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Gabrie lla D ias HEMATOLOGIA (Hematopoiese, coleta e manuseio de amostras para o hemograma) HEMOGRAMA Definição - Análises quantitativas e qualitativas dos elementos celulares do sangue - Optamos por evitar o termo “células sanguíneas” devido a presença das plaquetas. As plaquetas não se enquadram na categoria de células verdadeiras, mas sim como fragmentos do citoplasma liberados por megacariócitos, células gigantes encontradas na medula óssea. Indicações • As células sanguíneas são vitais, precisam estar na quantidade certa e podem ser afetadas diretamente ou indiretamente. • Procedimento de triagem para avaliação da saúde geral. Exemplo: dois pacientes com a mesma doença podem apresentar diferentes níveis de gravidade, influenciados pela resposta imunológica de cada um e pelo estado das células sanguíneas individuais. • As alterações do hemograma são 99% das vezes inespecíficas • O hemograma não é um exame de diagnóstico, trata-se apenas de uma avaliação do estado do paciente Exceções: • Blastos – Leucemia (?) → Mielograma - Blastos são células imaturas e no sangue encontramos apenas células maduras - A presença de blastos no sangue pode estar relacionada a Leucemia, é necessário solicitar um Mielograma (exame citológico da medula óssea vermelha) - Exame feito por patologista treinado em mielograma • Hemoparasitas Exemplo: babesias em hemácias (babesiose) Elementos celulares • Glóbulos Vermelhos (eritrócitos/ hemácias) - Apenas as hemácias jovens possuem núcleo - Atuam no transporte de oxigênio • Plaquetas (elementos coagulantes) • Leucócitos (células nucleares) - Possui função tecidual, estão no sangue apenas de passagem Diapedese: passagem dos leucócitos para os tecidos através das paredes dos capilares • Neutrófilos (neutrófilos maduros apresentam o núcleo segmentado, enquanto os neutrófilos mais jovens apresentam o núcleo na forma de bastão) • Linfócitos (estão associados ao processo imune; é o menor leucócito circulante) • Monócito (maior leucócito circulante; dão origem aos macrófagos residuais) • Eosinófilos (dois lóbulos de núcleos; afinidade pela eosina) • Basófilos (afinidade pelos corantes básicos) 1° passo Identificar de quem é o exame (nome, espécie, raça e idade) 2°passo Analisar os elementos e seus respectivos resultados 3° passo Comparar com o valor de referência DADOS QUANTITATIVOS Hemácias (x10³/µL) → 5 milhões e 400 mil hemácias por microlitro de sangue. Hemoglobina (g/dL) →13,1 Hematócrito (%) → 40% • Porcentagem do sangue ocupada por células vermelhas VCM (fL) → 74,1 fentolitros • Volume corpuscular médio • Tamanho médio das hemácias HCM (pg) → 24,3 picogramas • Hemoglobina corpuscular média: identifica a concentração total de hemoglobina no sangue, através da análise de tamanho e da coloração das hemácias CHCM (g/dL) → 32,8 • Identifica a quantidade média de hemoglobina dentro das hemácias Global de Leucócitos → 12.325/mm³ • Total de Leucócitos Mielócito (células jovens) - nem sempre aparece no sangue Metamielócito (células jovens) - nem sempre aparece no sangue Bastonetes (%) → 123 • É avaliado a partir do número total, número de soluto Segmentados → 8.751 Linfócitos → 986 Monócitos → 740 Eosinófilos → 1.726 • Acima do valor de referência • Eosinofilia Basófilos → 0 Plaquetas → 518.000 A apresentação do hemograma pode variar entre laboratórios; para identificar os dados quantitativos, é necessário primeiro localizar as informações relacionadas às hemácias, células vermelhas. Índices hematimétricos/ índices eritrocitários: são parâmetros utilizados na análise de um hemograma para avaliar o tamanho e a coloração das hemácias presentes no sangue A seção que apresenta os dados dos leucócitos inclui a contagem total de leucócitos (calculada automaticamente pela máquina) e a contagem diferencial (envolve a contagem individual de cada tipo de leucócito e não é realizada pela máquina). DADOS QUALITATIVOS → Normocitose e normocromia (células de tamanho e coloração normais). Leucócitos sem alterações morfológicas. Contagem de plaquetas confirmada em lâmina → A única alteração presente no exame foi a eosinofilia • Os eosinófilos podem estar elevados em casos de alergias, algumas neoplasias e parasitoses, sendo esta última a causa mais comum de aumento dos eosinófilos. → Os eosinófilos são indicativos da resposta imunológica à presença de helmintos intestinais → Com base no exame realizado, é recomendado que este paciente faça um exame de fezes para confirmar a presença de parasitas e identificar o tipo específico, se presente. → A disposição dos dados presente no hemograma podem mudar de acordo com cada laboratório • Anisocitose com acentuada microcitose. • Anisocromia Gabrie lla D ias • Leucócitos sem alterações morfológicas • Exame Revisto e confirmado a microscopia óptica COLETA Para realizar a análise abrangente das células sanguíneas, tanto em termos quantitativos quanto qualitativos , é fundamental utilizar o sangue total, isto é, o sangue líquido sem coagulação. - Para evitar a coagulação da amostra precisamos utilizar anticoagulantes. → O anticoagulante já se encontra presente nos tubos O sangue é composto por uma parte líquida na qual todos os componentes estão diluídos, enquanto os elementos celulares estão em suspensão. Se o sangue com anticoagulante ficar em repouso, as células em suspensão tendem a se separar de acordo com o seu peso molecular: as hemácias, por serem mais densas e menores, se acumulam na parte inferior, os leucócitos formam uma camada intermediária (botão leucocitário) e as plaquetas permanecem na superfície, por serem mais leves (essa camada não é visível a olho nu). A camada líquida amarela formada na superfície contém todos os componentes do sangue, exceto as células que se sedimentaram na parte inferior do tubo. → Líquido obtido a partir de um tubo que contém anticoagulante Apenas a presença do soro no tubo pode promover a coagulação do sangue. No coágulo formado, é possível identificar hemácias, leucócitos, plaquetas e fibrina. O fibrinogênio, que está diluído no plasma, é convertido em fibrina durante a coagulação e é responsável por manter o coágulo unido. Hematócrito: é a percentagem do volume total da amostra ocupado por células vermelhas Sempre que estivermos trabalhando com sangue total, é importante homogeneizar a amostra para prevenir a sedimentação das células na parte inferior do tubo. - Devemos colocar a amostra em uma microcentrífuga - A contadora automatizada de células não mede diretamente o hematócrito; ela calcula o hematócrito com base no tamanho das plaquetas (é uma estimativa). Plasma opaco = presença de muitos lípides Plasma avermelhado = ruptura de hemácias (hemólise) Durante a coleta de sangue, é essencial ter cuidado para evitar hemólise, pois as células sanguíneas são extremamente sensíveis e podem se romper facilmente. - Com a hemólise, a contagem de células acaba sendo menor do que o valor real Lugares para a coleta: Pequenos animais → Coletar com a seringa acoplada agulha - Veia cefálica (venopulsão) - Veia safena - Veia jugular Posicionamento do garrote → venopulsão → soltar o garrote → puxar o êmbolo da seringa lentamente → retirar a agulha → depositar o sangue lentamente pela parede do tubo de coleta → homogeneização da amostra com o anticoagulante A quantidade de anticoagulante varia dependendo do tipo de tubo utilizado Equinos e pequenos ruminantes - Veia jugular Bovinos - Veia jugular - Veia caudal - Veia mamária EDTA: anticoagulante de escolha para realizar o hemograma - Atua no sequestro de Ca → A ausência de Ca impede a coagulação do sangue. - Não afeta as características morfológicas das células Heparina: anticoagulante natural - Também pode ser utilizado para a hematologia, principalmente em espécies exóticas. - Anticoagulantemais caro - A duração da amostra é de 4 a 6 horas no máximo Citrato de Sódio: utilizado na realização de testes da coagulação (plasma citratado). Fluoreto + EDTA: material de escolha para realizar a dosagem de glicose - O fluoreto impede que as hemácias na amostra de sangue consumam glicose através da glicólise para a produção de ATP CONSEQUÊNCIAS DOS ERROS NA COLETA • Hemólise → Ar contagem de células acaba sendo menor do que o valor real → Apontado em alguns dados hematimétricos • Coagulação do sangue → Ocorre quando a amostra não é homogeneizada adequadamente → A coagulação durante a coleta é indicativo de alguma patologia da cascata de coagulação • Alteração dos componentes sanguíneos - lipemia HEMATOPOIESE Processo de produção de células sanguíneas e plaquetas Eritropoiese - produção de eritrócitos Leucopoiese - produção de leucócitos Trombopoiese - produção de plaquetas Processo que ocorre na medula óssea vermelha no tecido mielóide. Tecido Mielóide: tecido conjuntivo de propriedades especiais, como a produção de células sanguíneas. - Localizado nos ossos esponjosos - É o tecido mais produtivo do corpo pois está continuamente produzindo células para manter os elementos sanguíneos em números adequados → São células especializadas e extremamente maduras com características únicas. Gabrie lla D ias Histologia do osso esponjoso - Presença de trabéculas ósseas - Células em diferentes estados de amadurecimento - Para realizar o exame do tecido ósseo é necessário realizar um mielograma (citologia da medula óssea) → Realizado por um patologista especialista em mielograma O entendimento do processo geral da hematopoiese é fundamental para a interpretação do hemograma HEMATOPOIESE → Processo complexo e muito ativo Linhagem vermelha: produção de hemácias Linhagem plaquetária: produção de plaquetas Linhagem branca: produção de leucócitos Todos são formados a partir de um precursor comum A maioria das células produzidas possuem uma vida útil curta • Após passarem pela circulação sanguínea, os neutrófilos migram para os tecidos. - A ação dos glóbulos brancos ocorre nos tecido • A quantidade de eosinófilos é sempre mantida pois, à medida que eles saem dos tecidos, novos eosinófilos entram na corrente sanguínea • Os linfócitos são as células com maior longevidade no organismo, sendo os únicos leucócitos que saem da corrente sanguínea e retornam a ela. As células sanguíneas são constantemente perdidas e renovadas para manter os níveis adequados no sangue. Hematopoiese pré-natal: fígado, baço, timo e medula óssea vermelha Hematopoiese pós-natal: sítio primário de produção de células sanguíneas (medula óssea vermelha) • Eventualmente podemos encontrar alguns casos raros de hematopoiese extramedular (situações extremamente específicas). Após o nascimento, o sítio de produção de células sanguíneas é a medula vermelha • A medula óssea amarela, parte interna do osso, é preenchida por tecido adiposo A estimulação da produção de células pela medula óssea ocorre por meio de diversos mediadores químicos específicos. Cada tipo de célula sanguínea requer um estimulante específico: um para as células vermelhas, outro para as plaquetas e vários para as células inflamatórias, variando conforme o tipo de célula. • De maneira geral, essas substâncias estimuladoras são conhecidas como CITOCINAS (ou interleucinas). As citocinas são mediadores químicos secretados no local de inflamação que, ao entrarem na corrente sanguínea e alcançarem a medula óssea, estimulam a produção de tipos específicos de células. • A produção de células não ocorre de maneira aleatória; ela é direcionada conforme a necessidade pelos fatores estimulantes específicos de cada linhagem celular • Independente do tipo celular, todos derivam de uma única célula: a célula tronco hematopoiética Precursor comum: HSCs (Hematopoietic Stem Cell) → Hemocitoblasto → Célula tronco pluripotente → A partir de uma célula tronco originam-se duas células filhas. Uma dessas células compromete-se a se diferenciar em outro tipo celular, enquanto a outra substitui a célula-mãe. Logo, ao mesmo tempo que temos a produção a partir de uma célula tronco, temos também a sua população sendo mantida. → Uma célula filha mantém o potencial pluripotente da célula original, enquanto a outra segue o caminho da especialização. As células tronco do feto são totipotentes, o que significa que têm a capacidade de se diferenciar em todos os tipos de células do organismo, diferentemente das células pluripotentes, que têm a capacidade de se diferenciar apenas em células sanguíneas. O hemocitoblasto da origem as células progenitoras: Mieloide (MSC) e Linfóide (LSC) Precursor linfóide: produção de linfócitos Precursor mielóide: tem a capacidade de originar todos os outros elementos, exceto os linfócitos Diferenciação subsequente: comprometimento com os tipos celulares específicos → UFCs: Unidades Formadoras de Colônias → Quando uma célula progenitora não dá origem a mais nenhuma outra célula e produz apenas células vermelhas, monócitos ou plaquetas. • No hemograma não é possível identificar o tipo de linfócito • O que irá definir a produção de monócitos ou eritrócitos através das células mielóides são os mediadores químicos. - O excesso de monócitos e neutrófilos em um hemograma pode estar relacionado à estimulação das células precursoras de granulócitos e monócitos. • A ERITROPOETINA é a substância responsável pela estimulação da produção de hemácias → É produzida pelos rins → Estimula apenas células vermelhas • A TROMBOPOETINA é a substância responsável por estimular as células plaquetárias Elemento Celular Vida útil no sangue Neutrófilo 4 a 6 horas Eosinófilo 30 minutos Basófilo 4 a 6 horas Monócito 2 a 3 dias Linfócito Meses ou anos Eritrócito 2 a 5 meses Plaquetas 4 a 6 dias Gabrie lla D ias ERITRÓCITOS/ HEMÁCIAS (glóbulos vermelhos) - São células que possuem 30% citoplasma repleto de hemoglobinas - São células que não apresentam organelas e núcleos, o que justifica sua curta vida útil. - A hemoglobina é responsável pelo transporte de O2. - A Hematopoiese acontecerá na medula óssea - À medida que as células envelhecem, a membrana torna-se mais rígida. Ao passarem pelo baço (órgão responsável pela hemocaterese), as células mais velhas são removidas por fagocitose. Hemocaterese: processo no qual as hemácias envelhecidas são retiradas e destruídas por fagocitose → Acontecerá a lise das hemácias e reaproveitamento das proteínas e ferro. → Apenas o grupo heme será eliminado O número de células vermelhas presentes no sangue é um equilíbrio resultante da produção de novas células e remoção das mais velhas. ERITROPOIESE 1. RUBROBLASTOS: unidade formadora de colônia da série de eritrócitos (célula mais jovem) - Célula anormal do sangue (blástica) 2. PRÓ-RUBRICITOS - Célula jovem - Células ocasionais do sangue (imaturas) 3. RUBRÍCITOS → Basofílicos - possui afinidade pelo corante roxo (básico) → Policromáticos - possui o citoplasma mais claro - transição entre o citoplasma roxo e vermelho - Células ocasionais do sangue (imaturas) → presença de hemácias nucleadas 4. METARRUBRÍCITOS: apresentam um núcleo pequeno - É uma célula que já produziu os 30% de hemoglobina - Perda de núcleo para originar os reticulócitos - Células ocasionais do sangue (imaturas) → presença de hemácias nucleadas 5. RETICULÓCITOS - Não é uma hemácia completamente madura - Apresenta resíduos de organelas (retículo endoplasmático) - Perdem as organelas restantes para originar a hemácia madura - Células normais do sangue 6. HEMÁCIAS MADURAS - Células normais do sangue • Do estágio 1 ao estágio 3, além da produção de hemoglobina, as células também passam por mitose • Do estágio 4 ao estágio 6 ocorreo processo de maturação celular (denucleação) → É um processo estimulado pela eritropoetina. → A eritropoetina é um hormônio produzido pelos rins • No hemograma convencional, o termo “RETICULÓCITO”não é utilizado . Esse termo só é identificado com o corante Novo Azul de Metileno, o qual destaca resíduos de organelas presentes nas células • Para realizar a contagem de reticulócitos é necessário utilizar outro corante - A contagem de reticulócitos é realizada para a classificação da anemia e sua causa. HEMATOLOGIA(Hematopoiese, coleta e manuseio de amostras para o hemograma)