, 2003), Tg(Slc17a8-icre)1Edw/SealJ (Divito et al., 2015), B6,129-Chat/Slc18a3tm1.2Vpra(Martins-Silva et al., 2011); Comitês da 
Universidade de Fudan e da Universidade de Tsinghua sobre Cuidados e Uso de Animais:Trpm7tm1Clph/J (Jin e outros, 2008), B6-Tg(Camk2a-
cre)T29- 1Stl(Tsien et al., 1996b), B6.129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J (Hippenmeyer e outros, 2005); O NINDS Animal Care and Use Committee:
Gria1tm2Rsp(Engblom et al., 2008),Gria2tm3Rsp(Shimshek e outros, 2006),Gria3tm1Rsp(Sanchis-Segura et al., 2006),Grin1tm2Stl(Tsien et al., 
1996b), B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010),Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J (BA €ckman e outros, 2006); Nie-
dersa€chsisches Landesamt fu €r Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit:Wwp1tm1.1Hkb/N (Ambrozkiewicz e outros, 2018),
Wwp2tm1.1Hkb/N (Ambrozkiewicz e outros, 2018), B6.129S2-Emx1tm1(cre)Krj/J (Gorski e outros, 2002),Neurod6tm1(cre)Kan(Goebbels e outros, 2006), 
Tg(Camk2a-cre)159Kln (Minichiello et al., 1999),Fdft1tm1Kan(Saher e outros, 2005); O Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade 
de Kobe:Grik4tm1(cre)Ksak(Akashi e outros, 2009), B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010); Comitê Institucional de 
Cuidados e Uso de Animais da Harvard Medical School: Tg(Six3-cre)69Frty/GcoJ (Furuta et al., 2000), B6.SJL-
€ckman e outros, 2006),Aros1tm3Sud/J (Kaeser e outros, 2008),Aros2tm1.1Sud/J (Kaeser e outros, 2011), Ai34 (MGI
Envio direto de dados, J:170755), Tg(Nes-cre)1Kln/J (Tronche et al., 1999), B6.Cg-Tg(Syn1-cre)671Jxm/J (Zhu et al., 2001), Erc2tm1.1Sud/J (Kaeser 
e outros, 2009),Slc17a7tm1.1(cre)Hze/J (Harris e outros, 2014), B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010), B6;Bhlhe22
tm3.1(cre)Meg(Ross e outros, 2010), B6;129P-Klf3tm1(cre/ERT2)Pzg/J (Projeto de Anatomia Molecular de Desenvolvimento Genito-Urinário (GUDMAP)),
Neurog2tm1(cre/Esr1)E(Zirlinger e outros, 2002), Tg(Scx-GFP/cre)1Stzr (Blitz e outros, 2009), B6;129S4- Foxd1tm1(GFP/cre)Amc/J (Humphreys e outros, 
2010); O Conselho Canadense de Cuidados com Animais e o Comitê de Cuidados com Animais do Instituto Neurológico de Montreal:Neo1
tm1.1Jfcl(Kam e outros, 2016), B6.Cg-H2afvTg(Wnt1-cre)11Rth(Danielian et al., 1998; Rowitch et al., 1999); Painel Administrativo da Universidade de 
Stanford sobre Cuidados com Animais de Laboratório: B6.SJL-Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J (BA €ckman e outros, 2006), B6-Tg(Drd1-Cre)
EY262GSat (Gong e outros, 2003), B6-Gad2tm2(cre)Zjh/J (Taniguchi e outros, 2011),Slc17a6tm2(cre)Lowl/J (Vong e outros, 2011), B6-Tg(Adora2a-
Cre)KG139GSat (Gong e outros, 2007), B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J ; os Institutos Nacionais de Saúde: B6.Cg-Gt(ROSA) 26Sor
tm14(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010),Gt(ROSA)26Sortm1.1(CAG-EGFP)Fsh/Mmjax (Sousa e outros, 2009), C57BL/6J-Tg(Nkx2- 1-cre)2Areia/J (
Xu e outros, 2008), Tg(Slc17a8-icre)1Edw/SealJ (Grimes e outros, 2011), Tg(Htr3a-cre)NO152Gsat/Mmucd (Chittajallu et al., 2013); Hospital 
Infantil de Boston: C57BL/6-Tg(Grik4-cre)G32-4Stl/J (Nakazawa e outros, 2002), B6.FVB(Cg)-Tg(Adora2a-cre)
Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J (BA
neurônio106, 37–65.e1–e5, 8 de abril de 2020e4
mailto:acraig@mail.ubc.ca
KG139Gsat/Mmucd/GENSAT,
Mmucd/GENSAT (Gong e outros, 2007), B6.SJL-Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J/JAX (BA
PyngJ (Young e outros, 2008),Gt(ROSA)26Sortm2(CAG-tdTomato)Fawa(Rocha e outros, 2011),Fgf22tm1a(EUCOMM)Hmgu(Terauchi et al., 2016); 
Serviço Veterinário Cantonal de Basel-Stadt, Suíça: B6-Tg(Camk2a-cre)T29-1Stl, B6.Cg-Cux2tm3.1(cre/ERT2)Mull/Mmmh (Franco e outros, 
2012), B6-Tg(Grik4-cre)G32-4Stl/J (Nakazawa e outros, 2002), B6.Cg-Tg(Ntsr1-cre)GN220Gsat/Mmucd (Gong e outros, 2003), B6.129-
PCP2tm1(cre)Nobs(Saito et al., 2005), B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010), B6.129P2- Pvalbtm1(cre)Arbr/J, B6.Cg-
Tg(Rbp4-cre)KL100Gsat/Mmucd (Gong e outros, 2003), B6.129S-Rorbtm1.1(cre)Hze/J (Harris e outros, 2014),
B6.FVB(Cg)-Tg(Drd1-cre)EY262Gsat/Mmucd/GENSAT,
€ckman e outros, 2006), Tg(Thy1-cre/ERT2,-EYFP)HGfng/
B6.FVB(Cg)-Tg(Rbp4-cre)KL100Gsat/
B6;C3-Tg(Scnn1a-cre)2Aibs/J (Madisen e outros, 2010), B6-SSTtm2.1(cre)Zjh, B6-VIPtm1(cre)Zjh/J (Taniguchi e outros, 2011), Khdrbs3tm1.1Schei/J 
(Traunmu €ller et al., 2014),Rpl22tm1.1Psam/J (Sanz e outros, 2009); Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais
na Duke University: B6;129S6-Bater papotm2(cre)Lowl/J (Rossi e outros, 2011), B6.Cg-Csf1rtm1.2Jwp/J (Li e outros, 2006), B6.129P2 (Cg)-
Cx3cr1tm2.1(cre/ERT2)Litt/WganJ (MGI Envio direto de dados MGI: J:190965),Epas1tm1Mcs/J (Gruber e outros, 2007), B6;129- Flrt2
tm1c(EUCOMM)Wtsi/RobH (Del Toro e outros, 2017), FVB-Tg(GFAP-cre)25Mes/J (Zhuo et al., 2001),Isl1tm1(cre)Sev/J (Yang e outros, 2006),
Megf10tm1c(KOMP)Jrs(Kay e outros, 2012),Tgfb3tm1Moaz(Doetschman e outros, 2012),Ptf1atm3Cvw(Krah et al., 2015),Isl1tm1.1Whk
(Mu et al., 2008), Tg(Six3-cre)69Frty/GcoJ, B6.129P2-Syktm1.2Tara/J (Saijo et al., 2003), CBy.B6-Gt(ROSA)26Sortm1(HBEGF)Awai/J (Buch e 
outros, 2005), B6.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomate,-EGFP)Luo/J (Muzumdar e outros, 2007), B6.Cg-Gt(ROSA) 26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J (
Madisen e outros, 2010); o Comitê de Recursos Animais da Universidade de Keio:Grin2ctm2(icre)Mwa(Miyazaki e outros, 2012),Cacna1a
tm1Kano(Hashimoto e outros, 2011),Grik4tm1(cre)Ksak(Akashi e outros, 2009),Grik2tm1.1 Ksak(Matsuda e outros, 2016),Adgrb3tm1Ksak(
Kakegawa e outros, 2015),Atg5tm1Myok(Hara e outros, 2006), B6.129-Tg(Pcp2-cre)2Mpin/J (Barski et al., 2000), PhotonSABER-LSL; O 
Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais e a supervisão da Duke Division of Laboratory Animal Resources: Tg(Slc1a3-cre/
ERT)1Nat/J (Wang e outros, 2012),Nlgn2tm1.1Sud/J (Liang e outros, 2015),Gt(ROSA) 26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J (Madisen e outros, 2010); as 
diretrizes institucionais e governamentais holandesas para bem-estar animal: B6.129(Cg)-Slc6a4tm1(cre)Xz/J (Zhuang e outros, 2005),
Stxbp1tm1Mver(Heeroma e outros, 2004), B6-Gad2tm2(cre)Zjh/J (Taniguchi e outros, 2011), Baylor College of Medicine Institutional Care 
and Use Committee:Dnmt3atm3.1Enl(Kaneda e outros, 2004), B6.FVB-Tg(Slc32a1-cre)2.1Hzo/FrkJ/ (Chao et al., 2010), o Comitê 
Institucional de Uso e Cuidado de Animais da Universidade Johns Hopkins: B6.Cg-Tg(Gfap-cre)77.6Mvs/2J (Gregorian e outros, 2009
),Slc16a1lox / lox(Jha et al., 2019), B6;CBA-Tg(Sox10-cre)1Wdr/J (Matsuoka e outros, 2005). A genotipagem foi realizada usando primers 
e tecidos descritos emTabela S1.
Procedimentos envolvendo peixe-zebra foram aprovados peloEunice Kennedy ShriverComitê Nacional de Cuidados e Uso de Animais do Instituto 
Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano e são descritos emTabor e outros. (2019).
DETALHES DO MÉTODO
Imagem de corte cerebral
Os descendentes dos cruzamentos Ai32 foram sacrificados em P14-16, os cérebros extraídos e seccionados em líquido cefalorraquidiano 
artificial gelado (ACSF) contendo (em mM): 124 NaCl, 3 KCl, 1,25 NaH2PO4, 1 MgSO47H2O, 2 CaCl2, 26NaHCO3e 15 D-glicose que foi 
borbulhado continuamente com carbogênio (95% O2/ 5% CO2) para ajustar o pH para 7,3. Fatias (300mm) foram então recuperados em 31 
C ACSF por 20 min e fixados em 4% de paraformaldeído + 4% de sacarose em PBS (pH 7,4) por 12 min. Eles foram então lavados em PBS 
contendo a contracoloração nuclear DAPI (4',6 diamidino-2-fenilindol) e montados em elvanol (Tris-HCl, glicerol e álcool polivinílico com 2% 
de 1,4-diazabiciclo[2,2, 2]octano). Imagens lado a lado e individuais foram capturadas em um microscópio confocal Zeiss LSM 700.
DISPONIBILIDADE DE DADOS E CÓDIGOS
Informação detabela 1será incorporado na seção de detalhes da mutação para cada linha Cre na página da MGI, marcada em negrito como ''Recombinação da 
linhagem germinativa.'' Este campo de detalhes da mutação em particular já foi exportado para vários recursos, incluindo repositórios de camundongos 
mutantes para exibição em páginas de dados de tensão .
e5neurônio106, 37–65.e1–e5, 8 de abril de 2020
	Optimizing Nervous System-Specific Gene Targeting with Cre Driver Lines: Prevalence of Germline Recombination and Influenci ...
	Introduction
	Results and Discussion
	Maternal Germline Recombination in Dlx5/6-Cre Driver Mice
	Mosaic Cre Expression in Genotyping Tissue
	Paternal Germline Recombination in Gpr26-Cre Driver MiceGermline Recombination in Mouse Cre Driver Lines Designed for Cell-Type-Specific Expression
	Recombination in Germline Cells
	Recombination in Zygotes
	Comparisons among Related Cre Driver Lines
	Target Locus Selectivity
	Broader Implications—Other Recombinase Systems and Organisms
	Guidelines
	Supplemental Information
	Acknowledgments
	Author Contributions
	Declaration of Interests
	References
	STAR★Methods
	Key Resources Table
	Lead Contact and Materials Availability
	Experimental Model and Subject Details
	Method Details
	Brain slice imaging
	Data and Code AvailabilitydeClstn3f/fcruzamentos com Dlx5
Cre. F/F Cre–indicaClstn3f/fsem Cr. F/- Cre+indicaClstn3f/–; Dlx5/6-Cre em que ocorreu reco
podem ser F/- Cre+e alguns podem ser F/F Cre+genótipos porque a recombinação em mo
Clstn3f/–sem Cre em que ocorreu recombinação. P e N indicam controles (múltiplos camu
número total de descendentes obtidos com aquele genótipo.
(B) Resultados de genotipagem representativos e números de descendentes de Ai
LSL-tg indica o promotor CAG e as sequências lox-stop-lox antes do transgene can
após a recombinação da linhagem germinativa por Cre, resultando na expressão 
e Cre–; 4, L-tg/+ e Cre+; 5, LSL-tg/+ e Cre+(mostrando alguma recombinação em mo
(C–E) Imagens lado a lado do hipocampo (C) e amostras das regiões CA1 e CA3 (D) mostrando a e
de (B). (E) Imagens de maior ampliação são mostradas para hipocampo CA1 estrato piramidal (sp
giro denteado. Observe que a potência do laser usada para o canal EYFP no painel da extrema di
resto. Barras de escala, 500mm (C), 100mm (D), e 20mmeu).
40neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
rosa 26locus. Para distinguir o alelo repórter antes e depois da 
recombinação, projetamos um conjunto de primers visando a região 
loxPstop-loxP-EYFP, com o primer forward annealing ao cassete stop que 
seria deletado pela Cre recombinase. Assim, o produto de PCR com esses 
primers está presente no tecido da cauda de
transgênico ratos sem dependente de cre recombinação
(''LSL-tg'' emfigura 1B) e ausente em camundongos com recombinação 
germinativa (''L-tg'' emfigura 1B). quando mulherrosaLSL-tg/+; Camundongos 
Dlx5/6-Cre foram cruzados com camundongos WT machos, 46,2% (18/39) da 
prole com o transgene tinha um alelo L-tg recombinado em vez do LSL-tg 
original, indicando recombinação germinalCre (Figura 1B). Em contraste, 
nenhum alelo recombinado foi detectado quando macho rosaLSL-tg/+; 
Camundongos Dlx5/6-Cre foram cruzados com camundongos WT fêmeas 
(0/33 descendentes com o transgene). Esta atividade de recombinação da 
linhagem germinativa em células germinativas femininas, mas não 
masculinas, é consistente com o achado doClstn3f/fcruzes. No entanto, as 
frequências de recombinação diferiram (33,3% pararosaLSL-tge 85,3% para
Clstn3fpor alelo alvo para camundongos Cre-negativos, assumindo que não há 
recombinação no zigoto, o que foi verificado conforme discutido abaixo).
Para apoiar os resultados da PCR com Dlx5/6-Cre e o repórter Ai32, 
avaliamos a linha germinativa versus a recombinação Cre específica do 
interneurônio do prosencéfalo por imagem de fluorescência para a 
expressão dependente de Cre de EYFP-ChR2;Figuras 1C–1E). rosaLSL-tg/+os 
camundongos não mostraram sinal EYFP acima dos níveis de fundo.rosa
LSL-tg/+; Camundongos Dlx5/6-Cre mostraram um padrão de EYFP-ChR2 
consistente com expressão em axônios e dendritos de interneurônios, 
como esperado. Por exemplo, o sinal foi forte nas regiões piramidais do 
estrato piramidal CA1 e CA3 do hipocampo, que são ricos em entradas 
inibitórias, mas fraco no estrato lúcido CA3, que é rico em sinapses 
excitatórias. A linhagem germinativa recombinada rosaL-tg/+;A prole 
Dlx5/6-Cre mostrou um amplo padrão de expressão de EYFP-ChR2 
abrangendo todas as regiões do cérebro, consistente com a expressão 
em todos os tipos de células, neurônios, células da glia e vasos 
sanguíneos (Figuras 1C–1E). Observe que a potência do laser de 
excitação para o canal EYFP usado para gerar imagens da linha germinal 
Cre-recombinada rosaL-tg/+; O hipocampo do camundongo Dlx5/6-Cre foi 
apenas 15% do dos outros dois genótipos emFiguras 1C–1E. Cre-
negativo rosaL-tg/+camundongos apresentaram o mesmo fenótipo que
rosaL-tg/+; Dlx5/ 6-Cre (dados não mostrados).
Expressão Mosaic Cre em tecido de genotipagem
Digno de nota, a presença de alelos Cre-recombinados no tecido
usado para genotipagem por PCR pode ser devido à expressão limitada de Cre 
e recombinação em nervos periféricos ou tipos de células não neurais em
/6-Cre transmitidos do genitor masculino ou feminino. F/F Cre+indicaClstn3f/f; Dlx5/6-
mbinação (essa marcação é usada para simplificar, mas alguns desses camundongos 
saico foi observada no tecido da cauda usado para genotipagem). F/- Cre–indica
ndongos foram usados para P). Os números abaixo dos genótipos indicam o 
32Gt(ROSA)26Sortm32(CAG-COP4*H134R/EYFP)HzeRepórter /J e cruzamentos Dlx5/6-Cre. 
alrodopsina-2(H134R)-EYFP (CHR2-EYFP) norosalocus. L-tg indica o transgene 
global do transgene. Os genótipos dos animais são 1, +/+ e Cre–; 2 e 3, LSL-tg/+ 
saico); 6, L-tg/+ e Cre–; 7, +/+ e Cre+.
xpressão do transgene CHR2-EYFP e coloração nuclear DAPI para descendentes selecionados 
), CA3 estrato lúcido (sl), camada molecular do giro denteado (DG ml) e regiões do hilo do 
reita para imagens deRosa26L-tg/+;Camundongos Dlx5/6-Cre foi apenas 15% disso para o 
(legenda na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202041
o tecido de genotipagem em vez da recombinação germinativa. Esse 
fenômeno normalmente envolve mosaico em vez de recombinação 
ubíqua, conforme indicado pela presença de produtos floxados e 
recombinados intactos de um alelo alvo. Essa recombinação em mosaico 
ocorreu no tecido da cauda usado para genotipagem por PCR de Ai32
rosaLSL-tg/+;Camundongos Dlx5/6-Cre. Por exemplo, emfigura 1B, pista 5 
mostra bandas para ambos os recombinadosrosaEU-
tg/+e o não recombinadorosaLSL-tg/+formulários para um único rosaLSL-
tglocus, indicando um genótipo de camundongo derosaLSL-tg/+
com alguma recombinação local. Essa recombinação do mosaico foi 
observada em 22/26rosaLSL-tg/+; Prole Dlx5/6-Cre enquanto nãorosaLSL-tg/+A 
descendência Cre-negativa (0/20) mostrou qualquer recombinaçãorosaL-tg/+
produtos. Para camundongos com dois alelos alvo, pode ser difícil, com base 
apenas na genotipagem por PCR do locus alvo, distinguir a recombinação 
ubíqua da linhagem germinativa em um alelo da recombinação somática em 
mosaico. Uma abordagem definitiva para distinguir a recombinação da 
linhagem germinativa de tal recombinação em mosaico local é a detecção do 
alelo recombinado na descendência Cre-negativa. Outra abordagem definitiva 
é a imagem de resolução celular para a expressão de RNA ou produtos 
proteicos de ambos os loci recombinados e não recombinados. Além disso, é 
provável que a recombinação da linhagem germinativa exiba um viés de sexo 
parental, como foi o caso da maioria das linhagens relatadas aqui, enquanto a 
recombinação em mosaico é tipicamente independente do sexo, exceto em 
algumas situações envolvendo modificação epigenética.
O uso de células que divergem consideravelmente do desenvolvimento das 
células nervosas para genotipagem por PCR, como células sanguíneas, pode 
ajudar a distinguir entre linha germinal e recombinação local. Por exemplo, na 
descendência do cruzamento de fêmeas Emx1-Cre;Wwp1f/f;Wwp2f/fcom macho
Wwp1f/f;Wwp2f/fcamundongos, recombinação emWwp2alelos foram 
observados no tecido da cauda da maioria dos camundongos Crepositivos 
(14/15), mas não Cre-negativos (0/16). A PCR do sangue não revelou nenhuma 
recombinação em nenhuma prole (0/14), indicando que a recombinação 
observada no tecido da cauda foi devido ao mosaico em vez da recombinação 
da linha germinativa. No entanto, esta abordagem não é universalmente útil, 
uma vez que o rosaLSL-tg/+; Camundongos Dlx5/6-Cre mostraram recombinação 
em mosaico no sangue, bem como no tecido da cauda.
Recombinação Germinativa Paterna em Camundongos 
Gpr26-Cre Driver
Dada a experiência com Dlx5/6-Cre e as recomendações no site do 
Jackson Labs—''Para muitoscrecepas, mas não todas, usandocre-machos 
positivos para reprodução evitam potencial linhagem germinativa
Figura 2. Camundongos Gpr26-Cre mostram recombinação da linhagem germinativa paterna
(A) Resultados de genotipagem de linhagem e amostra deClstn3f/fcruza com Gpr26-Cre d
Clstn3f/fsem Cr. F/- Cre+indicaClstn3f/–;Gpr26-Cre em que ocorreu a recombinação. Isso fo
no tecido da cauda deClstn3f/f; Camundongos Gpr26-Cre (n = 46 camundongos gerados a
tecido usado para genotipageme pela transmissão do alelo KO à prole. F/- Cre–indicaCls
camundongos foram usados para P).
(B) Resultados de genotipagem representativos e números de descendentes de Ai
LSL-tg indica o promotor CAG e as sequências lox-stop-lox antes do transgene can
após a recombinação da linhagem germinativa por Cre, resultando na expressão 
Cre+; 3 e 4, L-tg/+ e Cre–; 5, LSL-tg/+ e Cre+; 6, +/+ e Cre–.
(C–E) Imagens lado a lado do hipocampo e córtex (C) e amostras das regiões CA1 e CA3 (
descendentes selecionados de (B). Imagens de maior ampliação são mostradas para hipo
do laser usada para o canal EYFP no painel da extrema direita para imagens derosatg/+rat
meu).
42neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
eliminação do seuloxP-alelo flanqueado.'' (https://www.jax.org/news-
and-insights/jax-blog/2016/may/are-your-cre-lox-micedeleting-what-you-
think-they-are)—adotamos uma estratégia geral de reprodução de 
transmitir Cre recombinase paternalmente. No entanto, descobrimos 
que Gpr26-Cre mostrou recombinação paterna seletiva da linhagem 
germinativa.
Gpr26-Cre (Tg(Gpr26-cre)KO250Gsat/Mmucd) foi gerado pelo projeto 
GENSAT (http://gensat.org/index.html) e exibe expressão abundante na 
região CA1 do hipocampo e expressão esparsa em outras regiões do 
cérebro, incluindo camada V do córtex e tálamo (Gerfen et al., 2013; 
Harris e outros, 2014). Escolhemos esta linha por sua expressão 
específica em neurônios piramidais CA1 (Figura 2), que na verdade 
estava apenas na subcamada profunda (perto do estrato oriens), mas 
não na subcamada superficial do estrato piramidal CA1 em nossa 
caracterização (dados não mostrados;Figura 2C). Para deletarClstn3na 
região CA1 condicionalmente, cruzamosClstn3f/f; Gpr26-Cre eClstn3f/f
camundongos e descendentes genotipados por PCR. Como mostrado 
pela presença de bandas KO PCR emFigura 2A, observamos 
recombinação mediada por Cre no tecido da cauda quando o macho
Clstn3f/f; Gpr26-Cre foram cruzados com fêmeasClstn3f/fmas não vice-
versa. A transmissão adicional da linhagem germinativa deste alelo KO e 
a ausência de recombinação local no tecido da cauda confirmaram a 
recombinação seletiva da linhagem germinativa paterna de floxedClstn3.
Para testar se a recombinação seletiva da linhagem germinativa paterna 
também ocorre com outro locus floxado alvo, cruzamos camundongos Gpr26-
Cre com a linha repórter Ai32 e avaliamos os genótipos da progênie F2 por 
PCR usando tecido da cauda e por imagem de EYFP-ChR2 em seções cerebrais. 
quando masculinorosaLSL-tg/+; Camundongos Gpr26-Cre foram cruzados com 
fêmeas WT, 27,6% (8/29) da prole com o transgene tinha apenas um alelo 
recombinado independentemente da presença de Cre, indicando 
recombinação da linhagem germinativa. Em contraste, quando Cre foi 
transmitido através do progenitor feminino, as sequências loxP-stop-loxP 
permaneceram praticamente intactas (Figura 2B; nenhuma recombinação 
ubíqua da linhagem germinativa foi observada, mas 2/17rosaLSL-tg/+; 
Camundongos Gpr26-Cre mostraram recombinação em mosaico no tecido da 
cauda). Como esperado,rosaLSL-tg/+camundongos não mostraram sinal EYFP 
acima dos níveis de fundo erosaLSL-tg/+; Camundongos Gpr26-Cre expressaram 
EYFP-ChR2 proeminentemente na região CA1 do hipocampo com expressão 
fraca no córtex (Figuras 2C-2E). Em contraste, para animais com recombinação 
germinativa, ou seja,rosaL-tg/+camundongos, EYFP-ChR2 foi expresso 
globalmente. No hipocampo,rosaLSL-tg/+; Camundongos Gpr26-Cre tiveram 
forte expressão de EYFP-ChR2 no CA1 stratum radiatum e oriens
o progenitor masculino ou feminino. F/F Cre+indicaClstn3f/f;Gpr26-Cre. F/F Cre–indica
i confirmado como deleção da linhagem germinativa pela ausência de uma banda KO 
 partir de cruzamentos Cre maternos) indicando a ausência de recombinação local no 
tn3f/–sem Cre em que ocorreu recombinação. P e N indicam controles (múltiplos 
32Gt(ROSA)26Sortm32(CAG-COP4*H134R/EYFP)Hze/J repórter e cruzamentos Gpr26-Cre. 
alrodopsina-2(H134R)-EYFP (CHR2-EYFP) norosalocus. L-tg indica o transgene 
global do transgene. Os genótipos dos animais são 1, LSL-tg/+ e Cre–; 2, +/+ e 
D) mostrando a expressão do transgene CHR2-EYFP e coloração nuclear DAPI para 
campo CA1 estrato piramidal (sp) e CA3 estrato lúcido (sl) (E). Observe que a potência 
os foi apenas 15% disso para o resto. Barras de escala, 500mm (C), 100mm (D), e 20m
https://www.jax.org/news-and-insights/jax-blog/2016/may/are-your-cre-lox-mice-deleting-what-you-think-they-are
https://www.jax.org/news-and-insights/jax-blog/2016/may/are-your-cre-lox-mice-deleting-what-you-think-they-are
https://www.jax.org/news-and-insights/jax-blog/2016/may/are-your-cre-lox-mice-deleting-what-you-think-they-are
http://gensat.org/index.html
camadas, mas não em CA3, enquantorosaL-tg/+camundongos mostraram expressão 
de EYFP-ChR2 em ambas as regiões em um padrão consistente com a expressão em 
todos os tipos de células (Figuras 2C-2E).
Recombinação de linhagem germinativa em linhas de driver Cre Mouse 
projetadas para expressão específica de tipo de célula
Como a recombinação germinativa significativa ocorreu em ambas as 
linhagens Dlx5/6-Cre e Gpr26-Cre projetadas para recombinação em tipos 
específicos de neurônios, nos perguntamos sobre a prevalência desse 
fenômeno em outras linhagens Cre. Até onde sabemos, há apenas um 
punhado de artigos focados na recombinação da linhagem germinativa em 
linhas de driver Cre destinadas à recombinação específica do sistema nervoso 
(Kobayashi e Hensch, 2013; Liput, 2018; Weng et al., 2008; Zhang e outros, 
2013) e vários outros artigos que mencionam esse problema, normalmente 
nos métodos (tabela 1). Linhagens relatadas para sofrer recombinação 
germinativa significativa incluem o amplamente utilizado Nestin-Cre, GFAP-
Cre, CaMKIIa-Linhas Cre e Synapsin1-Cre (Choi et al., 2014; Rempe et al., 2006; 
Zhang e outros, 2013), que coletivamente foram usados em mais de 1.500 
artigos publicados de acordo com o banco de dados MGI (Bult e outros, 2019). 
Além disso, nesses dados coletados da literatura, a maioria (9/10) das 
linhagens de motorista Cre testadas mostrou um efeito de sexo parental. 
Suspeitamos que esses dados representem a ponta de um iceberg, já que 
para a maioria das linhas condutoras Cre, as informações não estão 
prontamente disponíveis sobre a extensão da recombinação da linhagem 
germinativa ou sobre o viés de sexo dos pais.
Um recurso abrangente de informações relevantes sobre linhagens Cre driver 
pode ser inestimável para mitigar a recombinação indesejada de linhagem 
germinativa, servindo como um guia para escolher entre linhagens Cre semelhantes 
e para projetar esquemas de reprodução ideais. Assim, reunimos informações para 
apresentar novos dados combinados sobre taxas de recombinação de linhagem 
germinativa e efeitos sexuais parentais para linhas de driver Cre para pesquisa em 
neurociência. Os dados coletivos de todas as fontes publicadas e não publicadas 
anteriormente são relatados emtabela 1.
Das 64 linhagens de driver Cre analisadas, mais da metade (64,1%) exibiu 
alguma recombinação da linhagem germinativa. A natureza em mosaico da 
deleção da linhagem germinativa para a maioria das linhagens do driver Cre 
torna o genótipo da prole individual imprevisível. Além disso, das 29 linhagens 
de driver Cre para as quais informações suficientes estão disponíveis sobre os 
efeitos sexuais dos pais, a maioria (82,8%) mostrou um viés de sexo, com 
62,1% demonstrando recombinação da linhagem germinativa única ou 
seletivamente por meio do genitor masculino e 20,1% apenas ou 
seletivamente por meio de a progenitora. Apenas 17,2% apresentaram taxas 
quase iguais de recombinação germinativa em pais masculinos e femininos. 
Essas descobertas destacam a importância de avaliar a recombinação 
potencial da linhagem germinativa para cada camundongo e o valor de 
rastrear o viés sexual dos pais para otimizar os esquemas de reprodução para 
minimizar a recombinação indesejada da linhagem germinativa.
Recombinação em Células Germinativas
Conformediscutido na introdução, a atividade Cre nas células germinativas do ovário 
ou testículos medeia a recombinação germinativa. Relevante para as linhas de driver 
Cre escolhidas como exemplos aqui, o Gpr26 nativo é expresso nos testículos (Jones 
e outros, 2007), consistente com a recombinação seletiva da linhagem germinativa 
paterna de Gpr26-Cre. No entanto, Dlx5 e Dlx6 nativos são expressos tanto no ovário 
quanto nos testículos.Bouhali et al., 2011; Nishida e outros, 2008); no entanto, 
apenas a recombinação da linhagem germinativa materna foi observada para 
Dlx5/6-Cre.
Além disso, a expressão no ovário ou nos testículos pode não refletir a 
expressão das células germinativas, e as linhas condutoras Cre podem não 
reproduzir os padrões de expressão nativos. Dados scRNA-seq recentes de 
células germinativas masculinas (Lukassen e outros, 2018a, 2018b) contorna a 
limitação anterior. No entanto, mesmo restringindo as análises às linhas 
condutoras KI Cre, os níveis de expressão dos genes condutores nativos 
nestes loci KI em células germinativas masculinas não mostraram relação 
aparente se a linha condutora Cre mediava a recombinação da linhagem 
germinativa paterna (Figura S1). Contornando a segunda limitação, a 
expressão de Cre pode não ser adequadamente refletida pela expressão do 
gene driver nativo, o portal Cre do banco de dados MGI (Bult et al., 2019; 
Heffner e outros, 2012) relata padrões de atividade de recombinase Cre para 
muitas linhas. Para a maioria (75%) das 16 linhagens de driver Cre com 
informações sobre a atividade das células germinativas do sistema 
reprodutivo no banco de dados MGI, os dados foram consistentes com nossos 
achados sobre recombinação germinativa emtabela 1. Em 3 casos, foi relatada 
atividade de Cre nas células germinativas, mas não foi observada 
recombinação; por exemplo, ChAT-Cre foi positivo para a atividade de 
recombinase Cre em oócitos (MGI), mas não exibiu recombinação da linhagem 
germinativa materna em nenhum dos vários loci alvo (tabela 1). Tg(Grik4-
cre)G32-4Stl e Sst-IRES-Cre foram listados como negativos para atividade de 
recombinase Cre em células germinativas, mas mostraram alguma 
recombinação germinativa, embora para Sst-IRES-Cre apenas em um dos seis 
loci alvo, portanto consistente com os dados MGI para a maioria dos loci alvo. 
Entre as outras 30 linhagens que apresentaram recombinação germinativa em
tabela 1, o banco de dados MGI não listou nenhum como negativo para a 
atividade da recombinase Cre em células germinativas, embora vários tenham 
sido listados como negativos nos testículos ou no ovário. Assim, uma 
interpretação conservadora da atividade de recombinase Cre do banco de 
dados MGI pode ser útil para prever a ocorrência de recombinação 
germinativa. Basear as previsões para a recombinação da linhagem 
germinativa na maioria dos loci-alvo na atividade Cre nas células germinativas 
produz boas medidas com precisão 0,700, recuperação 0,875, precisão 0,750, 
razão de chances de diagnóstico 11,67 e F1pontuação 0,778 (de 16 linhas: 7 
verdadeiros positivos, 5 verdadeiros negativos, 3 falsos positivos e 1 falso 
negativo).
Em princípio, seria de esperar que camundongos expressando Cre 
recombinase fundida com o receptor de estrogênio (CreER) não tivessem 
recombinação germinativa, a menos que fossem expostos ao tamoxifeno para 
ativar o CreER. De fato, das 7 linhas de driver aqui estudadas que expressam 
CreER ou a versão melhorada CreERT2 (Feil et al., 1997), 85,7% não 
apresentaram recombinação germinativa. No entanto, Tg(hs799-cre/ ERT2,-
GFP)405Jlr mostrou recombinação da linhagem germinativa materna na 
ausência de administração de tamoxifeno (tabela 1). Esta linha de 
camundongos exibe alguma atividade independente de tamoxifeno de 
CreERT2, possivelmente associada à alta expressão do alelo CreERT2 (
Silberberg e outros, 2016). Essa atividade independente do tamoxifeno 
também pode levar a um aumento dependente da idade na recombinação 
específica da célula; por exemplo, camundongos Tg(Plp1-cre/ERT)3Pop não 
tratados mostraram recombinação crescente em oligodendrócitos com a 
idade (Traka et al., 2016). Assim, não é seguro assumir que as linhas de driver 
CreER não possuem recombinação germinativa.
Recombinação em zigotos
Nossos dados emtabela 1foca na recombinação da linhagem germinativa que ocorre 
quando o driver Cre e o locus alvo estão juntos nas células germinativas masculinas 
ou femininas de camundongos F1, resultando na transmissão de um alelo 
recombinado para camundongos F2. Também é possível
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202043
44neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
Tabela 1. Prevalência de recombinação de linhagem germinativa em linhagens de mouse Cre Driver projetadas para recombinação específica do sistema nervoso
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
799-CreER-
IRES-GFP
Tg(hs799-cre/ERT2,-
GFP)405Jlr
mafbtm1.1Bom H 0 (de >20
ninhadas)
observado
(de >20
ninhadas)
– Pai et al., 2019; 
Silberberg et al.,
2016
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Tg(hs799-cre/ERT2,-
GFP)405Jlr
maftm2.1Cbm H 0 (de >20
ninhadas)
observado
(de >20
ninhadas)
– Pai et al., 2019; 
Silberberg et al.,
2016
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Tg(hs799-cre/ERT2,-
GFP)405Jlr
Ai14e H 0 (de >20
ninhadas)
observado
(de >20
ninhadas)
– Pai et al., 2019; 
Silberberg et al.,
2016
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
A2a-Cre B6-Tg(Adora2a-Cre)
KG139GSat
Ai14e E ou G 0 (de >3
anos
Reprodução)
0 (de >3
anos
Reprodução)
– – Kevin T. Beier
B6.FVB(Cg)-Tg
(Adora2a-cre)
KG139Gsat/
Mmucd/GENSAT
Gt(ROSA) F 0 (0/15) ND – – Hisashi Umemori
26Sortm2(CAG-tdTomato)Fawa
Bhlhb5-Cre Bhlhe22tm3.1(cre)Meg Ai9e B 0 (de >10
ninhadas)
0 (de >10
ninhadas)
– – Wenjia Você,
Constança L. Cepko
CaMKIIa-Cre Tg(Camk2a-cre)
159Kln
Fdft1tm1Kan C 16,2% (12/74) 6,3% (3/48) – fu€nfschilling et al., 
2012; Minichiello
e outros, 1999
Gesine Saher,
Klaus A. Nave
CaMKIIa-Cre Tg(Camk2a-cre)93Kln Gnao1 B 72,1% (31/43) ND – Choi et al., 2014 –
Tg(Camk2a-cre)93Kln B6;129S4-Gt(ROSA)
26Sortm1Sor/J
B 98,5% (64/65) ND – Choi et al., 2014 –
CaMKIIa-Cre B6.Cg-Tg(Camk2a-
cre)2Szi/J
Lepratm1.1Chua A observado 0 – McMinn et al.,
2005
–
B6.Cg-Tg(Camk2a-
cre)2Szi/J
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra A ou C observado ND – de Castro e outros, 
2009
–
CaMKIIa-Cre
(T29-1)
Tg(Camk2a-cre)
T29-1Stl
Khdrbs3tm1.1Schei/J C 31,3% (5/16) 0% (0/7) – – Elisabetta Furlanis,
Lisa Traunmu€ller,
Peter Scheiffele
Tg(Camk2a-cre)
T29-1Stl
Rpl22tm1.1Psam/J C 21,4% (6/28) 0% (0/21) – – Elisabetta Furlanis,
Lisa Traunmu€ller,
Peter Scheiffele
Tg(Camk2a-cre)
T29-1Stl
Trpm7tm1Clph C 25,0% (33/132) ND – Liu et al., 2018b Cui Chen, Wei Li,
Nashat Abumaria
(Continua na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202045
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
Chat-Cre B6;129S6- Megf10tm1c(KOMP)Jrs A ou C 0 (de 16
ninhadas)
0 (de 15
ninhadas)
– Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. KayBater papotm2(cre)Lowl/J
B6;129S6- Tgfb3tm1Moaz A ou C 0 (de 33
ninhadas)
0 (de 35
ninhadas)
– Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. KayBater papotm2(cre)Lowl/J
B6;129S6- ROSAmT/mG5 A ou C 0 (de 17
ninhadas)
0 (de 19
ninhadas)
– Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. KayBater papotm2(cre)Lowl/J
B6;129S6- Ai14e A ou C 0 (de 15
ninhadas)
0 (de 9
ninhadas)
– Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,Jeremy N. KayBater papotm2(cre)Lowl/J
Cux2-Cre B6.Cg- Ai9e B – – observado Gil-Sanz et al.,
2015
–
Cux2tm2.1(cre)Mull
B6.Cg- Gt(ROSA) B – – observado Gil-Sanz et al.,
2015
–
Cux2tm2.1(cre)Mull 26Sortm1(CAG-lacZ,-EGFP)Glh/J
Cux2-CreERT2 B6.Cg- Rpl22tm1.1Psam/J B ND 0 (0/15) – – Susanne Falkner,
Peter ScheiffeleCux2tm3.1(cre/ERT2)Mull/
Mmmh
B6.Cg- Rpl22tm1.1Psam/J E 0 (0/23) 0 (0/23) – – Susanne Falkner,
Peter ScheiffeleCux2tm3.1(cre/ERT2)Mull/
Mmmh
CX3CR1-CreER Cx3cr1tm2.1(cre/ERT2)Litt/ Syktm1.2Tara E 0 (de 32
ninhadas)
0 (de 26 ninhadas) – Pual et al.,
2019
Ariane Pereira,
Jeremy N. KayWganJ
Cx3cr1tm2.1(cre/ERT2)Litt/ Gt(ROSA) A ou C 0 (de 8
ninhadas)
0 (a partir de 6 ninhadas) – Pual et al.,
2019
Ariane Pereira,
Jeremy N. KayWganJ 26Sortm1(HBEGF)Awai/J
Cx3cr1tm2.1(cre/ERT2)Litt/ Csf1rtm1.2Jwp/J A ou C 0 (de 10
ninhadas)
0 (a partir de 8 ninhadas) – Pual et al.,
2019
Ariane Pereira,
Jeremy N. KayWganJ
D2-Cre Tg(Drd2-cre)
ER44Gsat/
Mmucd
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra C 0 (0/55) 0 (0/44) – Guzman e outros,
2011
Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
DAT-Cre Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Gria1tm2Rsp A ou C 0 (de >3
anos de reprodução)
ND – Hutchison
e outros, 2018
Maria Ana
Hutchison, Wei Lu
Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Gria2tm3Rsp A ou C 0 (de >3
anos de reprodução)
ND – Hutchison
e outros, 2018
Maria Ana
Hutchison, Wei Lu
Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Gria3tm1Rsp A ou C 0 (de >3
anos de reprodução)
ND – Hutchison
e outros, 2018
Maria Ana
Hutchison, Wei Lu
Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Grin1tm2Stl A ou C 0 (de >3
anos de reprodução)
ND – Hutchison
e outros, 2018
Maria Ana
Hutchison, Wei Lu
(Continua na próxima página)
46neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
Slc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J Ai14e A ou C 0 (de >3
anos de reprodução)
ND – Hutchison e outros,
2018
Maria Ana
Hutchison, Wei Lu
B6.SJL- Ai14e E ou G 0 (de > 6 anos de 
reprodução)
0 (de > 6 anos de 
reprodução)
– – Kevin T. Beier
SLc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J
B6.SJL- Gt(ROSA) E, F 0 (0/26) 0 (0/15) – – Hisashi Umemori
SLc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J 26Sortm2(CAG-tdTomato)Fawa
B6.SJL- Aros1tm3Sud/J A ou C 0 (de >1 ano
de reprodução)
0 (de >1 ano
de reprodução)
– Liu et al., 2018a Jiexin Wang,
Pascal S. KaeserSLc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J
B6.SJL- Aros2tm1.1Sud/J A ou C 0 (de >1 ano
de reprodução)
0 (de >1 ano
de reprodução)
– Liu et al., 2018a Jiexin Wang,
Pascal S. KaeserSLc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J
B6.SJL- Ai34e A ou C 0 (de >19
ninhadas)
0 (de >14
ninhadas)
– Liu et al., 2018a Jiexin Wang,
Pascal S. KaeserSLc6a3tm1.1(cre)Bkmn/J
Dlx5/6-Cre B6-Tg(dlx5a-cre)
1Mekk/J
Prox1tm2Gco B 0 ou menos que
fêmea
observado – Miyoshi et al.,
2015
–
B6-Tg(dlx5a-cre)
1Mekk/J
Clstn3tm1Amcr/J C 0 (0/52) 85,3% (29/34)
de Cre negativo
filhos
– – Lin Luo, Ann
marie craig
B6-Tg(dlx5a-cre)
1Mekk/J
Ai32e B 0 (0/33) 33,3% (6/18)
de Cre negativo
filhos
– – Lin Luo, Ann
marie craig
DlxI12B-Cre Tg(I12b–cre)1Jlr mafbtm1.1Bom H observado
(de >10
ninhadas)
ND – Potter e outros,
2009
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Tg(I12b–cre)1Jlr maftm2.1Cbm H observado
(de >10
ninhadas)
ND – Potter e outros,
2009
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Tg(I12b–cre)1Jlr Ai14e H observado
(de >10
ninhadas)
ND – Potter e outros,
2009
Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Drd1-Cre B6-Tg(Drd1-Cre)
EY262GSat
Ai14e E ou G 0 (de >3
anos
Reprodução)
0 (de > 3 anos de 
criação)
– – Kevin T. Beier
B6.FVB(Cg)-Tg(Drd1-
cre)EY262Gsat/Mmucd/26Sortm2(CAG-tdTomato)Fawa
GENSAT
Gt(ROSA) F 0 (0/20) ND – – Hisashi Umemori
(Continua na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202047
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
E3-CreN Grin2ctm2(icre)Mwa Cacna1atm1Kano C 41,2% (7/17)
de Cre negativo
filhos
0 (0/20) – – Junko Motohashi,
Michisuke Yuzaki
Emx1-Cre Emx1tm1(cre)Ito B6.129(FVB)–
Gabra1tm1Geh/J
A 36% 36% – Zeller e outros,
2008
–
Emx1-Cre B6.129S2- Syngap1tm1.1Geno Não especificado observado 0 ou menos que
macho
– Ozkan et al.,
2014
–
Emx1tm1(cre)Krj/J
B6.129S2- Ai93e Não especificado - – observado Steinmetz e outros,
2017
–
Emx1tm1(cre)Krj/J
B6.129S2- Wwp2tm1.1Hkb C 33,3% (4/12) 0 (0/20) – Ambrozkiewicz
e outros, 2018
Mateusz C.
Ambrozkiewicz,
Fritz Benseler, Nils
Brose, Hiroshi
Kawabe
Emx1tm1(cre)Krj/J de Cre negativo
filhos
B6.129S2- Rai1tm2.1Luo/J A 40,5% (64/158) ND – – Wei-Hsiang
Huang, Liqun LuoEmx1tm1(cre)Krj/J
En1-Cre En1tm2(cre)Wrst/J Chat/Slc18a3tm1.2Vpra A ou C 54,6% (95/174
incluindo 17 Cre
descendência negativa) descendência negativa)
36,2% (54/149
incluindo 3 Cre
– Janickova et al.,
2017
Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
Foxd1-Cre B6;129S4- Ai9e B 0 (de >7 ninhadas) 0 (de >7 ninhadas) – – Wenjia Você,
Constança L. CepkoFoxd1tm1(GFP/cre)Amc/J
Foxg1-Cre 129(Cg)- Gt(ROSA)26Sortm1Sor B 68,8% (11/16) ND – Weng e outros,
2008
–
Foxg1tm1(cre)Skm/J
Gad2-IRES-Cre B6.Cg- stxbp1tm1Mver E ou G – – - 50% (de
> 17 ninhadas)
Kovacevic et al.,
2018
Matthijs Verhage
Gad2tm2(cre)Zjh/J
B6N.Cg- Rai1tm2.1Luo/J A 0 (0/26) ND – – Wei-Hsiang Huang,
Liqun LuoGad2tm2(cre)Zjh/J
B6-Gad2tm2(cre)Zjh/J Ai14e E ou G 0 (de > 6 anos de 
reprodução)
0 (de > 6 anos de 
reprodução)
– – Kevin T. Beier
GFAP-Cre Tg(GFAP-cre)25Mes Gja1tm1Kwi C 16,7% (7/42)
de Cre negativo
filhos
50% (8/16) da descendência 
Cre negativa
– Zhang e outros,
2013
–
Tg(GFAP-cre)25Mes Epas1tm1Mcs/J A ou C 50% (9/18) 42,9% (6/14) – – Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
GFAP-Cre B6.Cg-Tg(Gfap-cre)
77,6Mvs/2J
Slc16a1lox / lox C observado (100%
de algumas ninhadas)
35
ninhadas)
– – Thomas Philips,
Jeffrey Rothstein
(Continua na próxima página)
48neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
GLAST-CreERT2 Tg(Slc1a3-cre/ERT)
1Nat/J
Nlgn2tm1.1Sud/J A – – 0 (0/160) Stogsdill e outros,
2017
Jeff Stogsdill,
Cagla Eroglu
Tg(Slc1a3-cre/ERT)
1Nat/J
Gt(ROSA) A – – 0 (0/160) Stogsdill e outros,
2017
Jeff Stogsdill,
Cagla Eroglu26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J
Gpr26-Cre B6-Tg(Gpr26-cre)
KO250Gsat/
Mmucd
Clstn3tm1Amcr/J C observado 0 (0/92) – – Lin Luo, Ann
marie craig
B6-Tg(Gpr26-cre)
KO250Gsat/
Mmucd
Ai32e B 27,6% (8/29
incluindo 5
Cre negativo
filhos)
0 (0/23) – – Lin Luo, Ann
marie craig
Grik4-Cre B6-Tg(Grik4-cre)
G32-4Stl/J
Khdrbs3tm1.1Schei/J E – – 37,5% (12/32) – Lisa Traunmu€ller,
Andrea Gomes,
Peter Scheiffele
B6-Tg(Grik4-cre)
G32-4Stl/J
Khdrbs3tm1.1Schei/J C 0% (0/42) ND – – Lisa Traunmu€ller,
Andrea Gomes,
Peter Scheiffele
B6-Tg(Grik4-cre)
G32-4Stl/J
Rpl22tm1.1Psam/J C 0% (0/10) ND – – Lisa Traunmu€ller,
Andrea Gomes,
Peter Scheiffele
B6-Tg(Grik4-cre)
G32-4Stl/J
Fgf22tm1a(EUCOMM)Hmgu A, B, C, F, G – – 0 (0/16) Terauchi et al.,
2017
Hisashi Umemori
Grik4-Cre Grik4tm1(cre)Ksak Grin2btm1Ksak Não especificado - – observado Akashi et al.,
2009
–
Grik4tm1(cre)Ksak Ai9e D 71,4% (5/7) de
Cre negativo
filhos
48,3% (14/29)
de Cre negativo
filhos
– – Yu Itoh-Maruoka,
Tomohiko Maruo,
Kenji Sakimura,
Kenji Mandai,
Yoshimi Takai
Grik4tm1(cre)Ksak Grik2tm1.1 Ksak C 95% (38/40) de
Cre negativo
filhos
0 (0/31) –– Junko Motohashi,
Michisuke Yuzaki
Htr3a-Cre Tg(Htr3a-cre)
NO152Gsat/
Mmucd
Ai14e múltiplo – – - 20%–50%
(de > 60 ninhadas)
– Kenneth Pelkey,
Chris J McBain
Isl1-Cre Isl1tm1(cre)Sev/J Ptf1atm3Cvw A 0 (de 2 ninhadas) 0 (de 2 ninhadas) – – Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
(Continua na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202049
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
Klf3-CreERT2 B6;129P- Ai9e B 0 (de >15
ninhadas)
0 (de >15
ninhadas)
– – Wenjia Você,
Constança L. CepkoKlf3tm1(cre/ERT2)Pzg/J
Nestin-Cre Tg(Nes-cre)1Kln/J Gja1tm8Kwi Não especificado - – 28,6% (4/14) de
Cre negativo
filhos
Zhang e outros,
2013
–
Tg(Nes-cre)1Kln/J Ai34e B 12,5% (1/8) 20% (2/10) – – Jiexin Wang,
Pascal S. Kaeser
Tg(Nes-cre)1Kln/J Rai1tm2.1Luo/J A 79,1% (117/148) ND – Huang e outros,
2016, 2018
Wei-Hsiang
Huang, Liqun Luo
Nestin-Cre Tg(Nes-cre)1Atp Runx1tm1Buch D – – observado em
Cre negativo
filhos
Buchholz e outros,
2000
–
Tg(Nes-cre)1Atp Fgf8tm1.3Mrt A - 100% observado – Dubois e outros,
2006; Trumpp
e outros, 1999
–
Tg(Nes-cre)1Atp Ntf3tm2Jae F - 100% ND – Bates e outros, 1999 –
Tg(Nes-cre)1Atp Smad4tm2.1Cxd A - 100% 0 ou menos que
macho
– Zhou e outros, 2003 –
Tg(Nes-cre)1Atp Tb1tm3Tyj A - 100% ND – MacPherson e outros,
2003
v
NEX-Cre Neurod6tm1(cre)Kan Wwp1tm1.1Hkb C 0 (0/30) 0 (0/30) – – Hiroshi Kawabe
Neurod6tm1(cre)Kan Wwp2tm1.1Hkb C 0 (0/30) 0 (0/30) – – Hiroshi Kawabe
Neurod6tm1(cre)Kan Gt(ROSA)26Sortm1Sor múltiplo 0 (de >5
ninhadas)
0 (de >5
ninhadas)
– Goebbels e outros,
2006
Sandra Goebbels,
Klaus A. Nave
Ngn2-CreER Neurog2tm1(cre/Esr1*)E Ai9e B 0 (de >25
ninhadas)
0 (de >25
ninhadas)
– – Wenjia Você,
Constança L. Cepko
Nkx2.1-Cre C57BL/6J-Tg(Nkx2-
1-cre)2Areia/J
RCE:loxpe múltiplo – – - 10%–30%
(de > 60 ninhadas)
– Kenneth Pelkey,
Chris J McBain
C57BL/6J-Tg(Nkx2-1-
cre)2Areia/J
Ai14e múltiplo – – - 10%–30%
(de > 60 ninhadas)
– Kenneth Pelkey,
Chris J McBain
C57BL/6J-Tg(Nkx2-1-
cre)2Areia/J
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra C 5,4% (12/224) 12,5% (24/192
incluindo 5
Cre negativo
filhos)
– Kolisnyk et al.,
2017
Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
B6.CD1-Tg(Nkx2-1-
cre)2Areia
mafbtm1.1Bom H observado
(de >100
ninhadas)
observado
(de >100
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
(Continua na próxima página)
50neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
B6.CD1-Tg(Nkx2-1-
cre)2Areia
maftm2.1Cbm H observado
(de >100
ninhadas)
observado
(de >100
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
B6.CD1-Tg(Nkx2-1-
cre)2Areia
Ai14e H observado
(de >100
ninhadas)
observado
(de >100
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR Rubenstein
Ntsr1-Cre B6.FVB(Cg)-
Tg(Ntsr1-cre)
GN220Gsat/Mmucd
Ai93e Não especificado - – observado Steinmetz e outros,
2017
–
B6.Cg-Tg(Ntsr1-cre)
GN220Gsat/Mmucd
Rpl22tm1.1Psam/J C ND 0 (0/21) – – Susanne Falkner,
Peter Scheiffele
B6.Cg-Tg(Ntsr1-cre)
GN220Gsat/Mmucd
Rpl22tm1.1Psam/J E – – 8,1% (3/37) – Susanne Falkner,
Peter Scheiffele
Nos1-Cre Nº1tm1(cre)Mgmj Lepratm1.1Chua C ND observado – Rupp et al.,
2018
–
Pcp2/L7-Cre B6.129-Tg(Pcp2-cre)
2Mpin/J
Tsc1tm1.1Djk A ou E – – - 5% Tsai et al.,
2012
–
B6.129-Tg(Pcp2-cre)
2Mpin/J
Adgrb3tm1Ksak C 84% (63/75) de
Cre negativo
filhos
0 (0/90) – Kakegawa
e outros, 2015
Junko Motohashi,
Michisuke Yuzaki
B6.129-Tg(Pcp2-cre)
2Mpin/J
Atgtm1Myok C 14,3% (3/21) de 0 (0/50) Cre 
negativo
filhos
– Nishiyama
e outros, 2007
Junko Motohashi,
Michisuke Yuzaki
B6.129-Tg(Pcp2-cre)
2Mpin/J
PhotonSABER-LSL C 69% (58/84) de
Cre negativo
filhos
0 (0/256) – Kakegawa
e outros, 2018
Junko Motohashi,
Michisuke Yuzaki
Pcp2/L7-Cre B6.129-PCP2tm1(cre)NobsRpl22tm1.1Psam/J C 0 (0/11) ND – – Elisabetta Furlanis,
Peter Scheiffele
B6.129-PCP2tm1(cre)NobsRpl22tm1.1Psam/J G 0 (0/4) 0 (0/4) – – Elisabetta Furlanis,
Peter Scheiffele
Pou4f2-Cre Pou4f2tm1(cre)Bnt/J Ai9e B - 100% 0 – simmons
e outros, 2016
–
Pvalb-2A-Cre B6.Cg- B6.129S4-
Relógiotm1Rep/J
F 50% (24/48) 10
ninhadas)
0 (de >10
ninhadas)
– – Wenjia Você,
constância
L. Cepko
SERT-Cre B6.129(Cg)- Lepratm1.1Chua C – – - 100% Lam e outros, 2011 –
Slc6a4tm1(cre)Xz/J
B6.129(Cg)- Stxbp1tm1MverA observado
(de >20
ninhadas)
observado
(de >20
ninhadas)
– Dudok et al.,
2011
Matthijs Verhage
Slc6a4tm1(cre)Xz/J
Sim1-Cre Tg(Sim1-cre)1Lowl/J Rai1tm2.1Luo/J A 0 (0/95) ND – – Wei-Hsiang Huang,
Liqun Luo
Six3-Cre Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Isl1tm1.1Whk A 1/1 2/3 – Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Syktm1.2Tara A 1/1 1/2 – Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Tgfb3tm1Moaz A 1/2 3/4 – Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Flrt2tm1c(EUCOMM)Wtsi A 3/3 4/4 – Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Ptf1atm3Cvw A 1/1 1/1 – Ray e outros, 2018 Ariane Pereira,
Jeremy N. Kay
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
pcdhgtm2Xzw múltiplo observado observado – Ing-Esteves
e outros, 2018
Joshua R. Sanes
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Pcdhaem1Jrs múltiplo observado observado – Ing-Esteves
e outros, 2018
Joshua R. Sanes
Tg(Seis3-cre)69Frty/
GcoJ
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra A ou C 51,9% (177/341
incluindo 58 Cre
descendência negativa) negativa
filhos)
100% (12/12
incluindo 4 Cre
– Martin et al.,
2012
Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
Sox10-Cre Tg(Sox10-cre)1Wdr Gria2tm3Rsp F observado 0 – Kougioumtzidou
e outros, 2017
–
(Continua na próxima página)
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202053
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
Tg(Sox10-cre)1Wdr Gjb2tm1Ugds Não especificado observado 0 ou menos que
macho
– Crispino e outros,
2011; Takada
e outros, 2014
–
B6;CBA-Tg(Sox10-cre)Slc16a1lox / lox
1Wdr/J
C ND 0 (de >35
ninhadas)
– – Thomas Philips,
Jeffrey Rothstein
Sst-IRES-Cre B6-SSTtm2.1(cre)Zjh Ai9e múltiplo – – 60
ninhadas)
0 (de >60
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR RubensteinSSTtm2.1(cre)Zjh
B6;129S4;CD1- maftm2.1Cbm H 0 (de >60
ninhadas)
0 (de >60
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR RubensteinSSTtm2.1(cre)Zjh
B6;129S4;CD1- Ai14e H 0 (de >60
ninhadas)
0 (de >60
ninhadas)
– Pai et al., 2019 Emily Ling-Lin Pai,
John LR RubensteinSSTtm2.1(cre)Zjh
Synapsin1-Cre B6.Cg-Tg(Syn1-
cre)671Jxm/J
Prkar2btm3Gsm F observado 0 ou menos
do que masculino
– Zheng e outros,
2013
–
B6.Cg-Tg(Syn1-
cre)671Jxm/J
Hif1atm1Rsjo C 63% 0 – Zheng e outros,
2013
–
B6.Cg-Tg(Syn1-
cre)671Jxm/J
Erc2tm1.1Sud/J A ND 0 (0/39) – – Jiexin Wang, Pascal
S. Kaeser
Thy1-CreER Tg(Thy1-cre/ERT2,-
EYFP)
HGfng/PyngJ
Fgf22tm1a(EUCOMM)Hmgu A, B, C, D, E, F – – 0 (0/27) – Hisashi Umemori
VAChT.Cre.Fast B6;129–Tg(SLC18A3-
cre)KMisa/0
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra A ou C 6,1% (7/115) 1,3% (1/76) – – Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
(Continua na próxima página)
54neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
Tabela 1. Contínuo
Linhagem germinativa
recombinação
Eficiência,
Parental
efeitos sexuais
Desconhecidob
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência, Cre
da mãeb
linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
Publicaçãoc
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa Contribuintesd
VGAT/VIAAT-CreSlc32a1tm2(cre)Lowl/J Rai1tm2.1Luo/J A 0 (0/103) ND – – Wei-Hsiang Huang,
Liqun Luo
VGAT/VIAAT-Cre B6.FVB-Tg(Slc32a1-cre)Dnmt3atm3.1Enl
2,1Hzo/FrkJ/
A ou F 60,9% (14/23) 0,7% (de >100 -
ratos)
– Laura Lavery,
Huda Y. Zoghbi
VGluT1-IRES2-
Cre-D
Slc17a7tm1.1(cre)Hze/J Ai34e A, F, H 33,3% (10/30) 38,5% (5/13) – – Jiexin Wang,
Pascal S. Kaeser
B6;129S- Rai1tm2.1Luo/J A 0 (0/20) ND – – Wei-Hsiang Huang,
Liqun LuoSlc17a7tm1.1(cre)Hze/J
VGluT2-IRES-creSlc17a6tm2(cre)Lowl/J Rai1tm2.1Luo/J A 0 (0/142) ND – – Wei-Hsiang Huang,
Liqun Luo
Slc17a6tm2(cre)Lowl/J Ai14e E ou G 0 (de >3 anos
Reprodução)
0 (de >3 anos
Reprodução)
– – Kevin T. Beier
VGluT3-Cre Tg(Slc17a8-icre)
1Edw/SealJ
Chat/Slc18a3tm1.2Vpra C 1,9% (5/265
Incluindo
2 Cre negativo
filhos)
1,9% (1/52) – – Marco AM Prado,
Vânia F. Prado
Tg(Slc17a8-icre)
1Edw/SealJ
Ai14e múltiplo – – - 30% (de
> 60 litros)
– Kenneth Pelkey,
Chris J McBain
VIP-Cre B6-VIPtm1(cre)Zjh/J Khdrbs3tm1.1Schei/J C 0 (0/22) ND – – Lisa Traunmu€ller,
Peter Scheiffele
B6-VIPtm1(cre)Zjh/J Khdrbs3tm1.1Schei/J E 0 (0/7) 0 (0/7) – – Lisa Traunmu€ller,
Peter Scheiffele
B6-VIPtm1(cre)Zjh/J Rpl22tm1.1Psam/J E 0 (0/31) 0 (0/31) – – Lisa Traunmu€ller,
Peter Scheiffele
B6-VIPtm1(cre)Zjh/J Ai9e múltiplo – –global resultante da atividade de Cre no zigoto unicelular e 
metade apresentou recombinação em mosaico (Lakso et al., 1996). Além disso, 
praticamente todos os loci floxados sofrem recombinação global na prole F1 
de fêmeas portadoras de Vasa-Cre (Tg(Ddx4-cre)1Dcas), mesmo na prole sem 
Cre, devido à aparente permanência da proteína Cre no zigoto (Gallardo e 
outros, 2007). No entanto, a recombinação global não foi comumente 
observada em nossos camundongos F1 combinando drivers Cre e loci alvo. 
Por exemplo, não observamos recombinação no tecido da cauda de 
camundongos F1 de cruzamentos Dlx5/6-Cre X Ai32 (0/9 com Cre materno) ou 
cruzamentos Gpr26-Cre X Ai32 (0/19 com Cre paterno), apesar da 
recombinação global em alguns Camundongos F2 (Figuras 1e2). Além disso, 
nos cruzamentos descritos emFiguras 1A e2A, a recombinação no zigoto F2 
provavelmente afetaria ambosClstn3f/falelos, mas a recombinação foi 
observada apenas para um dos dois alelos, sugerindo que a recombinação 
ocorreu em células germinativas de camundongos F1, mas não em zigotos F2. 
Da mesma forma, nas publicações discutidas aqui relatando a recombinação 
global em camundongos F2 resultante da recombinação da linhagem 
germinativa em camundongos F1, a recombinação global não foi observada 
em camundongos F1 quando analisados (Simmons et al., 2016; Weng e 
outros, 2008). Assim, a recombinação pode ocorrer em zigotos que combinam 
um driver Cre e um locus alvo, mas a prevalência parece ser 
consideravelmente menor do que em células da linha germinativa que 
carregam o driver Cre e o locus alvo.
Comparações entre Linhas Cre Driver Relacionadas Diferentes 
linhas de driver Cre com alguns elementos reguladores 
transcricionais comuns freqüentemente se comportaram de 
maneira diferente em relação à recombinação da linha 
germinativa. Talvez a comparação mais interessante seja para 
os pares de linhas de driver Cre visando elementos regulatórios 
transcricionais comuns tanto por inserção transgênica aleatória 
quanto por abordagens KI. Para um desses pares, Grik4-Cre, a 
recombinação da linhagem germinativa foi observada com 
ambas as abordagens. Para os outros dois desses pares, Pcp2/
L7-Cre e VGAT/VIAAT-Cre, a recombinação da linhagem 
germinativa foi observada para a linha transgênica, mas não 
para a linha KI. Embora não possamos descartar diferenças 
relacionadas à seletividade do local de destino (veja abaixo), 
diferenças intrínsecas entre essas linhas de driver Cre 
relacionadas parecem prováveis.Barski et al., 2000).
Diferenças na recombinação da linhagem germinativa foram observadas mesmo 
entre linhagens de driver Cre geradas usando estratégias semelhantes. Ambas as 
linhas transgênicas Nestin-Cre mostraram recombinação germinativa, mas com 
algumas diferenças nas frequências. As quatro linhas transgênicas CaMKII-Cre foram 
geradas com estratégias de direcionamento semelhantes (Dragatsis e Zeitlin, 2000; 
Minichiello et al., 1999; Rios et al., 2001; Tsien et al., 1996a). Enquanto todas as 
quatro linhagens CaMKII-Cre mostraram recombinação da linhagem germinativa 
paterna, duas não tiveram recombinação da linhagem germinativa materna, uma 
teve uma taxa baixa e a última não foi testada maternamente. Comparando as duas 
linhas geradas com exatamente
neurônio106, 37–65, 8 de abril de 202055
Tabela 2. Prevalência de recombinação de linhagem germinativa em linhagens Zebrafish Cre Driver que mostram recombinação do sistema nervoso
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência,
Cre do paib
Linhagem germinativa
Recombinação
Eficiência,
Cre da mãeb
Linha Cre
Comum
Nome
Cred Completo
Nome da linha/
Fonte
Referência/
Associado
PublicaçãocContribuintesd
Gene Alvo/
Repórter
Reprodução
Estratégiaa
y492-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre-
2A-Cerúleo)y492
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
A 4,8% (3/63) 0% (0/134) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
y547-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre)y547
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
B 82,3% (51/62) 38,1% (8/21) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
y549-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre)y549
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
B 0% (0/58) 6,7% (2/30) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
y559-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre)y559
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
B 3,4% (3/89) 2,4% (1/42) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
y546-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre-
2A-Cerúleo)y546
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
B 51,1% (23/45) 6,2% (4/64) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
y555-Cre Et(REX2-SCP1-
Ocu.Hbb2:Cre)y555
Tg(actb2:LOXP-EGFP-
LOXP-LY-TagRFPT)y272
A 3,2% (3/95) 0% (0/64) Tabor e outros,
2019
Jeniffer Sinclair,
Harold Burgess
aEstratégia de criação: A: Alvof/f; Driver Cre X Alvo+/+; B: Alvof/+; Driver Cre X Alvo+/+.
bOs números (x/y) indicam que x descendentes com recombinação da linhagem germinativa foram encontrados a partir de descendentes y com o locus alvo em dados cumulativos de 
ninhadas múltiplas.
cA publicação associada relatou a geração e caracterização das linhas de driver Cre, mas não informações detalhadas sobre a recombinação da linhagem 
germinativa.
dColaboradores fornecendo informações sobre recombinação germinativa. Entre em contato com o contato principal para obter os endereços eletrônicos dos investigadores principais.
a mesma estratégia (Minichiello et al., 1999; Rios e outros, 2001), Tg(Camk2a-
cre)93Kln mostrou expressão geral de Cre mais forte do que Tg(Camk2a-
cre)159Kln (Tolson e outros, 2010) e uma taxa mais alta de recombinação da 
linhagem germinativa paterna. Também foram observadas diferenças entre as 
duas linhagens Emx1-Cre KI e entre as duas linhagens GFAP-Cre. Em ambos os 
casos, uma linha mostrou aproximadamente igual recombinação da linhagem 
germinativa paterna e materna e a outra apenas recombinação da linhagem 
germinativa paterna. Ao comparar as duas linhagens Pvalb-Cre KI, Pvalb-IRES-
Cre não exibiu recombinação germinativa em múltiplos cruzamentos de 
diferentes laboratórios, enquanto Pvalb-2A-Cre mostrou recombinação 
germinativa através de ambos os pais. Esses achados são consistentes com a 
atividade geral de Cre mais forte em camundongos Pvalb-2A-Cre do que em 
camundongos Pvalb-IRES-Cre (Madisen e outros, 2010) e detecção da atividade 
de Cre em espermátides de camundongos Pvalb-2A-Cre, mas não Pvalb-IRES-
Cre (Kobayashi e Hensch, 2013). O uso de ferramentas como um IRES para 
atenuar a expressão de Cre pode ser benéfico para reduzir a recombinação da 
linhagem germinativa para linhas condutoras de KI, onde a expressão de Cre 
nas células germinativas é menor do que no sistema nervoso.Canção e 
Palmiter (2018)relataram sucesso na redução da recombinação da linha 
germinativa gerando uma nova linha condutora Cre com expressão Cre 
atenuada alterando os códons, removendo um sinal de localização nuclear ou 
adicionando sinais desestabilizadores.
Seletividade do Locus Alvo
A prevalência de recombinação germinativa também pode depender do locus 
alvo específico. Entre as linhagens de driver Cre cruzadas com múltiplos loci-
alvo, 81,6% (31/38) mostraram resultados consistentes para todos os loci-alvo 
em termos de ocorrência de recombinação da linhagem germinativa e viés de 
sexo parental quando conhecido. Dados quantitativos para alvos múltiplos 
estavam disponíveis para nove dessas linhagens, das quais a maioria (seis) 
mostrou diferenças específicas de alvo. Além disso
56neurônio106, 37–65, 8 de abril de 2020
para Dlx5/6-Cre como mencionado acima, Tg(Camk2a-cre)93Kln, Tg(Nes-
cre)1Kln, Tg(Pcp2-cre)2Mpin, Tg(Six3-cre)69Frty e Tg(Slc17a8-icre)1Edw 
mostraram diferenças substanciais dependentes do locus nas taxas de 
recombinação da linhagem germinativa. Por exemplo, Tg(Pcp2-cre)2Mpin 
gerou descendentes recombinantes de linhagem germinativa Cre-negativos a 
taxas de 14,3%, 69,0% ou 84,0% em diferentes loci floxados. Além disso, 15,8% 
(6/38) das linhagens de driver Cre mostraram recombinação