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Público INTRODUÇÃO À BIOLOGIA CELULAR E DO DESENVOLVIMENTO. Roteiro Aula Prática 2 Público ROTEIRO DE AULA PRÁTICA NOME DA DISCIPLINA: INTRODUÇÃO À BIOLOGIA CELULAR E DO DESENVOLVIMENTO. Unidade: U1_Introdução à Biologia Celular Aula: A1_ Componentes e propriedades celulares OBJETIVOS Definição dos objetivos da aula prática: Dominar as normas de biossegurança e a operação do microscópio óptico, realizando ajustes adequados de foco, iluminação e manuseio do equipamento. Compreender os princípios da microscopia e interpretar a formação da imagem, considerando fatores como aumento, nitidez, campo de visão e inversão. Executar o preparo de lâminas biológicas e diferenciar células eucariontes e procariontes com base em critérios estruturais e morfológicos. Analisar criticamente resultados microscópicos, identificar falhas técnicas e tomar decisões fundamentadas em evidências no contexto laboratorial. Cronograma da aula prática: Atividade a ser realizada Tempo Procedimento nº 1 – Storytelling: A liberação do laboratório 00:00 – 00:25 Procedimento nº 2 – Aprendizagem Baseada em Investigação (Inquiry-Based Learning): O comportamento da imagem 00:25 – 01:00 Procedimento nº3 - Aprendizagem Baseada em Problemas: Missão Diagnóstica – Quem está na lâmina? 01:00 – 02:00 Procedimento nº4 – Jigsaw: Auditoria Laboratorial: Identificando e corrigindo falhas microscópicas. 02:00 – 03:00 SOLUÇÃO DIGITAL: NSA. INFRAESTRUTURA Instalações: 3 Público Laboratório Multidisciplinar Materiais: Lista de Materiais: Nome do Material Unidade de medida* Qtd. alunos Material do Aluno? Por lab? Qtd. mínima Microscópio óptico Unidade 1 para cada 3 alunos Não Sim 1 Lâmina Unidade 3 para cada 3 alunos Não Sim 3 Lamínula Unidade 3 para cada 3 alunos Não Sim 3 Espátula de madeira ou palito de sorvete Unidade 1 para cada 3 alunos Não Sim 1 Azul de metileno frasco 30 ML Unidade 1 por laboratório Não Sim 1 Conta-gotas ou pipeta Pasteur descartável Unidade 1 para cada 3 alunos Não Sim 1 Pinça de madeira Unidade 1 para cada 3 alunos Não Sim 1 Pinça anatômica Unidade 2 para cada 3 alunos Não Sim 2 Papel absorvente Unidade 4 folhas para cada 3 alunos Não Sim 4 Bico de bunsen Unidade 1 para cada 3 alunos Não Sim 1 Óleo de imersão Unidade 10 ml para cada 3 aluno Não Sim 10 mL Solução álcool- éter (1:1) Unidade 10 ml para da 3 alunos Não Sim 10 mL Saco lixo 30l branco leitoso pa Unidade 1 por laboratório Não sim 1 Iogurte natural Unidade 10 ml para da 3 alunos Não Sim 10 mL Solução de Limpeza L 1 por laboratório Não Sim 1 4 Público PROCEDIMENTOS PRÁTICOS E APLICAÇÕES Procedimento nº 1 Storytelling: A liberação do laboratório Tempo Esperado: 25 minutos Vídeo do Professor: https://mdstrm.com/embed/69d658442e85f6a13b68ca08 Atividade proposta Você faz parte de uma equipe responsável pela liberação de um laboratório de análises celulares. Antes de iniciar qualquer investigação microscópica, será necessário garantir que o ambiente esteja seguro, organizado e tecnicamente adequado, simulando critérios reais adotados em laboratórios clínicos e de pesquisa. Para que o laboratório seja liberado, a equipe deverá demonstrar domínio em três aspectos fundamentais: • Biossegurança • Reconhecimento do microscópio • Preparação e ajuste do equipamento A análise só poderá começar após a validação completa dessas etapas. Orientações iniciais: Organize-se em grupo de 3 alunos para realização do cenário proposto (liberação do laboratório de análises celulares) e inicie a preparação do ambiente, assegurando que todos os materiais necessários estejam disponíveis e organizados. Cada grupo deverá assumir o papel de uma equipe responsável pela liberação do laboratório, sendo necessário cumprir rigorosamente os critérios de biossegurança e preparo técnico antes de qualquer atividade experimental. Desafio da aula: Como garantir que a análise microscópica seja confiável desde o primeiro contato com o material biológico? Indicações de referências bibliográficas: Antes da aula prática, recomenda-se a leitura do Capítulo 1 – Microscopia de luz, que apresenta os fundamentos da microscopia e da organização celular, com ênfase no uso do microscópio óptico, seus componentes e princípios de funcionamento. https://mdstrm.com/embed/69d658442e85f6a13b68ca08 5 Público MELO, Rossana C. N. Células & microscopia: princípios e práticas. 2. ed. Barueri: Manole, 2018. E-book. ISBN 9788578683023. Disponível em: https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788578683023/ Procedimentos para a realização da atividade 1. Preparação inicial- Biossegurança (25 minutos) 1. Realize a paramentação completa com os EPIs obrigatórios, garantindo a integridade da “barreira de proteção” da dupla antes do início da investigação. ✓ Jaleco abotoado ✓ Calçados fechados ✓ Calça comprida ✓ Cabelos presos 2. Posicione o microscópio na bancada de forma estável, conecte à fonte de energia e realize os ajustes iniciais de iluminação e condensador, preparando o equipamento para análise. 3. Execute a higienização das lentes das objetivas com papel macio embebido em álcool 96%, assegurando condições adequadas para a visualização das estruturas que serão investigadas. 4. Posicione a lâmina de “Pele HE” na platina, iniciando a análise pela objetiva de menor aumento (4x), utilizando o parafuso macrométrico. Progrida gradualmente para as objetivas de 10x e 40x, refinando o foco com o micrométrico. 5. Posicione o revólver entre as objetivas de 40x e 100x, aplique uma pequena gota de óleo de imersão sobre a lâmina e acione a objetiva de 100x, realizando ajustes finos exclusivamente com o micrométrico. 6. Durante a observação, acompanhe as variações na nitidez da imagem conforme os ajustes são realizados, reconhecendo como a qualidade da preparação da lâmina e do equipamento influencia na obtenção das evidências microscópicas. 7. Realize o revezamento entre os integrantes da dupla, garantindo que ambos executem o ajuste completo do microscópio, desde o foco inicial até a obtenção de uma imagem nítida nas diferentes ampliações. 8. Ao finalizar a análise inicial, abaixe a platina, retorne a uma objetiva de menor aumento e retire a lâmina com cuidado. 9. Remova o excesso de óleo da lâmina e da objetiva com papel macio, preservando o equipamento para as próximas etapas da investigação. 10. Reduza gradualmente a intensidade da iluminação antes de desligar o microscópio. Durante esta etapa inicial, o trio estabelece as condições necessárias para a análise microscópica, a precisão na manipulação do equipamento representa o primeiro contato com as evidências que serão aprofundadas ao longo da práticas desta aula. https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788578683023/ 6 Público Figura 1 – Partes do microscópio óptico Fonte: Pires, Almeida e Coelho (2014). Checklist: ✓ Realizou a paramentação completa com EPIs. ✓ Organizou a bancada de forma adequada para análise. ✓ Higienizou as lentes do microscópio antes do uso. ✓ Alcançou o foco nítido nas objetivas de forma independente. ✓ Organizou a bancada seguindo as normas de biossegurança. Procedimento nº 2 Aprendizagem Baseada em Investigação (Inquiry-Based Learning): O comportamento da imagem Tempo Esperado: 35 minutos Vídeo do Professor: https://mdstrm.com/embed/69d658504add598e76375968 https://mdstrm.com/embed/69d658504add598e76375968 7 Público Atividade proposta: Dando continuidadeà liberação do laboratório e ao nivelamento técnico realizado na etapa anterior, sua equipe avançará para uma nova fase da investigação, na qual o microscópio óptico será utilizado como ferramenta de análise. Nesta etapa, os estudantes irão explorar o comportamento da imagem ao microscópio, buscando compreender como fatores como orientação, aumento e qualidade da visualização influenciam a interpretação das amostras. A atividade será conduzida com base na investigação científica, permitindo que os estudantes reconstruam o fenômeno observado a partir da experimentação direta. Ao manipular uma amostra simples (letra), será possível reconhecer padrões de inversão de imagem, variações no campo de visão e alterações na nitidez conforme o aumento utilizado. A exploração experimental permitirá desenvolver não apenas habilidades técnicas, mas também o raciocínio científico, por meio da observação, elaboração de hipóteses, teste e validação dos resultados. Indicações de referências bibliográficas: Antes da aula prática, recomenda-se a leitura do Capítulo 3 – Preparação de amostras, que aborda os princípios e técnicas fundamentais para o preparo adequado de lâminas, essenciais para a qualidade da observação ao microscópio óptico. MELO, Rossana C. N. Células & microscopia: princípios e práticas. 2. ed. Barueri: Manole, 2018. E-book. ISBN 9788578683023. Disponível em: https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788578683023/ Procedimentos para a realização da atividade: Antes de iniciar a atividade, organize o grupo e o espaço de trabalho: • Organize-se em grupos de até 3 estudantes • Cada grupo deverá utilizar 1 microscópio • Todos os integrantes devem participar das etapas A atividade será conduzida em três momentos: • Levantamento de hipóteses (antes da observação): 10 minutos • Execução experimental (uso do microscópio e preparo da lâmina): 15 minutos • Registro e validação dos resultados: 10 minutos Etapa 1 – Levantamento de hipóteses (5 minutos) https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788578683023/ 8 Público Nesta etapa, os estudantes deverão levantar hipóteses iniciais sobre o comportamento da imagem ao microscópio, com base na observação prévia da amostra. Procedimentos Em grupo, os estudantes deverão: • Selecionar uma folha de jornal ou revista • Observar atentamente as letras impressas • Escolher uma única letra para análise (ex.: “e”, “a”, “f”), priorizando: o letras minúsculas o caracteres nítidos e completos Importante: Todos os integrantes do grupo devem reconhecer claramente a letra escolhida, garantindo referência comum para comparação posterior com a imagem microscópica. Representação da hipótese (5 minutos) O grupo deverá elaborar um desenho esquemático representando como acredita que a letra será visualizada ao microscópio. O desenho deve evidenciar: • posição/orientação da imagem • proporção em relação ao tamanho original • possíveis alterações percebidas Etapa 2 – Procedimentos experimentais (15 minutos) Preparação do microscópio (5 minutos) Considerando que o microscópio já foi previamente reconhecido e ajustado na etapa anterior, os estudantes deverão realizar a retomada e adequação do equipamento, assegurando condições ideais para a observação da amostra. Procedimentos: 1. Verificar o posicionamento do microscópio na bancada, garantindo estabilidade para a observação. 2. Conferir o funcionamento da fonte de luz e ajustar a intensidade da iluminação conforme necessário. 3. Ajustar o condensador, de modo a otimizar a distribuição da luz sobre a amostra. 4. Verificar as condições das lentes das objetivas e, se necessário, realizar a higienização com material apropriado. 9 Público Preparo da lâmina (letras) (5 minutos) Após a preparação do microscópio, os estudantes deverão realizar o preparo da lâmina, garantindo condições adequadas para a observação da amostra. Procedimentos 1. Recortar uma pequena letra de jornal ou revista, preferencialmente nítida e bem definida. 2. Depositar uma gota de água no centro da lâmina. 3. Posicionar cuidadosamente a letra sobre a gota, mantendo-a na orientação original de leitura. 4. Segurar a lamínula em um ângulo aproximado de 45°, aproximando-a lentamente da lâmina. 5. Abaixar a lamínula de forma gradual sobre a amostra, evitando a formação de bolhas de ar. 6. Remover o excesso de líquido com papel absorvente, se necessário. Observação microscópica (5 minutos) Após o preparo da lâmina, os estudantes deverão realizar a observação microscópica, analisando o comportamento da imagem em diferentes aumentos e condições de visualização. Procedimentos 1. Posicionar a lâmina sobre a platina e fixá-la adequadamente com as presilhas. 2. Iniciar a observação utilizando a objetiva de menor aumento (4x). 3. Ajustar o foco inicial com o parafuso macrométrico. 4. Centralizar a imagem no campo visual. 5. Observar a orientação da imagem, identificando possíveis inversões. 6. Progredir gradualmente para as objetivas de 10x e 40x. 7. Realizar o ajuste fino utilizando exclusivamente o parafuso micrométrico. 8. Durante a focalização, observar as alterações na nitidez da imagem. 9. Analisar como a espessura da amostra influencia a passagem da luz e a qualidade da visualização Etapa 3 – Registro, análise e validação dos resultados (5 minutos) Nesta etapa, os estudantes deverão sistematizar os resultados obtidos durante a observação microscópica, relacionando-os às hipóteses iniciais e interpretando o comportamento da imagem. 10 Público Registro dos resultados O grupo deverá: • Registrar a imagem observada por meio de um desenho representativo, fiel ao que foi visualizado no microscópio • Comparar a observação experimental com a hipótese inicial elaborada • Identificar e descrever as principais diferenças entre o que foi previsto e o que foi observado Discussão e interpretação dos resultados (5 minutos) O grupo deverá ainda: • Analisar se a hipótese inicial foi confirmada ou refutada, justificando sua resposta • Explicar o comportamento da imagem observada, considerando: o Orientação da imagem (inversão/posição) o Alterações de tamanho o Qualidade da visualização (nitidez, luminosidade, campo de visão) • Discutir as principais dificuldades encontradas durante a atividade • Relacionar essas dificuldades aos aspectos técnicos, como: o Uso do microscópio o Preparo da lâmina • Descrever de que forma essas variáveis influenciam o resultado experimental Checklist: ✔ Utilizou corretamente os EPIs obrigatórios ✔ Organizou o material de anotação na bancada ✔ Manteve postura adequada no ambiente laboratorial ✔ Observou atentamente a letra antes da prática ✔ Elaborou desenho inicial representando sua hipótese ✔ Registrou previsões sobre: • orientação da imagem • efeito do aumento ✔ Demonstrou raciocínio prévio (não apenas resposta superficial) Procedimento nº 3 Aprendizagem Baseada em Problemas: Missão Diagnóstica – Quem está na lâmina? Tempo Esperado: 60 minutos Vídeo do Professor: https://mdstrm.com/embed/69d6586144c6c29cb2d1546d https://mdstrm.com/embed/69d6586144c6c29cb2d1546d 11 Público Atividade proposta: Dando continuidade às etapas anteriores, nas quais foram desenvolvidas competências relacionadas à biossegurança, preparo do microscópio e interpretação da imagem microscópica, sua equipe avançará para uma análise aplicada, assumindo a postura de um profissional de laboratório de análises clínicas. Nesta etapa, os estudantes irão investigar amostras biológicas reais, utilizando o microscópio óptico como ferramenta de diagnóstico, com o objetivo de diferenciar células eucariontes e procariontes com base em critérios morfológicos e técnicos. A atividade seráconduzida a partir de uma situação-problema, exigindo que os estudantes mobilizem conhecimentos prévios, realizem observação criteriosa e tomem decisões baseadas em evidências experimentais. Espera-se que o grupo desenvolva: • raciocínio científico • capacidade de análise crítica • interpretação de resultados • tomada de decisão baseada em evidências Antes da aula prática, recomenda-se a leitura do Capítulo 1 – Células, que aborda os fundamentos da organização celular, incluindo as principais diferenças entre células eucariontes e procariontes, essenciais para a análise comparativa proposta na atividade. Indicações de referências bibliográficas: Antes da aula prática, recomenda-se a leitura do Capítulo 1 – Células, que aborda os fundamentos da organização celular, incluindo as principais diferenças entre células eucariontes e procariontes, essenciais para a análise comparativa proposta na atividade. DE ROBERTIS, Edward M.; HIB, José. Biologia celular e molecular. 16. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2014. E-book. ISBN 9788527723862. Disponível em: https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/978-85-277-2386-2/ Procedimentos para a realização da atividade: Organização • Os estudantes deverão se organizar em grupos de 3 integrantes • Cada grupo será responsável por discutir a situação-problema apresentada • Cada grupo deverá preparar duas lâminas para análise microscópica: • mucosa bucal (célula eucarionte) • iogurte (célula procarionte) https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/978-85-277-2386-2/ 12 Público A atividade será conduzida em três momentos: • Levantamento de hipóteses (12 minutos) • Execução experimental (33 minutos) • Registro e validação dos resultados (15 minutos) Situação-problema: contexto profissional (3 minutos) Um laboratório de análises clínicas recebeu uma amostra biológica para avaliação microscópica. Durante a análise, surgiram dúvidas quanto à presença de células humanas e possível contaminação bacteriana. A equipe apresentou resultados divergentes: • Alguns analistas relataram presença de células eucariontes • Outros identificaram estruturas compatíveis com bactérias Diante da inconsistência, o responsável técnico solicitou uma nova análise para garantir a confiabilidade do resultado. Com base nessa situação, discutam (9 minutos): • Quais características permitem diferenciar células humanas de bactérias ao microscópio? • Quais critérios devem ser utilizados para garantir que a análise seja confiável? • Quais fatores técnicos podem levar a interpretações incorretas? O grupo deve registrar suas hipóteses considerando: • Diferenças estruturais esperadas • Facilidade ou dificuldade de visualização • Possíveis erros que podem ocorrer durante o preparo e observação Objetivo da etapa • Ativar conhecimentos prévios • Direcionar a observação prática • Estimular o pensamento crítico antes da execução 2. Etapa 2 – Execução do procedimento experimental Preparação das lâminas Cada grupo deverá preparar duas lâminas: 2.1 Biossegurança (Obrigatório) • Não falar diretamente sobre a lâmina (evita contaminação) 13 Público • Não compartilhar materiais de coleta • Realizar descarte adequado do material biológico Observação importante: A mucosa bucal contém células vivas e microrganismos. Portanto, deve ser tratada como material biológico potencialmente contaminante. 2.2 Lâmina 1 – Célula eucarionte (mucosa bucal) ( 10 minutos) Coleta do material biológico: mucosa bucal • Preparação para a coleta: Higienize as mãos e certifique-se de que está utilizando os EPIs adequados (jaleco e cabelos presos). Posicione-se de forma confortável e com boa iluminação. • Local da coleta: Identifique a região interna da bochecha (mucosa bucal), preferencialmente em uma área limpa e sem excesso de saliva acumulada. • Raspagem do material: Com o auxílio da espátula (ou swab), realize uma raspagem suave e controlada na mucosa bucal. Faça movimentos leves, em uma única direção, evitando movimentos repetitivos no mesmo local. • Quantidade de material: Colete uma pequena quantidade de material, suficiente para formar um esfregaço fino na lâmina. Evite excesso de material, pois pode dificultar a visualização microscópica. • Cuidados durante a coleta: • Não aplicar força excessiva • Não causar desconforto ou dor • Evitar contato da espátula com outras superfícies • Não falar durante o procedimento Uma coleta adequada garante: ✔ maior quantidade de células íntegras ✔ melhor distribuição na lâmina ✔ melhor fixação e coloração ✔ maior qualidade na visualização microscópica Preparo da lâmina • Deposite o material coletado no centro da lâmina de vidro e, com auxílio da espátula, espalhe suavemente formando uma camada fina, homogênea e bem distribuída. Evite acúmulo de material, pois camadas espessas dificultam a passagem da luz e comprometem a visualização microscópica. • Adicione cuidadosamente 1 gota de azul de metileno sobre a amostra, garantindo que toda a área esteja coberta pelo corante. Aguarde aproximadamente 2 minutos, 14 Público permitindo a penetração do corante nas células e o aumento do contraste das estruturas. • Em seguida, incline levemente a lâmina e realize a lavagem suave com água da pisseta, direcionando o fluxo pelas laterais, evitando jato direto sobre a amostra. Remova o excesso de líquido com papel absorvente, sem encostar diretamente na região contendo o material. • Para a colocação da lamínula, segure-a com uma pinça e posicione-a em um ângulo de aproximadamente 45°, encostando uma de suas bordas na gota presente na lâmina. Abaixe lentamente a lamínula até cobrir toda a amostra. • O objetivo dessa técnica é evitar a formação de bolhas de ar, que podem interferir na visualização. • Caso haja formação de bolhas, pressione levemente a lamínula com a pinça para tentar removê-las. Observação importante: A correta preparação da lâmina e posicionamento da lamínula são fundamentais para garantir uma imagem nítida, com boa distribuição celular e sem interferências visuais. Observação microscópica (5 minutos) • Agora, posicione a lâmina sobre a platina do microscópio e fixe-a adequadamente com as presilhas, garantindo estabilidade durante a observação. Inicie a análise utilizando a objetiva de 4x, que permite uma visualização geral da amostra e facilita a localização da área de interesse. • Em seguida, passe para a objetiva de 10x, realizando o ajuste inicial do foco com o parafuso macrométrico, aproximando a imagem até torná-la visível. Após isso, refine a nitidez utilizando o parafuso micrométrico. • Prossiga para a objetiva de 40x, girando o revólver até que a lente esteja corretamente encaixada. Nessa etapa, realize o ajuste do foco exclusivamente com o parafuso micrométrico, evitando o uso do macrométrico para prevenir danos à lâmina e à objetiva. Observação importante: Sempre centralize a imagem antes de aumentar o aumento, garantindo melhor qualidade de visualização e evitando perda da área de interesse. Ajuste da iluminação Ajuste a intensidade da luz no botão localizado na base do microscópio: • Pouca luz: imagem escura e pouco nítida • Muita luz: perda de contraste (imagem “lavada”) O ajuste adequado da iluminação é essencial para visualizar corretamente as estruturas celulares. Após a observação não descartar a lâmina, esta será utilizada na prática seguinte. 15 Público 2.3 Lâmina 2 –Microrganismos procariontes presentes no iogurte (10 minutos) Preparo do esfregaço bacteriano: • Adicione a água na lâmina: Coloque uma pequena gota de água destilada no centro da lâmina utilizando conta-gotas ou pipeta. A água facilita a dispersão uniforme das bactérias. • Coleta da amostra (iogurte): Com o auxílioda espátula, retire uma quantidade mínima de iogurte (quase imperceptível). Atenção evite excesso, grandes quantidades dificultam a visualização. • Transferência para a lâmina: Deposite o material coletado sobre a gota de água no centro da lâmina. • Formação do esfregaço (etapa crítica): Com a própria espátula misture suavemente o iogurte com a água, espalhando o material sobre a lâmina. O objetivo é formar uma camada fina, homogênea e translúcida. • Controle da espessura: Distribua o material em movimentos leves e uniformes, evitando acúmulo em uma única região. Observação importante: o Camada muito espessa: impede a passagem da luz e dificulta a visualização o Camada muito fina: pode resultar em pouca presença de bactérias. • Verificação visual antes da secagem: Observe a lâmina contra a luz, esta deve apresentar aparência levemente turva e não deve estar opaca ou com grumos Secagem e fixação (etapa crítica): • Acendimento do bico de Bunsen. Acenda o bico de Bunsen com auxílio de fósforo ou acendedor, ajustando a chama para uma intensidade moderada. Mantenha atenção ao ambiente e à presença de materiais inflamáveis. • Secagem inicial da lâmina. Deixe a lâmina secar ao ar por alguns instantes, posicionando-a próxima à chama, mas sem contato direto. Essa etapa remove o excesso de umidade antes da fixação. • Fixação térmica da amostra: Segure a lâmina com pinça e passe rapidamente pela chama do bico de Bunsen 2 a 3 vezes, em movimentos contínuos e rápidos. O lado da amostra deve passar pela chama. Objetivo: • Fixar as bactérias • Aumentar aderência à lâmina Erro comum: superaquecer levando a destruição das células Coloração: 16 Público • Aplicação do corante: Adicione 2 gotas de azul de metileno sobre a área do esfregaço, cobrindo completamente a amostra. • Tempo de ação: Aguarde aproximadamente 3 minutos, permitindo a penetração do corante nas células. O corante aumenta o contraste, facilitando a visualização das bactérias. • Lavagem da lâmina: Lave suavemente com água destilada, direcionando o fluxo pelas laterais da lâmina. Evite jato direto sobre a amostra para não a remover. • Secagem final: Deixe a lâmina secar naturalmente em posição horizontal. Importante: não utilize calor nesta etapa. Observação microscópica (6 minutos): • Posicione a lâmina sobre a platina do microscópio e fixe-a adequadamente com as presilhas, garantindo estabilidade durante a observação. Inicie a análise utilizando a objetiva de 4x, que permite uma visualização geral da amostra e facilita a localização da área de interesse. • Em seguida, passe para a objetiva de 10x, realizando o ajuste inicial do foco com o parafuso macrométrico, aproximando a imagem até torná-la visível. Após isso, refine a nitidez utilizando o parafuso micrométrico. • Prossiga para a objetiva de 40x, girando o revólver até que a lente esteja corretamente encaixada. Nessa etapa, realize o ajuste do foco exclusivamente com o parafuso micrométrico, evitando o uso do macrométrico para prevenir danos à lâmina e à objetiva. • Aplique o óleo de imersão: Coloque cuidadosamente uma pequena gota de óleo de imersão diretamente sobre a área da lâmina onde está a amostra. O óleo melhora a passagem da luz e aumenta a resolução da imagem. • Gire para a objetiva de 100x (imersão): Movimente o revólver lentamente até posicionar a objetiva de 100x, garantindo que ela entre em contato com o óleo de imersão. • Ajuste o foco apenas com o micrométrico: Realize pequenos ajustes com o micrométrico até obter uma imagem nítida. Observação: Nunca utilize o macrométrico nessa etapa, pois pode danificar a lâmina e a objetiva. 2.4 Observação guiada ( 2 minutos) Durante a observação, o grupo deve analisar as lâminas como um analista de laboratório, considerando critérios técnicos e qualidade da amostra. Aspectos a serem observados: • Tamanho das estruturas • Presença ou ausência de núcleo • Forma celular 17 Público • Distribuição das estruturas na lâmina • Facilidade de visualização • Nível técnico exigido para a análise 2.5 Registro e comparação dos resultados (10 minutos). Critério Célula Eucarionte Célula Procarionte Tamanho Núcleo Forma Facilidade de visualização Comparação com as hipóteses iniciais Após o preenchimento da tabela, o grupo deve: • Comparar os resultados obtidos com as hipóteses registradas no início da atividade. • Identificar quais previsões foram confirmadas ou refutadas. • Discutir entre o seu grupo possíveis justificativas para as diferenças observadas. Finalização do procedimento (5 minutos). • Retirar a lâmina com cuidado, não descartar a lâmina, será usada na próxima prática. • Limpar o excesso de óleo da objetiva (papel adequado) • Desligar o microscópio • Colocar a capa protetora no microscópio • Limpar bancada Checklist: ✔ Participou ativamente da discussão inicial e da construção das hipóteses ✔ Demonstrou envolvimento no preparo das lâminas, seguindo critérios técnicos ✔ Manipulou ou auxiliou no uso do microscópio de forma adequada ✔ Identificou corretamente as estruturas celulares observadas ✔ Colaborou no registro e na análise comparativa dos resultados ✔ Contribuiu com argumentos na análise crítica e na tomada de decisão do grupo Procedimento nº 4 Jigsaw: Auditoria Laboratorial: Identificando e corrigindo falhas microscópicas. Tempo Esperado: 60 minutos Vídeo do Professor: https://mdstrm.com/embed/69d65e3ba464fb8e37fdc81c Atividade proposta: https://mdstrm.com/embed/69d658893567df84c7d5a2a9 18 Público Dando continuidade à investigação iniciada nas etapas anteriores, sua equipe avançará para a análise crítica da qualidade das lâminas produzidas e interpretadas ao longo da aula. Após dominar o uso do microscópio, compreender o comportamento da imagem e realizar a análise comparativa entre diferentes tipos celulares, chega o momento de assumir uma postura profissional diante de falhas reais de laboratório. Nesta etapa, você atuará como analista e responsável técnico, investigando inconsistências em resultados microscópicos, identificando erros no processo laboratorial e propondo soluções aplicáveis à rotina clínica. A atividade permitirá retomar as lâminas previamente preparadas (letra, mucosa bucal e iogurte), utilizando-as como evidência para validar hipóteses, reconhecer falhas técnicas e consolidar o raciocínio diagnóstico. Situação-problema (15 minutos). Um laboratório de análises clínicas tem apresentado aumento no número de exames inconclusivos e divergência entre resultados microscópicos realizados por diferentes técnicos. O gestor identificou que os principais problemas estão relacionados à qualidade das lâminas, que frequentemente apresentam os seguintes casos: CASO 1: Durante a análise de uma lâmina de mucosa bucal, o técnico observou que o campo microscópico apresentava grandes áreas vazias, com poucas estruturas celulares visíveis. O núcleo das células não estava bem definido e, em alguns campos, não havia material suficiente para análise. O técnico relatou dificuldade em confirmar a presença de células epiteliais, classificando o exame como inconclusivo. CASO 2: Uma lâmina preparada apresentou intensa coloração e grande concentração de material. As células estavam sobrepostas, formando uma camada espessa, com dificuldade de visualização individual das estruturas. O analista relatou que não foi possível distinguir claramente núcleo e citoplasma, mesmo após ajuste da iluminação. CASO 3: Durante a observação microscópica, o técnico percebeu que as estruturas celulares estavam pouco contrastadas. O núcleo não se destacava e a coloração parecia muito fraca em algumas áreas e intensa em outras. Houve relato de dificuldade na identificação das estruturas celulares,mesmo com foco adequado. CASO 4: Na análise de um esfregaço bacteriano, o técnico não conseguiu observar bactérias na lâmina, mesmo utilizando objetiva de 100x com óleo de imersão. Em outra tentativa, observou estruturas distorcidas e com aparência irregular. 19 Público O técnico suspeitou de erro no preparo da lâmina. Indicações de referências bibliográficas: Antes da aula prática, recomenda-se a leitura do Capítulo 1 – Células: as unidades fundamentais da vida, que apresenta os conceitos essenciais sobre a organização celular, fundamentais para a compreensão das estruturas observadas nas análises microscópicas e para a diferenciação entre os tipos celulares ao longo da atividade. ALBERTS, Bruce et al. Fundamentos da biologia celular. 4. ed. Porto Alegre: ArtMed, 2017. E- book. ISBN 9788582714065. Disponível em: https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788582714065/. Procedimentos para a realização da atividade Para o adequado desenvolvimento da metodologia Jigsaw, os estudantes devem atuar em dois momentos distintos, assumindo papéis complementares: 1. Grupo de Especialistas (Etapa 1 – Análise do caso) Durante a etapa inicial de análise, cada grupo atua como um Grupo de Especialistas, sendo responsável por: • aprofundar a análise de um caso específico sorteado; • identificar o problema técnico presente na lâmina; • discutir possíveis causas e consequências; • construir uma interpretação fundamentada sobre o erro; Neste momento, o grupo se torna especialista naquele tipo de falha laboratorial. 2. Grupo Base (Etapa 2 – Compartilhamento) Na etapa de compartilhamento (Jigsaw), os estudantes serão reorganizados em novos grupos, formando o Grupo Base. • Cada novo grupo será composto por integrantes que analisaram casos diferentes; • Cada estudante levará o conhecimento construído no grupo de especialistas; Neste momento, cada estudante assume o papel de especialista dentro do novo grupo. Organização • Organize-se em grupos de até 3 integrantes • Cada grupo atuará como uma equipe técnica responsável pela análise e tomada de decisão • Cada grupo será responsável por discutir a situação-problema apresentada https://app.minhabiblioteca.com.br/reader/books/9788582714065/ 20 Público • Para a investigação, deverão ser utilizadas as lâminas previamente preparadas nas atividades anteriores: • mucosa bucal (célula eucarionte) • iogurte (célula procarionte) Essas lâminas deverão ser utilizadas como evidência para identificação de falhas e validação dos resultados A atividade será conduzida em quatro momentos: • Análise do caso: 15 minutos • Compartilhamento : 15 minutos • Aplicação prática: 15 minutos • Validação e socialização: 15 minutos ETAPA 1 – ANÁLISE DO CASO- Investigação técnica (15 minutos). O grupo deverá analisar um dos casos acima sorteado e preencher a ficha abaixo: FICHA DE INVESTIGAÇÃO 1. Identificação do problema observado na lâmina: (Descrever o que está inadequado no caso descrito) 2. Possível erro técnico envolvido: (Ex: esfregaço inadequado, excesso de corante, falha na coleta, erro no uso do microscópio, etc.) 3. Etapa do processo em que ocorreu o erro: (Assinale e justifique) • ( ) Coleta da amostra • ( ) Preparo da lâmina • ( ) Coloração • ( ) Observação microscópica 4. Impacto na qualidade do exame: (Explique como o erro interfere na visualização e no resultado) 5. Classificação da gravidade do erro: • ( ) Crítico (compromete totalmente o resultado) • ( ) Moderado (dificulta, mas não inviabiliza) • ( ) Leve (interfere pouco) Justificativa: 21 Público ETAPA 2 – COMPARTILHAMENTO (15 minutos) Nesta etapa, será realizada a troca de conhecimentos entre os grupos, com o objetivo de garantir que todos os estudantes tenham contato com os diferentes problemas relacionados à qualidade das lâminas microscópicas. Organização da atividade Todos os integrantes dos grupos deverão se reorganizar, formando novos grupos mistos • Cada novo grupo deverá ser composto por estudantes que analisaram casos diferentes na etapa anterior • O mediador pedagógico auxiliará na organização para garantir que não haja repetição de casos no mesmo grupo, repetições pode ocorrer caso seja necessário criar mais de um grupo com o mesmo caso Desenvolvimento da atividade No novo grupo, cada estudante deverá apresentar o seu caso, assumindo o papel de especialista. Durante a explicação, o estudante deverá abordar de forma clara e objetiva: • qual foi o problema identificado na lâmina; • qual erro técnico foi associado ao caso; • em qual etapa do processo laboratorial ocorreu a falha; • quais foram os impactos desse erro na qualidade do exame; • qual foi a classificação da gravidade (crítico, moderado ou leve), com justificativa. Dinâmica do grupo • Todos os estudantes devem apresentar seu caso • Os demais integrantes devem ouvir ativamente, fazer perguntas e comparar os diferentes problemas apresentados • O grupo deve buscar compreender semelhanças e diferenças entre os erros técnicos Registro das informações Durante as apresentações, cada estudante deverá anotar os principais pontos dos outros casos, pois essas informações serão utilizadas nas próximas etapas da atividade. Objetivo da etapa Ao final desta etapa, espera-se que todos os estudantes: • conheçam os diferentes tipos de falhas no preparo e análise de lâminas; • compreendam como esses erros se manifestam na prática microscópica; 22 Público • relacionem cada problema às etapas do processo laboratorial; • ampliem sua capacidade de análise crítica em situações reais de laboratório. Observação importante: Após o compartilhamento, os estudantes deverão retornar aos seus grupos de origem, levando as informações discutidas. Esses conhecimentos serão utilizados para a identificação e análise dos erros presentes tanto nos casos quanto nas lâminas elaboradas nas práticas anteriores, bem como para a proposição de correções técnicas adequadas à rotina laboratorial. ETAPA 3 – Aplicação prática – Validação com lâminas reais (15 minutos). Após o compartilhamento entre especialistas, os estudantes deverão aplicar os conhecimentos discutidos na análise das lâminas previamente preparadas nas atividades anteriores (atividades 2 e 3), relacionando-os também aos casos analisados. Cada grupo deverá: • observar novamente as lâminas produzidas pelo seu grupo (letra, mucosa bucal e iogurte); • identificar se há falhas semelhantes às discutidas nos casos apresentados; • relacionar os erros observados tanto nas lâminas quanto nos casos com as etapas do processo (coleta, preparo, coloração ou observação); • discutir se os problemas identificados poderiam comprometer o resultado do exame; Em grupo, deverão: • comparar os erros identificados nas lâminas reais com aqueles descritos nos casos; • selecionar pelo menos um erro relevante (observado na lâmina e/ou no caso); • classificá-lo quanto à gravidade (crítico, moderado ou leve); • propor uma correção técnica baseada na prática laboratorial adequada. Essa etapa tem como objetivo consolidar o aprendizado por meio da integração entre teoria e prática, promovendo a análise crítica e a tomada de decisão em contexto profissional. ETAPA 4 – SOCIALIZAÇÃO (15 minutos). Nesta etapa, cada grupo deverá apresentar para a turma a síntese da análise realizada ao longo da atividade, integrando os conhecimentos construídos a partir dos casos discutidos e da avaliação das lâminas reais produzidas durante a prática. O objetivo é demonstrar que o grupo foi capaz de: • identificar o problema técnico central, nos casos e nas suas lâminas; • compreender suas consequências para a qualidade do exame; 23 Público • propor uma correçãotécnica viável para a rotina laboratorial. A apresentação deve ser realizada de forma objetiva, organizada e com linguagem técnica adequada, simulando uma reunião de equipe em um laboratório de análises clínicas para discussão de falhas e melhoria de processos. Cada grupo deverá apresentar: • o erro identificado (no caso e/ou na lâmina real analisada); • a etapa do processo em que ocorreu a falha (coleta, preparo, coloração ou observação); • o impacto desse erro na qualidade da análise microscópica; • a correção técnica proposta; • a justificativa de como essa correção contribui para melhorar a confiabilidade dos resultados. Forma de apresentação: A exposição deve ser curta, clara e bem estruturada. O grupo pode dividir a fala entre os integrantes, garantindo a participação equilibrada de todos. A apresentação deve contemplar: • breve contextualização do erro analisado; • explicação técnica do problema identificado; • descrição da correção proposta; • justificativa baseada nos princípios da microscopia e preparo de lâminas. Pesquisa de Satisfação (Aluno): Perguntas de 0 a 10 (0 a 8 indicam muito ruim, 9 e 10 muito bom). Avaliação dos componentes pedagógicos das Aulas Práticas – Preencher o formulário RESULTADOS Resultados do experimento: Procedimento nº 1- O comportamento da imagem Storytelling Espera-se que o estudante reconheça corretamente as partes do microscópio óptico, incluindo ocular, objetivas, platina, parafusos de ajuste, condensador e sistema de iluminação, sendo https://forms.office.com/r/Ujf62gWzcg 24 Público capaz de realizar os procedimentos iniciais de uso com segurança, como ligar o equipamento, ajustar a iluminação e obter foco adequado. Além disso, espera-se a aplicação das normas de biossegurança, com uso correto de EPIs e organização da bancada, promovendo o desenvolvimento de autonomia inicial, segurança no manuseio do equipamento e redução de erros operacionais básicos durante a prática. Procedimento nº 2: O comportamento da imagem Aprendizagem baseada em investigação (Inquiry-Based Learning) Espera-se que o estudante formule hipóteses coerentes sobre o comportamento da imagem no microscópio, especialmente quanto à inversão e aos efeitos do aumento, sendo capaz de testá- las experimentalmente e compará-las com os resultados observados. O estudante deverá compreender a relação entre aumento, campo de visão, luminosidade e nitidez, além de desenvolver raciocínio científico por meio das etapas de observação, experimentação e interpretação, registrando adequadamente os dados por meio de desenhos e descrições e realizando análise crítica das diferenças entre hipótese e resultado. Procedimento nº 3 - Missão Diagnóstica – Quem está na lâmina? Aprendizagem baseada em problemas (PBL) Espera-se que o estudante seja capaz de diferenciar células eucariontes e procariontes com base em critérios como presença de núcleo, tamanho e morfologia celular, além de executar corretamente o preparo de lâminas biológicas (mucosa bucal e iogurte), aplicando técnicas laboratoriais como coloração, fixação e uso adequado do microscópio. Espera-se também que identifique limitações técnicas do procedimento, interprete criticamente os resultados em um contexto de análises clínicas, desenvolva a tomada de decisão baseada em evidências e atue de forma colaborativa, com comunicação científica adequada durante o trabalho em equipe. Procedimento nº 4- Auditoria Laboratorial: Identificando e corrigindo falhas microscópicas JIGSAW Espera-se que os estudantes sejam capazes de identificar falhas técnicas no preparo e na análise de lâminas microscópicas, relacionando os erros às diferentes etapas do processo laboratorial. A atividade permite compreender o impacto dessas falhas na qualidade da visualização e na confiabilidade dos resultados, além de favorecer a tomada de decisão ao reconhecer e priorizar erros críticos. Também se espera que os alunos sejam capazes de propor correções técnicas viáveis, aplicáveis à rotina laboratorial, desenvolvendo habilidades de análise crítica, trabalho em equipe e integração entre teoria e prática em um contexto profissional. Resultados de Aprendizagem: 25 Público Ao final da aula prática, espera-se que o estudante opere corretamente o microscópio óptico com autonomia e segurança, aplicando normas de biossegurança e realizando o preparo adequado de lâminas biológicas para análise microscópica. O estudante deverá ser capaz de reconhecer e diferenciar células eucariontes e procariontes, compreender os princípios ópticos envolvidos na formação da imagem, analisar criticamente resultados experimentais e identificar possíveis limitações e erros técnicos. Além disso, espera-se que consiga integrar teoria e prática no contexto das análises clínicas, desenvolver habilidades de trabalho em equipe, comunicação científica e tomada de decisão baseada em evidências, adotando postura ética, crítica e profissional no ambiente laboratorial.