Aula 9 TSA

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TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE 
AOS ANTIMICROBIANOS – TSA 
OU ANTIBIOGRAMA 
 
Prof. Alan Brito 
TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE AOS 
ANTIMICROBIANOS – TSA OU 
ANTIBIOGRAMA 
PROF. DRA. FABÍOLA KEGELE 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
9 Histórico
ƒ 1929Ö Penicilina Ö Alexandre Fleming;
ƒ 1929 até hoje ~ 250 antimicrobianos comercializados
Surgimento da resistências aos antimicrobianos
Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
9 Essência da quimioterapia antimicrobianaÖ Toxicidade seletiva;
9 AntibióticosÖ Interferem com diferentes atividades da célula bacteriana;
9 Ação dos agentes antimicrobianos Ö Morte da célula bacteriana ou inibição do seu
crescimento;
9Morte da célula bacterianaÖ Agentes bactericidas;
9 Inibição do crescimento bacterianoÖ Agentes bacteriostáticos;
9 Tanto os agentes bactericidas quanto os agentes bacteriostáticos são extremamente
eficientes;
9 Em se tratando de pacientes com imunodeficiências Ö Preferência pelos bactericidas.
Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
9 Principais mecanismos de ação dos antimicrobianos
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2
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4
Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos 
Características gerais 
Ø  Sinônimos è TSA ou antibiograma; 
Ø  Notável importância clínica e terapêutica; 
Ø  Realizados para detecção de resistência de bactérias isoladas de 
amostras clínicas representativas de processo infeccioso, nos quais 
a sensibilidade aos antimicrobianos não é previsível; 
Ø  Resultados è Influenciados por diferentes fatores havendo a 
necessidade de padronizações extremamente rígidas; 
Ø  Principais métodos è Disco-difusão, microdiluição em caldo, 
macrodiluição em caldo, difusão em ágar e E-test; 
Características gerais 
Ø  Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
susceptibilidade aos antimicrobianos: 
ü  pH do meio de cultura è Entre 7,2 e 7,4; 
ü  Concentração de cátions è Principalmente cálcio e magnésio; 
ü  Padronização do inóculo è Equivalente à escala 0,5MF (MacFarland 
è 1,5x108 UFC/mL ); 
ü  Espessura do meio de cultura; 
ü  Temperatura de incubação; 
ü  Atmosfera de incubação; 
ü  Meio padrão è Müeller-Hinton. 
 
‰ Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
susceptibilidade aos antimicrobianos: 
ƒ pH do meio de cultura Ö Entre 7,2 e 7,4; 
ƒ Concentração de cátions Ö Principalmente cálcio e magnésio; 
ƒ Padronização do inóculo Ö Equivalente à escala 0,5MF; 
ƒ Espessura do meio de cultura; 
ƒ Temperatura de incubação; 
ƒ Atmosfera de incubação; 
ƒ Meio padrão Ö Müeller-Hinton. 
Características Gerais 
Características gerais 
Ø  Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
susceptibilidade aos antimicrobianos: 
‰ Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
susceptibilidade aos antimicrobianos: 
20mL de meio 4mm de espessura 
Meio de Müeller-Hinton 
Antibiótico 
Halo de inibição 
Características Gerais 
Características gerais 
Ø  Seleção dos antimicrobianos: 
ü  O laboratório tem a responsabilidade de testar e reportar os 
antimicrobianos mais apropriados para o microrganismo isolado e o 
sítio de infecção; 
ü  Os antimicrobianos testados e reportados pelo laboratório devem 
ser adequados para o tipo de hospital ou instituição; 
ü  As orientações sobre os antimicrobianos mais adequados para 
cada grupo de microrganismos são publicadas e atualizadas 
anualmente nos Manuais de Interpretação, como CLSI ou EUCAST 
 
Características gerais 
Ø  Controle de qualidade: 
ü  Monitorar a precisão e acurácia dos procedimentos aplicados 
nos testes, verificar a qualidade dos materiais empregados e o 
desempenho do técnico que conduz o teste e finaliza o exame; 
ü  Cepas-padrões (ATCC – American Type Culture Collection) 
 
Características Gerais 
‰ Controle de qualidade 
9 Monitorar a precisão e acurácia dos procedimentos aplicados 
nos testes, verificar a qualidade dos materiais empregados e o 
desempenho do técnico que conduz o teste e finaliza o exame; 
9 Cepas-padrões (ATCC – American Type Culture Collection) 
- Escherichia coli ATCC 25922 - Haemophilus influenzae ATCC 49766 
- Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 - Enterococcus faecalis ATCC 51299 
- Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Escherichia coli ATCC 35218 
- Staphylococcus aureus ATCC 25293 - Haemophilus influenzae ATCC 49247 
- Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - Enterococcus faecalis ATCC 29212 
Procedimento Laboratorial 
1) Método de Disco Difusão ou Método de Kirby-Bauer 
v Método qualitativo 
 
Procedimento Laboratorial 
1) Método de Disco Difusão ou Método de Kirby-Bauer 
ƒ Método qualitativo 
Cultura pura Escala 0,5MF 
Com auxílio 
de swab 
Aplicação 
dos discos 
Crescimento 
confluente 
Incubação 
Leitura e 
interpretação / CLSI 
ou EUCAST 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração 
Inibitória Mínima – CIM) 
v Macrodiluição em caldo 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração Inibitória 
Mínima – CIM) 
ƒ Macrodiluição em caldo 
16,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 C 8,0 
Antimicrobiano 
+ Suspensão bacteriana 
Incubação ideal e interpretação dos resultados 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração 
Inibitória Mínima – CIM) 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração Inibitória 
Mínima – CIM) 
16,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 C 8,0 
Antimicrobiano 
Crescimento bacteriano 
Ausência de crescimento 
Interpretação dos resultados 
- “Break-point” Ö Entre os tubos 4 e 5 
(concentrações de 2,0 e 1,0); 
- CMI Ö 2,0mg/dL 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração 
Inibitória Mínima – CIM) 
v Microdiluição em caldo 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração Inibitória 
Mínima – CIM) 
ƒ Microdiluição em caldo 
Cultura pura Escala 0,5MF 
Leitura e interpretação / 
CLSI ou EUCAST 
Diluição 1/10 
Com auxílio de 
um inoculador 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração 
Inibitória Mínima – CIM) 
v Teste Epsilométrico ou E-Test ou Teste E 
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração Inibitória 
Mínima – CIM) 
ƒ Teste Epsilométrico ou E-Test ou Teste E 
Cultura pura Escala 0,5MF 
Com auxílio 
de swab 
Aplicação 
das fitas 
Crescimento 
confluente 
Incubação 
Leitura e interpretação / 
CLSI ou EUCAST 
Interpretação e relato dos resultados 
1- Sensível ! em geral significa que a infecção devida ao 
microrganismo estudado pode ser adequadamente tratada com a 
dosagem habitual do antimicrobiano testado e recomendado para este 
tipo de infecção. 
2- Intermediário ! significa que o microrganismo pode ser inibido 
por concentrações atingíveis de certas drogas se doses maiores 
puderem ser administradas ou se a infecção ocorre em local onde o 
antimicrobiano é fisiologicamente concetrado (trato urinário, por ex.) 
3- Resistente ! quando o isolado não é inibido pela concetração do 
antimicrobiano obtida no local da infecção ou quando o microrganismo 
patogênico apresenta mecanismos específicos de resistência. 
Resultados que não devem ser liberados 
An#microbianos	
   Microrganismos	
  
Cefalosporinas	
  de	
  1a	
  e	
  2a	
  gerações	
  e	
  
aminoglicosídeos	
  
Salmonella	
  e	
  Shigella	
  isoladas	
  de	
  fezes	
  
Betalactâmicos	
  e	
  carbapenens	
   Staphylococcus	
  spp.	
  resistentesà	
  
oxacilina	
  
Cefalosporinas,	
  aminoglicosídeos,	
  
clindamicina	
  e	
  sulfametoxazol/
trimetoprima	
  
Enterococcus	
  spp.	
  
Cefalosporinas	
   Listeria	
  spp	
  
Detecção de fenótipos de resistência 
1) Pesquisa fenotípica de Staphylococcus aureus resistentes a 
meticilina 
•  Ágar Mueller Hinton 
•  Disco de 30 µg de cefoxitina 
•  Interpretação: ≤ 21mm = Resistente a meticilina 
Detecção de fenótipos de resistência 
2) Teste D para detecção de resistência induzida a clindamicina 
(lincosaminas) 
•  Ágar Mueller Hinton 
•  Disco de 15 µg de eritromicina e 2 µg de clindamicina (15 a 20 
mm) 
•  Caracterização dos fenótipos de resistência: 
o  Fenótipo M è resistência apenas aos macrolídeos 
o  Fenótipo MLSbc ! resistência constitutiva a macrolídeos e 
lincosaminas 
o  Fenótip MLSbi ! resistência constitutiva a macrolídeos e 
induzida a lincosaminas 
Detecção de fenótipos de resistência Detecção de fenótipos de resistência 
ERI 
CLI 
ERI CLI 
Fenótipo iMLSb Fenótipo cMLSb 
REPORTAR COMO RESISTENTE A CLINDAMICINA