Controle de Qualidade Microbiológico

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<p>CONTROLE DE QUALIDADE</p><p>MICROBIOLÓGICO</p><p>Controle de Qualidade M</p><p>icrobiológico</p><p>Fernanda Waitman de Oliveira Silva</p><p>Susana de Oliveira Elias</p><p>Fernanda Waitman de Oliveira Silva</p><p>Susana de Oliveira Elias</p><p>GRUPO SER EDUCACIONAL</p><p>gente criando o futuro</p><p>O objetivo geral dessa disciplina é fornecer os conhecimentos necessários para o plane-</p><p>jamento, organização e funcionamento de um laboratório de controle de qualidade na</p><p>indústria farmacêutica, incluindo a aplicação dos principais métodos de análise de medi-</p><p>camentos. Para tanto, diversos assuntos serão abordados ao longo dessa incrível jornada</p><p>rumo à concretização do sonho de se tornar um farmacêutico.</p><p>Abordaremos os temas mais relevantes dessa área em expansão, que apresenta desa� os</p><p>cada vez maiores. A contaminação microbiana dos produtos farmacêuticos é um problema</p><p>de saúde pública capaz de impactar tanto a qualidade do produto, favorecendo sua dete-</p><p>rioração, quanto a segurança do usuário, que pode sofrer com infecções e intoxicações.</p><p>Assim, a presença de microrganismos nos produtos farmacêuticos é um grande risco à</p><p>indústria e ao consumidor.</p><p>O controle de qualidade microbiológico é essencial, dessa forma, para a produção de me-</p><p>dicamentos de qualidade e com segurança e que atendam a todos os requisitos exigidos</p><p>pelas regulamentações vigentes. Nesse contexto, o pro� ssional que atua no laboratório</p><p>de controle de qualidade da indústria farmacêutica tem um papel estratégico, integrando</p><p>as diferentes áreas da empresa – desde a matéria-prima até o produto � nal –, a � m de</p><p>assegurar que os níveis de qualidade e segurança sejam alcançados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE</p><p>MICROBIOLÓGICO</p><p>Capa_SER_FARMA_CQM.indd 1,3 18/01/2021 11:06:34</p><p>© Ser Educacional 2021</p><p>Rua Treze de Maio, nº 254, Santo Amaro</p><p>Recife-PE – CEP 50100-160</p><p>*Todos os gráficos, tabelas e esquemas são creditados à autoria, salvo quando indicada a referência.</p><p>Informamos que é de inteira responsabilidade da autoria a emissão de conceitos.</p><p>Nenhuma parte desta publicação poderá ser reproduzida por qualquer meio</p><p>ou forma sem autorização.</p><p>A violação dos direitos autorais é crime estabelecido pela Lei n.º 9.610/98 e punido pelo artigo 184 do</p><p>Código Penal.</p><p>Imagens de ícones/capa: © Shutterstock</p><p>Presidente do Conselho de Administração</p><p>Diretor-presidente</p><p>Diretoria Executiva de Ensino</p><p>Diretoria Executiva de Serviços Corporativos</p><p>Diretoria de Ensino a Distância</p><p>Autoria</p><p>Projeto Gráfico e Capa</p><p>Janguiê Diniz</p><p>Jânyo Diniz</p><p>Adriano Azevedo</p><p>Joaldo Diniz</p><p>Enzo Moreira</p><p>Fernanda Waitman de Oliveira Silva</p><p>Susana de Oliveira Elias</p><p>DP Content</p><p>DADOS DO FORNECEDOR</p><p>Análise de Qualidade, Edição de Texto, Design Instrucional,</p><p>Edição de Arte, Diagramação, Design Gráfico e Revisão.</p><p>SER_FARMA_CQM_UNIDCOMPLETO.indd 2 18/01/2021 13:04:08</p><p>Boxes</p><p>ASSISTA</p><p>Indicação de filmes, vídeos ou similares que trazem informações comple-</p><p>mentares ou aprofundadas sobre o conteúdo estudado.</p><p>CITANDO</p><p>Dados essenciais e pertinentes sobre a vida de uma determinada pessoa</p><p>relevante para o estudo do conteúdo abordado.</p><p>CONTEXTUALIZANDO</p><p>Dados que retratam onde e quando aconteceu determinado fato;</p><p>demonstra-se a situação histórica do assunto.</p><p>CURIOSIDADE</p><p>Informação que revela algo desconhecido e interessante sobre o assunto</p><p>tratado.</p><p>DICA</p><p>Um detalhe específico da informação, um breve conselho, um alerta, uma</p><p>informação privilegiada sobre o conteúdo trabalhado.</p><p>EXEMPLIFICANDO</p><p>Informação que retrata de forma objetiva determinado assunto.</p><p>EXPLICANDO</p><p>Explicação, elucidação sobre uma palavra ou expressão específica da</p><p>área de conhecimento trabalhada.</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 3 18/01/2021 11:40:39</p><p>Unidade 1 - Aspectos gerais do controle de qualidade de produtos farmacêuticos</p><p>Objetivos da unidade ����������������������������������������������������������������������������������������������������������� 12</p><p>Controle biológico: conceitos gerais e objetivos 13</p><p>Boas práticas de laboratório e biossegurança .......................................................... 14</p><p>Validação de métodos analíticos .................................................................................. 19</p><p>Garantia de qualidade .................................................................................................... 20</p><p>Animais de laboratório �������������������������������������������������������������������������������������������������������� 20</p><p>Biotérios ........................................................................................................................... 21</p><p>Conceito 3 Rs ................................................................................................................... 25</p><p>Métodos alternativos ...................................................................................................... 26</p><p>Controle de qualidade de material de acondicionamento e embalagem 27</p><p>Materiais de acondicionamento e embalagens 28</p><p>Testes para avaliação de materiais de embalagens 33</p><p>Controle microbiológico de ambientes ���������������������������������������������������������������������������� 37</p><p>Controles de esterilidade ............................................................................................... 37</p><p>Monitoramento ambiental .............................................................................................. 38</p><p>Contaminação microbiana ............................................................................................. 40</p><p>Sintetizando ��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 45</p><p>Referências bibliográficas ������������������������������������������������������������������������������������������������� 46</p><p>Sumário</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 4 18/01/2021 11:40:39</p><p>Sumário</p><p>Unidade 2 - Análise microbiana de produtos farmacêuticos</p><p>Objetivos da unidade ����������������������������������������������������������������������������������������������������������� 52</p><p>Análise de produtos não estéreis ������������������������������������������������������������������������������������� 53</p><p>Controle microbiológico de produtos farmacêuticos não estéreis e de imunoterápicos 54</p><p>Determinação de carga microbiana ............................................................................ 55</p><p>Validação de métodos analíticos .................................................................................. 57</p><p>Garantia de qualidade e controle biológico ................................................................ 59</p><p>Análise de produtos estéreis ��������������������������������������������������������������������������������������������� 60</p><p>Métodos de esterilização ............................................................................................... 60</p><p>Avaliação de desinfetantes e antissépticos ............................................................... 63</p><p>Testes de inocuidade de plásticos ............................................................................... 64</p><p>Biossegurança ................................................................................................................. 66</p><p>Análise de agentes antimicrobianos �������������������������������������������������������������������������������� 67</p><p>Potência de antibióticos ................................................................................................. 68</p><p>Teste de eficácia de conservantes............................................................................... 70</p><p>Análise de vitaminas ����������������������������������������������������������������������������������������������������������� 72</p><p>Cromatografia .................................................................................................................. 73</p><p>Conservantes ................................................................................................................... 74</p><p>Sintetizando ���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������</p><p>os contaminantes em matérias-primas não</p><p>só são importantes porque podem contaminar o produto diretamente, mas</p><p>também porque podem contaminar a fábrica, causando problemas futuros,</p><p>tanto para os produtos quanto para os pacientes. Tais microrganismos, quan-</p><p>do se estabelecem dentro da fábrica, são difíceis de erradicá-los, resultando</p><p>na contaminação contínua ou intermitente do produto, ficando, dessa forma,</p><p>complexa sua detecção.</p><p>O objetivo desse controle microbiológico é garantir ao fabricante que as</p><p>matérias-primas utilizadas não representam direta ou indiretamente um risco</p><p>para o produto e para o consumidor. Cabe ressaltar que nem todos os pro-</p><p>dutos precisam ser estéreis, portanto, as especificações adotadas necessitam</p><p>refletir o tipo de matéria-prima, o tipo de produto, seu método de fabricação</p><p>e uso pretendido.</p><p>A qualidade do ambiente de fabricação será influenciada por muitos fa-</p><p>tores. Compreender essas influências é parte essencial de um programa de</p><p>controle ambiental. Elas chegam a ser divididas em quatro categorias básicas:</p><p>instalações, equipamentos, pessoal e higienização.</p><p>O tipo e a frequência do monitoramento microbiológico das superfícies fí-</p><p>sicas dependerão da suscetibilidade do produto à contaminação microbiana,</p><p>da escala de fabricação e do tipo de planta e de processo. As superfícies físi-</p><p>cas que entram em contato direto com o produto devem ser monitoradas com</p><p>mais frequência que aquelas que não estão em contato direto com o produto.</p><p>Superfícies de contato direto carecem ser examinadas quanto à presença de</p><p>microrganismos deteriorantes e patogênicos. Superfícies indiretas têm que ser</p><p>monitoradas para determinar os níveis de microrganismos ambientais. Qual-</p><p>quer aumento desses níveis predeterminados pode ser considerado uma indi-</p><p>cação de um potencial problema microbiológico, afetando a qualidade e a se-</p><p>gurança do produto, logo, pode-se exigir uma revisão da frequência dos testes</p><p>e dos protocolos de higienização.</p><p>O monitoramento do ar também precisa ser realizado rotineiramente. A fre-</p><p>quência dele é determinada pelo tipo de atividade realizada na área. Mais uma</p><p>vez, a frequência e os padrões devem ser estabelecidos pelos padrões internos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 42</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 42 18/01/2021 11:42:03</p><p>Os métodos mais usados, tanto para análise de superfície quanto do ar,</p><p>foram explicados no tópico anterior. Em síntese, o monitoramento ambiental</p><p>é uma ferramenta de controle e feedback para monitorar e validar os procedi-</p><p>mentos de limpeza e higienização.</p><p>Os microrganismos que normalmente causam problemas de contamina-</p><p>ção em produtos farmacêuticos são as bactérias e os fungos. As bactérias são</p><p>unicelulares e procarióticas (com material genético disperso pelo citoplasma,</p><p>ou seja, sem carioteca), sendo que Pseudomonas é provavelmente o grupo de</p><p>microrganismos mais comumente isolado desses ambientes, particularmen-</p><p>te Pseudomonas fluorescens e P. cepacia. Outras bactérias que também podem</p><p>ser encontradas são: Enterobacter, Klebsiella e esporos de Bacillus, menos fre-</p><p>quentes, Serratia, Citrobacter, Acinetobacter, Proteus e Staphylococcus. Na Figu-</p><p>ra 7, encontra-se uma placa de Petri com multiplicação de diversas bactérias</p><p>presentes no ar de uma empresa; como o meio de cultura utilizado foi ágar</p><p>nutriente, não é possível fazer a identificação dessas bactérias, apenas a con-</p><p>tagem total delas.</p><p>Figura 7. Colônias bacterianas de diferentes cores, tamanhos e formatos. Amostra de ar em ágar nutriente.</p><p>Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 43</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 43 18/01/2021 11:42:09</p><p>Os fungos, eucariotos (núcleo delimitado pela carioteca), são divididos em:</p><p>leveduras, que são unicelulares, cujo principal contaminante é Candida, e os</p><p>bolores, também conhecidos como fungos filamentosos ou mofos, que são</p><p>pluricelulares, sendo que os mais relacionados a produtos farmacêuticos são:</p><p>Aspergillus e Penicillium. A Figura 8 apresenta cinco placas de Petri com mul-</p><p>tiplicação de diversos bolores e leveduras presentes no ar de uma empresa,</p><p>coletados em diferentes áreas, o meio de cultura utilizado não permite a iden-</p><p>tificação desses fungos, mas é possível perceber que a contagem depende da</p><p>área coletada.</p><p>Figura 8. Multiplicação de fungos presentes no ar em placas de Petri. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>A maioria desses microrganismos tem requisitos de crescimento muito sim-</p><p>ples e é adaptável a uma série de ambientes, o que facilita sua disseminação.</p><p>Além disso, é capaz de ocorrer a formação de biofilmes microbianos,</p><p>comunidades de microrganismos, formados por bacté-</p><p>rias e/ou fungos, que são estruturas de resistência mi-</p><p>crobiana tanto a antibióticos quanto a desinfetantes.</p><p>A Figura 9 detalha o processo de formação e disper-</p><p>são dos biofilmes.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 44</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 44 18/01/2021 11:42:17</p><p>Figura 9. Biofilmes microbianos. 1: microrganismos planctônicos (de vida livre) se aderem à superfície. 2: microrganis-</p><p>mos aderidos começam a secretar exopolissacarídeos (EPS). 3: desenvolvimento do biofilme. 4: biofilme maduro. 5:</p><p>dispersão do biofilme, microrganismos planctônicos são liberados do biofilme maduro. Fonte: Shutterstock. Acesso</p><p>em: 17/09/2020.</p><p>A partir da década de 1960, vários produtos farmacêuticos não estéreis</p><p>começaram a ser associados a microrganismos potencialmente patogêni-</p><p>cos: Pseudomonas sp., Klebsiella sp., Serratia sp., Salmonella sp., Clostridium sp.</p><p>(GRAEVENITZ, 1977). Atualmente, a qualidade microbiológica desses produ-</p><p>tos melhorou, visto que existe uma maior conscientização dos perigos pela</p><p>indústria, hospitais e órgãos reguladores. Contaminações ocasionais, no</p><p>entanto, continuam a ocorrer, por isso, são necessárias me-</p><p>lhorias contínuas tanto na formulação quanto na produção</p><p>higiênica, de modo a não colocar os pacientes em risco. Os</p><p>responsáveis pela produção, distribuição e administração</p><p>de medicamentos, dessa forma, devem permanecer para</p><p>sempre vigilantes.</p><p>1 2 3 4 5</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 45</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 45 18/01/2021 11:42:18</p><p>Sintetizando</p><p>Nesta unidade, apresentamos as noções fundamentais do controle biológico</p><p>de produtos farmacêuticos. Começamos nossa trajetória pelas boas práticas de</p><p>laboratório, enfatizando a biossegurança.</p><p>Os temas de validação de métodos analíticos, bem como os animais de labo-</p><p>ratório (incluindo métodos alternativos) também foram abordados.</p><p>Durante nosso estudo, discutimos ainda sobre a garantia e o controle de qua-</p><p>lidade – tanto no nível de embalagens quanto no de monitoramento ambiental.</p><p>Foram apresentados, inclusive, os principais testes realizados para avaliação.</p><p>Dessa forma, contribuímos para a capacitação do estudante, visando à atua-</p><p>ção em um laboratório de controle de qualidade na indústria farmacêutica.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 46</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 46 18/01/2021 11:42:18</p><p>Referências bibliográficas</p><p>AGÊNCIA BRASILEIRA DE DESENVOLVIMENTO INDUSTRIAL (ABDI); ASSOCIAÇÃO</p><p>BRASILEIRA DA INDÚSTRIA DE HIGIENE PESSOAL, PERFUMARIA E COSMÉTICOS</p><p>(ABIHPEC); SERVIÇO BRASILEIRO DE APOIO ÀS MICRO E PEQUENAS EMPRESAS</p><p>(SEBRAE). 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Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).</p><p>Resolução RDC n. 11, de 16 de fevereiro de 2012. Dispõe sobre o funcionamento</p><p>de laboratórios analíticos que realizam análises em produtos sujeitos à Vigilância</p><p>Sanitária e dá outras providências. Brasília: DOU, 2012b. Disponível em: <http://</p><p>bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/anvisa/2012/res0011_16_02_2012.html#:~:-</p><p>text=Disp%C3%B5e%20sobre%20o%20funcionamento%20de,Sanit%C3%A-</p><p>1ria%20e%20d%C3%A1%20outras%20provid%C3%AAncias.&text=em%20produ-</p><p>tos%20sujeitos%20%C3%A0%20Vigil%C3%A2ncia%20Sanit%C3%A1ria%2C%20</p><p>nos%20termos%20desta%20Resolu%C3%A7%C3%A3o>. Acesso em: 15 set. 2020.</p><p>BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).</p><p>Resolução RDC n. 17, de 16 de abril de 2010. Dispõe sobre as boas práticas de</p><p>fabricação de medicamentos. Brasília: DOU, 2010. 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Disponível: < https://bvsms.saude.gov.br/</p><p>bvs/publicacoes/classificacao_risco_agentes_biologicos_3ed.pdf>. Acesso em:</p><p>17 set. 2020.</p><p>NATIONAL RESEARCH COUNCIL (NRC). Guide for the care and use of labora-</p><p>tory animals. 8. ed. Washington, D.C.: National Academies Press, 2011.</p><p>NEVES, S. M. P.; et al. Manual de cuidados e procedimentos com animais de</p><p>laboratório do Biotério de Produção e Experimentação da FCF-IQ/USP. São</p><p>Paulo: FCF-IQ/USP, 2013. Disponível em: <http://www.fo.usp.br/wp-content/</p><p>uploads/Manual-Cuidados-com-Animais.pdf>. Acesso em: 15 set. 2020.</p><p>O JARDINEIRO Fiel. Direção de Fernando Meirelles. Britânico-estadunidense:</p><p>Universal Studios, 2005. (129 min.), son., color.</p><p>ORGANIZAÇÃO MUNDIAL DA SAÚDE (OMS). Anexo 1: boas práticas da OMS para</p><p>laboratórios de controle de qualidade de produtos farmacêuticos. n. 957. [s.l.],</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 49</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 49 18/01/2021 11:42:18</p><p>2010. Disponível em: <https://extranet.who.int/prequal/sites/default/files/docu-</p><p>ments/TRS957_annex1_PORTUGUESE.pdf>. Acesso em: 15 set. 2020.</p><p>WORLD HEALTH ORGANIZATION (WHO). Annex 9: guidelines on packaging for</p><p>pharmaceutical products. n. 902. [s.l.], 2002. Disponível em: <https://www.who.</p><p>int/medicines/areas/quality_safety/quality_assurance/GuidelinesPackaging-</p><p>PharmaceuticalProductsTRS902Annex9.pdf?ua=1>. Acesso em: 15 set. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 50</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 50 18/01/2021 11:42:18</p><p>ANÁLISE</p><p>MICROBIANA</p><p>DE PRODUTOS</p><p>FARMACÊUTICOS</p><p>2</p><p>UNIDADE</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 51 18/01/2021 11:59:46</p><p>Objetivos da unidade</p><p>Tópicos de estudo</p><p>Apontar os métodos analíticos de validação;</p><p>Compreender a importância da garantia de qualidade de produtos farmacêuticos;</p><p>Conhecer a eficácia dos conservantes;</p><p>Dominar quais os limites de micróbios em substâncias não estéreis;</p><p>Indicar como funciona o laboratório de uma indústria farmacêutica.</p><p>Análise de produtos não estéreis</p><p>Controle microbiológico de</p><p>produtos farmacêuticos não</p><p>estéreis e de imunoterápicos</p><p>Determinação de carga</p><p>microbiana</p><p>Validação de métodos analíticos</p><p>Garantia de qualidade e controle</p><p>biológico</p><p>Análise de produtos estéreis</p><p>Métodos de esterilização</p><p>Avaliação de desinfetantes e</p><p>antissépticos</p><p>Testes de inocuidade de plásticos</p><p>Biossegurança</p><p>Análise de agentes</p><p>antimicrobianos</p><p>Potência de antibióticos</p><p>Teste de eficácia de conservantes</p><p>Análise de vitaminas</p><p>Cromatografia</p><p>Conservantes</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 52</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd</p><p>52 18/01/2021 11:59:46</p><p>Análise de produtos não estéreis</p><p>Entende-se como produtos não estéreis aqueles que podem carregar uma</p><p>quantidade limitada de microrganismos, de modo que não causem patologias</p><p>aos seres vivos com os quais entrem em contato. Quando os produtos farmacêu-</p><p>ticos são referidos, o controle, tanto da quantidade como do tipo de micróbios</p><p>presentes nos medicamentos, é determinado pelas Farmacopeias, nas quais são</p><p>disponibilizados instruções, tabelas e quadros, como, por exemplo, a Tabela 1.</p><p>TABELA 1. LIMITE MICROBIANO DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS</p><p>Limites microbianos para produtos não estéreis</p><p>Via de administração</p><p>Contagem</p><p>total de</p><p>bactérias</p><p>aeróbias</p><p>UFC/g ou mLa</p><p>Contagem</p><p>total de</p><p>fungos UFC/g</p><p>ou mLa</p><p>Pesquisa de patógenosb,c</p><p>1 Produtos acabados de origem sintética ou biológicad</p><p>Aquoso para uso geral 102</p><p>101 Ausência de Escherichia coli em</p><p>1 g ou mL</p><p>Não aquoso para uso oral 103 102 Ausência de Escherichia coli em</p><p>1 g ou mL</p><p>Para uso retal 103 102 -</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>102 101</p><p>Ausência de Staphylococcus</p><p>aureus e Pseudomonas</p><p>aeruginosa em 1 g ou mL</p><p>Inalatórios 102 101</p><p>Ausência de Staphylococcus</p><p>aureus e Pseudomonas aeruginosa</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL</p><p>Para uso vaginal 102 101</p><p>Ausência de Staphylococcus</p><p>aureus e Pseudomonas aeruginosa</p><p>e Candida albicans 1 g ou mL</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade) 102 102</p><p>Ausência de Staphylococcus</p><p>aureus e Pseudomonas</p><p>auruginosa/dispositivo.</p><p>2 Produtos de origem vegetald</p><p>2.1 Produto acabado</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>104 102</p><p>Ausência de Escherichia coli e</p><p>Staphylococcus aureus em 1 g ou</p><p>mL. Ausência de Salmonella em</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>107 104</p><p>Ausência de Escherichia coli em</p><p>1 g. Ausência de Salmonella em 10</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em 1 g.</p><p>Aquoso para uso geralAquoso para uso geralAquoso para uso geral</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Aquoso para uso geral</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Aquoso para uso geral</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Para uso retal</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>Aquoso para uso geral</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Para uso retal</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>Aquoso para uso geral</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Para uso retal</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Para uso retal</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Não aquoso para uso oral</p><p>Para uso retal</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Para uso tópico</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Inalatórios</p><p>10</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Inalatórios</p><p>(oromucosa, nasal, gensival,</p><p>cutâneo, auricular)</p><p>Inalatórios</p><p>Para uso vaginal</p><p>10</p><p>Para uso vaginal</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>10</p><p>Para uso vaginal</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>Para uso vaginal</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>10</p><p>102</p><p>Para uso vaginal</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>10</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>102</p><p>10</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>Ausência de</p><p>102</p><p>Dispositivo transdérmico</p><p>(limite por unidade)</p><p>Ausência de</p><p>Ausência de</p><p>10</p><p>Ausência de</p><p>Ausência de</p><p>10</p><p>Ausência de Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>Ausência de</p><p>10</p><p>10</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>aeruginosa</p><p>Escherichia coli em Escherichia coli em Escherichia coli</p><p>Escherichia coli</p><p>1 g ou mL</p><p>-</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>aeruginosa</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>101</p><p>em</p><p>Escherichia coli</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>aeruginosa</p><p>Ausência de</p><p>aureus e</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>em</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>aeruginosa em 1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>Pseudomonas</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerante</p><p>102</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerante</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerante</p><p>Ausência de</p><p>aureus e</p><p>e Candida</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Ausência de</p><p>Pseudomonas</p><p>Candida</p><p>Ausência de</p><p>Staphylococcus</p><p>aeruginosa</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>Candida</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>Staphylococcus</p><p>aeruginosa</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>albicans</p><p>Ausência de</p><p>aureus</p><p>auruginosa</p><p>aeruginosa</p><p>e bactéria Gram negativa bile</p><p>em 1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>albicans</p><p>Ausência de Staphylococcus</p><p>e</p><p>auruginosa</p><p>Staphylococcus</p><p>aeruginosa</p><p>1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>auruginosa</p><p>Staphylococcus</p><p>aeruginosa</p><p>1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>/dispositivo.</p><p>aeruginosa</p><p>1 g ou mL</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>/dispositivo.</p><p>Staphylococcus</p><p>Pseudomonas</p><p>/dispositivo./dispositivo.</p><p>Para uso oral, contendo insumo Para uso oral, contendo insumo Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>Para uso oral, contendo insumo</p><p>ativo que foi submetido a</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>pré-tratamento que reduz a</p><p>carga microbiana</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>10</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>Para uso oral que será submetido</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>a processo extrativo a quente (por</p><p>exemplo, infusões ou decocções).</p><p>10</p><p>10</p><p>Ausência de</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>Ausência de</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>mL. Ausência de</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>Ausência de</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>mL. Ausência de</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>10</p><p>Ausência de Escherichia coli e</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>mL. Ausência de</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>Escherichia coli e</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>mL. Ausência de</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Ausência de</p><p>1 g. Ausência de</p><p>Escherichia coli e</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>mL. Ausência de Salmonella</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Ausência de</p><p>1 g. Ausência de</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Escherichia coli e</p><p>em 1 g ou</p><p>Salmonella</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Ausência de</p><p>1 g. Ausência de</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>Escherichia coli e</p><p>em 1 g ou</p><p>Salmonella</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Ausência de Escherichia</p><p>1 g. Ausência de</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em 1 g ou</p><p>Salmonella em</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Escherichia</p><p>1 g. Ausência de</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Escherichia</p><p>Salmonella</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>10 g ou 10 mL. Limite máximo de</p><p>102 bactéria Gram negativa bile</p><p>tolerantee em 1 g ou mL.</p><p>Escherichia coli</p><p>Salmonella</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em 1 g.</p><p>coli em coli em coli</p><p>Salmonella em 10</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em 1 g.</p><p>em</p><p>em 10</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee</p><p>em 10</p><p>g. Limite máximo de 104 bactéria</p><p>Gram negativa bile tolerantee Gram negativa bile tolerantee</p><p>Fonte: ANVISA, 2019, p. 413. (Adaptado).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 53</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 53 18/01/2021 11:59:47</p><p>A contaminação de medicamentos não estéreis, como cápsulas, comprimidos</p><p>e xaropes, com quantidades maiores do que as relacionadas na Tabela 1, pode</p><p>acarretar em graves prejuízos aos seres humanos. Algumas bactérias, por exem-</p><p>plo, a E. coli e a Salmonella, quando são ingeridas, mesmo que em quantidades pe-</p><p>quenas, podem causar doenças que acarretam em morte. Desse modo, garantir</p><p>a qualidade desses medicamentos é imprescindível para que seja assegurada sua</p><p>efi cácia. Faz-se necessária a aplicação de testes que sigam a metodologia descrita</p><p>na farmacopeia, chamada de ensaios microbiológicos para produtos não estéreis.</p><p>Controle microbiológico de produtos farmacêuticos não</p><p>estéreis e de imunoterápicos</p><p>Considera-se que, uma vez contaminado, o produto sofrerá mudanças em di-</p><p>versas características, de modo que algumas substâncias apresentem tendência à</p><p>contaminação, como medicamentos com grande quantidade de água em sua com-</p><p>posição, e também os de origem vegetal, animal e mineral. Assim, esses tipos de</p><p>fórmula farmacêutica devem ser submetidos a testes frequentemente, assim como</p><p>os medicamentos que possuem compostos propícios para o desenvolvimento de</p><p>patógenos. A exceção à regra são os produtos que têm adicionado, em sua fórmula,</p><p>conservantes ou valores de pH muito altos ou baixos, cuja probabilidade do cresci-</p><p>mento de micróbios é mais baixa, logo, a realização de testes é mais espaçada.</p><p>Figura 1. Capela de fl uxo laminar. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 15/10/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 54</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 54 18/01/2021 11:59:48</p><p>Para que o ensaio seja válido, é necessário que seja demonstrada a ausência da</p><p>atividade microbiana na amostra coletada. Para isso, o procedimento deve ser exe-</p><p>cutado em capela de fl uxo laminar (Figura 1), empregando a técnica de antissepsia</p><p>em todos os matérias utilizados. Prepara-se o meio de cultura adequado para o tipo</p><p>de medicamento que se pretende fazer o estudo e, após a obtenção dos resultados,</p><p>é realizada a comparação com os valores disponibilizados na tabela de limite micro-</p><p>biano. Se os valores forem maiores do que os aceitáveis, o lote deverá ser descartado.</p><p>Desse modo, a fi m de evitar a perda de lotes de produção de medicamento, as</p><p>grandes indústrias possuem áreas especifi cas para o controle de qualidade de seus</p><p>produtos. Amostras de todos os lotes são retiradas e enviadas ao laboratório in-</p><p>terno para serem testadas se estão dentro dos parâmetros solicitados antes que o</p><p>medicamento seja comercializado.</p><p>Os medicamentos à base de plantas que necessitam de uma maior manipula-</p><p>ção devido à colheita e tratamento têm grandes chances de estarem contaminados</p><p>por fungos e bactérias, por isso são alvos de muitos estudos para se obter técnicas</p><p>que evitem essa contaminação. Com o avanço da tecnologia e da esterilização, as</p><p>técnicas empregadas para destruir microrganismos sem afetar as propriedades dos</p><p>medicamentos estão cada vez mais presentes das indústrias farmacêuticas.</p><p>Além disso, existem os medicamentos utilizados na imunoterapia, ou seja, ad-</p><p>ministrados para o tratamento de câncer. Nesses casos, o critério passa a ser um</p><p>pouco mais rígido, uma vez que pessoas portadoras desse tipo de patologia tendem</p><p>a ter uma imunidade mais baixa, ou seja, suas células de defesa já estão trabalhando</p><p>bastante a fi m de proteger o corpo contra o crescimento anormal de células. Assim,</p><p>o contato com microrganismos que causam doenças, mesmo em pequenas quanti-</p><p>dades, pode causar danos irreversíveis.</p><p>Determinação de carga microbiana</p><p>Para a análise do produto é necessário levar em conta a ausência de microrga-</p><p>nismos patógenos, os quais não são aceitos mesmo que a quantidade presente seja</p><p>mínima. Da mesma forma, os classifi cados como saprófi tos podem ser potencial-</p><p>mente mortais caso consigam se multiplicar no ser humano. Portanto, a presença</p><p>de alguns tipos de cepas comprovadamente patogênicas não pode ocorrer conside-</p><p>rando o risco eminente gerado.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 55</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 55 18/01/2021 11:59:48</p><p>EXPLICANDO</p><p>Diferentes tipos de seres vivos podem ser classificados como saprófitos, por</p><p>exemplo, as bactérias e os fungos. O que os define como tal é a capacidade</p><p>de se alimentar de matéria orgânica em decomposição, como as bactérias</p><p>encontradas em cadáveres de animais e plantas. Portanto, podem ser</p><p>consideradas perigosas para a saúde humana, de modo que não é aceitável</p><p>encontrá-las em medicamentos, mesmo em pouca quantidade.</p><p>Vale salientar que as bactérias e os vírus produzem descendentes com</p><p>material semelhante ao deles, mas, de tempos em tempos, ocorre uma</p><p>alteração na carga genética, como se fosse uma melhoria para poderem</p><p>sobreviver. Isto é, eles evoluem e produzem “filhos” mais resistentes, bem</p><p>como mais perigosos, aos quais denominamos de cepas. Essas, por sua</p><p>vez, podem ser encontradas em diferentes locais, como objetos, água e</p><p>comida, sendo que, uma vez em contato com o ser humano, podem se</p><p>multiplicar e desenvolver doenças. Nem todas são perigosas, mas é neces-</p><p>sário fazer uma análise mais específica visando determinar quais os tipos</p><p>de cepa estão presentes no medicamento.</p><p>Figura 2. Placa de petri para cultura microbiana. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 23/10/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 56</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 56 18/01/2021 11:59:49</p><p>Uma das formas de analisar o tipo de microrganismo encontrado em amos-</p><p>tras analisadas é a utilização da placa de petri (Figura 2). Fabrica-se o meio de</p><p>cultura específi ca para cada tipo de bactéria que se deseja estudar e, com um</p><p>swab, a amostra é delicadamente deslizada em cima no meio, devendo aguar-</p><p>dar uns dias para que o ser vivo possa se reproduzir. Ressalta-se que o local</p><p>e temperatura devem estar adequados e favoráveis para o desenvolvimento.</p><p>Dessa forma, é possível determinar que classes de bactérias estão presentes</p><p>na amostra.</p><p>Validação de métodos analíticos</p><p>A validação de método analítico é regulamentada pela instituição ameri-</p><p>cana Food Drugs Administration (FDA), com o intuito de garantir que os re-</p><p>sultados obtidos nos testes realizados possam ser confi áveis. Com isso, fi ca</p><p>determinado que o controle não é feito apenas para que o produto seja sim-</p><p>plesmente aprovado ou reprovado, mas, também, objetiva verifi car se as ca-</p><p>racterísticas encontradas após os testes estão corretas. Como em todo teste,</p><p>há uma margem de erro que pode ocorrer por diferentes fatores,</p><p>sendo que,</p><p>nesse caso, a Resolução nº. 899 (BRASIL, 2003) determina que a margem de</p><p>erro aceitável, chamada de desvio-padrão relativo (DPR), seja de até 5%.</p><p>Assim, desenvolveu-se uma fórmula capaz de calcular a capacidade do sis-</p><p>tema de medição, tal qual é dada pela seguinte equação:</p><p>Sendo:</p><p>6σ = variação de medida;</p><p>LSE = limite superior de especifi cação;</p><p>LIE = limite inferior de especifi cação.</p><p>Os valores encontrados abaixo de 10% são ideais, entretanto, os acima de</p><p>30% são inaceitáveis.</p><p>Importante lembrar que as vidrarias utilizadas dentro do laboratório, prin-</p><p>cipalmente as destinadas ao controle de qualidade, devem ser calibradas, ou</p><p>seja, necessitam passar por um processo de qualifi cação e quantifi cação que</p><p>garanta que as medidas determinadas sejam exatamente como as indicadas.</p><p>% = 100</p><p>P</p><p>T</p><p>6σ</p><p>LSE-LIE</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 57</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 57 18/01/2021 11:59:49</p><p>Além disso, esse processo deve ser realizado por um local que tenha validação</p><p>e que certifique, mediante documentação, que a calibração foi realizada dentro</p><p>das normas estabelecidas pela RDC n. 17 (BRASIL, 2010).</p><p>Contudo, as vidrarias e os testes realizados são desenvolvidos por seres hu-</p><p>manos e, assim, passíveis de erros. Quando o mesmo teste é feito por muitas</p><p>pessoas ou locais diferentes, pode haver influência por ação do local, tempera-</p><p>tura, ou até mesmo saúde mental do profissional, entre outros. Assim sendo,</p><p>é interessante que o mesmo tipo de teste seja feito algumas vezes no mesmo</p><p>local e pela mesma pessoa.</p><p>Desse modo, o método de validação tem características específicas, como</p><p>prezar pela exatidão e também pela especificidade dos resultados obtidos. Para</p><p>isso, o procedimento deve ser realizado várias vezes até que seja alcançado o</p><p>resultado mais confiável. Como requisitos mínimos, deve ser possível separar</p><p>a substância a ser analisada de outras que podem estar agregadas, interferin-</p><p>do no procedimento. Vale destacar que existem variáveis que podem afetar</p><p>diretamente os resultados, como a estabilidade dessa substância na amostra.</p><p>Outro ponto importante é definir em quais condições o laboratório se encon-</p><p>tra, assim como a experiência do analista, para que seja possível uma maior pre-</p><p>cisão dos resultados. Da mesma forma, os limites de detecção e quantificação</p><p>são fatores determinantes para se obter os resultados almejados. A reproduti-</p><p>bilidade do teste é imprescindível para garantir a conclusão mais exata possível.</p><p>Figura 3. Setores da indústria farmacêutica. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 23/10/2020.</p><p>Pesquisa e</p><p>desenvolvimento Vendas em</p><p>farmáciasControle de qualidade</p><p>e empacotamento</p><p>Produção de remédios</p><p>Produtos prontos</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 58</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 58 18/01/2021 11:59:51</p><p>Na Figura 3, é possível visualizar um esquema de como são distribuídos</p><p>os principais setores da indústria farmacêutica. Primeiramente, o nascimento</p><p>de um fármaco acontece no setor de pesquisa e desenvolvimento, também</p><p>conhecido como PID. Nessa etapa, a pesquisa visa estabelecer qual tipo de fár-</p><p>maco será produzido, de qual forma e com qual intuito, bem como a forma que</p><p>será o desenvolvimento e avaliação de todo o processo. Uma vez fi nalizado o</p><p>estudo, o processo segue para a área de produção de medicamentos propria-</p><p>mente dita, onde o medicamento é produzido. Contudo, para que possa ser</p><p>liberado para a venda, é preciso que o mesmo passe pelo departamento de</p><p>controle de qualidade, quando é garantido que o produto está dentro das es-</p><p>pecifi cações preestabelecidas. Logo, sendo os resultados favoráveis, esse será</p><p>empacotado e enviado para venda em farmácias e drogarias.</p><p>Garantia de qualidade e controle biológico</p><p>Quando se fala de qualidade e, ainda, sobre garanti-la, é preciso considerar</p><p>que existem leis, regras e determinações para determinar quais os parâmetros</p><p>adequados para cada situação, visto que, se dependesse apenas da prática e</p><p>qualidade consideradas por cada analista, haveria uma grande divergência.</p><p>A garantia de qualidade engloba várias etapas, como a pesquisa e o de-</p><p>senvolvimento do produto dentro das normas, e boas práticas de fabricação,</p><p>cumprindo as especifi cações estabelecidas. Para que a produção seja feita da</p><p>forma correta, há necessidade de comprar produtos de qualidade e estabele-</p><p>cer um planejamento das etapas a serem seguidas.</p><p>Controle de qualidade (CQ)</p><p>Deve haver um</p><p>departamento de</p><p>controle de</p><p>qualidade para cada</p><p>área de funcionamento</p><p>Cada departamento</p><p>deve ter</p><p>autonomia própria</p><p>O profi ssional</p><p>responsável deve ser</p><p>qualifi cado e experiente</p><p>DIAGRAMA 1. DEPARTAMENTOS DO CONTROLE DE QUALIDADE</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 59</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 59 18/01/2021 11:59:51</p><p>O controle de qualidade é responsável pelos testes realizados nas amostras</p><p>retiradas de cada lote dos produtos da linha de produção e enviado para o</p><p>laboratório. Além dos procedimentos envolvidos, em alguns casos, é relevante</p><p>que seja preparada a documentação que ateste os resultados obtidos e apon-</p><p>tam que a qualidade do produtor está dentro dos paramentos aceitáveis. No</p><p>Diagrama 1, observa-se como pode ser divididas as áreas dentro do departa-</p><p>mento de controle de qualidade.</p><p>Desse modo, durante o processo de controle de qualidade, é importante</p><p>considerar requisitos básicos, tais como: métodos de testes validados, investi-</p><p>gar falhas no aparecimento de qualquer desvio, utilizar matérias-primas com</p><p>a pureza correta, além de recipientes adequados e a rotulagem correta. É im-</p><p>prescindível a leitura dos rótulos para que não ocorra desvios dos quais não se</p><p>consiga explicar.</p><p>Análise de produtos estéreis</p><p>Produto estéril consiste em quando há total ausência de seres que podem</p><p>se multiplicar, visto que a garantia de que um produto isolado está realmente</p><p>estéril não pode ser demonstrada e, sim, aceita por meios de probabilidade</p><p>através de um método de validação previamente aprovado. Nem sempre o mi-</p><p>crorganismo é eliminado do produto, pois pode ser que haja uma inativação do</p><p>mesmo por meios químicos e físicos, havendo chances de sobrevivência.</p><p>Assim, deve ser realizado um cálculo de probabilidade a fi m de contabilizar</p><p>qual a porcentagem de chance de um determinado ser sobreviver a tal método,</p><p>viabilizando a escolha mais segura para esterilização de um produto.</p><p>Métodos de esterilização</p><p>O objetivo da esterilização é eliminar todas as formas de vida que possa existir</p><p>no produto. No entanto, para que seja efi caz, é importante conhecer qual tipo de</p><p>micróbio pode constar na amostra, ou seja, qual tipo tem maior facilidade para</p><p>reprodução. Informações acerca do meio em que se encontra o medicamento,</p><p>seja líquido ou sólido, ou ainda, se o excipiente utilizado contém mais açúcar ou</p><p>mais ácido, infl uenciam na capacidade de reprodução dos microrganismos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 60</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 60 18/01/2021 11:59:51</p><p>O conhecimento prévio da amostra e dos seres que têm maior probabilidade de</p><p>serem encontrados é fundamental para que o método de esterilização elegido seja</p><p>efi caz. Vale lembrar que é necessário cumprir as exigências descritas para cada pro-</p><p>duto objetivando seguir a padronização adotada pelos órgãos responsáveis.</p><p>Processo de</p><p>esterilização</p><p>Valor D</p><p>(minutos)</p><p>Faixa de valor</p><p>D para seleção</p><p>de indicador</p><p>biológico</p><p>(minutos)</p><p>Limites para resistência adequada</p><p>(dependente do valor D em minutos)</p><p>Tempo de</p><p>sobrevivência Tempo de morte</p><p>Calor secoa</p><p>(160 ºC) 1,9 Mín. 1,0</p><p>Máx. 3,0</p><p>Mín. 4,0</p><p>Máx. 14,0</p><p>10,0</p><p>32,0</p><p>Óxido de</p><p>etilenob</p><p>(600 mg/L,</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>3,5 Mín. 2,5</p><p>Máx. 5,8</p><p>Mín. 10,0</p><p>Máx. 27,0</p><p>25,0</p><p>68,0</p><p>Calor úmidoc</p><p>(121 ºC) 1,9 Mín. 1,5</p><p>Máx. 3,0</p><p>Mín. 4,5</p><p>Máx. 14,0</p><p>13,5</p><p>32,0</p><p>apara 1,0 x 106 a 5,0 x 106 esporos / carreador</p><p>bpara 1,0 x 106 a 5,0 x 107 esporos / carreador</p><p>cpara 1,0 x 105 a 5,0 x 106esporos / carreador</p><p>TABELA 2. CARACTERÍSTICAS EXEMPLIFICATIVAS</p><p>DE SISTEMA DE INDICADORES</p><p>BIOLÓGICOS DISPONÍVEIS COMERCIALMENTE</p><p>Calor secoa Calor secoa Calor secoa</p><p>(160 ºC)</p><p>Calor secoa</p><p>(160 ºC)</p><p>Óxido de</p><p>etilenob</p><p>Óxido de</p><p>etilenob</p><p>(600 mg/L,</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>Óxido de</p><p>etilenob</p><p>(600 mg/L,</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>Calor úmidoc</p><p>(600 mg/L,</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>Calor úmidoc</p><p>1,9</p><p>(600 mg/L,</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>Calor úmidoc</p><p>(121 ºC)</p><p>apara 1,0 x 10</p><p>54 ºC, 60% UR)</p><p>Calor úmidoc</p><p>(121 ºC)</p><p>apara 1,0 x 10</p><p>bpara 1,0 x 10</p><p>Calor úmidoc</p><p>(121 ºC)</p><p>apara 1,0 x 10</p><p>bpara 1,0 x 10</p><p>cpara 1,0 x 10</p><p>3,5</p><p>apara 1,0 x 10</p><p>bpara 1,0 x 10</p><p>cpara 1,0 x 10</p><p>Mín. 1,0</p><p>a 5,0 x 10</p><p>bpara 1,0 x 106</p><p>cpara 1,0 x 10</p><p>Mín. 1,0</p><p>Máx. 3,0</p><p>1,9</p><p>a 5,0 x 10</p><p>a 5,0 x 10</p><p>cpara 1,0 x 10 a 5,0 x 10</p><p>Mín. 1,0</p><p>Máx. 3,0</p><p>1,9</p><p>a 5,0 x 106</p><p>a 5,0 x 10</p><p>a 5,0 x 10</p><p>Máx. 3,0</p><p>Mín. 2,5</p><p>Máx. 5,8</p><p>esporos / carreador</p><p>a 5,0 x 10 esporos / carreador</p><p>a 5,0 x 10</p><p>Mín. 2,5</p><p>Máx. 5,8</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>Mín. 4,0</p><p>Mín. 2,5</p><p>Máx. 5,8</p><p>Mín. 1,5</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>Mín. 4,0</p><p>Máx. 14,0</p><p>Mín. 1,5</p><p>Máx. 3,0</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>Mín. 4,0</p><p>Máx. 14,0</p><p>Mín. 1,5</p><p>Máx. 3,0</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>Máx. 14,0</p><p>Mín. 10,0</p><p>Máx. 3,0</p><p>esporos / carreador</p><p>esporos / carreador</p><p>Mín. 10,0</p><p>Máx. 27,0</p><p>Mín. 10,0</p><p>Máx. 27,0 Máx. 27,0</p><p>Mín. 4,5</p><p>Máx. 14,0</p><p>Mín. 4,5</p><p>Máx. 14,0</p><p>10,0</p><p>32,0</p><p>Máx. 14,0</p><p>32,0</p><p>25,0 25,0</p><p>68,0 68,0</p><p>13,5</p><p>32,032,0</p><p>Fonte: ANVISA, 2019, p. 699.</p><p>A Tabela 2 é um trecho retirado da Farmacopeia brasileira (ANVISA, 2019),</p><p>que traz características de três formas de esterilização. O valor D informa o</p><p>tempo de redução decimal, ou seja, o tempo necessário para que a população</p><p>microbiana caia em 90%. Em seguida, aparecem os valores da faixa de valor D</p><p>para seleção de indicador biológico, que é um produto que teria a mesma resis-</p><p>tência do micróbio contra o processo de esterilização, facilitando a visualização</p><p>da efi cácia do processo.</p><p>Nas duas últimas colunas da Tabela 2, constam o tempo de sobrevivência e</p><p>o tempo de morte, ambos valores dependentes do valor D e da resistência dos</p><p>micróbios. Na primeira linha, é apontada a especifi cação de um tipo de método</p><p>físico, que ocorre por calor. Nesse caso, trata-se de calor seco, que esteriliza a tem-</p><p>peraturas em torno de 160 ºC. Da mesma maneira, na terceira linha, há as caracte-</p><p>rísticas do calor úmido, que ocorre em conjunto com temperatura – em torno de</p><p>121° – e umidade. No que diz respeito ao óxido de etileno, caracteriza-se por ser</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 61</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 61 18/01/2021 11:59:51</p><p>um método químico que utiliza gás óxido de etileno, empregado em produtos que</p><p>não suportam altas temperaturas, haja vista que a esterilização, nesse caso, se dá</p><p>a temperaturas em torno de 54 ºC.</p><p>Vale salientar que a maneira mais simples, rápida e segura de esterilização</p><p>é por calor, seja o úmido ou o seco; porém, a sensibilidade dos microrganismos</p><p>varia bastante, principalmente daqueles que possuem formas de esporos.</p><p>EXPLICANDO</p><p>Esporo é a forma latente de alguns tipos de seres vivos, ou seja, quando</p><p>bactérias estão em um meio que não seja propício para desenvolvimento,</p><p>elas se transformam em esporos pelo processo de esporogênese. Assim,</p><p>ficam envolvidas por uma cápsula que as protegem. Desse modo, conse-</p><p>guem sobreviver por muito tempo em um ambiente desfavorável até que</p><p>surjam condições melhores para que possam se reproduzir.</p><p>Os métodos físicos são classificados em quatro tipos mais importantes: o</p><p>calor seco, o calor úmido, a radiação ionizante e a filtração. Os dois primeiros,</p><p>como já citado anteriormente, se diferem pela temperatura e pela porcenta-</p><p>gem de umidade empregada no processo. A radiação ionizante ocorre pela</p><p>emissão de energia em forma de ondas eletromagnéticas que, ao se choca-</p><p>rem, produzem radicais livres, como a hidroxila e peróxidos, que lesionam a</p><p>célula do micróbio.</p><p>Por fim, temos o método de filtração, utilizado em medicamentos sensíveis</p><p>à temperatura, porém, o material poroso utilizado não deve soltar impurezas</p><p>visando impedir a contaminação do produto final. Além disso, o tamanho do</p><p>poro precisa ser menor do que os microrganismos que podem contaminar a</p><p>amostra. Vale destacar que a escolha é de responsabilidade do profissional</p><p>incumbido pelo procedimento.</p><p>No método químico podemos utilizar o gás de óxido de etileno. Geral-</p><p>mente, emprega-se em materiais termossensíveis. Nesses casos, há neces-</p><p>sidade de inserir o material dentro de uma câmara de pressão adequada.</p><p>Existem desvantagens nesse processo, como a alta capacidade de mutação</p><p>que o óxido de etileno possui. Os indicadores biológicos utilizados para que</p><p>seja feita a simulação de sobrevivência são específicos para validar a taxa de</p><p>mortalidade de esporos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 62</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 62 18/01/2021 11:59:52</p><p>Avaliação de desinfetantes e antissépticos</p><p>A função dos desinfetantes é des-</p><p>truir os microrganismos tanto de</p><p>maneira aleatória como selecionada,</p><p>seja em ambientes ou em objetos.</p><p>Quando o cloro, por exemplo, é de-</p><p>tectado em amostras de água, é ne-</p><p>cessário que se faça a neutralização</p><p>antes de realizar os testes, para que</p><p>o microrganismo presente possa se</p><p>multiplicar e, enfi m, saber se há con-</p><p>taminação ou não. Isto ocorre porque</p><p>alguns esporos conseguem se manter durante muito tempo encapsulados</p><p>em ambientes com presença de desinfetantes, até que a situação se torne</p><p>mais favorável para o seu desenvolvimento.</p><p>Devemos conhecer algumas das classifi cações, objetivando escolher o</p><p>melhor produto a ser utilizado dependendo da necessidade, uma vez que as</p><p>determinações no método de validação conceituam as substâncias necessá-</p><p>rias para cada. Nesse contexto, existem os antissépticos que são de natureza</p><p>química e utilizados em organismos vivos com o propósito de eliminar ou blo-</p><p>quear o desenvolvimento dos mesmos, garantindo a segurança do ser vivo.</p><p>Outro conceito importante é o termo antibacteriano. Sua função é agir</p><p>contra as bactérias, levando-as à morte ou, ao menos, reduzindo a quantida-</p><p>de encontrada na amostra. Por mais que algumas pessoas acreditem que seja</p><p>mais potente que os desinfetantes, essa ideia não é verdade. É importante es-</p><p>clarecer que existem também os antimicrobianos, muitas vezes confundidos</p><p>com os antibacterianos, porém agem contra micróbios e não especifi camente</p><p>contra bactérias.</p><p>Já um agente esterilizante diz respeito àquele produto que é capaz de eli-</p><p>minar todos os microrganismos, incluindo os esporos. Alguns desinfetantes</p><p>podem ser considerados esterilizante quando são capazes de manter em con-</p><p>tato com uma superfície inanimada durante um tempo prolongado e eliminar</p><p>todos os seres vivos presente, como bactérias, fungos, vírus, dentre outros.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 63</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 63 18/01/2021 11:59:53</p><p>Sensibilidade microbiana Microrganismos</p><p>1 Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>2 Bactérias vegetativas</p><p>3 Bolores ascósporos (Aspergillus brasiliensis)</p><p>4 Cistos (Giardia spp.)</p><p>5 Micobactérias (Mycobacterium tuberculosi)</p><p>6 Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>TABELA 3. RESISTÊNCIA DOS SERES VIVOS AOS DESINFETANTES, EM ORDEM CRESCENTE</p><p>2</p><p>3</p><p>5</p><p>6</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Micobactérias (</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Micobactérias (</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Bolores ascósporos (</p><p>Cistos (</p><p>Micobactérias (</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Bolores ascósporos (Aspergillus brasiliensis</p><p>Cistos (</p><p>Micobactérias</p><p>(</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Cistos (Giardia spp.</p><p>Micobactérias (</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Vírus lipídico (coronavírus)</p><p>Bactérias vegetativas</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Giardia spp.</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Giardia spp.</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Giardia spp.</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Aspergillus brasiliensis</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Aspergillus brasiliensis)</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Mycobacterium tuberculosi</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Mycobacterium tuberculosi)</p><p>Príons (encefalopatias transmissíveis)Príons (encefalopatias transmissíveis)</p><p>Na Tabela 3 são citados alguns microrganismos, alinhados de acordo com</p><p>as respectivas capacidades de resistência aos desinfetantes. Assim, um vírus</p><p>como o coronavírus é mais facilmente destruído quando comparado a uma</p><p>micobactéria, como a que desenvolve a patologia conhecida como tuberculose.</p><p>Podemos perceber que a capacidade de um desinfetante também depende de</p><p>quão resistente é o micróbio que necessita ser destruído.</p><p>Testes de inocuidade de plásticos</p><p>Além dos testes mencionados para amostras de substâncias como os fár-</p><p>macos, existe a necessidade de garantir que a embalagem do produto também</p><p>esteja dentro das especifi cações. Assim, são realizados testes nas embala-</p><p>gens de plásticos, visando garantir que substâncias potencialmente tóxicas</p><p>utilizadas na produção da embalagem não sejam liberadas quando em contato</p><p>com soluções farmacêuticas.</p><p>CONTEXTUALIZANDO</p><p>Antigamente, para saber se uma embalagem plástica apresentava toxici-</p><p>dade, eram realizados testes em roedores. No entanto, ocorreu a chamada</p><p>tragédia da talidomida, que serviu como divisor de águas para a mudança</p><p>desse tipo de teste (MORO; INVERNIZZI, 2017). Na época, em meados dos</p><p>anos 1950, não havia regulamentação acerca da maneira como as subs-</p><p>tâncias seriam testadas e, assim, em uma determinada produção utilizan-</p><p>do essa substância, os resultados obtidos foram favoráveis. Contudo essa</p><p>medicação causou sérios danos irreversíveis nos seres humanos, compro-</p><p>vando a inefi cácia dos testes até então empregados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 64</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 64 18/01/2021 11:59:53</p><p>Vale salientar que não existe nenhuma espécie animal que reaja exatamen-</p><p>te igual ao corpo humano com qualquer tipo de substância estudada, mas são</p><p>realizados testes com outras espécies, seguindo protocolos rígidos e adotando</p><p>porcentagem de erros ocasionais. Além disso, os resultados devem ser cruza-</p><p>dos com os experimentos feitos em laboratório a fim de concluir pelo resultado</p><p>mais próximo possível de reações que podem surgir com o uso de tal medica-</p><p>mento. Geralmente os animais são ratos e camundongos, pois além de ser fi-</p><p>nanceiramente mais vantajoso, já existem plataformas com os dados genéticos</p><p>deles, o que facilita o trabalho dos pesquisadores. Testes também podem ser</p><p>aplicados em outras espécies, ainda que em menor número, como cachorros e</p><p>porcos, após a padronização correta para o teste solicitado.</p><p>A Figura 4 ilustra a linha de produção de embalagens plásticas utilizadas</p><p>para armazenar medicamentos que não são fotossensíveis. Após esse proces-</p><p>so, tanto o frasco como a tampa devem passar por um controle de qualidade</p><p>em cultivo celular para garantir que não liberem substâncias citotóxicas. Uma</p><p>vez comprovado, esse material passa a ser considerado biocompatível.</p><p>Os experimentos realizados são separados em categorias de acordo com</p><p>o tipo de substância com a qual a embalagem teve contato. Logo, são usados</p><p>como parâmetros os aspectos já regulamentados pelos órgãos competentes,</p><p>considerando três categorias: de superfície, de comunicação externa ou im-</p><p>plantáveis. Cada uma dessas categorias é dividida em subcategorias, que sepa-</p><p>ram os locais de contato, o tempo e o risco que pode existir, dependendo se o</p><p>tempo é limitado, prolongado ou permanente.</p><p>Figura 4. Linha de produção de embalagem plástica. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 28/10/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 65</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 65 18/01/2021 11:59:54</p><p>NB Agentes Práticas Equipamento de</p><p>segurança</p><p>Instalações (Barreiras</p><p>secundárias)</p><p>1.</p><p>Que não são</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>Práticas Padrões de</p><p>microbiologia Não são necessários Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>2.</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>risco = lesão</p><p>percutânea,</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>mucosa</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>- Aviso de risco</p><p>biológico</p><p>- Precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes</p><p>- Manual de</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>NB-1 mais: autoclave</p><p>3.</p><p>Agentes exóticos</p><p>com potencial</p><p>para transmissão</p><p>via aerossol; a</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>ou até fatais</p><p>Práticas de NB-2</p><p>mais:</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção usados</p><p>para todas as</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>necessária</p><p>NB-2 mais:</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Portas de</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>automático</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>recirculante</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>4.</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>e ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol; ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>saída</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>Barreiras primárias</p><p>= todos os</p><p>procedimentos</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Edifício separado ou</p><p>área isolada</p><p>- Sistema de</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>Biossegurança</p><p>A biossegurança é um conceito que está inserido nas Boas Práticas de La-</p><p>boratório (BPL), que podem ser classifi cadas em níveis (Quadro 1). Dentro do</p><p>laboratório é extremamente importante garantir a segurança dos profi ssionais</p><p>e, para tal, conhecer os riscos é fundamental para formular protocolos e padro-</p><p>nizar quais procedimentos devem ser adotados.</p><p>QUADRO 1. NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA</p><p>1.</p><p>Que não são</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>Que não são</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>Que não são</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>Que não são</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>conhecidos por</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>2.</p><p>causarem doenças</p><p>em adultos sadios</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>em adultos sadios</p><p>Práticas Padrões de</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>Práticas Padrões de</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>risco = lesão</p><p>percutânea,</p><p>ingestão, exposição</p><p>Práticas Padrões de</p><p>microbiologia</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>risco = lesão</p><p>percutânea,</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>Práticas</p><p>Padrões de</p><p>microbiologia</p><p>Associados com</p><p>doenças humanas,</p><p>risco = lesão</p><p>percutânea,</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>Práticas Padrões de</p><p>microbiologia</p><p>doenças humanas,</p><p>risco = lesão</p><p>percutânea,</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>mucosa</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>Práticas Padrões de</p><p>microbiologia</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>mucosa</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>- Aviso de risco</p><p>ingestão, exposição</p><p>da membrana</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>- Aviso de risco</p><p>Não são necessários</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>- Aviso de risco</p><p>biológico</p><p>- Precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes</p><p>Não são necessários</p><p>Prática de NB-1 mais:</p><p>- Acesso limitado</p><p>- Aviso de risco</p><p>biológico</p><p>- Precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes</p><p>biossegurança que</p><p>Não são necessários</p><p>- Aviso de risco</p><p>biológico</p><p>- Precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes</p><p>- Manual de</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>Barreiras primárias</p><p>Não são necessários</p><p>- Precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes</p><p>- Manual de</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>Não são necessários</p><p>perfurocortantes</p><p>- Manual de</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>Não são necessários</p><p>perfurocortantes</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>biossegurança que</p><p>defi na qualquer</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>Barreiras primárias</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>descontaminação de</p><p>objetos ou nomes de</p><p>vigilância médicas</p><p>= Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>com pias próximas</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>NB-1 mais: autoclave</p><p>especiais como uso</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>NB-1 mais: autoclave</p><p>de aventais, luvas,</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>NB-1 mais: autoclave</p><p>proteção para o rosto</p><p>quando necessário</p><p>NB-1 mais: autoclave NB-1 mais: autoclave NB-1 mais: autoclave</p><p>3.</p><p>Agentes exóticos Agentes exóticos</p><p>com potencial</p><p>para transmissão</p><p>Agentes exóticos</p><p>com potencial</p><p>para transmissão</p><p>via aerossol; a</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>Agentes exóticos</p><p>com potencial</p><p>para transmissão</p><p>via aerossol; a</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>Agentes exóticos</p><p>com potencial</p><p>para transmissão</p><p>via aerossol; a</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>ou até fatais</p><p>para transmissão</p><p>via aerossol; a</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>ou até fatais</p><p>Práticas de NB-2</p><p>doença pode ter</p><p>consequências séries</p><p>ou até fatais</p><p>Práticas de NB-2</p><p>- Acesso controlado</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>consequências séries</p><p>ou até fatais</p><p>Práticas de NB-2</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>4.</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>consequências séries</p><p>Práticas de NB-2</p><p>mais:</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>Práticas de NB-2</p><p>mais:</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>e ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>Práticas de NB-2</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>e ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>quando necessário</p><p>- Acesso controlado</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>e ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol; ou</p><p>quando necessário</p><p>- Descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>risco de doenças</p><p>e ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol; ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>quando necessário</p><p>- Descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol; ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>quando necessário</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção usados</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol; ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão</p><p>- Mudança de roupa</p><p>quando necessário</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção usados</p><p>para todas as</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>via aerossol; ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>- Amostra sorológica</p><p>Barreiras primárias</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção usados</p><p>para todas as</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>= cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção usados</p><p>para todas as</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>contenção usados</p><p>para todas as</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>- Separação física dos</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>saída</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>necessária</p><p>NB-2 mais:</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Mudança de roupa</p><p>antes de entrar</p><p>- Banho de ducha na</p><p>saída</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais,</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>necessária</p><p>NB-2 mais:</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Banho de ducha na</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>Barreiras primárias</p><p>luvas, proteção</p><p>respiratória quando</p><p>necessária</p><p>NB-2 mais:</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Portas de</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>- Todo o material</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>Barreiras primárias</p><p>= todos os</p><p>procedimentos</p><p>respiratória quando</p><p>NB-2 mais:</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Portas de</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>descontaminado na</p><p>saída das instalações</p><p>Barreiras primárias</p><p>= todos os</p><p>procedimentos</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Portas de</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>automático</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>saída das instalações</p><p>Barreiras primárias</p><p>= todos os</p><p>procedimentos</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>- Separação física dos</p><p>corredores de acesso</p><p>- Portas de</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>automático</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>recirculante</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>Barreiras primárias</p><p>= todos os</p><p>procedimentos</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>acesso duplas</p><p>com fechamento</p><p>automático</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>recirculante</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>Barreiras primárias</p><p>procedimentos</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>com fechamento</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>recirculante</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>conduzidos em</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>- Ar de exaustão não</p><p>recirculante</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>cabines de classe</p><p>II ou classe I ou II</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>- Edifício separado ou</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>juntamente com</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Edifício separado ou</p><p>- Fluxo de ar negativo</p><p>dentro do laboratório</p><p>macacão de pressão</p><p>positiva com</p><p>suprimento de ar.</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Edifício separado ou</p><p>área isolada</p><p>- Sistema de</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>NB-3 mais:</p><p>- Edifício separado ou</p><p>área isolada</p><p>- Sistema de</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>suprimento de ar.</p><p>descontaminação</p><p>- Edifício separado ou</p><p>área isolada</p><p>- Sistema de</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>- Edifício separado ou</p><p>área isolada</p><p>- Sistema de</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>abastecimento e</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>escape, a vácuo, e de</p><p>descontaminação</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no texto</p><p>- Outros requisitos</p><p>sublinhados no textosublinhados no texto</p><p>Fonte: ANVISA, 2008.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 66</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 66 18/01/2021 11:59:55</p><p>O Quadro 1 apresenta os níveis de biossegurança estipulados pelos órgãos</p><p>responsáveis por determinar parâmetros seguros e adequados para atividades</p><p>farmacêuticas. O NB-1 é o nível com menor periculosidade, no qual os micror-</p><p>ganismos presentes não causam patologias em adultos sadios, e, então, não há</p><p>necessidade de utilização de equipamentos de proteção individual (EPIs). Logo,</p><p>no NB-2 existem seres que podem causar doenças caso entrem em contato</p><p>com a pele ou sejam ingeridos, por isso, é imperativa a adoção de algumas</p><p>medidas de segurança.</p><p>O NB-3 diz respeito ao nível em que laboratórios trabalham com materiais</p><p>que apresentam grande perigo para o ser humano, com alta possibilidade de</p><p>transmissão via aerossol, infecção, se multiplicarem e, até mesmo, matar. Des-</p><p>se modo, os cuidados são cada vez maiores e as regras estabelecidas devem</p><p>ser seguidas minuciosamente para garantir a integridade física do profi ssional.</p><p>Por fi m, o NB-4 contempla locais onde os seres, além de serem perigosos, po-</p><p>dem ser desconhecidos, o que os tornam ainda mais ameaçadores, uma vez</p><p>que tratar o desconhecido é mais difícil.</p><p>Análise de agentes antimicrobianos</p><p>Os agentes antimicrobianos agem contra os micróbios, ou seja, podem en-</p><p>globar vários tipos de substâncias, como: os antibacterianos, que agem contra</p><p>bactérias como as E. coli; os antifúngicos, que combatem os fungos, como os</p><p>que causam micose; os antivirais, que atuam em vírus como os da H1N1; e,</p><p>ainda, os antiparasitários, que destroem parasitas, como a lombriga.</p><p>Lembre-se que os antimicrobianos têm ação desinfetante, pois são capazes</p><p>de destruir vários tipos de micróbios que podem infectar uma amostra. Além</p><p>disso, podem ser usados como conservantes antimicrobianos, impedindo a</p><p>proliferação de seres vivos nos medicamentos. Contudo, durante os testes de</p><p>qualidade de substâncias que contenham esse tipo de conservante, é</p><p>necessário que seja neutralizada a ação do mesmo para que os micró-</p><p>bios presentes possam crescer e serem analisados. O Qua-</p><p>dro 1 mostra alguns tipos de antimicrobianos que podem</p><p>ser utilizados como conservantes e também os tipos de</p><p>substâncias capazes de neutralizar tal composto.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 67</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 67 18/01/2021 11:59:55</p><p>O Quadro 2 indica alguns exemplos de antimicrobianos que são utilizados tanto na</p><p>área de medicamentos como no de cosméticos. O formaldeído, por exemplo, quan-</p><p>to utilizado como conservante antimicrobiano, necessita ser diluído a um composto</p><p>chamado histidina para que inative sua ação. A intenção é promover o desenvolvi-</p><p>mento dos micróbios presentes na amostra, a fi m de que sejam analisados e, por fi m,</p><p>obter confi rmação sobre a adequação das especifi cações necessárias do produto.</p><p>ANTIMICROBIANO NEUTRALIZANTE</p><p>Formaldeído Histidina</p><p>Clorados Tiossulfato</p><p>Sais de amônio quaternário Polissorbato + lecitina</p><p>Fenóis e derivados Polissorbato 80</p><p>Tensoativos anfóteros Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados Cisteina</p><p>QUADRO 2. ANTIMICROBIANOS E RESPECTIVOS NEUTRALIZANTES</p><p>Formaldeído</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Formaldeído</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Formaldeído</p><p>Clorados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Formaldeído</p><p>Clorados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Formaldeído</p><p>Clorados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Sais de amônio quaternário</p><p>Fenóis e derivados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>Tensoativos anfóteros</p><p>Metais pesados, orgânicos ou ionizadosMetais pesados, orgânicos ou ionizadosMetais pesados, orgânicos ou ionizadosMetais pesados, orgânicos ou ionizados</p><p>HistidinaHistidina</p><p>Tiossulfato</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Histidina</p><p>Tiossulfato</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Tiossulfato</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Tiossulfato</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Cisteina</p><p>Polissorbato + lecitina</p><p>Polissorbato 80</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Cisteina</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Cisteina</p><p>Polissorbato 80 + lecitina</p><p>Fonte: PINTO, 2015.</p><p>Potência de antibióticos</p><p>A determinação da potência do antibiótico pode ser feita de acordo com al-</p><p>gumas técnicas. Uma delas é conhecida como difusão em ágar (Figura 5v). Por</p><p>meio de um instrumento chamado alça de platina, uma haste com a ponta curva-</p><p>da presa a um cabo de Kolle, são espalhados microrganismos a serem estudados</p><p>em toda a superfície, por meio de movimentos específi cos. Após a inoculação da</p><p>bactéria, é dispensada a solução de antibiótico previamente selecionada.</p><p>Figura 5. Preparo de meio de cultura para determinação de potência de antibióticos. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 29/10/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 68</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 68 18/01/2021 11:59:57</p><p>Outra forma de análise, desenvolvida em meados dos anos 1980, consiste</p><p>em uma técnica que utiliza três doses padrão e mais três da amostra. A quan-</p><p>tidade de cada uma deve ser igual e o experimento precisa ser realizado em</p><p>uma mesma placa. Os resultados obtidos são introduzidos em fórmulas ma-</p><p>temáticas especifi cas para essas amostras e, após realizar alguns testes com</p><p>o mesmo produto, são somados todos os resultados e calculada uma média</p><p>para que se possa analisar. Desse modo, é desenvolvida uma curva padrão e</p><p>gráfi cos utilizados para defi nir a potência do antibiótico empregado.</p><p>Microrganismo Meio de cultura Temperatura</p><p>de incubação</p><p>Tempo de</p><p>incubação do</p><p>inóculo</p><p>Tempo de</p><p>incubação para</p><p>a recuperação</p><p>microbiana</p><p>Escherichia coli</p><p>ATCC 8739</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC 18 – 24 horas 3 a 5 dias</p><p>Pseudomonas</p><p>auruginosa</p><p>ATCC 9027</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC 18 – 24 horas 3 a 5 dias</p><p>Staphylococcus</p><p>aureus</p><p>ATCC 6538</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC 18 – 24 horas 3 a 5 dias</p><p>Candida albicans</p><p>ATCC 10231</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC 44 – 52 horas 3 a 5 dias</p><p>Aspergillus</p><p>brasiliensis</p><p>ATCC 16404</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC 6 – 10 dias 3 a 7 dias</p><p>Fonte: ANVISA, 2019, p. 443-444.</p><p>TABELA 4. CONDIÇÕES PARA RECONSTITUIÇÕES DAS CEPAS</p><p>Escherichia coli Escherichia coli</p><p>ATCC 8739</p><p>Escherichia coli</p><p>ATCC 8739</p><p>Escherichia coli</p><p>ATCC 8739</p><p>Pseudomonas</p><p>Escherichia coli</p><p>ATCC 8739</p><p>Pseudomonas</p><p>auruginosa</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Pseudomonas</p><p>auruginosa</p><p>ATCC 9027</p><p>Staphylococcus</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Pseudomonas</p><p>auruginosa</p><p>ATCC 9027</p><p>Staphylococcus</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>ATCC 9027</p><p>Staphylococcus</p><p>aureus</p><p>ATCC 6538</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Staphylococcus</p><p>aureus</p><p>ATCC 6538</p><p>Candida albicans</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Staphylococcus</p><p>ATCC 6538</p><p>Candida albicans</p><p>ATCC 10231</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>ATCC 6538</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Candida albicans</p><p>ATCC 10231</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Candida albicans</p><p>ATCC 10231</p><p>Aspergillus</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Candida albicans</p><p>ATCC 10231</p><p>Aspergillus</p><p>brasiliensis</p><p>ATCC 16404</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Aspergillus</p><p>brasiliensis</p><p>ATCC 16404</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Aspergillus</p><p>brasiliensis</p><p>ATCC 16404</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>ATCC 16404</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Soybean-Casein Digest</p><p>Broth/Soybean-Casein</p><p>Digest Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>18 – 24 horas</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>18 – 24 horas</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Dextrose Agar</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>18 – 24 horas</p><p>18 – 24 horas</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>18 – 24 horas</p><p>18 – 24 horas</p><p>(32,5 ± 2,5) ºC</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>Sabouraud Dextrose</p><p>Broth/Sabourad</p><p>Dextrose Agar</p><p>18 – 24 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>18 – 24 horas</p><p>18 – 24 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>18 – 24 horas</p><p>18 – 24 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>18 – 24 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>3 a 5 dias</p><p>18 – 24 horas</p><p>44 – 52 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>44 – 52 horas</p><p>(22,5 ± 2,5) ºC</p><p>3 a 5 dias</p><p>44 – 52 horas</p><p>3 a 5 dias</p><p>44 – 52 horas</p><p>6 – 10 dias</p><p>3 a 5 dias</p><p>6 – 10 dias</p><p>3 a 5 dias</p><p>3 a 5 dias</p><p>6 – 10 dias</p><p>3 a 5 dias3 a 5 dias</p><p>3 a 7 dias3 a 7 dias3 a 7 dias</p><p>Na Tabela 4, observa-se algumas</p><p>características de tipos de bactérias,</p><p>como, por exemplo, o meio de cultura</p><p>específi co para o crescimento de cada</p><p>espécie. Assim como a temperatura e o</p><p>tempo de incubação adequada para de-</p><p>senvolvimento, sendo a última coluna a</p><p>marca de tempo de incubação para a re-</p><p>cuperação das células dessas bactérias.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 69</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 69 18/01/2021 11:59:58</p><p>Teste de eficácia de conservantes</p><p>Para garantir a eficácia da ação</p><p>dos antimicrobianos como conser-</p><p>vantes quando são misturados a me-</p><p>dicamentos farmacêuticos, é neces-</p><p>sário realizar testes. Considerando</p><p>que tais substâncias são incorpora-</p><p>das em produtos não estéreis objeti-</p><p>vando evitar a proliferação excessiva</p><p>e indesejada de micróbios, as quanti-</p><p>dades adicionadas devem ser peque-</p><p>nas para não interferir na biodisponi-</p><p>bilidade do princípio ativo.</p><p>Os meios de cultura devem passar</p><p>por testes que garantam sua efi cácia.</p><p>Depois da preparação do meio de cul-</p><p>tura e da amostra, inocula-se o mate-</p><p>rial sobre a superfície da placa de petri,</p><p>que é submetida a condições ótimas</p><p>de desenvolvimento do ser vivo em</p><p>estudo. Em seguida, deve-se aguardar</p><p>alguns dias para, então, retirar os mi-</p><p>crorganismos que se desenvolveram</p><p>na placa por meio de uma lavagem</p><p>com solução salina. Depois, os micror-</p><p>ganismos são acondicionados em um</p><p>frasco estéril, possibilitando a conta-</p><p>gem da quantidade microbiana através</p><p>do número de UFC/ml. Com tal resul-</p><p>tado será possível descobrir os valores</p><p>necessários de conservantes microbia-</p><p>nos, assegurando que não haja cresci-</p><p>mento prejudicial nos medicamentos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 70</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 70 18/01/2021 12:00:01</p><p>QUADRO 3. CONDIÇÕES PARA RECONSTITUIÇÕES DAS CEPAS</p><p>Tipo de produto Microrganismo 7º dia 14º dia 28º dia</p><p>Categoria 1 -</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>Bactérias</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos,</p><p>1 log do nº de</p><p>UFC inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve</p><p>75</p><p>Referências bibliográficas ������������������������������������������������������������������������������������������������� 77</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 5 18/01/2021 11:40:39</p><p>Sumário</p><p>Unidade 3 – Pirogênios e toxicidade de microrganismos</p><p>Objetivos da unidade ����������������������������������������������������������������������������������������������������������� 79</p><p>Pirogênios in vitro ���������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 80</p><p>Bactérias Gram-negativas e Gram-positivas ............................................................................80</p><p>Tipos de pirogênios ......................................................................................................... 82</p><p>Procedimento de gelificação ........................................................................................ 84</p><p>Pirogênios in vivo ����������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 86</p><p>Procedimento in vivo ...................................................................................................... 87</p><p>Fontes de pirogênios ....................................................................................................... 88</p><p>Despirogenização ............................................................................................................ 90</p><p>Toxicidade ����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 93</p><p>Testes de toxicidade aguda ........................................................................................... 93</p><p>Testes de toxicidade subcrônica e crônica ................................................................ 96</p><p>Procedimento de Draize ................................................................................................. 97</p><p>Sintetizando ��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 99</p><p>Referências bibliográficas ����������������������������������������������������������������������������������������������� 100</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 6 18/01/2021 11:40:39</p><p>Sumário</p><p>Unidade 4 – Métodos de irritação ocular e dérmica</p><p>Objetivos da unidade ��������������������������������������������������������������������������������������������������������� 103</p><p>Método de irritação ocular ���������������������������������������������������������������������������������������������� 104</p><p>Anatomia ocular ........................................................................................................................................ 104</p><p>Teste de irritação ocular in vivo .................................................................................. 108</p><p>Teste de irritação ocular in vitro ................................................................................. 112</p><p>Controle de qualidade de medicamento oftálmico .................................................. 114</p><p>Método de irritação dérmica ������������������������������������������������������������������������������������������� 115</p><p>Anatomia da pele humana ........................................................................................... 116</p><p>Teste adjuvante completo de Freund ......................................................................... 119</p><p>Fototoxicidade ................................................................................................................ 119</p><p>Testes de implantes....................................................................................................... 121</p><p>Sintetizando ��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 99</p><p>Referências bibliográficas ����������������������������������������������������������������������������������������������� 100</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 7 18/01/2021 11:40:39</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 8 18/01/2021 11:40:39</p><p>Olá, estimados estudantes! Bem-vindos à disciplina Controle de Qualidade</p><p>Microbiológico.</p><p>O objetivo geral dessa disciplina é fornecer os conhecimentos necessários</p><p>para o planejamento, organização e funcionamento de um laboratório de con-</p><p>trole de qualidade na indústria farmacêutica, incluindo a aplicação dos princi-</p><p>pais métodos de análise de medicamentos. Para tanto, diversos assuntos serão</p><p>abordados ao longo dessa incrível jornada rumo à concretização do sonho de</p><p>se tornar um farmacêutico.</p><p>Abordaremos os temas mais relevantes dessa área em expansão, que</p><p>apresenta desafi os cada vez maiores. A contaminação microbiana dos produ-</p><p>tos farmacêuticos é um problema de saúde pública capaz de impactar tanto a</p><p>qualidade do produto, favorecendo sua deterioração, quanto a segurança do</p><p>usuário, que pode sofrer com infecções e intoxicações. Assim, a presença de</p><p>microrganismos nos produtos farmacêuticos é um grande risco à indústria e</p><p>ao consumidor.</p><p>O controle de qualidade microbiológico é essencial, dessa forma, para a</p><p>produção de medicamentos de qualidade e com segurança e que atendam a</p><p>todos os requisitos exigidos pelas regulamentações vigentes. Nesse contexto,</p><p>o profi ssional que atua no laboratório de controle de qualidade da indústria</p><p>farmacêutica tem um papel estratégico, integrando as diferentes áreas da em-</p><p>presa – desde a matéria-prima até o produto fi nal –, a fi m de assegurar que os</p><p>níveis de qualidade e segurança sejam alcançados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 9</p><p>Apresentação</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 9 18/01/2021 11:40:39</p><p>Dedico essa produção à minha família e a todos que, de alguma forma,</p><p>contribuíram para a minha trajetória profi ssional e pessoal. Agradeço</p><p>especialmente ao meu esposo, por sempre acreditar e incentivar meu</p><p>trabalho, e aos meus amigos, que são uma fonte de apoio durante todo</p><p>esse processo.</p><p>A Professora Fernanda Waitman de</p><p>Oliveira Silva é mestre em Biotecno-</p><p>ciência (2016), pela Universidade Fe-</p><p>deral do ABC – UFABC e graduada em</p><p>Farmácia (2011), pela Universidade</p><p>Braz Cubas – UBC. Desenvolveu traba-</p><p>lhos relacionados a fi lmes poliméricos</p><p>na área de Bioengenharia. Ministrou</p><p>aulas de química, biologia, farmaco-</p><p>logia e bioquímica, entre 2012 e 2013.</p><p>Desenvolveu projetos para tratamento</p><p>de dependência química para a inicia-</p><p>ção científi ca em Farmacologia (2007),</p><p>pela Universidade Federal de São Paulo</p><p>– UNIFESP.</p><p>Currículo Lattes:</p><p>http://lattes.cnpq.br/6793356746944272</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 10</p><p>A autora</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 10 18/01/2021 11:40:39</p><p>Dedico este livro aos meus pais,</p><p>João Elias e Olga Rosa de Oliveira</p><p>Elias, por todo o amor, o carinho</p><p>e a dedicação. Por sempre terem</p><p>me apoiado, acreditando nos</p><p>meus sonhos e me ajudando a</p><p>realizá -los.</p><p>A professora Susana de Oliveira Elias</p><p>é doutora em Microbiologia (2018) pela</p><p>Universidade Federal do Rio Grande do</p><p>Sul (UFRGS) e possui mestrado (2014)</p><p>na mesma área e na mesma universi-</p><p>dade. É especialista em Docência no</p><p>Ensino Superior (2017) pelo Centro Uni-</p><p>versitá rio Leonardo da Vinci (UNIAS-</p><p>SELVI). Graduada em Biomedicina</p><p>(2011) pela Universidade Federal do Rio</p><p>Grande do Sul (UFRGS) com habilitaç ã o</p><p>em Aná lises Bromatoló gicas e Biologia</p><p>Molecular. Ministrante de cursos e trei-</p><p>namentos, palestrante, pesquisadora</p><p>e revisora de periódicos científi cos na-</p><p>cionais e internacionais. Desenvolve e</p><p>implementa projetos de laboratório de</p><p>microbiologia, atuando como professo-</p><p>ra e orientadora em cursos de gradua-</p><p>ção e pós-graduação.</p><p>Currículo Lattes:</p><p>http://lattes.cnpq.br/6365194633800291</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 11</p><p>A autora</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 11 18/01/2021 11:40:40</p><p>ASPECTOS GERAIS</p><p>DO CONTROLE</p><p>DE QUALIDADE</p><p>DE PRODUTOS</p><p>FARMACÊUTICOS</p><p>1</p><p>UNIDADE</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 12 18/01/2021 11:41:00</p><p>Objetivos da unidade</p><p>Tópicos de estudo</p><p>Apresentar noções fundamentais do controle biológico de</p><p>haver</p><p>redução de</p><p>3 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Categoria 2 -</p><p>Produtos de uso</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>Bactérias -</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>2 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve haver</p><p>aumento da</p><p>contagem em</p><p>relação ao</p><p>14º dia</p><p>Bolores e</p><p>leveduras -</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Categoria 3 -</p><p>Produtos orais,</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>Bactérias -</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos, 1 log</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>Bolores e</p><p>leveduras -</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Categoria 4 -</p><p>Antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>aquosa</p><p>Bactérias -</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Bolores e</p><p>leveduras -</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Nota: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log10</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Categoria 1Categoria 1</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>Categoria 1</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>Categoria 1</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>-</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>Injetáveis, outros</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>parenterais incluindo</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>emulsões, produtos</p><p>otológicos, nasais</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>Bactérias</p><p>estéreis, oftálmicos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>Bactérias</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso</p><p>Bactérias</p><p>Categoria 2</p><p>Produtos de uso</p><p>Categoria 2</p><p>Produtos de uso</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>Categoria 2</p><p>Produtos de uso</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Categoria 2</p><p>Produtos de uso</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos,</p><p>1 log do nº de</p><p>UFC inicialmente</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Produtos de uso</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>redução de, pelo</p><p>menos,</p><p>1 log do nº de</p><p>UFC inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>redução de, pelo</p><p>1 log do nº de</p><p>UFC inicialmente</p><p>inoculado</p><p>leveduras</p><p>tópico, constituídos</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>1 log do nº de</p><p>UFC inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve haver</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>de base, ou de veículo</p><p>aquoso, produtos</p><p>UFC inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>Bactérias</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>3 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Bactérias</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>3 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Bactérias</p><p>3 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve haver</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>em relação ao</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>2 logs do</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Deve haver</p><p>redução de</p><p>2 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>redução de</p><p>2 logs do</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve haver</p><p>inoculado</p><p>Não deve haver</p><p>aumento da</p><p>contagem em</p><p>Não deve haver</p><p>aumento da</p><p>contagem em</p><p>relação ao</p><p>Não deve haver</p><p>aumento da</p><p>contagem em</p><p>relação ao</p><p>aumento da</p><p>contagem em</p><p>relação ao</p><p>14º dia</p><p>contagem em</p><p>relação ao</p><p>14º dia</p><p>aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>aquoso, produtos aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>aquoso, produtos aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>aquoso, produtos aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>aquoso, produtos aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>aquoso, produtos</p><p>nasais, não estéreis e</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>emulsões, incluindo</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>aqueles aplicados em</p><p>membranas mucosas</p><p>Categoria 3</p><p>constituídos de base</p><p>Bolores e</p><p>Categoria 3</p><p>Produtos orais,</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Categoria 3</p><p>Produtos orais,</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Categoria 3</p><p>Produtos orais,</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>leveduras</p><p>Produtos orais,</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>ou veículo aquoso,</p><p>exceto antiácidos</p><p>Bactérias</p><p>exceto antiácidos</p><p>Bactérias</p><p>-</p><p>Bactérias</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos, 1 log</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos, 1 log</p><p>do nº de UFC</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Deve haver</p><p>redução de, pelo</p><p>menos, 1 log</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>redução de, pelo</p><p>menos, 1 log</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>A contagem não</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>deve aumentar</p><p>em relação ao</p><p>14º dia</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>em relação ao</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculadoinoculado</p><p>Categoria 4Categoria 4</p><p>Antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>Categoria 4</p><p>Antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>Categoria 4</p><p>Antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>aquosa</p><p>Antiácidos</p><p>constituídos de base</p><p>aquosa</p><p>constituídos de base</p><p>aquosa</p><p>constituídos de base</p><p>BactériasBactériasBactérias</p><p>NotaNota: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>Bolores e</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>Bolores e</p><p>leveduras</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>leveduras</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>-</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>inoculado</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>de unidades maiores que o valor previamente obtido.</p><p>Não deve</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>haver aumento</p><p>do nº de UFC</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log</p><p>inicialmente</p><p>inoculado</p><p>: o “não aumento” do número de UFC inoculados é defi nido como não mais que 0,5 log10</p><p>Fonte: ANVISA, 2019, p. 443-444.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 71</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 71 18/01/2021 12:00:02</p><p>No Quadro 3, é possível compreender a classifi cação em categorias dos con-</p><p>servantes microbianos de acordo com os resultados obtidos nos testes. Cada</p><p>categoria abrange alguns tipos de fórmulas farmacêuticas, por exemplo, na</p><p>primeira indica as determinações que substâncias injetáveis, otologias, nasais,</p><p>entre outros, devem seguir. Também classifi ca de acordo com o tipo de micror-</p><p>ganismo, podendo ser bactérias ou fungos, como os bolores e as leveduras,</p><p>assim como aborda os limites aceitáveis de ação dos conservantes de acordo</p><p>com o tempo, após 7, 14 e 28 dias em contato com o antimicrobiano escolhido.</p><p>Análise de vitaminas</p><p>Para realizar a análise de vitaminas, deve-se levar em conta que é possível</p><p>classifi ca-las em dois tipos: a vitaminas lipossolúveis e as hidrossolúveis, de</p><p>modo que o meio pelo qual se diluem infl uencia diretamente a maneira como</p><p>será realizado o teste, assim como quais os microrganismos com maior facilida-</p><p>de para se desenvolver em cada caso. Para exemplifi car, adota-se como lipos-</p><p>solúveis as vitaminas A, D, E e K, enquanto as hidrossolúveis são as vitaminas C</p><p>e do Complexo B (B1, B2, B3, B5, B7, B9 e B12).</p><p>EXPLICANDO</p><p>Quando uma vitamina é classifi cada como lipossolúvel signifi ca que não</p><p>possui afi nidade com a água, ou seja, quando misturada à água não se</p><p>dissolve. Ocorre o contrário com as hidrossolúveis, que podem se misturar</p><p>ao meio aquoso facilmente. Isso implica diretamente na forma como devem</p><p>ser administradas para que tenha melhor absorção: as lipossolúveis devem</p><p>ser ingeridas próximo aos horários das refeições; enquanto que as hidrosso-</p><p>lúveis, apenas com água, e uma a duas horas antes ou depois das refeições.</p><p>As vitaminas são importantes tendo em vista que evitam o desenvolvimen-</p><p>to de diversas patologias. Porém, também são substâncias sensíveis</p><p>que devem passar por um controle de qualidade rígido; portanto,</p><p>é indicado que sejam realizados testes antes e depois do</p><p>envase de forma a assegurar a quantidade enviada, as-</p><p>sim como o não aparecimento de micróbios, uma vez</p><p>que alguns deles podem ser fortalecidos por certos</p><p>tipos de vitaminas.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 72</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 72 18/01/2021 12:00:02</p><p>Cromatografia</p><p>A cromatografi a é uma técnica desenvolvida cuja função é separar substân-</p><p>cias contidas dentro de uma outra substância específi ca. Pode ser classifi cada</p><p>em: cromatografi a em papel, cromatografi a líquida de alta efi ciência (em inglês,</p><p>HPLC) ou cromatografi a a gás. Considerando que nosso enfoque aborda as vi-</p><p>taminas, estudaremos apenas primeira classifi cação.</p><p>0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 6,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0</p><p>-40</p><p>-20</p><p>0</p><p>20</p><p>40</p><p>60</p><p>80</p><p>100</p><p>120</p><p>140</p><p>-40</p><p>mAU 210 nm</p><p>min</p><p>0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 6,0 8,0 9,0 10,0 11,0 12,0</p><p>-50</p><p>0</p><p>50</p><p>100</p><p>150</p><p>200</p><p>250</p><p>300</p><p>350</p><p>400</p><p>-40</p><p>mAU 254 nm</p><p>min</p><p>O funcionamento básico da cromatografi a consiste em dissolução das vita-</p><p>minas em uma solução com o solvente adequado (ou seja, dependendo se são</p><p>lipossolúveis ou hidrossolúveis), para, então, colocar um papel específi co para</p><p>cromatografi a em contato com essa solução. Chamamos essa mistura de fase</p><p>GRÁFICO 1. CROMATOGRAMAS E HPLC</p><p>Fonte: Shutterstock. Acesso em: 29/10/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 73</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 73 18/01/2021 12:00:03</p><p>móvel. Após, na fase estacionária, ela é forçada a passar pelo papel ou pela má-</p><p>quina, por um processo conhecido como eluição. A última fase é variável,</p><p>uma</p><p>vez que pode alternar devido às formas da cromatografi a empregada.</p><p>O Gráfi co 1 mostra um exemplo de como são obtidos os resultados após</p><p>a solução passar pela cromatografi a. Cada pico determina um comprimento</p><p>de onda específi co, considerando que existe uma tabela com os dados já ca-</p><p>dastrados dos comprimentos de onda de cada vitamina conhecida. Assim, o</p><p>profi ssional é capaz de comparar esses dados e descobrir o tipo e a quantidade</p><p>de vitamina presente na amostra estudada.</p><p>Conservantes</p><p>Além das funções mais conhecidas das vitaminas, como a de nutrir o corpo,</p><p>também são muito importantes as que realizam atividades básicas do corpo</p><p>humano. Por exemplo, para que as atividades metabólicas ocorram de forma</p><p>perfeita, as vitaminas precisam estar presentes em quantidades sufi cientes.</p><p>Algumas delas ainda podem agir como conservantes e antioxidantes em ali-</p><p>mentos e fórmulas farmacêuticas.</p><p>Uma das mais utilizadas é a vitamina E, que possui ambas as funções e evita</p><p>que ocorra a oxidação dos alimentos e de outras substâncias, como a vitamina</p><p>A. Existem estudos que tratam sobre a ação da vitamina C quando adicionada</p><p>em carnes com a fi nalidade de conservação, mas ainda carecem de comprova-</p><p>ções no que diz respeito ao uso indiscriminado dessa vitamina, que pode trazer</p><p>consequências negativas aos seres humanos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 74</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 74 18/01/2021 12:00:03</p><p>Sintetizando</p><p>Abordamos as principais características dos estudos necessários para deter-</p><p>minar se produtos não estéreis estão dentro das especificações solicitadas pelas</p><p>agências reguladores. Assim, encontramos na Farmacopeia brasileira a quanti-</p><p>dade e os tipos de microrganismos que podemos encontrar dentro de produtos</p><p>não estéreis a fim de não causar danos aos consumidores.</p><p>Assim, concluímos que é necessário realizar o controle de qualidade de cada</p><p>lote produzido pela indústria, seguindo rigorosamente os critérios solicitados,</p><p>sendo fundamental que o controle analise também os departamentos pelos</p><p>quais a matéria prima perpassa até que seja embalada no estágio final e vendida</p><p>em farmácias e drogarias. Adotar o método de validação analítica permite que</p><p>sejam garantidos não apenas o resultado favorável ou desfavorável do produto,</p><p>mas também se os valores encontrados estão corretos.</p><p>Em seguida, tratamos acerca da análise de produtos estéreis, ou seja, aque-</p><p>les nos quais não se permite quantidade mínima de qualquer tipo de micróbios.</p><p>Desse modo, a produção desses tipos de medicamentos deve ser realizada com</p><p>cuidados redobrados a fim de que atendam às especificações. Logo, seguir as</p><p>normas das Boas Práticas de Laboratório, assim como os cuidados indicados</p><p>pelos níveis de biosseguranças, garantem a obtenção dos resultados almejados</p><p>com a devida segurança.</p><p>Vale lembrar que não são apenas os medicamentos em si que devem ser</p><p>testados, mas também as embalagens nos quais são acondicionados. Aborda-</p><p>mos as categorias utilizadas para testar a inocuidade das embalagens plásticas,</p><p>considerando que quando em contato com o material não deve haver liberação</p><p>de substâncias que possam intoxicar os seres humanos.</p><p>A análise de antimicrobianos é tão relevante quanto qualquer outro teste.</p><p>Além de serem substâncias que podem tratar patologias, é possível que sejam</p><p>utilizados como conservante, visando evitar que microrganismos indese-</p><p>jáveis se proliferem nas soluções medicamentosas. Mas, para realizar</p><p>testes de controle de qualidade em medicamentos que con-</p><p>têm esses conservantes, é necessário neutralizar sua ação</p><p>para que os micróbios possam se multiplicar e, então, ser</p><p>feita a análise de tipo e quantidade corretamente.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 75</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 75 18/01/2021 12:00:03</p><p>Por fim, ao falarmos da análise das vitaminas, indicamos o funcionamento</p><p>do sistema de cromatografia, por meio do qual será comprovado o tipo e a</p><p>quantidade de vitaminas a ser encontrados nas amostras. Todo esse processo</p><p>faz parte do controle de qualidade desse tipo de substância, garantindo que se</p><p>mantenha dentro das especificações determinadas.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 76</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 76 18/01/2021 12:00:03</p><p>Referências bibliográficas</p><p>ANVISA - AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Noções gerais para</p><p>Boas Práticas em Microbiologia Clínica. [s.l.], 2008. Disponível em: <http://</p><p>www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/boas_praticas/</p><p>modulo1/biosseguranca6.htm#quadro1>. Acesso em: 30 out. 2020.</p><p>ANVISA - AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Farmacopeia Bra-</p><p>sileira. 6. ed. Brasília: ANVISA, 2019, v. 1. Disponível em: <https://www.gov.br/</p><p>anvisa/pt-br/assuntos/farmacopeia/farmacopeia-brasileira/arquivos/7985j-</p><p>son-file-1>. Acesso em: 11 nov. 2020.</p><p>BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).</p><p>Resolução-RE n. 899, de 29 de maio de 2003. Diário Oficial da União, Brasília,</p><p>DF, Poder Executivo, 02 jun. 2003. Disponível em: <http://bvsms.saude.gov.br/bvs/</p><p>saudelegis/anvisa/2003/res0899_29_05_2003.html>. Acesso em: 11 nov. 2020.</p><p>BRASIL. Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).</p><p>Resolução-RDC n. 17, de 16 de abril de 2010. Diário Oficial da União, Brasília, DF,</p><p>Poder Executivo, 17 abr. 2010. Disponível em: <http://bvsms.saude.gov.br/bvs/</p><p>saudelegis/anvisa/2010/res0017_16_04_2010.html>. Acesso em: 11 nov. 2020.</p><p>MORO, A.; INVERNIZZI, N. A tragédia da talidomida: a luta pelos direitos das víti-</p><p>mas e por melhor regulação de medicamentos. História, Ciências, Saúde, Rio de</p><p>Janeiro, v. 24, n. 3, p.603-622, jul./set. 2017. Disponível em: <https://www.scielo.</p><p>br/pdf/hcsm/v24n3/0104-5970-hcsm-24-03-0603.pdf>. Acesso em: 11 nov. 2020.</p><p>PINTO, T. J. A.; KANEKO, T. M.; PINTO, A. F. Controle biológico de qualidade de</p><p>produtos farmacêuticos, correlatos e cosméticos. 4. ed. Barueri: Manole, 2015.</p><p>PRESOTO, A. E. F.; ALMEIDA-MURADIAN, L. B. A. Validação de métodos croma-</p><p>tográficos por clae para análise das vitaminas B1, B2, B6 e niacina naturalmente</p><p>presentes em farinha de cereais. Química Nova, São Paulo, v. 31, n. 3, p. 498-502,</p><p>2008. Disponível em: <http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pi-</p><p>d=S0100-40422008000300006&lng=en&nrm=iso>. Acesso em: 01 nov. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 77</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID2.indd 77 18/01/2021 12:00:03</p><p>PIROGÊNIOS E</p><p>TOXICIDADE DE</p><p>MICRORGANISMOS</p><p>3</p><p>UNIDADE</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 78 18/01/2021 12:21:47</p><p>Objetivos da unidade</p><p>Tópicos de estudo</p><p>Diferenciar os testes de pirogênios in vitro e in vivo;</p><p>Compreender a importância de detectar endotoxinas em medicamentos;</p><p>Conhecer os procedimentos de Draize;</p><p>Entender o conceito de toxicidade.</p><p>Pirogênios in vitro</p><p>Bactérias Gram-negativas e</p><p>Gram-positivas</p><p>Tipos de pirogênios</p><p>Procedimento de gelificação</p><p>Pirogênios in vivo</p><p>Procedimento in vivo</p><p>Fontes de pirogênios</p><p>Despirogenização</p><p>Toxicidade</p><p>Testes de toxicidade aguda</p><p>Testes de toxicidade subcrônica</p><p>e crônica</p><p>Procedimento de Draize</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 79</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 79 18/01/2021 12:21:47</p><p>Pirogênios in vitro</p><p>O termo pirogênio é relativamente novo, tendo começado a ser estudado</p><p>mais profundamente há cerca de cinquenta anos. Contudo, existem relatos</p><p>nas literaturas antigas de que dois mil anos atrás já se faziam experimentos</p><p>com substâncias que induziam febre nos seres humanos. Entendia-se que a</p><p>febre era, principalmente, um mecanismo terapêutico, sendo tratada dessa</p><p>forma durante muitos anos, ao ponto de se induzí-la por meio de injeções</p><p>com substâncias específi cas, para tratar diferentes patologias.</p><p>Contudo, a partir do século XIX, a temperatura corporal alta começou</p><p>a ser vista com outros olhos. Houve a isolação de produtos classificados</p><p>como antipiréticos, utilizados para baixar a temperatura do corpo. Assim,</p><p>um estudioso chamado Billbroth foi o</p><p>primeiro a usar o termo pirogênio</p><p>para conceituar substâncias capazes de induzir a febre. Com o avanço da</p><p>ciência, foram isolados produtos, liberados por bactérias, capazes de fazer</p><p>com que a temperatura do corpo se elevasse acima do aceitável, classifi-</p><p>cados como pirogênios.</p><p>Os produtos mais conhecidos como pirogênios são as endotoxinas, ex-</p><p>cretadas por bactérias como, principalmente, as Gram-negativas. Embora</p><p>toda endotoxina seja um pirogênio, nem todo pirogênio é uma endotoxina.</p><p>Dito isso, o conceito mais atualizado é que qualquer tipo de substância</p><p>proveniente de injetáveis contaminados, capazes de desenvolver um qua-</p><p>dro febril, bem como infecções causadas por bactérias Gram-negativo, é</p><p>classificado como pirogênio.</p><p>Bactérias Gram-negativas e Gram-positivas</p><p>Antes de aprofundarmos o estudo sobre os pirogênios propriamente di-</p><p>tos, devemos diferenciar as bactérias Gram-positivas das Gram-negativas. Na</p><p>Figura 1, podemos ver essas duas bactérias, que apresentam suas principais</p><p>diferenças na quantidade de camadas que possuem em volta de si mesmas.</p><p>Em roxo-azulado, temos a bactéria Gram-positiva e, logo ao lado, um esquema</p><p>das camadas existentes ao seu redor, salientando que, de cima para baixo, po-</p><p>demos ver da camada mais interna para a mais externa.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 80</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 80 18/01/2021 12:21:47</p><p>Bactéria</p><p>Gram-positiva</p><p>Citoplasma</p><p>Citoplasma</p><p>Membrana plasmática</p><p>Membrana plasmática</p><p>Espaço periplasmático</p><p>Espaço periplasmático</p><p>Espaço periplasmático</p><p>Membrana externa</p><p>Peptideoglicano</p><p>Peptideoglicano</p><p>Bactéria</p><p>Gram-negativa</p><p>Figura 1. Comparação bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 07/11/2020.</p><p>CURIOSIDADE</p><p>Essas bactérias são denominadas Gram-positivas e Gram-negativas, pois,</p><p>durante o processo de cultivo microbiológico, para determinar que tipos</p><p>de bactérias estão presentes, é realizado um procedimento chamado</p><p>coloração de Gram. Devido à diferença nas camadas existentes em volta</p><p>de cada uma, após a coloração, a Gram-negativa fica com a coloração</p><p>rosa/vermelha, enquanto a Gram-positiva pode ser visualizada em um tom</p><p>roxo-azulado.</p><p>Logo, podemos observar que a bactéria Gram-positiva possui três ca-</p><p>madas, sendo a mais profunda, ou mais próxima do citoplasma, a chamada</p><p>membrana plasmática, conhecida por estar presente em todas as células vi-</p><p>vas, com o propósito de selecionar a entrada e a saída de substâncias do meio</p><p>intracelular e extracelular. Em seguida, existe um espaço, mais fino quando</p><p>comparado aos outros, denominado espaço periplasmático e, por último,</p><p>já na parte mais externa e em contato com o líquido extracelular, temos a</p><p>camada de peptideoglicanos.</p><p>Ainda na Figura 1, em vermelho, temos a bactéria Gram-negativa, que pos-</p><p>sui duas camadas a mais do que as Gram-positivas. Além de apresentar uma</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 81</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 81 18/01/2021 12:21:54</p><p>membrana plasmática, um espaço periplasmático e uma camada de peptideo-</p><p>glicanos (que é mais fi na nas Gram-negativas), essas bactérias também apre-</p><p>sentam mais um espaço periplasmático e uma membrana externa, em conta-</p><p>to com o líquido extracelular.</p><p>Assim, as bactérias Gram-negativas causam doenças mais graves que as</p><p>Gram-positivas, devido a elas possuírem uma cápsula protetora, em volta das</p><p>suas membranas, que faz com que as células de defesa do organismo não con-</p><p>sigam atacar, difi cultando o combate a elas. Logo, a membrana externa tem</p><p>propriedades que favorecem a resistência desse tipo de bactéria a antibióticos</p><p>como a penicilina, além de produzir substâncias pirogênicas, quando atacada.</p><p>Tipos de pirogênios</p><p>Na indústria farmacêutica, é obrigatório, dentro do controle de qualidade,</p><p>que os medicamentos injetáveis passem pelo teste de pesquisa de pirogênio,</p><p>visto que esse tipo de substância pode causar danos nos vasos sanguíneos, além</p><p>de outras complicações, podendo levar à morte. Desse modo, existem dois tipos</p><p>de pirogênios, com base no local de formação da endotoxina, que são:</p><p>• O exógeno, que é formado fora do corpo (Figura 2). Em geral, ele usa uma</p><p>via de administração parenteral contaminada para entrar no corpo do animal;</p><p>• O endógeno, que é formado dentro do próprio corpo. Foi descoberto após</p><p>alguns experimentos de cientistas que perceberam que o aumento de tempe-</p><p>ratura poderia ser uma forma de mecanismo de defesa do organismo.</p><p>Figura 2. Molécula de endotoxina de lipopolissacarídeo (LPS, lipídeo A e fragmento de núcleo interno) de E. coli. Fonte:</p><p>Shutterstock. Acesso em: 07/11/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 82</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 82 18/01/2021 12:22:19</p><p>Assim, detectou-se que células do sistema hematopoiético, como, por exem-</p><p>plo, os leucócitos polimorfonucleares produziam pirogênios endógenos, que ti-</p><p>nham como finalidade elevar a temperatura corporal. Ambos tipos de pirogênios</p><p>podem induzir a produção de uma molécula chamada de prostaglandina, que</p><p>tem sua ação bloqueada por fármacos responsáveis por baixar a temperatura cor-</p><p>poral, conhecidos como antitérmicos ou antipiréticos, sugerindo uma interligação</p><p>entre essas substâncias. Assim, podemos listar dois tipos de testes mais comu-</p><p>mente utilizados para detectar a presença de pirogênios:</p><p>• O teste de pirogênio in vivo, também chamado de teste em coelhos;</p><p>• O teste de pirogênios in vitro, também conhecido como teste de endotoxina</p><p>bacteriana, ou, ainda, lisado de amebócito do Limulus (LAL).</p><p>O teste in vitro é realizado em laboratórios específicos, sem a participação de</p><p>animais vivos. Esse teste passou a ser denominado lisado de amebócito do Limu-</p><p>lus (LAL), pois, no fim do século XIX, cientistas perceberam que, quando o sangue de</p><p>um caranguejo da espécie Limulus polyphemus (Figura 3) era retirado de seu corpo,</p><p>ocorria uma coagulação, passando a apresentar uma consistência de gelatina.</p><p>Figura 3. Caranguejo-ferradura. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 07/11/2020.</p><p>ASSISTA</p><p>Para que melhor entendamos a importância dessa espé-</p><p>cie de caranguejo para a vida humana, o documentário</p><p>Caranguejos-ferradura (também conhecido como Límulo),</p><p>do canal Vídeos da década de 2000, no YouTube, mostra</p><p>o habitat natural desses animais e traz informações inte-</p><p>ressantes, abordando outros estudos realizados com essa</p><p>espécie, que contribuiu para a evolução do ser humano.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 83</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 83 18/01/2021 12:22:23</p><p>Desse modo, estudando mais a fundo, os pesquisadores descobriram que</p><p>circulava na corrente sanguínea dos caranguejos apenas uma célula, conhecida</p><p>como amebócito. Além disso, algumas bactérias Gram-negativas acometiam es-</p><p>ses animais e os matavam, pois induziam uma coagulação intravascular neles.</p><p>Para descobrir exatamente como isso acontecia, os pesquisadores desenvolve-</p><p>ram um teste experimental que comprovou que a presença dos amebócitos era</p><p>responsável por reagir com a endotoxina liberada pelas bactérias Gram-negati-</p><p>vas e mudar a consistência do sangue. Assim, com o passar dos anos, cientistas</p><p>foram estudando e aprimorando a técnica LAL, que consiste em:</p><p>• Extrair o sangue do caranguejo por meio de um procedimento chamado de</p><p>sangria, pela introdução de uma agulha estéril entre a musculatura do animal;</p><p>• Misturar o sangue com produtos anticoagulantes, a fi m de evitar a coagu-</p><p>lação precipitada do material;</p><p>• Centrifugar o sangue e, em seguida, desprezar as substâncias que fi ca-</p><p>rem na superfície;</p><p>• Realizar a lavagem dos amebócitos e a retirada do anticoagulante com</p><p>solução de soro fi siológico;</p><p>• Introduzir água destilada para o rompimento das membradas celulares</p><p>e a liberação dos produtos intracelulares no meio;</p><p>• Liofi lizar a solução e armazenar.</p><p>Desse modo, a técnica de LAL, ou in vitro, foi constantemente atualizada e</p><p>levada para dentro dos laboratórios de controle de qualidade das indústrias,</p><p>com o objetivo de detectar a presença de endotoxinas</p><p>em amostras.</p><p>Procedimento de gelificação</p><p>Um dos métodos mais simples e utilizados para identifi car a presença de</p><p>endotoxinas utilizando a técnica do LAL é chamado de ponto fi nal de gelifi -</p><p>cação e pode ser dividido em duas fases. A primeira, denominada teste-limi-</p><p>te, apenas detecta se a quantidade de endotoxina presente na amostra está</p><p>acima ou abaixo dos valores de referência, ou seja, se está dentro dos limites</p><p>pré-determinados. A segunda fase é chamada de teste semiquantitativo e</p><p>torna possível quantifi car os valores de endotoxinas por método geométrico,</p><p>após repetidas diluições.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 84</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 84 18/01/2021 12:22:23</p><p>Esse procedimento consiste em colocar a endotoxina em contato com o meio de</p><p>cultura LAL, para que, assim, ocorra o processo de coagulação do sangue do caran-</p><p>guejo. No Diagrama 1, podemos ver um esquema de como a endotoxina age quando</p><p>entra em contato com esse tipo de substância, sendo responsável pela transformação</p><p>de uma pró-enzima – ainda inativa – em uma enzima ativada. Essa, por sua vez, faz</p><p>com que o coagulogênio, também em uma forma inativa, se transforme em sua forma</p><p>ativa, chamada de coagulina, fazendo com que ocorra a formação do gel.</p><p>DIAGRAMA 1. CASCADA DE GELIFICAÇÃO</p><p>Endotoxina</p><p>Proenzima Enzima ativada</p><p>Coagulogênio Coagulina</p><p>Formação do gel</p><p>Por meio do teste, é possível garantir que haja a presença de endotoxinas</p><p>bacterianas, liberadas por bactérias Gram-negativas. Assim, quanto mais espes-</p><p>so o gel ficar, maior a quantidade de toxina presente na amostra. A diluição desse</p><p>gel com a substância de amostra já introduzida, por sua vez, permite quantificar os</p><p>valores existentes de endotoxinas.</p><p>Contudo, esse método de ponto final de gelificação apresenta desvantagens,</p><p>como a incapacidade ou a pouca capacidade de detectar a presença de</p><p>endotoxinas quando a quantidade está muito baixa. Dessa</p><p>forma, existem outros meios mais sensíveis, como o ensaio</p><p>turbidimétrico, que é capaz de medir mais precisamente a</p><p>quantidade de endotoxina, por meio da turbidez da amos-</p><p>tra, causada pela precipitação de proteínas.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 85</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 85 18/01/2021 12:22:23</p><p>Pirogênios in vivo</p><p>As endotoxinas são os pirogênicos mais estudados na indústria farmacêu-</p><p>tica, pois existe a preocupação de evitar sua presença em soluções injetáveis,</p><p>vendidas para a utilização em seres vivos. Esses compostos possuem alto peso</p><p>molecular, sendo encontrados na camada externa de bactérias Gram-nega-</p><p>tivas e, quando purifi cados, passam a ser chamados de lipopolissacarídeos</p><p>(LPS), devido à sua constituição química. Podemos observar, na Figura 4, o es-</p><p>quema das membranas que envolvem a bactéria Gram-negativa, com ênfase</p><p>nos compostos presentes no LPS. Assim, podemos dividi-la em três partes:</p><p>• Lipídeo A, que, fi ca entre os fosfolipídeos da membrana externa;</p><p>• Polissacarídeo, como se fosse a parte inicial da cauda; e</p><p>• Polissacarídeo-O.</p><p>Porina</p><p>Peptideoglicano</p><p>Membrana interna</p><p>Membrana externa</p><p>Polissacarídeo-O</p><p>Lipídeo A</p><p>Fosfolipídeo</p><p>Espaço periplasmático</p><p>Proteína de membrana</p><p>Lip</p><p>op</p><p>ol</p><p>iss</p><p>ac</p><p>ar</p><p>íd</p><p>eo</p><p>Polissacarídeo</p><p>central</p><p>Figura 4. Camadas da parede celular da bactéria Gram-negativa com ênfase no lipopolissacarídeo. Fonte: Shutterstock.</p><p>Acesso em: 09/11/2020.</p><p>O lipídeo A é uma parte com característica hidrofóbicas e bem parecidas</p><p>em todas as bactérias que possui o LPS, já a parte de polissacarídeos é mais va-</p><p>riável em sua constituição. O oligossacarídeo, encontrado na porção fi nal do</p><p>polissacarídeo-O e voltado ao meio extracelular, é responsável pela especifi ci-</p><p>dade do lipopolissacarídeo. Desse modo, as cadeias que formam essas estru-</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 86</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 86 18/01/2021 12:22:43</p><p>turas têm sequências diferentes entre os açúcares, os lipídeos e as proteínas</p><p>que a compõem. Isso permitiu que os pesquisadores descobrissem variedades</p><p>de espécies de bactérias, como as Salmonellas.</p><p>Procedimento in vivo</p><p>Na primeira metade do século XIX, ficou determinado que o teste de</p><p>pirogênio em medicamentos administrados por via parenteral era funda-</p><p>mental. Na época, não se conheciam as endotoxinas tão a fundo como</p><p>hoje em dia, contudo, os efeitos adversos que ocorriam em muitos pa-</p><p>cientes apontaram para a necessidade de estudos mais completos. As-</p><p>sim, amostras de soluções contaminadas foram aplicadas em coelhos,</p><p>havendo o aumento da temperatura desses animais. Desse modo, co-</p><p>meçaram os experimentos mais aprofundados sobre o assunto.</p><p>Desde então, pouca coisa mudou nesses estudos, que não são sensí-</p><p>veis em indicar a quantidade de endotoxina, mas lembram um teste-li-</p><p>mite, determinando se há ou não a presença de endotoxinas. Uma das</p><p>mudanças que aconteceram foi a quantidade de animais testados, vis-</p><p>to que, quanto mais testes forem realizados, menor a chance de desvio</p><p>de resultado. Assim, um aumento de 0,5 °C, em média, de todos os ani-</p><p>mais testados, já permite que se considere a presença de endotoxinas na</p><p>amostra injetada.</p><p>Na Figura 5, podemos observar como são realizados esses experimen-</p><p>tos, sendo os coelhos colocados em aparatos específicos, chamados de</p><p>contendores, para imobilizar a região cervical e impedir que eles se lo-</p><p>comovam, e o profissional injeta a substância em umas das</p><p>orelhas do animal. Nesse mesmo contexto, é aferida a tem-</p><p>peratura, após o tempo pré-determinado. Isso pode ser feito</p><p>por via retal, sendo o termômetro introduzido por</p><p>cerca de 7 cm no reto do animal, de acordo com</p><p>a farmacopeia. Todos os materiais utilizados</p><p>devem ser, obrigatoriamente, despirogeniza-</p><p>dos e calibrados, a fim de garantir os resulta-</p><p>dos obtidos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 87</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 87 18/01/2021 12:22:43</p><p>Figura 5. Aplicação de substância em coelhos para teste in vivo. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 10/11/2020.</p><p>O coelho foi o animal escolhido nesse caso devido à semelhança em rela-</p><p>ção aos termorreceptores dos seres humanos. Visto que a diferença de peso</p><p>entre as duas espécies deve ser levada em consideração, utilizam-se coelhos</p><p>adultos. Contudo, os resultados obtidos são averiguados e uma equivalência</p><p>de dose e peso é feita, para comparar como seria a resposta do ser humano</p><p>à mesma substância.</p><p>Nesse tipo de teste, é permitido que o animal seja reutilizado, desde que</p><p>seja obedecida as normas entre uma inoculação e outra. Assim, animais que</p><p>não tiveram reação podem passar por novos testes após dois ou três dias,</p><p>enquanto os que tiveram têm que aguardar de duas a três semanas para pas-</p><p>sarem por novos procedimentos. Isso ocorre até que os animais se tornem</p><p>resistentes ou morram.</p><p>Fontes de pirogênios</p><p>Desde que os testes de pirogênio começaram a ser aplicados, não havia</p><p>valor exato que seria aceitável para reprovar ou aprovar um medicamento.</p><p>Assim, quando resolveram quantifi car, foram colocados valores muito</p><p>altos, permitindo que grandes quantidades de endotoxinas fossem</p><p>liberadas em medicamentos. Com o avanço dos experimen-</p><p>tos, a U.S. Food and Drug Administration (FDA), agência</p><p>reguladora americana, determinou valores aceitáveis, de</p><p>acordo com os produtos estudados (Tabela 1).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 88</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 88 18/01/2021 12:22:50</p><p>Produtos Valores limites de endotoxinas</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos 5,0 UE/kg</p><p>Radiomarcadores 2,5 UE/hg</p><p>Parenterais de grande volume 0,5 UE/mL</p><p>Água para injeção 0,25 UE/mL</p><p>Correlatos intratecais 0,06 UE/mL</p><p>Correlatos Até 0,5 UE/mL</p><p>Drogas intratecais 0,2 UE/mL</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicosProdutos farmacêuticos e biológicosProdutos farmacêuticos e biológicosProdutos farmacêuticos e biológicosProdutos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Parenterais</p><p>de grande volume</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Radiomarcadores</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Produtos farmacêuticos e biológicos</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Parenterais de grande volume</p><p>Água para injeção</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Correlatos</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Correlatos</p><p>Drogas intratecais</p><p>Correlatos intratecais</p><p>Correlatos</p><p>Drogas intratecais</p><p>Correlatos</p><p>Drogas intratecaisDrogas intratecais</p><p>5,0 UE/kg</p><p>Drogas intratecais</p><p>5,0 UE/kg</p><p>Drogas intratecais</p><p>5,0 UE/kg</p><p>2,5 UE/hg2,5 UE/hg2,5 UE/hg</p><p>0,5 UE/mL0,5 UE/mL</p><p>0,25 UE/mL</p><p>0,5 UE/mL</p><p>0,25 UE/mL0,25 UE/mL</p><p>0,06 UE/mL</p><p>0,25 UE/mL</p><p>0,06 UE/mL0,06 UE/mL</p><p>Até 0,5 UE/mL</p><p>0,06 UE/mL</p><p>Até 0,5 UE/mLAté 0,5 UE/mL</p><p>0,2 UE/mL</p><p>Até 0,5 UE/mL</p><p>0,2 UE/mL0,2 UE/mL0,2 UE/mL</p><p>TABELA 1. VALORES LIMITES DE ENDOTOXINAS EM PRODUTOS ESPECÍFICOS,</p><p>SEGUNDO A FDA</p><p>Muito se fala nas endotoxinas, já que são as mais comumente encontradas</p><p>com ação pirogênica. Contudo, é importante comentarmos de outros tipos,</p><p>que também podem causar danos, como, por exemplo, as cepas de estrepto-</p><p>cocos do grupo A, que possuem exotoxinas que causam vermelhidão da pele</p><p>e aumento da temperatura corpórea, chegando a causar choques e podendo</p><p>levar o ser humano à morte. Quando submetidos a testes in vitro, como o</p><p>LAL, elas causam gelifi cação no meio muito mais consistente do que no caso</p><p>da ação das endotoxinas.</p><p>Outra bactéria conhecida pelo seu efeito pirogênico é a Mycobacterium</p><p>tuberculosis, responsável por desenvolver a patologia conhecida como tu-</p><p>berculose. O aumento de temperatura se deve pela ação de fagócitos, além</p><p>da reação sistêmica, ou seja, que engloba o corpo como um todo.</p><p>Vale salientar que os pirogênicos não são exclusividade</p><p>de bactérias. Existem vírus e fungos que podem cau-</p><p>sar febre em seres humanos, porém, os testes in</p><p>vivo realizados em coelhos não foram totalmente</p><p>esclarecedores para compreender o mecanismo</p><p>de ação desses tipos de microrganismos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 89</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 89 18/01/2021 12:22:51</p><p>EXPLICANDO</p><p>Células fagocitárias são responsáveis por, entre outras funções, englobar</p><p>microrganismos estranhos presentes no corpo, formando uma bolsa e cau-</p><p>sando sua destruição, jogando enzimas que vão digerí-los e eliminá-los. As</p><p>células de defesa, como os leucócitos, são classifi cadas como fagocíticos,</p><p>uma vez que usam esse mecanismo para defender o organismo de pató-</p><p>genos. Além disso, existem estudos que estabelecem que esse tipo celular</p><p>está envolvido no mecanismo de pirogênios, participando do processo de</p><p>aumento de temperatura corporal.</p><p>Despirogenização</p><p>Existem diferentes formas de despirogenização, relacionadas à inativa-</p><p>ção e à remoção da molécula LPS da parede celular das bactérias, de modo</p><p>que a destruição, total ou parcial, ou a inativação dos sítios ativos podem</p><p>fazer com que a amostra seja classifi cada como apirogênica. Assim, deve-</p><p>mos entender alguns dos mecanismos capazes de cumprir essa função, co-</p><p>meçando pelos meios adequados para inativar o lipopolissacarídeo.</p><p>A hidrólise acidobásica atua no lipídeo A, realizando sua inativação e,</p><p>desse modo, impedindo a ação biológica do LPS. Assim, ela impede a movi-</p><p>mentação de substâncias entre a membrana, visto que essa parte da molé-</p><p>cula é responsável pelo transporte aquoso de substâncias. A hidrólise ácida</p><p>ocorre pela incorporação de ácido clorídrico (HCL), por 30 minutos, a 100 °C,</p><p>enquanto na alcalina age o hidróxido de sódio (NaOH) pelo processo de sapo-</p><p>nifi cação, por 1 hora, a 50 °C.</p><p>A oxidação foi descoberta no começo do século XX, quando a água oxi-</p><p>genada foi incorporada à solução com as endotoxinas, e, assim, a perda</p><p>de função pirogênica é percebida. A ideia é que essa substância inative o</p><p>lipídeo A, por oxidação dos ácidos graxos. Contudo, há vantagens e des-</p><p>vantagens: a facilidade de utilização do peróxido de hidrogênio, tanto para</p><p>adicionar como eliminar da amostra, é uma vantagem, mas ele pode oxidar</p><p>outras substâncias presentes, o que pode atrapalhar na função geral do</p><p>produto farmacêutico.</p><p>A alquilação, geralmente, é feita com a utilização de óxido de etileno,</p><p>que se incorpora em uma ligação presente no lipídeo A, fazendo com que</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 90</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 90 18/01/2021 12:22:51</p><p>perca sua função. Também existe o processo por radiação ionizante, que</p><p>tem como mecanismo de ação física e biológica a mudança da conformação</p><p>das endotoxinas, que, consequentemente, perdem a função. Contudo, os</p><p>riscos de contaminação são maiores do que os benefícios de despirogeniza-</p><p>ção por esse tipo de mecanismo.</p><p>Por fim, temos o processo térmico, comumente o mais utilizado em produtos</p><p>que não são sensíveis à temperatura, conhecidos como termolábeis. Nesse caso,</p><p>utiliza-se o calor seco, dentro de estufas, podendo ser colocados tanto a substân-</p><p>cia, como frascos de vidro e plástico, resistentes ao calor. Dependendo do tipo de</p><p>endotoxina que se quer inativar, utiliza-se uma temperatura e tempo adequados,</p><p>lembrando que alguns tipos são mais resistentes que outros.</p><p>Até aqui, exploramos os mecanismos capazes de inativar a ação de endotoxi-</p><p>nas. Agora, poderemos conhecer os meios de remover tal composto da amostra</p><p>em questão. Um dos mais básicos é a lavagem, geralmente utilizada em locais</p><p>sólidos, como superfícies, em que, para realizar o procedimento, se utiliza água de</p><p>injeção estéril.</p><p>Ainda dentro de meios simples para eliminação de endotoxinas, temos a des-</p><p>tilação (Figura 6), na qual acontece a mudança de estado físico da substância. Pri-</p><p>meiramente, a substância é fervida, até que se evapore, e, em seguida, ela passa</p><p>por um condensador, voltando ao seu estado líquido. Desse modo, as moléculas</p><p>de lipopolissacarídeos são grandes o suficiente para não conseguirem evaporar e,</p><p>assim, se mantêm na primeira fase líquida.</p><p>Figura 6. Destilação. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 10/11/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 91</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 91 18/01/2021 12:23:00</p><p>A ultrafi ltração também pode ser efi ciente para eliminar as endotoxinas, que</p><p>utiliza membranas de fi ltração com poros menores que a endotoxinas, para que</p><p>haja efi ciência no processo. Em casos em que as moléculas sejam muito grandes e</p><p>difi cultem a fi ltração, pode-se incorporar um agente que as quebre, mas que ainda</p><p>as mantenha em tamanhos maiores que o poro da membrana.</p><p>A osmose ocorre quando existe diferença de concentração entre dois meios, ou</p><p>seja, há uma membrana que separa duas soluções, sendo uma mais concentrada e a</p><p>outra menos concentrada. Um exemplo simples e didático seria quando uma mem-</p><p>brana semipermeável separa um litro de água com 500 mg de sal de cozinha diluído</p><p>(muito concentrado) de outra solução, com apenas 100 mg de sal. Assim, as soluções</p><p>tendem a se manter em equilíbrio, isto é, a água migra, de forma passiva (naturalmen-</p><p>te), do lado com menor quantidade de sal para o lado com maior concentração, com o</p><p>intuito de deixar o meio mais diluído e, assim, igualar as concentrações.</p><p>Dito isso, podemos conceituar a osmose reversa, em que a água fará o trajeto</p><p>inverso, indo do meio mais concentrado para o menos concentrado, ao contrário da</p><p>osmose normal. Contudo, para que isso ocorra, é necessário que seja realizado uma</p><p>pressão (Figura 7), pois não será um processo natural, mas, sim,</p><p>forçado. Desse modo, é realizada uma pressão em cima da so-</p><p>lução que pretende ser despirogenizada, forçando-a a passar</p><p>pela membrana semipermeável, cujo tamanho dos poros é</p><p>menor que as endotoxinas, impedindo que essas</p><p>moléculas</p><p>passem para o outro lado.</p><p>Pressão</p><p>Alta concentração</p><p>de contaminantes</p><p>Membrana</p><p>semipermeável</p><p>Baixa concentração</p><p>de contaminantes</p><p>Osmose reversa</p><p>Figura 7. Osmose reversa. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 10/11/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 92</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 92 18/01/2021 12:23:01</p><p>Toxicidade</p><p>Quando classifi camos uma substância como tóxica, estamos dizendo que</p><p>ela é capaz de causar danos, de alguma forma. Em outras palavras, quando</p><p>valoramos o quão danoso um produto é para o ser vivo, estamos estimando a</p><p>sua toxicidade. Assim, a presença de pirogênios e outras substâncias nocivas</p><p>faz parte do nível de toxicidade que pode ser encontrado em medicamentos.</p><p>Para garantir que um fármaco não tenha possibilidade de intoxicar os se-</p><p>res vivos que o usarão, é necessário que ele passe por todo o processo de</p><p>garantia de qualidade e esteja dentro das especifi cações já estabelecidas</p><p>pelas agências de saúde. Assim, é necessário que se faça tanto o teste in vitro</p><p>como o in vivo, sendo que a quantidade de animais utilizados, diferentemente</p><p>dos testes para pirogênio, deve ser a menor possível, entre 5 e 15 animais.</p><p>Ainda existe muita controvérsia em utilizar animais de laboratório, sejam</p><p>coelhos ou camundongos, a fi m de administrar substâncias potencialmente</p><p>tóxicas. As especifi cações descrevem que não se deve levar o animal ao sofri-</p><p>mento durante os experimentos. Além disso, devido à necessidade de que os</p><p>animais sejam sacrifi cados após os testes, muito já se falou sobre a proibição</p><p>dos testes in vivo. Contudo, eles ainda são considerados fundamentais para</p><p>garantir a segurança do ser humano.</p><p>Testes de toxicidade aguda</p><p>Os produtos passíveis de teste de toxicidade são os medicamentos de</p><p>origem sintética e biológica, bem como os correlatos (material plástico e as</p><p>embalagens de acondicionamento), as matérias-primas, os produtos acaba-</p><p>dos, os cosméticos e os produtos de higiene em geral. Esses devem passar</p><p>tanto pelo teste in vivo como pelo teste in vivo. De modo que, para analisar-</p><p>mos os diferentes riscos que esses agentes tóxicos podem trazer para o ser</p><p>vivo, os testes de toxicidade focam na maneira que essas substâncias po-</p><p>dem se desenvolver e o tempo de exposição necessário para causar danos.</p><p>Assim, podemos classifi cá-las em aguda, subcrônica e crônica.</p><p>Os experimentos práticos e teóricos da toxicidade buscam informar, bem</p><p>como ter como referência, o que conhecemos como dose letal mediana,</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 93</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 93 18/01/2021 12:23:01</p><p>representados pela sigla DL50, que significa que a dose utilizada foi capaz de</p><p>matar 50% dos animais que foram testados. Na Figura 8, podemos observar</p><p>um gráfico ilustrativo que mostra as doses utilizadas em testes e que ma-</p><p>taram 50% da população estudada, isto é, quanto maior o valor da escala,</p><p>maior a potência de causar danos no ser humano.</p><p>0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13</p><p>-log LD50 kg/kg</p><p>Ág</p><p>ua</p><p>Sa</p><p>ca</p><p>ro</p><p>se</p><p>Ác</p><p>id</p><p>o</p><p>as</p><p>or</p><p>bi</p><p>co</p><p>Cl</p><p>or</p><p>et</p><p>o</p><p>de</p><p>só</p><p>di</p><p>o</p><p>Pa</p><p>ra</p><p>ce</p><p>ta</p><p>m</p><p>ol</p><p>Tó</p><p>xi</p><p>na</p><p>b</p><p>ot</p><p>ul</p><p>ín</p><p>ica</p><p>A escala dos venenos</p><p>Ni</p><p>co</p><p>tin</p><p>a</p><p>Es</p><p>tri</p><p>cn</p><p>in</p><p>a</p><p>Fó</p><p>sfo</p><p>ro</p><p>b</p><p>ra</p><p>nc</p><p>o</p><p>Afl</p><p>at</p><p>ox</p><p>in</p><p>a</p><p>B1</p><p>TC</p><p>CD</p><p>Ca</p><p>fe</p><p>ín</p><p>a</p><p>Et</p><p>an</p><p>ol</p><p>Figura 8. Exemplo de dose letal mediana de algumas substâncias. Fonte: Wikimedia Commons. Acesso em: 13/11/2020.</p><p>A toxicidade de um produto também está relacionada à quantidade utili-</p><p>zada, pois a grande maioria das substâncias encontradas no planeta têm um</p><p>nível de toxicidade. Assim, a diferença entre o que faz bem e o que faz mal</p><p>está na dose. Para avaliar a toxicidade aguda de produtos, existem algumas</p><p>especificações para separar qual tipo de produto deve ser testado.</p><p>Em se tratando de correlatos, por exemplo, observa-se o tempo de uti-</p><p>lização do produto, sendo considerado de curto prazo quando dura de 60</p><p>minutos a um mês de contato, e de longo prazo quando dura mais de 30 dias.</p><p>Quando o quesito é avaliar a exposição direta do corpo humano a esse mate-</p><p>rial, podemos classificar em:</p><p>• Limitado, quando a exposição é de menos de 24 horas;</p><p>• Prolongado, quando a exposição é entre 24 horas e 30 dias; e</p><p>• Permanente, quando a exposição é de mais de 30 dias.</p><p>De modo que, para a determinação do DL50 em ensaios de toxicidade</p><p>aguda, são necessárias 24 horas de teste, enquanto, quando se pretende</p><p>determinar a concentração media letal CL50, são necessárias 96 horas. As-</p><p>sim, as principais finalidades para realizar o teste de toxicidade aguda são</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 94</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 94 18/01/2021 12:23:01</p><p>conseguir informações especificas e determinar a dose e a concentração</p><p>media letal de tais produtos.</p><p>Outro ponto importante é entender como funciona o mecanismo desse</p><p>produto no corpo, isto é, como ele consegue intoxicar o ser vivo. Além disso,</p><p>com os resultados agudos, podemos traçar quais seriam as doses utilizadas</p><p>caso seja necessário estudos para toxicidade crônica. Por último, é importan-</p><p>te garantir a segurança do consumidor final, sendo necessário o estudo de</p><p>cada lote liberado na indústria.</p><p>Até aqui, vimos o teste de toxicidade aguda, com efeito local em partes</p><p>do corpo. Contudo, também há o teste agudo sistêmico, usado quando a</p><p>substância age em mais de um sistema de funcionamento do ser vivo. O tes-</p><p>te pode ser feito por administração oral, com base no DL50 da amostra a ser</p><p>estudada e considerando a duração do efeito sistêmico, a escolha do grupo</p><p>de testes (quantidade, idade e tipo de animal-teste) e a dieta a ser seguida</p><p>durante a observação. Além disso, entre as 8 e 12 horas após a administração,</p><p>os animais devem ser controlados.</p><p>Seguindo protocolos parecidos, embora cada um tenha suas especificida-</p><p>des, pode-se realizar testes de aplicação dérmica (Figura 9), sendo realizada</p><p>a tricotomia, para eliminar os pelos do animal, a fim de não interferir na ab-</p><p>sorção da substância em teste. Em seguida, são feitos pontos, para delimitar</p><p>e definir onde serão realizadas as aplicações, que devem ser mantidos até o</p><p>final do experimento, de modo que deve ser analisada a pele, bem como se há</p><p>interferência no crescimento da pelagem nova, já que o estudo não é apenas</p><p>local, estudando também como essa substância age no corpo.</p><p>Figura 9. Teste dérmico. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 13/11/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 95</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 95 18/01/2021 12:23:05</p><p>Outras vias de administração comumente estudadas são a inalação, que</p><p>pode ser feita por meio de canículas introduzidas nas narinas ou por meio</p><p>de câmaras de gás, e as vias parenterais, geralmente feita por meio de</p><p>injeções sistêmicas.</p><p>Testes de toxicidade subcrônica e crônica</p><p>Após compreendermos como funcionam os testes em toxicidade aguda,</p><p>devemos conceituar os testes que analisam outros níveis. Quando tratamos</p><p>da toxicidade subcrônica, por exemplo, estamos falando de testes que du-</p><p>ram entre 30 dias e 10% da expectativa de vida do animal em teste, ou seja, se</p><p>um camundongo vive entre dois anos e meio e três anos, para que seja con-</p><p>siderado um teste subcrônico, sua duração não pode ser maior que 90 dias.</p><p>Os estudos feitos para observar os resultados desse tipo de teste são mais</p><p>variados do que nos testes agudos. Assim, além de coletar os dados bási-</p><p>cos, também se faz uma análise de urina, uma hematologia, um controle de</p><p>massa corporal e uma histopatologia, entre outros. Sendo esse tipo de teste</p><p>mais prolongado, se torna ainda mais necessário seguir corretamente as re-</p><p>ferências impostas, tanto para garantir resultados confi áveis, que permitirão</p><p>traçar estratégias para posteriores estudos, como para evitar o sofrimento</p><p>do animal-teste.</p><p>Em testes de toxicidade crônica, a diferença se dá, principalmente, no tem-</p><p>po que o animal será exposto à substância, para a realização do experimento,</p><p>havendo variações de acordo com a espécie do ser vivo. Por exemplo, em ca-</p><p>mundongos, o teste</p><p>dura em torno de 18 a 24 meses, enquanto, nos macacos,</p><p>esse tempo é de 5 a 7 anos e, nos ratos, de 24 a 30 meses, sendo as vias de ad-</p><p>ministração iguais às utilizadas nos testes agudos e subcrônicos. Vale salientar</p><p>que, em estudos muito prolongados, como os crônicos, é recomendado que se</p><p>façam estudos complementares, de teor oncológico, para determinar os riscos</p><p>do desenvolvimento de tumores (benignos ou malignos).</p><p>Ainda dentro desse contexto, existe a avaliação de teratogenicidade,</p><p>realizado em animais-testes fêmeas gestantes, a fi m de obter informações</p><p>sobre se a substância em estudo pode desenvolver algum problema no feto,</p><p>seja uma anormalidade morfológica ou funcional. O estudo se desenvolve</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 96</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 96 18/01/2021 12:23:05</p><p>com a aplicação de substância durante todo o período gestacional da fê-</p><p>mea, sendo que, após o nascimento, esse fi lhote passa por vários exames,</p><p>para detectar diferentes sinais de anomalias. Esse tipo de teste também é</p><p>realizado in vitro, ou seja, em células desenvolvidas em laboratório, buscan-</p><p>do alguma alteração durante a sua divisão celular.</p><p>CURIOSIDADE</p><p>Existem fármacos, como, por exemplo, a isotretinoína, representada co-</p><p>mercialmente pelo nome de Roacutan, utilizada para tratamento de acne</p><p>severa. Estudos de teratogenicidade comprovaram que a capacidade de</p><p>provocar anomalias em fetos de mães que fi zeram uso desse medicamen-</p><p>to é altíssima. De modo que mulheres em idade fértil precisam assinar</p><p>um termo de responsabilidade, que diz que estão cientes dos riscos que</p><p>correm se engravidarem durante e até um ano depois do tratamento feito</p><p>com esse medicamento.</p><p>Procedimento de Draize</p><p>John H. Draize foi um cientista que, em 1944, padronizou o teste de</p><p>irritabilidade primária da pele, utilizado até os dias de hoje, sem nunca</p><p>ter sido modificado em seu contexto geral. O teste foi realizado em vários</p><p>tipos de animais, até que se constatou que a pele dos coelhos reagia de</p><p>maneira mais aproximada à dos seres humanos. Esse experimento é reali-</p><p>zado após a raspagem do pelo do animal e de escoriações na pele, em uma</p><p>área delimitada, sendo aplicada cerca de 0,5 mL ou 0,5 g de substância. Em</p><p>seguida, se envolve a região com algum tipo de material impermeável, por</p><p>24 horas, a fim de evitar a evaporação do produto. Por fim, deve-se obser-</p><p>var os resultados, comparando-os a valores pré-definidos, repetindo isso</p><p>após 72 horas da aplicação.</p><p>Os resultados são obtidos pela busca por eritemas e ede-</p><p>mas (Figura 10), tipos de irritabilidade da pele. A ver-</p><p>melhidão na pele caracteriza o eritema, enquanto</p><p>a descamação é chamada de escara, porém, em</p><p>casos mais graves, podem-se formar edemas,</p><p>quando existe um acúmulo de água no tecido,</p><p>formando bolhas.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 97</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 97 18/01/2021 12:23:05</p><p>Figura 10. Eritema de pele. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 13/11/2020.</p><p>Os resultados são analisados de acordo com os parâme-</p><p>tros defi nidos na Tabela 2, sendo declarados os valores re-</p><p>ferentes à situação encontrada na pele do animal após</p><p>24 ou 72 horas da aplicação. Por exemplo, o valor 0 é de-</p><p>fi nido quando não se observa nenhuma alteração na pele,</p><p>enquanto a escala de número 4 são os casos mais severos.</p><p>Parâmetros Respostas da pele Valor</p><p>Formação de eritemas e escaras</p><p>Ausência de eritema 0</p><p>Eritema muito leve 1</p><p>Eritema bem defi nido 2</p><p>Eritema moderado e severo 3</p><p>Eritema grave com formação</p><p>de escaras 4</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de edema 0</p><p>Edema muito leve (apenas visível) 1</p><p>Edema leve (contornos nítidos) 2</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm) 3</p><p>Edema grave (superior a 1 cm) 4</p><p>Formação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escarasFormação de eritemas e escaras</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Eritema muito leve</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Eritema muito leve</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Eritema muito leve</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Eritema muito leve</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Formação de edema</p><p>Ausência de eritema</p><p>Eritema muito leve</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Eritema muito leve</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>de escaras</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Eritema bem defi nido</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>de escaras</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>de escaras</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Eritema moderado e severo</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>0</p><p>Eritema grave com formação</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>Ausência de edema</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>2</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>3</p><p>Edema muito leve (apenas visível)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>Edema moderado</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>Edema leve (contornos nítidos)</p><p>(espessura +/- 1 cm)</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>0</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>1</p><p>Edema grave (superior a 1 cm)</p><p>3</p><p>4</p><p>TABELA 2. GRAU DE IRRITABILIDADE DA PELE PELO PROCEDIMENTO DE DRAIZE</p><p>Fonte: CHORILLI; et al., 2009. (Adaptado).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 98</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 98 18/01/2021 12:23:11</p><p>Sintetizando</p><p>Durante o controle de qualidade de medicamentos produzidos pela indús-</p><p>tria farmacêutica, é imprescindível seguir técnicas, processos e comparar os</p><p>valores obtidos com os limites pré-estabelecidos por agências sanitárias. As-</p><p>sim, testes em laboratório que simulam o contato dessas substâncias com o</p><p>fluido corpóreo se tornaram indispensáveis para que esses fármacos fossem</p><p>liberados para comercialização.</p><p>Quando se trata de soluções com via de administração parenteral, foram de-</p><p>senvolvidos testes de pirogenicidades, realizados, primeiramente, in vitro, pelo pro-</p><p>cesso conhecido como teste de endotoxina bacteriana ou lisado de amebócito do</p><p>Limulus (LAL). Nesse caso, as amostras entram em contato com um meio de cultura</p><p>fabricada a partir do sangue de um caranguejo-ferradura e, caso haja endotoxinas</p><p>presentes na solução, há mudança do meio, saindo do aquoso e se transformando</p><p>em gel. Nesse caso, dependendo de como é feito o teste, pode-se apenas saber se</p><p>existe ou não a presença de pirogênios, como as endotoxinas, e, também, quantifi-</p><p>cá-las após várias diluições desse meio de cultura.</p><p>Após a realização do teste in vitro, é realizado o teste in vivo, que tem como</p><p>referência a utilização de coelhos, nos quais se injeta a amostra que se necessi-</p><p>ta testar e afere-se a temperatura dos animais. Após obter os resultados, faz-se</p><p>uma média de quanto se aumentou a</p><p>temperatura corpórea, para poder concluir</p><p>se existe ou não endotoxinas na amostra. Há um valor limite para cada tipo de</p><p>produto farmacêutico, sendo permitido para alguns um valor pouco maior de con-</p><p>taminação. Contudo, há técnicas que se pode utilizar para inativar ou remover as</p><p>endotoxinas, o que chamamos de despirogenização, garantindo que superfícies,</p><p>frascos e soluções se tornem apirogênicas.</p><p>Por fim, falamos de toxicidade, que pode ser classificada como aguda, local ou</p><p>sistêmica, bem como subcrônica e crônica. Os tipos de via de administração dos</p><p>testes são praticamente os mesmos, sendo que as diferenças se dão devido ao tem-</p><p>po de exposição do animal-teste com o produto, além da quantidade de exames</p><p>realizados a fim de obter os resultados necessários para concluir qual a extensão do</p><p>dano que a amostra pode causar. Ainda nesse contexto, abordamos o procedimen-</p><p>to de Draize, uma técnica antiga, e conservada até os dias atuais, que traz resultados</p><p>sobre como um produto pode ou não irritar a pele do ser vivo.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 99</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 99 18/01/2021 12:23:11</p><p>Referências bibliográficas</p><p>ADAMI, E. R. Atenção farmacêutica aos pacientes em uso de medicamentos</p><p>inibidores de receptor do fator de crescimento epidérmico de 1ª e 2ª linha</p><p>de tratamento. Revista UNIANDRADE, Curitiba, v. 21, n. 1, p. 59-81. Disponí-</p><p>vel em: <https://revista.uniandrade.br/index.php/revistauniandrade/article/</p><p>view/1316/0>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>BATISTA, E. S.; COSTA, A. G. V.; PINHEIRO-SANT’ANA, H. M. Adição da vitamina E</p><p>aos alimentos: implicações para os alimentos e para a saúde humana. Revista</p><p>de Nutrição, Campinas, v. 20, n. 5, p. 525-535, 2007. p. 525-535. 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Disponível em: <ht-</p><p>tps://www.youtube.com/watch?v=ycmARS9LLeE>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>CHORILLI, M.; et al. Ensaios biológicos para avaliação de segurança de produtos</p><p>cosméticos. Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, Araraqua-</p><p>ra, v. 30, n. 1, p. 19-30, 2009. Disponível em: <https://www.researchgate.net/</p><p>publication/49599564_Ensaios_biologicos_para_avaliacao_de_seguranca_de_</p><p>produtos_cosmeticos>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>GINDRI, A. L.; LAPORTA, L. V.; SANTOS, M. R. Controle microbiológico de drogas</p><p>vegetais comercializadas na região central do Rio Grande do Sul. Revista Bra-</p><p>sileira de Plantas Medicinais, Botucatu, v. 14, n. 3, p. 563-570, 2012. Disponível</p><p>em: <https://doi.org/10.1590/S1516-05722012000300020>. Acesso: 16 dez. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 100</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 100 18/01/2021 12:23:11</p><p>KANEKO, T. M. Pirogênios, testes de LAL e despirogenação. Revista Brasileira</p><p>de Ciências Farmacêuticas, São Paulo, v. 40, n. 2, p. 270-271, 2004. Disponí-</p><p>vel em: <http://dx.doi.org/10.1590/S1516-93322004000200022>. Acesso em: 16</p><p>dez. 2020.</p><p>MORO, A.; INVERNIZZI, N. A tragédia da talidomida: a luta pelos direitos das ví-</p><p>timas e por melhor regulação de medicamentos. História, Ciências, Saúde -</p><p>Manguinhos, Rio de Janeiro, v. 24, n. 3, p. 603-622, 2017. Disponível em: <http://</p><p>dx.doi.org/10.1590/S0104-59702017000300004>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>PINTO, T. J. A.; KANEKO, T. M.; PINTO, A. F. Controle biológico de qualidade de</p><p>produtos farmacêuticos, correlatos e cosméticos. 4. ed. Barueri: Manole, 2015.</p><p>PRESOTO, A. E. F.; ALMEIDA-MURADIAN, L. B. Validação de métodos cromato-</p><p>gráficos por clae para análise das vitaminas B1, B2, B6 e niacina naturalmente</p><p>presentes em farinha de cereais. Química Nova, São Paulo, v. 31, n. 3, p. 498-502,</p><p>2008. Disponível em: <https://doi.org/10.1590/S0100-40422008000300006>.</p><p>Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>SANTORO, M. I. R. M. Introdução ao controle de qualidade de medicamentos.</p><p>São Paulo: Editora da USP, 1988.</p><p>SILVA, C. C.; et al. Métodos alternativos para a detecção de pirogênios em pro-</p><p>dutos e ambientes sujeitos a Vigilância Sanitária: avanços e perspectivas no Bra-</p><p>sil a partir do reconhecimento internacional do teste de ativação de monócitos.</p><p>Revista Vigilância Sanitária em Debate: Sociedade, Ciência & Tecnologia,</p><p>São Paulo, v. 6, n. 1, p. 137-149, 2018. Disponível em: <https://doi.org/10.22239/</p><p>2317-269x.01082>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>VIEIRA, N. R.; VIANA, W. O.; ALMEIDA, J. F. M. Controle de qualidade microbioló-</p><p>gica de produtos não estéreis. Brazilian Journal of Development, Curitiba, v. 6,</p><p>n. 1, p. 2889-2901, 2020. Disponível em: <https://doi.org/10.34117/bjdv6n1-208>.</p><p>Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 101</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID3.indd 101 18/01/2021 12:23:11</p><p>MÉTODOS DE</p><p>IRRITAÇÃO OCULAR</p><p>E DÉRMICA</p><p>4</p><p>UNIDADE</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 102 18/01/2021 12:40:59</p><p>Objetivos da unidade</p><p>Tópicos de estudo</p><p>Entender a anatomia ocular;</p><p>Compreender a análise para detectar irritação ocular;</p><p>Entender a anatomia da pele;</p><p>Compreender a análise para detectar irritação dérmica;</p><p>Diferenciar os testes in vitro e in vivo;</p><p>Conhecer o teste de Draize.</p><p>Método de irritação ocular</p><p>Anatomia ocular</p><p>Teste de irritação ocular in vivo</p><p>Teste de irritação ocular in vitro</p><p>Controle de qualidade de</p><p>medicamento oftálmico</p><p>Método de irritação dérmica</p><p>Anatomia da pele humana</p><p>Teste adjuvante completo de</p><p>Freund</p><p>Fototoxicidade</p><p>Testes de implantes</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 103</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 103 18/01/2021 12:40:59</p><p>Método de irritação ocular</p><p>As substâncias que entram em contato com o ser humano, sejam as</p><p>que atuam por efeito local ou sistêmico, necessitam da realização de inú-</p><p>meros testes a fim de garantir a segurança e eficácia. Cada teste pode</p><p>verificar determinada situação, coletando resultados para conferir se o</p><p>produto está dentro das especificações predeterminadas pelas agências</p><p>reguladoras.</p><p>Quando levamos em consideração as indústrias que produzem medica-</p><p>mento e cosméticos, serão realizados testes gerais, como os que conferem</p><p>se há contaminação por microrganismos tanto nos insumos como nos fras-</p><p>co que irão acondicionar os produtos. Outro ponto é testar se a quantidade</p><p>de princípio ativo que deve estar contida na fórmula está correta, sendo ti-</p><p>radas, aleatoriamente, algumas amostras para teste. Alguns medicamentos</p><p>necessitam de testes específi cos, como, por exemplo, os oftálmicos.</p><p>Nesse caso, é necessário, também, realizar o teste de irritação ocular,</p><p>que passa por testes in vitro e in vivo a fi m de garantir que não haverá da-</p><p>nos para o consumidor. O olho é uma mucosa bem irrigada que pode atuar</p><p>como entrada de muitos patógenos, sendo que prejuízos causados a essa</p><p>área podem ser irreversíveis.</p><p>Anatomia ocular</p><p>À simples vista, ser capaz de visualizar uma imagem não é complexo. Pre-</p><p>cisamos de luz, pois no escuro é mais difícil; miramos nosso olho para onde</p><p>temos interesse em ver e, pronto, lá está! Mas será que é tão simples assim?</p><p>Claro que não! O olho é composto de várias camadas, muitos vasos sanguíneos</p><p>e milhares de terminações nervosas que são capazes de processar a imagem e</p><p>levar até nosso cérebro para que ele interprete.</p><p>Além de ter como função a visão, o olho</p><p>também é capaz de proteger e nu-</p><p>trir, assim como as glândulas lacrimais encontradas logo abaixo do globo ocular</p><p>têm como objetivo liberar as lágrimas que irão lubrifi car e eliminar impurezas.</p><p>Outra parte importante para proteção é a sobrancelha; os pelos também são</p><p>capazes de reter o suor, evitando que caia nos olhos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 104</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 104 18/01/2021 12:40:59</p><p>Nesse mesmo sistema, os cones e bastonetes são as células responsáveis</p><p>por sermos capazes de distinguir cores. Os cones são capazes de reconhecer</p><p>cada tipo de cor pelo comprimento de onda que cada uma emite, enquanto os</p><p>bastonetes informam ao cérebro a intensidade da luz que está sendo emitida,</p><p>o que também funciona como um tipo de proteção.</p><p>Figura 1. Anatomia ocular. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 15/12/2020. ID: 657947488.</p><p>A parte de trás do globo ocular é formada por três camadas,</p><p>chamadas de externa, média e interna, cada qual com suas fun-</p><p>ções e de extrema importância para fazer com que o olho desem-</p><p>penhe seu papel. Como podemos observar na Figura 1, o</p><p>globo ocular é composto por várias partes que, em con-</p><p>junto, fazem com que você seja capaz de olhar, ler e in-</p><p>terpretar essas imagens, sendo que, por trás do globo</p><p>ocular sai o nervo óptico, que é responsável por levar os</p><p>impulsos elétricos até o cérebro.</p><p>A esclera, a famosa “parte branca” do olho, caracteriza-se por ser uma mem-</p><p>brana que tem como função proteger o globo ocular, sendo recoberta por outra</p><p>membrana chamada de conjuntiva. A íris é a parte colorida, podendo variar</p><p>entre tons de azul, verde, marrom e preto, que tem o formato de disco e envolve</p><p>a pupila, região que controla a passagem de luz.</p><p>A córnea é uma membrana transparente que envolve o globo ocular, prote-</p><p>ge o sistema óptico e refrata a luz que incide. Logo atrás da pupila, localiza-se a</p><p>lente ou cristalino, que funciona como uma lente de óculos, porém, pode mudar</p><p>o que também funciona como um tipo de proteção.</p><p>. Anatomia ocular. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 15/12/2020. ID: 657947488.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 105</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 105 18/01/2021 12:41:00</p><p>sua conformação para focalizar uma imagem que esteja mais longe ou mais per-</p><p>to. Para manter o cristalino no lugar certo, há uma musculatura lisa chamada de</p><p>corpo ciliar, que, além dessa função, também secreta humor aquoso.</p><p>EXPLICANDO</p><p>O humor aquoso, como o próprio nome sugere, é um líquido transparente</p><p>de consistência aquosa liberado pelo cristalino, ficando localizado entre</p><p>a córnea e o cristalino. Sua função é levar substâncias nutritivas para</p><p>essas áreas próximas, além de regular a pressão do olho. Sua produção é</p><p>constante, bem como a sua drenagem para que não se acumule além do</p><p>necessário, sendo responsável por manter o globo ocular no lugar correto.</p><p>A falta ou o excesso do humor aquoso pode levar à cegueira.</p><p>Até esse ponto, abordamos a parte frontal do olho, agora veremos as es-</p><p>truturas que se localizam na parte posterior, mais interna da órbita ocular. A</p><p>retina é umas das áreas mais importantes, sendo a região onde se localizam</p><p>os fotorreceptores, que irão coletar a imagem e enviar ao cérebro pelo nervo</p><p>óptico para que seja interpretada, por isso que essa área tem uma irrigação</p><p>sanguínea bem definida, chamada de vasos sanguíneos da retina.</p><p>A mácula é uma pequena área especializada da retina localizada na região</p><p>temporal, embaixo do disco óptico, responsável por captar imagens mais deta-</p><p>lhadas e em movimento para encaminhar ao cérebro. Por fim, temos o humor</p><p>vítreo, o qual tem consistência viscosa, parecida com uma gelatina, com a fun-</p><p>ção de manter a forma esférica do olho. Localiza-se entre a retina e o cristalino,</p><p>sendo mantido esse compartimento sob pressão.</p><p>Agora que já conhecemos as principais estruturas oculares, somos capazes</p><p>de entender o mecanismo fisiológico da visão. Primeiramente, a luz atravessa a</p><p>córnea e chega à íris, sendo que, quando incide na pupila, haverá um controle da</p><p>quantidade de luz que poderá entrar. Assim, quando a pupila se dilata, isto é,</p><p>fica com o diâmetro maior, permite maior passagem de luz, o que ocorre quando</p><p>estamos em ambientes escuros. De modo que o inverso também é verdadeiro:</p><p>quando a oferta de luz é grande, como em um ambiente ensolarado, a pupila se</p><p>contrai, diminuindo seu diâmetro e impedindo o excesso de luz.</p><p>Em seguida, a imagem chega ao cristalino, que será responsável por foca-</p><p>lizá-la na retina, onde diversas células fotorreceptoras, como os cones e bas-</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 106</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 106 18/01/2021 12:41:00</p><p>tonetes, serão responsáveis por fabricar impulsos elétricos e enviar, através do</p><p>nervo óptico, até o cérebro, para que possam ser interpretadas. Vale ressaltar</p><p>que a imagem gerada pelo cristalino na retina é feita de ponta-cabeça e é</p><p>responsabilidade do cérebro interpretá-la do lado correto.</p><p>CURIOSIDADE</p><p>Umas das patologias que envolve o sentido da visão é o daltonismo, o qual</p><p>possui origem genética, em geral, localizada no cromossomo X. Os por-</p><p>tadores têm as células fotorreceptoras, como os cones, anormais, o que</p><p>compromete a visualização de algumas cores, como o vermelho, o verde</p><p>e o azul. Testes são realizados, como os que podemos observar na Figura</p><p>2. Pessoas que não daltônicas são capazes de visualizar o elefante bem</p><p>no meio do círculo, enquanto os daltônicos não o fazem. Essa patologia</p><p>ainda não possui cura, mas cientistas já desenvolveram óculos capazes</p><p>de devolver algumas cores à vida desses indivíduos.</p><p>Figura 2. Teste aplicado para determinar o daltonismo. Fonte: Shutterstock.</p><p>Existem doenças que podem acometer os olhos, seja por determinado</p><p>tempo ou de força crônica, podendo ter tratamento ou não. A alergia ocular</p><p>é uma reação inflamatória que acomete o olho quando entra em contato</p><p>com alguma substância, bem como a blefarite, que também é uma inflação,</p><p>contudo, ela ocorre nas pálpebras. Outra inflamação comum é a conjuntivite,</p><p>sendo que a reação ocorre já na região da conjuntiva; por fim, temos o ter-</p><p>çolho, que é uma infecção causada na glândula da pálpebra, formando uma</p><p>pequena bolinha vermelha e dolorida.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 107</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 107 18/01/2021 12:41:09</p><p>Teste de irritação ocular in vivo</p><p>Os testes para determinar se uma substância é tóxica para o olho começaram</p><p>a ser realizados sem muitos protocolos em diferentes animais, com testes em</p><p>pesticidas e solventes, por exemplo. Contudo, os resultados foram pouco conclu-</p><p>sivos e apenas determinavam quantitativamente se a reação tóxica existia ou</p><p>não. De modo que, por volta da década de 1940, o estudioso Friedenwald e seus</p><p>companheiros resolveram fazer experimentos que determinavam a faixa de toxi-</p><p>cidade em números, isto é, quantitativamente.</p><p>Esse teste estudava como era a reação dos olhos após a utilização de</p><p>substâncias muito ácidas ou muito básicas. Os animais escolhidos para</p><p>esses experimentos eram os coelhos, nos quais eram administradas do-</p><p>ses específicas diretamente no olho, como está ilustrado na Figura 3. Vale</p><p>salientar que, nessa época, os cientistas estavam avaliando as reações fi-</p><p>siológicas que aconteciam na córnea, conjuntiva e íris desses coelhos</p><p>após a aplicação de diferentes doses da substâncias em teste.</p><p>Já na década de 1960, houve um aumento nos parâmetros a serem</p><p>estudados durante esses testes, sendo que estados patológicos também</p><p>deveriam ser observados. Assim, o aparecimentos de eritemas, edemas,</p><p>lacrimejamentos, bem como o aumento ou diminuição do fluxo sanguí-</p><p>neo passaram a ser analisados. Naquela época, o teste mais comum era o</p><p>de Draize, utilizado para irritação dérmica. Apesar de comum, este teste</p><p>causava grande polêmica com grupos defensores dos animais, que dis-</p><p>cordavam veementemente do uso dos coelhos neste procedimento. A jus-</p><p>tificativa era que não havia necessidade de submeter esses animais</p><p>produtos</p><p>farmacêuticos;</p><p>Capacitar o estudante para a atuação profissional em um laboratório de</p><p>controle de qualidade na indústria farmacêutica.</p><p>Controle biológico: conceitos</p><p>gerais e objetivos</p><p>Boas práticas de laboratório e</p><p>biossegurança</p><p>Validação de métodos analíticos</p><p>Garantia de qualidade</p><p>Animais de laboratório</p><p>Biotérios</p><p>Conceito 3 Rs</p><p>Métodos alternativos</p><p>Controle de qualidade de material</p><p>de acondicionamento e embalagem</p><p>Materiais de acondicionamento</p><p>e embalagens</p><p>Testes para avaliação de materiais</p><p>de embalagens</p><p>Controle microbiológico de</p><p>ambientes</p><p>Controles de esterilidade</p><p>Monitoramento ambiental</p><p>Contaminação microbiana</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 13</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 13 18/01/2021 11:41:01</p><p>Controle biológico: conceitos gerais e objetivos</p><p>A expectativa de vida dos seres humanos vem aumentado consistente-</p><p>mente nas últimas décadas. O me-</p><p>lhoramento da assistência médica,</p><p>assim como a maior disponibilidade</p><p>de medicamentos para o tratamento</p><p>das doenças, tem um papel de grande</p><p>importância perante a melhora pro-</p><p>gressiva da saúde da população em</p><p>nível mundial. Algumas doenças infec-</p><p>ciosas, inclusive, já são consideradas</p><p>erradicadas no mundo todo, como a</p><p>varíola, por exemplo. Isso ocorreu graças ao desenvolvimento e avanço das</p><p>vacinas, que, com os medicamentos, são o resultado de um amplo investimen-</p><p>to da indústria farmacêutica. A fabricação de produtos farmacêuticos, por-</p><p>tanto, é cada vez maior, e é um dos setores mais bem-sucedidos da economia</p><p>global (DENYER e colaboradores, 2011).</p><p>ASSISTA</p><p>O fi lme O jardineiro fi el, de Fernando Meirelles, conta a história de um</p><p>diplomata inglês que vive na África quando sua esposa é brutalmente</p><p>assassinada. Na investigação do crime, descobre que sua luta é contra a</p><p>ganância de uma grande empresa farmacêutica. Essa obra (2005) nos faz</p><p>refl etir sobre a indústria farmacêutica no cenário econômico mundial: até</p><p>que ponto podemos ir para testar novos medicamentos? O que fazer para</p><p>que seres humanos não sejam usados como cobaias? Qual a relação entre</p><p>ética e ganhos econômicos? Qual o custo real do desenvolvimento de</p><p>novos fármacos?</p><p>O crescimento da indústria farmacêutica, contudo, bastante evidente nos</p><p>últimos anos, veio acompanhado pelo aumento dos padrões de qualidade dos</p><p>fármacos e da maior exigência das regulamentações. Tudo isso a fi m de certi-</p><p>fi car que o produto obedeça um rigoroso processo de fabricação que garanta</p><p>sua efi cácia, estabilidade, segurança e boa qualidade, durante seu armazena-</p><p>mento e sua utilização.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 14</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 14 18/01/2021 11:41:09</p><p>Uma das ferramentas mais utilizadas para assegurar tais características aos</p><p>medicamentos é o controle de qualidade, uma disciplina que aborda conheci-</p><p>mentos teóricos e práticos de diversas áreas da ciência, como: química, física,</p><p>biologia e matemática, bem como as legislações sanitárias. Segundo a Agência</p><p>Nacional de Vigilância Sanitária – ANVISA – (2019), o controle de qualidade é o</p><p>conjunto de medidas destinadas a garantir, a qualquer momento, a produção</p><p>de lotes de medicamentos e demais produtos que satisfaçam às normas de</p><p>identidade, atividade, teor, pureza, efi cácia e inocuidade.</p><p>A garantia da qualidade representa não só um fator diferencial que contri-</p><p>bui para a competitividade e sobrevivência da indústria no setor, por conferir</p><p>credibilidade e solidez à empresa, mas também um pré-requisito legal, como</p><p>evidenciado na Resolução RDC nº 17/2010, que dispõe sobre as boas práticas</p><p>de fabricação de medicamentos. Tal legislação traz os principais aspectos do</p><p>gerenciamento da qualidade na indústria de medicamentos; destacam-se os</p><p>artigos 6° ao 12° nessa temática.</p><p>Boas práticas de laboratório e biossegurança</p><p>Um dos principais elementos necessários para o controle de qualidade é o</p><p>laboratório de controle de qualidade de produtos farmacêuticos. O Quadro 1 re-</p><p>sume dados relevantes para a implementação das boas práticas de laboratório.</p><p>Gestão e infraestrutura</p><p>Organização/gestão Deve ser legalmente autorizado, atendendo a</p><p>todos requisitos legais.</p><p>Sistema de gestão da qualidade Deve assegurar a qualidade dos resultados</p><p>dos ensaios realizados.</p><p>Controle de documentos Deve garantir ampla disponibilidade e acesso</p><p>aos procedimentos.</p><p>QUADRO 1. RESUMO DOS ASPECTOS DE GESTÃO, INFRAESTRUTURA, MATERIAIS,</p><p>EQUIPAMENTOS E OUTROS DISPOSITIVOS DO LABORATÓRIO DE CONTROLE DE</p><p>QUALIDADE DE PRODUTOS FARMACÊUTICOS</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 15</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 15 18/01/2021 11:41:09</p><p>Fonte: OMS, 2010. (Adaptado).</p><p>Registros Da qualidade e técnico-científicos, devem ser</p><p>detalhados e de fácil acesso.</p><p>Equipamentos de processamento de dados São sistemas automatizados; também exigem</p><p>controle.</p><p>Pessoal Qualificado para função, em quantidade</p><p>adequada e treinado em biossegurança.</p><p>Instalações Adequadas para as funções e operações.</p><p>Materiais, equipamentos e outros dispositivos</p><p>Reagentes Precisam possuir qualidade apropriada e</p><p>certificado.</p><p>Substâncias e materiais de referência Preferencialmente, referência farmacopeica.</p><p>Calibração, verificação de desempenho</p><p>e qualificação de equipamentos e outros</p><p>dispositivos</p><p>Manter os dispositivos de medição calibrados</p><p>e verificados, sempre adequados ao uso e à</p><p>função.</p><p>Rastreabilidade Resultados de análise e metrológica.</p><p>Dentre os aspectos abordados na tabela, destaca-se a biossegurança. Trata-</p><p>-se de um termo bastante amplo e se refere ao conjunto de medidas voltadas à</p><p>prevenção, controle, redução ou eliminação dos riscos presentes nas atividades</p><p>de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de ser-</p><p>viços que podem comprometer a saúde de seres humanos, animais, meio am-</p><p>biente e qualidade dos trabalhos desenvolvidos (ABDI e colaboradores, 2015). No</p><p>contexto dos laboratórios de controle de qualidade, a prevenção de acidentes é</p><p>responsabilidade de todos.</p><p>Os profissionais devem cumprir as normas estabelecidas pelo manual de bios-</p><p>segurança, visto que ele identifica os riscos e especifica as práticas e os procedi-</p><p>mentos que minimizam ou eliminam esses problemas. A atividade requer o uso de</p><p>equipamentos de proteção individual (EPIs), como os ilustrados na Figura 1,</p><p>e de proteção coletiva, que são necessários às operações. Além dis-</p><p>so, todos os profissionais precisam participar de treinamentos</p><p>e reciclagens periódicos. Por fim, caso ocorram acidentes, eles</p><p>têm que ser comunicados e devidamente monitorados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 16</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 16 18/01/2021 11:41:09</p><p>Figura 1. Laboratorista usando EPIs (touca, luvas, óculos, máscara e jaleco) de forma correta durante o trabalho. Faz-se</p><p>necessário ainda o uso de calçado de proteção (fechado e antiderrapante), além de evitar qualquer adorno ou acessório.</p><p>Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>As regras gerais para o trabalho seguro, em conformidade com as regula-</p><p>ções nacionais e internacionais, considerando os procedimentos operacionais</p><p>padrão, incluem (OMS, 2010):</p><p>• Restringir o acesso de pessoas ao laboratório, somente para autorizadas;</p><p>• As fichas com dados de segurança devem estar disponíveis para o pessoal</p><p>antes de realizar as análises;</p><p>• Todas as embalagens de substâncias químicas devem estar rotuladas e</p><p>incluir advertências destacadas quando aplicável;</p><p>• Deve-se proibir fumar, comer e beber no laboratório;</p><p>• Deve-se evitar trabalhar sozinho ou em jornadas prolongadas de trabalho;</p><p>• Os cabos elétricos e equipamentos devem estar providos de alimentação</p><p>e isolamento adequados;</p><p>• Disponibilizar kits de primeiros socorros e promover a capacitação dos</p><p>usuários em segurança, emergência e combate ao incêndio.</p><p>Existem quatro níveis de biossegurança para as atividades que envolvem</p><p>tanto microrganismos infecciosos quanto animais de laboratório. Os níveis são</p><p>designados em ordem crescente, pelo grau de contenção</p><p>a</p><p>tal sofrimento e sacrifício, uma vez que os resultados obtidos não eram</p><p>totalmente conclusivos e seguros.</p><p>Mesmo diante de todas as justificativas e pedidos para que</p><p>os testes não se realizassem in vivo, apenas alguns países da</p><p>Europa os proibiram, sendo que as agências regu-</p><p>ladores dos demais países diziam que não era</p><p>possível garantir a segurança dos produtos que</p><p>não passassem por esse tipo de teste enquanto</p><p>estavam sendo desenvolvidos.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 108</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 108 18/01/2021 12:41:09</p><p>Figura 3. Aplicação de substância para teste em olho de coelho. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 15/12/2020.</p><p>Diante da negativa em se proibir a execução do teste in vivo, negociou-se</p><p>a utilização mínima de animais em cada testes, contudo, ainda se utilizam</p><p>seis coelhos administrando 0,1 mL ou 100 g de sólido no saco conjuntival</p><p>inferior dos olhos. Os profissionais mantinham as pálpebras fechadas por</p><p>cerca de um segundo e depois as liberavam. Nem todos os animais tinham</p><p>a substância inoculada; em alguns, denominados animais controle, era ad-</p><p>ministrado apenas um veículo, como soro ou água destilada, para comparar</p><p>as reações entre ambos os grupos.</p><p>Os olhos, no primeiro momento, não eram lavados, aguardando que a</p><p>produção lacrimal natural se encarregasse de remover o excesso e, após</p><p>uma hora, observavam-se as reações. Logo, depois de 24 horas,</p><p>os olhos eram lavados com soro fisiológico e os resultados</p><p>eram anotados, de modo que as observações seguiam em 48</p><p>e 72 horas após a instilação da substância. Caso</p><p>não houvesse reações patológicas, nesse mo-</p><p>mento se encerravam as observações, porém,</p><p>se reações eram observadas, seguindo os pa-</p><p>râmetros determinados no Quadro 1, o acom-</p><p>panhamento seguia por sete dias.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 109</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 109 18/01/2021 12:41:20</p><p>QUADRO 1. VALORES DE GRADUAÇÃO DAS LESÕES OCULARES</p><p>Descrição das lesões Grau</p><p>Córnea</p><p>Não ulceração ou opacidade 0</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis 1</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros 2</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível 3</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível 4</p><p>Íris</p><p>Normal 0</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>reativa à luz 1</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira 2</p><p>Conjuntiva</p><p>Hiperemia -</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris) -</p><p>Vasos normais 0</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados 1</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis 2</p><p>Vermelho-carne difuso 3</p><p>Quemose -</p><p>Não inchaço 0</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante) 1</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras 2</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas 3</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas 4</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Não ulceração ou opacidade</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>mente obscuros</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>levemente discernível</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas dispersas de opacidade, detalhes da íris totalmente visíveis</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas transluzentes facilmente discerníveis, detalhes da íris leve-</p><p>Áreas</p><p>necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>0</p><p>Áreas necróticas, detalhes da íris não visíveis, tamanho da pupila</p><p>Completa opacidade da córnea, íris não discernível</p><p>2</p><p>3</p><p>4</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Normal</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Normal</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>reativa à luz</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Normal</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>reativa à luz</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>reativa à luz</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>reativa à luz</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>Dobras marcadamente profundas, congestão, inchaço, íris ainda</p><p>Não reação à luz, hemorragia, destruição grosseira</p><p>0</p><p>1</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>Hiperemia</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>Hiperemia</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Hiperemia</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Hiperemia</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Vasos normais</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Vasos normais</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Vasos normais</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Vasos normais</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>excluídas córnea e íris)</p><p>Vasos normais</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Avermelhamento (conjuntiva palpebrar e bulbar,</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Alguns vasos defi nidamente injetados</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>facilmente discerníveis</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>Vermelho-carne difuso</p><p>Vermelho-carmim difuso, vasos individuais não</p><p>-</p><p>1</p><p>2</p><p>3</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante) Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante) Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante) Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante) Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Quemose</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Quemose</p><p>Não inchaço</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Quemose</p><p>Não inchaço</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Não inchaço</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Não inchaço</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>Algum inchaço acima do normal (incluindo membrana nictitante)</p><p>Óbvio inchaço com parcial eversão das pálpebras</p><p>Inchaço com pálpebras pouco fechadas</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas Inchaço com pálpebras</p><p>mais que metade fechadas Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>0</p><p>Inchaço com pálpebras mais que metade fechadas</p><p>2</p><p>3</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 110</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 110 18/01/2021 12:41:21</p><p>Considerar ainda</p><p>Considerar ainda -</p><p>Secreção -</p><p>Sem secreção 0</p><p>Alguma secreção 1</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos 2</p><p>Área de Córnea envolvida</p><p>¼ 1</p><p>¼ a ½ 2</p><p>½ a ¾ 3</p><p>¾ do total 4</p><p>Interpretação Reação negativa grau Reação positiva grau</p><p>Córnea Opacidade 0-1 2-4</p><p>- Pannus 0 1-2</p><p>Íris 0 1-2</p><p>Conjuntiva Hiperemia 0-1 2-3</p><p>- Quemose 0-1 2-4</p><p>- Secreção 0–1 2-4</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção</p><p>Sem secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Considerar ainda</p><p>Secreção</p><p>Sem secreção</p><p>Alguma secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>Sem secreção</p><p>Alguma secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Sem secreção</p><p>Alguma secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Alguma secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Alguma secreção</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>erável ao redor dos olhos</p><p>Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-Secreção molhando pálpebras e pelos adjacentes e área consid-</p><p>0</p><p>2</p><p>¼ a ½ ¼ a ½ ¼ a ½</p><p>½ a ¾ ½ a ¾</p><p>¾ do total ¾ do total ¾ do total</p><p>2</p><p>3</p><p>4</p><p>CórneaCórnea</p><p>-</p><p>ÍrisÍris</p><p>ConjuntivaConjuntivaConjuntivaConjuntiva</p><p>Opacidade 0-1Opacidade 0-1Opacidade 0-1</p><p>Pannus</p><p>Opacidade 0-1</p><p>Pannus 0</p><p>0</p><p>Hiperemia 0-1Hiperemia 0-1Hiperemia 0-1</p><p>Quemose 0-1</p><p>Hiperemia 0-1</p><p>Quemose 0-1</p><p>Hiperemia 0-1</p><p>Quemose 0-1</p><p>Secreção 0–1</p><p>Quemose 0-1</p><p>Secreção 0–1</p><p>2-4</p><p>Secreção 0–1</p><p>2-4</p><p>Secreção 0–1</p><p>1-2</p><p>1-2</p><p>2-3</p><p>2-4</p><p>2-4 2-4</p><p>Fonte: PINTO, 2015, p. 374.</p><p>Classificar uma reação como positiva considera não apenas as reações</p><p>causadas, mas, também, a quantidade de animais que apresentaram os</p><p>efeitos. Assim, se apenas um animal dentre todos os testados apresentou</p><p>um edema na pálpebra, o resultado do teste é considerado negativo, ou</p><p>seja, a reação positiva é considerada quando mais de 50% dos animais</p><p>apresentarem reações. Se dentre seis animais, dois ou três tiveram um</p><p>edema, o teste deve ser repetido em outro grupo de coelhos para observar</p><p>se há essa mesma reação novamente. Ainda haverá um terceiro grupo a</p><p>ser testado caso metade ainda não apresentar sintomas, sendo que, nes-</p><p>te último teste, se apenas um tiver reação, a substância será classificada</p><p>como irritante.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 111</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 111 18/01/2021 12:41:22</p><p>Vale salientar que há uma comparação entre testes que irritam a pele</p><p>e os que irritam os olhos, pois acreditavam que se um produto causa al-</p><p>guma reação na pele não haveria necessidade de testá-lo nos olhos, já</p><p>predeterminando que também causaria tal reação. Contudo, nem todas</p><p>as substâncias agem assim: algumas podem causar danos na pele e não</p><p>afetar os olhos, então concluiu-se que há necessidade de realizar os dois</p><p>testes, tanto ocular como o de pele.</p><p>Teste de irritação ocular in vitro</p><p>Tratar de testes in vitro signifi ca falar sobre experimentos realizados sem</p><p>aplicar a amostra em animais vivos diretamente. Para o teste de irritação</p><p>ocular, existem dois métodos in vitro que são mais utilizados. O primeiro cha-</p><p>ma 3T3 NRU, natural red uptake, cuja realização se dá em cultura celular, e o</p><p>HET-CAM, teste de membrana coriônica de ovos de galinha, sendo utilizados</p><p>ovos de galinha parcialmente incubados.</p><p>O teste conhecido como 3T3 NRU é feito em laboratório, onde se realizam</p><p>culturas de células chamadas de fi broblastos, que serão multiplicadas e, em</p><p>seguida, injetadas amostras da substância que se deseja estudar.</p><p>As células em teste estão vivas, sendo que, primeiramente, inocu-</p><p>la-se um corante vermelho com átomos positivos para</p><p>que esse se ligue às organelas chamadas de lisosso-</p><p>mos, que possuem átomos negativos. Isto é, como</p><p>dois imãs, há a parte negativa dentro da célula e</p><p>os profi ssionais injetam a parte positiva para que se</p><p>atraiam naturalmente.</p><p>EXPLICANDO</p><p>Os fi broblastos são células que fazem parte do tecido conjuntivo, são</p><p>consideradas jovens e com grande capacidade de multiplicação, sendo</p><p>responsáveis por parte da regeneração tecidual quando há algum dano.</p><p>Desse modo, possuem metabolismo ativo, o que facilita para estudos, além</p><p>de serem células relativamente grandes. Produzem colágeno e podem ser</p><p>encontrados em tecidos conjuntivos fi brosos, onde a substância amorfa</p><p>necessária nessas áreas é produzida por tais células.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 112</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 112 18/01/2021 12:41:22</p><p>Quando alguma substância causa irritação na célula, ocorre uma deformi-</p><p>dade das membranas, gerando a diminuição da capacidade de captação do co-</p><p>rante. Nesse mesmo sentido, podemos diferenciar células mortas das vivas, já</p><p>que a entrada do corante depende do metabolismo ativo delas, o que não estará</p><p>bem estabelecido caso essa esteja danifi cada ou morta. Assim, torna-se um pa-</p><p>drão de estudos a quantidade de corante existente dentro dos lisossomos, visto</p><p>que a irritação fará com que a colocação do corante esteja menos visível.</p><p>Casca</p><p>Gema</p><p>Albumina</p><p>Aminio</p><p>Cavidade amniótica</p><p>com fl uido amniótico</p><p>Alantoide</p><p>Embrião</p><p>CórionSaco vitelino</p><p>Figura 4. Anatomia do ovo da galinha com embrião. Fonte: Wikimedia Commons. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Outro teste bastante utilizado é conhecido como HET-CAM, o qual é rea-</p><p>lizado em ovos de galinha parcialmente incubados, ou seja, que já possuem</p><p>um embrião em formação, pois é necessário que se desenvolva a membrana</p><p>corioalantoica com bastante vascularização, contudo, sem terminações ner-</p><p>vosas. Esse experimento se baseia na sensibilidade que essa área tem, tendo</p><p>semelhança com as características oculares do seres humanos.</p><p>Na Figura 4, podemos observar, dentre as outras partes do ovo da galinha,</p><p>a membrana coriônica e o alantoide, localizado onde seria a parte inferior do</p><p>ovo. Podemos reparar que o alantoide se liga ao embrião, pois sua função é</p><p>armazenar as substâncias que o embrião excreta até o dia do seu nascimento,</p><p>enquanto o córion ou a membrana coriônica se localiza abaixo da casca do ovo</p><p>e tem como função, juntamente com o alantoide, realizar as trocas gasosas,</p><p>bem como proteger o embrião contra choques.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 113</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 113 18/01/2021 12:41:23</p><p>Assim, as substâncias que devem ser testadas são inoculadas na membrana</p><p>corioalantoica, tanto as líquidas como as sólidas, sendo observadas as reações</p><p>que podem aparecer após cinco minutos, como, por exemplo, aumento de</p><p>temperatura local, sangramentos, coagulações e rompimentos de vasos</p><p>sanguíneos. Essas situações são muito importantes para saber o que pode</p><p>ocorrer no olho do ser humano, visto que é uma região bastante</p><p>vascularizada.</p><p>Figura 5. Aplicação de substância para teste. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Na Figura 5, temos a visão macroscópica da membrana corioalantoica de</p><p>um ovo de galinha parcialmente incubado, de modo que a seta indica um vaso</p><p>sanguíneo presente nessa área com um calibre signifi cativo. Pode-se observar,</p><p>também, as ramifi cações que são originadas a partir desse vaso, levando san-</p><p>gue para todo o tecido.</p><p>Esses dois testes in vitro que comentamos renderam ótimos resultados, ga-</p><p>rantindo informações seguras sobre as amostras testadas. Desse modo, passa-</p><p>ram a ser aceitos para substituir o teste de Draize em casos em que as reações</p><p>adversas dos produtos eram mais graves.</p><p>Controle de qualidade de medicamento oftálmico</p><p>Os medicamentos oftálmicos, quando são desenvolvidos, têm</p><p>que passar por testes rigorosos, como os que já citamos, para</p><p>garantir a segurança durante o uso nos seres humanos. Contu-</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 114</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 114 18/01/2021 12:41:27</p><p>do, a produção desses produtos também deve ser acompanhada para que</p><p>cada lote esteja dentro dos paramentos especifi cados pelas agências regu-</p><p>ladores de saúde.</p><p>Figura 6. Aplicação de colírio em olho humano. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Como podemos observar na Figura 6, a administração de colírios deve ser</p><p>feita diretamente no olho, sem contato com nenhum outro objeto ou parte do</p><p>corpo para que não haja contaminação cruzada. Assim, esses medicamentos</p><p>devem seguir protocolos de produtos estéreis com controle de qualidade mi-</p><p>crobiológico com maior periocidade, levando em consideração que as reações</p><p>em pacientes idosos e com imunidade comprometida, como os imunodeprimi-</p><p>dos, serão mais presentes.</p><p>Método de irritação dérmica</p><p>Assim como o teste de irritação ocular é extremamente importante para</p><p>garantir a segurança e efi cácia do medicamento durante seu uso nos seres</p><p>humanos, o teste de irritação dérmica também se torna indispensável</p><p>durante o desenvolvimento de produtos que serão utilizados em</p><p>contato com a pele. Vale salientar que mesmo que ambos</p><p>sejam de uso tópico, não se pode considerar que um pro-</p><p>duto que cause irritação no olho reaja da maneira seme-</p><p>lhante na pele e vice-versa.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 115</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 115 18/01/2021 12:41:37</p><p>CURIOSIDADE</p><p>Você sabe quando se classifi ca um produto como tópico? Muitos acredi-</p><p>tam que substâncias que apresentam a expressão “uso tópico” são exclu-</p><p>sivas para a pele. Não é bem assim! Claro que pomadas são de uso tópico,</p><p>mas o conceito que envolve essa palavra é outro: todas as substâncias</p><p>que não passam pelo trato gastrointestinal (TGI) do ser humano são clas-</p><p>sifi cadas como tópicas. Por exemplo, medicamentos de uso oftálmico,</p><p>otológico e nasal.</p><p>O teste padrão para irritação dérmica é o de Draize, sendo que a forma</p><p>como ele é realizado segue praticamente a mesma desde que surgiu. Ele é feito</p><p>em peles de coelhos que foram raspadas pelo método de tricotomia, nas quais</p><p>se espalha a substância que se deseja realizar o teste. Após algumas horas,</p><p>observa-se as reações que podem surgir e, se houve irritação ou não, visto que</p><p>esse teste é realizado in vivo e a análise dos resultados observados deve seguir</p><p>tabelas com normativas predefi nidas por agências reguladores de saúde que</p><p>graduam as lesões como eritema, edema e irritação da pele.</p><p>Anatomia da pele humana</p><p>Para que seja possível compreen-</p><p>der como funcionam os testes para</p><p>irritação dérmica, é extremamente</p><p>importante que se conheça as partes</p><p>do tecido epitelial. A pele é conside-</p><p>rada o maior órgão do ser humano e</p><p>acumula uma infi nidade de funções, das quais podemos citar como prin-</p><p>cipais: proteção, regulação térmica do corpo e revestimento. Na Figura 7,</p><p>temos um esquema das camadas do tecido epitelial a fi m de facilitar os es-</p><p>tudos. Como podemos observar, a superfície desse tecido possui poros e</p><p>pelos que irão auxiliar na regulação térmica, ora eliminando, ora retendo</p><p>líquidos. Os pelos são fi os que fi cam em pé quando estamos com frio, a fi m</p><p>de evitar a troca de calor com o ambiente e tentar manter a temperatura</p><p>do corpo, porém, para que isso seja possível, é necessário que o músculo</p><p>eretor de pelo trabalhe e sustente esse cabelo na posição vertical.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 116</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 116 18/01/2021 12:41:39</p><p>Figura 7. Anatomia da pele humana. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Ainda na região da superfície, está presente o estrato córneo – que faz parte</p><p>da epiderme, que é uma camada fi na de células mortas ricas em queratina cuja</p><p>função principal é proteger contra a entrada de microrganismos patógenos.</p><p>Sabe-se que um dos processos do teste de Draize é a abrasão da pele com o</p><p>intuito de remover o estrato córneo sem causar hemorragia para que se pos-</p><p>sa avaliar os impactos da substância em estudo em tecidos que possuem uma</p><p>maior sensibilidade e, portanto, menor proteção.</p><p>Logo abaixo temos a epiderme, uma camada avascularizada, ou seja, não</p><p>possui vasos sanguíneos, que é subdividida em cinco outras camadas: estrato</p><p>córneo, estrato lúcido, estrato granuloso, estrato espinhoso e, por fi m, já perto</p><p>da derme, o estrato germinativo. Um fato importante é quanto mais próxima da</p><p>superfície a célula se encontra, maior é seu tamanho e quantidade, conferindo</p><p>uma resistência mecânica à epiderme.</p><p>Na epiderme, podemos destacar três tipos de células muito importantes,</p><p>sendo a primeira chamada de melanócito, a qual tem como função produzir</p><p>as substâncias que dão a coloração da nossa pele. Em segundo, temos as célu-</p><p>las de Langherans, que compõem o sistema imunológico desse tecido, atuando</p><p>como uma das primeiras defesas contra micróbios. Em terceiro, vem as células</p><p>de Merkel, que são classifi cadas como mecanorreceptores, as quais se situam</p><p>predominantemente nas palmas das mão e plantas dos pés.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 117</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 117 18/01/2021 12:41:40</p><p>Logo abaixo encontra-se a derme, onde se situam os folículos pilosos, os</p><p>vasos sanguíneos, como, por exemplo, as veias e artérias responsáveis por</p><p>levar nutrientes a essas camadas. Há, também, glândulas sebáceas e sudo-</p><p>ríparas que produzirão o muco e o suor necessários nessa região, além dos</p><p>nervos, que formam uma rede responsável por detectar situações e levar até</p><p>o cérebro para que sejam interpretadas.</p><p>Por último, ainda na Figura 7, está a hipoderme, também conhecida como</p><p>camada de gordura, onde se localizam as células conhecidas como adipócitos.</p><p>A gordura é um ótimo isolante térmico, por isso que todos possuem a hipoder-</p><p>me, com o intuito de manter a temperatura do corpo dentro dos valores com-</p><p>patíveis com a vida. Contudo, alguns têm essa camada mais espessa e outros</p><p>mais delgada, o que varia de acordo com a alimentação, acúmulo e depósito de</p><p>gordura nos adipócitos.</p><p>Na Figura 8, temos uma visão mais realista do que é a nossa pele por um</p><p>microscópio óptico. A superfície superior voltada para a região branca da ima-</p><p>gem é o estrato córneo, onde as células são mais achatadas, estão mortas e</p><p>cheias de queratina. Logo abaixo, aparece a epiderme, uma área mais defini-</p><p>da, com muitas células de cor mais rosa e núcleos roxos. Por último, na área</p><p>mais clara e mais desorganizada se situa a derme, na qual podemos encontrar</p><p>todas as estruturas já citadas anteriormente.</p><p>Figura 8. Visão da pele através de um microscópio óptico. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 118</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 118 18/01/2021 12:41:45</p><p>Teste adjuvante completo de Freund</p><p>Existem testes que podem ser considerados variantes do teste padrão</p><p>conhecido como teste de Draize; um desses é chamado de teste adjuvante</p><p>completo de Freund. O objetivo é descobrir se as substâncias em teste cau-</p><p>sam algum tipo de alergia; para isso, adiciona-se um componente</p><p>denomina-</p><p>do adjuvante – nesse caso, uma emulsão de óleo com antígeno – para gerar</p><p>uma sensibilização na pele e observar quais as reações causadas. Desse modo,</p><p>quanto mais concentrada for essa emulsão, maior a sensibilização da pele e</p><p>consequentemente maior a chance de determinar os resultados alergênicos.</p><p>O teste em si é feito com dois grupos com média de 15 coelhos em cada um,</p><p>sendo o primeiro chamado de Grupo A, em que todos os animais receberão a</p><p>substância, e o Grupo B, denominado grupo de controle, que será induzido às</p><p>mesmas condições que o primeiro, porém não receberão o princípio ativo a ser</p><p>testado. Todos os animais passam pela tricotomização, em que serão retira-</p><p>dos todos os pelos de uma região com cerca de 12 cm², local que será feita a</p><p>aplicação da emulsão e, após quatro a oito dias, a substância-teste.</p><p>Outra área, bem menor que a anterior, é escolhida para pas-</p><p>sar por um desafi o: uma grande concentração de substância</p><p>é administrada após 21 e 35 dias da primeira dose</p><p>normal. Após três dias seguidos, os resultados</p><p>observados são anotados para que sejam ana-</p><p>lisados e comparados com tabelas. Assim, será</p><p>possível concluir se uma substância pode causar</p><p>alergia em contato com a pele ou não.</p><p>Fototoxicidade</p><p>A fototoxicidade é um conceito que envolve a irritação da pele devido</p><p>à exposição à luz em conjunto com alguma substância fotoativa, isto é, que</p><p>passa a agir quando entra em contato com um determinado comprimento</p><p>de onda luminoso. Em geral, é mais comum serem observadas reações toxi-</p><p>cologias e alergias em locais que possuem certa fotossensibilidade, isso é,</p><p>são sensíveis à energia luminosa.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 119</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 119 18/01/2021 12:41:45</p><p>1. Células da pele fragilmente aderidas</p><p>2. Penetração de alérgenos</p><p>3. Infl amação</p><p>Dermatite</p><p>1</p><p>3</p><p>2</p><p>Figura 9. Dermatite. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Na Figura 9, apresentamos um esquema do que acontece na pele quando</p><p>existe uma reação alérgica a algum produto, fazendo com que se desenvolva</p><p>a dermatite. Quando a pele entra em contato com um produto fototóxico,</p><p>ocorre a lesão das células da superfície desse tecido, desenvolvendo um pro-</p><p>cesso infl amatório, o que faz com que haja menor aderência entre as células</p><p>epiteliais. Isso gera calor, rubor, dor e aumento da vascularização a fi m de</p><p>trazer células de defesa para combater um possível ataque de antígenos.</p><p>Desse modo, acontece a penetração de substâncias que causam alergia pela</p><p>epiderme e derme, aumentando a infl amação e desenvolvendo a dermatite</p><p>de contato. Sendo que, em testes de irritação primária de pele, durante o de-</p><p>senvolvimento de um cosmético, por exemplo, a pele dos coelhos apresenta</p><p>eritema e edema quando em contato com substâncias que possuem fototoxici-</p><p>dade. Portanto, são testes considerados indispensáveis antes de liberar esses</p><p>cosméticos para comercialização e utilização dos seres humanos.</p><p>Vale salientar que o veículo utilizado pela indústria no momento do pre-</p><p>paro de cremes e sabonetes interfere diretamente na quantidade e veloci-</p><p>dade de absorção desses produtos. Em casos de desenvolvimento de derma-</p><p>tite por contato com algum produto que causou uma reação alérgica, como</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 120</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 120 18/01/2021 12:41:47</p><p>na Figura 10, há a necessidade de comunicar os órgãos responsáveis, como</p><p>a Vigilância Sanitária, para que seja apurado o motivo pelo qual tal reação</p><p>ocorre, que pode ser individual ou por alguma substância contida no pro-</p><p>duto que não deveria estar lá.</p><p>Figura 10. Dermatite por contato na pele do ser humano. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Testes de implantes</p><p>Existem diversos tipos de implantes que podem ser introduzidos no ser</p><p>humano, com diferentes materiais e em diversos locais. Há os contracepti-</p><p>vos, que são armazenados dentro de uma cápsula polimérica e implantados</p><p>via intradérmica, bem como as famosas próteses de silicone, que muitas</p><p>vezes são colocadas atrás do músculo, como podemos observar</p><p>na Figura 11. A primeira imagem da esquerda para direita mos-</p><p>tra um implante por cima do músculo, na imagem</p><p>do meio temos a prótese localizada intramuscu-</p><p>lar, em que colocam por dentro do músculo, e,</p><p>por fi m, na última ilustração, o implante fi ca atrás</p><p>do músculo, mais internamente.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 121</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 121 18/01/2021 12:41:52</p><p>Figura 11. Implante de silicone. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 16/12/2020.</p><p>Produtos à base de material polimérico que entrarão em contato direto</p><p>com a pele devem passar por testes de irritabilidade a fim de garantir a se-</p><p>gurança do paciente durante a utilização. Além de comprovar que o material</p><p>não causa danos, como eritemas, alergias e edemas, também é necessário</p><p>saber se o produto não se decompõe durante os anos de utilização, visto</p><p>que alguns implantes, como o silicone e as cápsulas de contraceptivos, per-</p><p>manecem por longos anos introduzidos na pele até que sejam trocados.</p><p>Nesse teste também são utilizados coelhos, nos quais são implantados</p><p>fragmentos do material polimérico na pele, podendo ser intramuscular ou</p><p>subcutâneo (em casos em que seja inviável a outra forma). Deve-se utilizar</p><p>uma região tricotomizada e limpa, e se administra anestésicos durante a</p><p>introdução para evitar traumas desnecessários. Após 120 horas, esses ani-</p><p>mais são sacrificados com superdoses de anestésicos para que sejam retira-</p><p>dos os fragmentos, a pele e a musculatura ao redor para serem avaliados.</p><p>Consideram-se as reações hemorrágicas, inflamatórias, possíveis ne-</p><p>croses, encapsulamentos, fibrose, entre outros, tanto macroscopicamente</p><p>como microscopicamente para juntar as informações e compará-las com</p><p>o grupo de controle. Uma vez que se determina a biocompatibilidade do</p><p>material com o tecido em estudo, garante-se a eficácia e a segurança do</p><p>produto para a utilização no ser humano.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 122</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 122 18/01/2021 12:41:52</p><p>Sintetizando</p><p>Primeiramente, falamos sobre o método de irritação ocular, em que existem</p><p>testes específicos para determinar se substâncias como medicamentos, cosmé-</p><p>ticos e pesticidas, por exemplo, causam algum tipo de irritação ou dano quando</p><p>em contato com os olhos. Para entender quais as principais regiões do olho que</p><p>podem ser afetadas, temos que entender, de modo geral, como está configurada</p><p>a anatomia do sistema ocular.</p><p>O teste de irritação ocular pode ser feito in vivo ou in vitro. Existem dois mé-</p><p>todos in vitro mais utilizados, o 3T3-NRU e o HET-CAM, e ambos não utilizam</p><p>animais vivos para obter resultados, sendo bastante confiáveis. Já o teste in vivo</p><p>é feito inoculando a amostra em olhos de coelhos com anotação dos resultados</p><p>observados após algumas horas e, quando existe resultado positivo, o teste se</p><p>estende por alguns dias.</p><p>O teste de irritação primária da pele é tão importante quanto o teste ocular,</p><p>contudo, um não deve substituir o outro, ou seja, um dos testes negativos não</p><p>isenta a realização dos outros. Para compreender os experimentos realizados é</p><p>necessário conhecer como está disposta a pele no ser humano, suas camadas,</p><p>organelas e disposição das estruturas que a compõe.</p><p>Existem diferentes testes, sendo o mais conhecido o teste de Draize, que pas-</p><p>sou a ser utilizado para fins de garantia de qualidade em meados do século XX.</p><p>Contudo, outros experimentos complementares vieram sendo implementados</p><p>com o passar dos anos, como o teste de fototoxicidade, que demonstra a sensibi-</p><p>lidade do tecido e das substâncias aplicadas após a incidência de raios luminosos</p><p>com diferentes intensidades e comprimentos de ondas.</p><p>Por fim, falamos dos testes de implantes, tanto intramusculares como sub-</p><p>cutâneos, nos quais materiais à base de polímeros entram em contato com o</p><p>tecido. Desse modo, para que se garanta a segurança durante a utilização, são</p><p>necessários testes para averiguar se o material se degrada ou gera alguma rea-</p><p>ção, como alergias, inflamações ou necroses nas células que ficarão próximas</p><p>desse implante por algum tempo.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 123</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 123 18/01/2021 12:41:52</p><p>Referências bibliográficas</p><p>ADAMI, E. R. Atenção farmacêutica aos pacientes em uso de medicamentos</p><p>inibidores de receptor do fator de crescimento epidérmico de 1° e 2° linha</p><p>de tratamento. Revista UNIANDRADE, v. 21, n. 1, p. 59-81, 2020. Disponí-</p><p>vel em: <https://revista.uniandrade.br/index.php/revistauniandrade/article/</p><p>view/1316/1152>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>ANVISA - AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Noções gerais para</p><p>boas práticas em microbiologia clínica. [s.l.], 2008. 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Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 124</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 124 18/01/2021 12:41:52</p><p>CHORILLI, M.; et al. Ensaios biológicos para avaliação de segurança de produtos</p><p>cosméticos. Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, v. 30, n. 1.</p><p>Araraquara, SP, 2009. p.19-30. Disponível em: <https://www.researchgate.net/</p><p>publication/49599564_Ensaios_biologicos_para_avaliacao_de_seguranca_de_</p><p>produtos_cosmeticos>. Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>COSTA, R. N. et al. Estudo da aplicabilidade do ensaio de quantificação</p><p>de proteínas totais em células SIRC na avaliação do potencial de irrita-</p><p>ção ocular de xampus e tensoativos. 2006. Dissertação de Mestrado Saúde</p><p>Pública – área de concentração em Toxicologia Ocupacional/Ambiental. Esco-</p><p>la Nacional de Saúde Pública Sérgio Arouca – Fundação Oswaldo Cruz, Rio de</p><p>Janeiro, 2006. 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Acesso em: 16 dez. 2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 126</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID4.indd 126 18/01/2021 12:41:52</p><p>formado por insta-</p><p>lações, equipamentos de segurança, procedimentos e práticas laboratoriais,</p><p>necessárias para permitir o trabalho seguro com agentes de risco para seres</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 17</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 17 18/01/2021 11:41:18</p><p>NB Agentes Práticas Equipamentos Instalações</p><p>1</p><p>Que não são</p><p>conhecidos</p><p>por causarem</p><p>doenças em</p><p>adultos sadios.</p><p>Práticas padrão de</p><p>microbiologia.</p><p>Cuidados com</p><p>o animal e as</p><p>práticas padrão</p><p>de gerenciamento,</p><p>incluindo</p><p>programas de</p><p>vigilância médica</p><p>adequados.</p><p>Não são necessários.</p><p>Cuidados normais</p><p>solicitados</p><p>a cada espécie.</p><p>Bancadas abertas</p><p>com pias próximas.</p><p>Instalação padrão</p><p>para animais:</p><p>- nenhuma</p><p>recirculação do ar</p><p>exaurido;</p><p>- recomendação</p><p>de fluxo de ar</p><p>direcionado;</p><p>- recomendação de</p><p>pia para lavagem das</p><p>mãos.</p><p>2</p><p>Associados</p><p>a doenças</p><p>humanas, risco =</p><p>lesão percutânea,</p><p>ingestão,</p><p>exposição da</p><p>membrana</p><p>mucosa</p><p>Prática de NB-1</p><p>mais:</p><p>- acesso limitado;</p><p>- avisos de risco</p><p>biológico;</p><p>- precauções</p><p>com objetos</p><p>perfurocortantes;</p><p>- manual de</p><p>biossegurança que</p><p>defina qualquer</p><p>descontaminação</p><p>de dejetos ou</p><p>normas de</p><p>vigilância médica;</p><p>-descontaminação</p><p>de todo o lixo</p><p>infeccioso e de</p><p>caixas e gaiolas de</p><p>animais antes da</p><p>lavagem.</p><p>Cabines de classe</p><p>I ou II ou outros</p><p>dispositivos de</p><p>contenção física</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>de agentes que</p><p>provoquem aerossóis</p><p>ou vazamento de</p><p>materiais infecciosos;</p><p>procedimentos</p><p>especiais como o uso</p><p>de aventais, luvas e</p><p>proteção para o rosto,</p><p>quando necessário.</p><p>NB-1 mais: autoclave</p><p>disponível.</p><p>Instalações de NBA-1</p><p>mais:</p><p>- autoclave à</p><p>disposição;</p><p>- pia para lavagem</p><p>das mãos dentro da</p><p>sala de animais;</p><p>- uso de lavagem</p><p>mecânica das caixas e</p><p>gaiolas.</p><p>Equipamento</p><p>de NBA-1 mais</p><p>barreiras primárias:</p><p>equipamento de</p><p>contenção adequado</p><p>para espécies animais;</p><p>EPIs: jalecos, luvas,</p><p>proteção facial e</p><p>respiradores quando</p><p>necessários.</p><p>QUADRO 2. RESUMO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA (NB) RECOMENDADOS PARA</p><p>AGENTES INFECCIOSOS E PARA ANIMAIS VERTEBRADOS INFECTADOS NATURALMENTE</p><p>OU EXPERIMENTALMENTE UTILIZADOS EM LABORATÓRIO</p><p>humanos, animais e ambiente. O Quadro 2 sintetiza tais agentes (considerando</p><p>microrganismos e animais), as práticas, os equipamentos de segurança (barrei-</p><p>ras primárias) e as instalações (barreiras secundárias).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 18</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 18 18/01/2021 11:41:18</p><p>3</p><p>Agentes nativos</p><p>ou exóticos com</p><p>potencial para</p><p>transmissão</p><p>via aerossol;</p><p>a doença</p><p>pode trazer</p><p>consequências</p><p>sérias ou até</p><p>fatais.</p><p>Práticas de NB-2</p><p>mais:</p><p>- acesso controlado;</p><p>- descontaminação</p><p>de todo o lixo;</p><p>- descontaminação</p><p>da roupa usada no</p><p>laboratório antes de</p><p>ser lavada;</p><p>- amostra</p><p>sorológica.</p><p>Cabines de classe I ou II</p><p>ou outros dispositivos</p><p>de contenção</p><p>usados para todas</p><p>as manipulações</p><p>abertas de agentes;</p><p>uso de aventais, luvas</p><p>e proteção respiratória,</p><p>quando necessária.</p><p>Práticas de NBA-2 mais:</p><p>- descontaminação das</p><p>caixas e gaiolas antes</p><p>de o material da cama</p><p>ser removido;</p><p>- lavagem dos pés com</p><p>desinfetante.</p><p>NB-2 mais:</p><p>- separação física dos</p><p>corredores de</p><p>acesso; · portas de</p><p>acesso duplas com</p><p>fechamento</p><p>automático;</p><p>- ar de exaustão não</p><p>circulante;</p><p>- fluxo de ar negativo</p><p>dentro do</p><p>laboratório.</p><p>Equipamento de NBA-</p><p>2 mais:</p><p>- equipamento de</p><p>contenção para</p><p>manutenção dos</p><p>animais;</p><p>- cabines SB de</p><p>classe I ou II para</p><p>manipulações</p><p>(inoculação,</p><p>necropsia) que</p><p>possam criar</p><p>aerossóis infecciosos,</p><p>proteção respiratória</p><p>adequada.</p><p>- linhas de</p><p>penetração seladas;</p><p>- janelas vedadas.</p><p>4</p><p>Agentes exóticos</p><p>ou perigosos que</p><p>impõem um alto</p><p>risco de doenças</p><p>que ameaçam a</p><p>vida, infecções</p><p>laboratoriais</p><p>transmitidas</p><p>via aerossol ou</p><p>relacionadas a</p><p>agentes com risco</p><p>desconhecido de</p><p>transmissão.</p><p>NB-3 mais:</p><p>- entrada por meio</p><p>do vestiário para</p><p>troca de roupa onde</p><p>a roupa pessoal é</p><p>removida e a do</p><p>laboratório,</p><p>vestida. Banho na</p><p>saída;</p><p>- todos os lixos</p><p>deverão ser</p><p>descontaminados</p><p>antes da remoção</p><p>do local.</p><p>Equipamento de NB-3</p><p>mais:</p><p>- equipamento de</p><p>máxima contenção</p><p>(CSB classe III ou de</p><p>contenção parcial com</p><p>macacão pressurizado</p><p>positivamente com</p><p>ar) usado para todas</p><p>as atividades e os</p><p>procedimentos.</p><p>NB-3 mais:</p><p>- edifício separado ou</p><p>área isolada;</p><p>- sistemas de</p><p>abastecimento e</p><p>escape a vácuo e de</p><p>descontaminação;</p><p>(sistemas de</p><p>insuflação e</p><p>exaustão).</p><p>Fonte: MS, 2006. (Adaptado).</p><p>DICA</p><p>Os laboratórios para controle de qualidade de produtos</p><p>farmacêuticos geralmente se enquadram na classe de risco</p><p>2. Para verificar a classificação completa dos agentes bioló-</p><p>gicos quanto ao nível de biossegurança, acesse ao material</p><p>produzido pelo Ministério da Saúde, (2017): “Classificação de</p><p>risco dos agentes biológicos”.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 19</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 19 18/01/2021 11:41:18</p><p>Validação de métodos analíticos</p><p>Além dos aspectos de gestão, infraestrutura, materiais, equipamentos e</p><p>outros dispositivos, é fundamental priorizar os procedimentos de trabalho.</p><p>Primeiramente, quanto ao recebimento de amostras, destaca-se a quantidade</p><p>recebida (ela deve ser sufi ciente para a repetição de ensaios, se necessário);</p><p>sua representatividade em relação ao lote, a realização de inspeção visual, re-</p><p>gistro, rotulagem e armazenamento adequados até o encaminhamento para</p><p>análise. Os registros de análises têm que ser documentos com informações</p><p>detalhadas sobre a amostra e o ensaio, incluindo os cálculos e os resultados.</p><p>É importante que os métodos (procedimentos) analíticos usados na realiza-</p><p>ção das análises sejam validados. A validação é a comprovação por meio de for-</p><p>necimento de evidência objetiva de que os requisitos para uma aplicação ou uso</p><p>específi co pretendido foram atendidos. Algumas características consideradas na</p><p>validação de métodos analíticos são: exatidão, precisão, especifi cidade e limite</p><p>de detecção.</p><p>Os ensaios devem ser feitos de acordo com a farmacopeia. Os ensaios bio-</p><p>lógicos, que são o alvo desta disciplina, conceituam-se como: “procedimentos</p><p>destinados a avaliar a potência de princípios ativos</p><p>contidos nas matérias-primas e preparações far-</p><p>macopeicas, utilizando reagentes biológicos tais</p><p>como microrganismos, animais, fl uidos e órgãos</p><p>isolados de animais” (ANVISA, 2010). Os resultados</p><p>dos ensaios têm que ser avaliados estatisticamente,</p><p>estimando-se a incerteza de medição e, em seguida,</p><p>deve ser realizado um laudo de análise.</p><p>Em relação ao descarte de resíduos gerados no laboratório, necessita-se</p><p>estar em conformidade com a Lei nº 12.305 de 2010, que institui a Política Na-</p><p>cional de Resíduos Sólidos, defi nindo os termos resíduos de serviços de saúde</p><p>e os rejeitos como os “resíduos sólidos que, depois de esgotadas todas as possi-</p><p>bilidades de tratamento e recuperação por processos tecnológicos disponíveis</p><p>e economicamente viáveis, não apresentem outra possibilidade que não a dis-</p><p>posição fi nal ambientalmente adequada”.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 20</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 20 18/01/2021 11:41:18</p><p>Garantia de qualidade</p><p>Assim, o sistema de gestão da qualidade necessita dirigir e controlar a organi-</p><p>zação no que diz respeito à qualidade (grau em que um conjunto de características</p><p>inerentes satisfaz a requisitos). Essa gestão compreende atividades coordenadas</p><p>focadas em demonstrar que os requisitos de qualidade são atendidos em um pro-</p><p>cesso chamado de garantia da qualidade.</p><p>A garantia e controle de qualidade do laboratório carecem incluir: o comprome-</p><p>timento com as boas práticas (que devem estar descritas em um manual); a im-</p><p>plementação do sistema de gestão da qualidade; uma declaração de que todo o</p><p>pessoal envolvido nas atividades de ensaio está familiarizado com</p><p>a documentação da qualidade e que implementa permanente-</p><p>mente suas políticas e seus procedimentos; o atendimento aos</p><p>requisitos dos regulamentos da habilitação na vigilância sanitária,</p><p>representados, principalmente, pela Resolução RDC nº 11 de 2012.</p><p>Animais de laboratório</p><p>Assim como os laboratórios de microbiologia, aqueles que realizam atividades</p><p>que envolvem doenças infecciosas com animais experimentais também são divi-</p><p>didos em quatro níveis de biossegurança, como apresentado no Quadro 1. Essas</p><p>quatro combinações de práticas, equipamentos de segurança e de instalações são</p><p>denominadas de níveis de biossegurança animal (NBA) 1, 2, 3 e 4 e proporcionam</p><p>níveis crescentes de proteção às pessoas e ao meio ambiente.</p><p>O uso de animais de laboratório é um componente essencial para o avanço</p><p>da ciência, tem-se registro dessa utilização desde a Grécia Antiga. Durante sécu-</p><p>los, médicos e pesquisadores utilizaram animais para melhorar seus conhecimen-</p><p>tos sobre como os vários órgãos e sistemas do corpo humano funcionavam, bem</p><p>como para aprimorar suas habilidades cirúrgicas. O conhecimento obtido com tais</p><p>testes tem sido fundamental para promover a saúde e o bem-estar humano e</p><p>animal por meio da prevenção e cura de doenças, novos tratamentos e desen-</p><p>volvimento de medicamentos e dispositivos. Além disso, a comunidade científi ca</p><p>entende que o uso de animais é um privilégio confi ado pela sociedade, por isso, ela</p><p>está comprometida em garantir a saúde e o bem-estar desses animais.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 21</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 21 18/01/2021 11:41:18</p><p>EXPLICANDO</p><p>Animal de laboratório: qualquer vertebrado vivo não humano, das espécies</p><p>classifi cadas no fi lo Chordata (animais que possuem como características</p><p>exclusivas, ao menos na fase embrionária, a presença de notocorda, fen-</p><p>das branquiais na faringe e tubo nervoso dorsal único), subfi lo Vertebrata</p><p>(animais cordados que têm como características exclusivas um encéfalo</p><p>grande encerrado em uma caixa craniana e uma coluna vertebral), como</p><p>disposto na Lei nº 11.794, de 2008, que estabelece os procedimentos para o</p><p>uso científi co de animais.</p><p>Cabe ressaltar que, quando o uso de animais for necessário, é fundamental</p><p>planejar e conduzir os experimentos de acordo com os mais elevados princípios</p><p>científi cos, humanitários e éticos. É possível, sendo assim, diminuir o estresse e a</p><p>dor causada a esses animais (NEVES, 2013).</p><p>Biotérios</p><p>De acordo com a Resolução Normativa nº 20 do Conselho Nacional de Con-</p><p>trole de Experimentação Animal (CONCEA), de 30 de dezembro de 2014 (MC-</p><p>TIC, 2016a, p. 5), biotério:</p><p>é a instalação na qual são produzidos, mantidos ou utilizados</p><p>animais para atividades de ensino ou pesquisa científi ca. A ins-</p><p>talação deve possuir infraestrutura adequada para atender aos</p><p>requisitos ambientais, sanitários e de bem-estar animal para a</p><p>espécie utilizada. São exemplos: instalações de roedores e la-</p><p>gomorfos, fazendas experimentais, canil, pocilga, baia, piquete,</p><p>curral, galpão, granja, tanque para peixes etc.</p><p>Além disso, a Resolução Normativa nº 6, de 10 de julho de 2012 estabelece</p><p>que o coordenador de biotério “deverá ser profi ssional com conhecimento na</p><p>ciência de animais de laboratório apto a gerir a unidade, visando ao bem-estar,</p><p>à qualidade na produção, bem como ao adequado manejo dos animais dos</p><p>biotérios” (BRASIL, 2012a, p. 13).</p><p>O responsável técnico pelos biotérios “deverá ter o título de médico veteri-</p><p>nário, com registro ativo no Conselho Regional de Medicina Veterinária da Uni-</p><p>dade Federativa em que o estabelecimento esteja localizado e assistir os animais</p><p>em ações voltadas ao bem-estar e cuidados veterinários” (BRASIL, 2012a, p. 13).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 22</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 22 18/01/2021 11:41:18</p><p>A estrutura física e ambiente de biotérios que serão abordados se funda-</p><p>mentam na Resolução Normativa nº 15, de 16 de dezembro de 2013 (MCTIC,</p><p>2016b), para roedores e lagomorfos, sendo os animais mais utilizados em labo-</p><p>ratórios. Tais instalações e ambiente são elementos essenciais para limitar as</p><p>variações fisiológicas que podem alterar a saúde, o bem-estar e os ensaios rea-</p><p>lizados com animais, além de propiciarem a segurança das pessoas envolvidas.</p><p>O projeto do biotério deve considerar a abrangência das atividades e dos obje-</p><p>tivos institucionais, a espécie animal e o número de animais que será alojado.</p><p>As instalações básicas de um biotério compreendem: área administrativa,</p><p>de recepção de animais/quarentena,</p><p>de depósitos (insumos, materiais lim-</p><p>pos, equipamentos, rejeitos), de higie-</p><p>nização, de serviços, salas de animais,</p><p>sala de procedimentos, eutanásia e</p><p>vestiários. É importante considerar a</p><p>escolha correta dos materiais a serem</p><p>usados na construção do biotério de</p><p>forma a oferecer as condições adequa-</p><p>das para o funcionamento eficiente e</p><p>facilitar a higienização dos ambientes.</p><p>O controle das variáveis ambien-</p><p>tais dentro dos biotérios também é</p><p>fundamental tanto para a produção e</p><p>manutenção dos animais de laborató-</p><p>rio quanto para a equipe de técnicos</p><p>que nele trabalha e para a validade</p><p>das pesquisas. O ambiente deve as-</p><p>segurar um padrão sanitário nas colônias, ao mesmo tempo que promove o</p><p>bem-estar dos animais. Devem ser controlados o nível de ruídos, fontes de</p><p>vibração, iluminação, temperatura, umidade, ventilação, exaustão e qualidade</p><p>do ar. A Tabela 1 apresenta o espaço mínimo recomendado para alocação dos</p><p>roedores mais comumente utilizados em laboratório. É importante observar</p><p>que animais maiores podem necessitar de espaços maiores que os apresenta-</p><p>dos na tabela para o desenvolvimento apropriado.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 23</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 23 18/01/2021 11:41:27</p><p>Espécie Peso (g) Área/animal (cm2) Altura (cm)</p><p>Rato</p><p>< 100 109,6 17,8</p><p>Até 200 148,35 17,8</p><p>Até 300 187,05 17,8</p><p>Até 400 258,0 17,8</p><p>Até 500 387,0 17,8</p><p>> 500 451,5 17,8</p><p>Camundongo</p><p>< 10 38,7 12,7</p><p>Até 15 51,6 12,7</p><p>Até 25 77,4 12,7</p><p>> 25 >96,7 12,7</p><p>TABELA 1. RECOMENDAÇÕES DE ESPAÇO MÍNIMO PARA ROEDORES ALOJADOS EM GRUPOS</p><p>Fonte: NRC, 2011. (Adaptado).</p><p>Considerando os animais em experimentação, as vias de administração de</p><p>medicamentos e de eutanásia são: oral (Figura 2), subcutânea (injeção sob a</p><p>pele do animal), intramuscular (injeção no músculo esquelético, geralmente o</p><p>quadríceps), endovenosa (Figura 3), intraperitoneal (injeção na cavidade peri-</p><p>toneal, entre os órgãos abdominais). De acordo com a Resolução Normativa nº</p><p>30 do CONCEA, de 02 de fevereiro de 2016, eutanásia é o modo de matar o ani-</p><p>mal sem dor e com mínimo estresse. O método deve ser tecnicamente aceitá-</p><p>vel e cientificamente comprovado, sua escolha depende da espécie envolvida,</p><p>da idade e do estado fisiológico dos animais, bem como dos meios</p><p>disponíveis de contenção, da capacidade técnica do executor, da</p><p>quantidade de animais e do protocolo de estudo es-</p><p>tabelecido.</p><p>A técnica ideal deve induzir a uma rápida per-</p><p>da de consciência no animal, sendo irreversível,</p><p>reproduzível, confiável, simples de administrar e</p><p>segura para o operador.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 24</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 24 18/01/2021 11:41:27</p><p>Figura 2. Via oral de administração. A substância é introduzida na cavidade oral ou no aparelho digestório por meio de</p><p>um tubo esofágico ou estomacal. O tubo flexível com a ponta arredondada é colocado na boca do animal e gentilmente</p><p>empurrado pelo esôfago até́ o estômago. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>Figura 3. Via de administração endovenosa ou intravenosa é feita diretamente na corrente sanguínea por meio de</p><p>vasos superficiais. A veia da cauda é o vaso sanguíneo de escolha em camundongos. Fonte: Shutterstock. Acesso</p><p>em: 14/09/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 25</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 25 18/01/2021 11:41:42</p><p>Conceito 3 Rs</p><p>A partir do século XIX, houve um aumento no número de animais utili-</p><p>zados em experiências com a ascensão da ciência biomédica moderna. Em</p><p>1959, com a publicação do livro The principles of humane experimental techni-</p><p>que pelos pesquisadores William Russell e Rex Burch, iniciou-se o movimento</p><p>de proteção aos animais usados em pesquisa, representando</p><p>um marco na</p><p>discussão sobre a utilização desses animais em experimentos.</p><p>Tal movimento estabeleceu os princípios de Russell-Burch de “redução,</p><p>substituição e refi namento” no uso de animais, conhecidos como princípio</p><p>ou conceito dos 3 Rs (reduction, refi nement, replacement). Apesar de antigo,</p><p>esses princípios ainda se mantêm bastante presentes nos meios científi cos e</p><p>acadêmicos em nível mundial.</p><p>Sinteticamente, deve haver refl exão para tentar reduzir o número de ani-</p><p>mais por procedimento experimental em um estudo, substituir o uso de ani-</p><p>mais sempre que possível e aprimorar os métodos já descritos para minimi-</p><p>zar o desconforto animal. Os princípios, assim, precisam ser incorporados</p><p>ao design e condução de atividades de laboratório que envolvam animais,</p><p>destacando que o custo e a conveniência não devem ter precedência sobre</p><p>esses princípios.</p><p>A redução (reduction) refl ete a obtenção de nível equiparável de informa-</p><p>ção com o emprego de menos animais. Ela pode ser baseada na estratégia</p><p>de busca ativa na literatura especializada, a fi m de não duplicar ensaios reali-</p><p>zados; é importante que haja estímulo à publicação de resultados negativos</p><p>para que o banco de dados seja o mais abrangente possível, contemplando</p><p>todos os estudos já realizados. Também é essencial conservar a qualidade ge-</p><p>nética, sanitária e ambiental dos animais, o que possibilitará uma diminuição</p><p>no número de animais utilizados, visto que os resultados apresentarão uma</p><p>menor dispersão. Por fi m, sempre que possível, necessita-se compartilhar os</p><p>mesmos animais para diferentes ensaios.</p><p>O refi namento (refi nement) promove o alívio ou a minimização da dor,</p><p>sofrimento ou estresse do animal. Várias abordagens podem ser utilizadas</p><p>para melhorar os protocolos experimentais, seja prevenindo, seja aliviando</p><p>esses danos:</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 26</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 26 18/01/2021 11:41:42</p><p>• Utilização de técnicas apropriadas no manuseio dos animais, assim como o</p><p>uso de analgésicos e anestésicos em experimentos potencialmente dolorosos;</p><p>• Capacitação adequada antes de executar qualquer ensaio;</p><p>• As cirurgias devem ser feitas de forma asséptica, evitando infecções e</p><p>estabelecendo cuidados pós-cirúrgicos adequados. Idealmente, realizar uma</p><p>única cirurgia por animal.</p><p>A substituição (replacement) estabelece que um determinado objetivo</p><p>seja alcançado sem o emprego de animais vertebrados vivos. Como exemplo,</p><p>é possível citar a utilização de: animais invertebrados, embriões de vertebra-</p><p>dos, microrganismos, órgãos e tecidos isolados de animais, cultura de tecidos</p><p>e células (técnicas in vitro), sistemas físico-químicos mimetizantes de funções</p><p>biológicas e simulação de processos fi siológicos em computadores.</p><p>Considerando todos esses aspectos, é imprescindível fazer uma avaliação</p><p>do custo-benefício do uso de animais nos ensaios, refl etindo sobre o grau de</p><p>dano a que o animal será submetido e a intensidade do benefício que será</p><p>adquirido com os resultados do ensaio. Torna-se fundamental, portanto, des-</p><p>tacar a importância de se trabalhar com uma vida, por isso, é essencial conhe-</p><p>cer bem o comportamento de cada espécie e suprir todas as necessidades da</p><p>forma mais adequada possível. Inclusive, ressalta-se que o não cumprimento</p><p>das orientações estabelecidas no Guia brasileiro de produção, manutenção ou</p><p>utilização de animais em atividades de ensino ou pesquisa científi ca pode incor-</p><p>rer em sanções administrativas e penais, caso aconteçam maus-tratos.</p><p>Métodos alternativos</p><p>Os métodos alternativos podem ser defi nidos como qualquer método que</p><p>visa reduzir, refi nar ou substituir (parcial ou totalmente) o emprego de ani-</p><p>mais vivos na pesquisa biomédica, ensaios ou ensino. São exemplos desses</p><p>métodos os modelos matemáticos, simulação em computador e sistemas</p><p>biológicos in vitro. Segundo a Resolução Normativa nº 17, de 3 de julho</p><p>de 2014 (CARVALHO, 2015, n.p.), o método alternativo é “qual-</p><p>quer método que possa ser utilizado para substituir, reduzir</p><p>ou refi nar o uso de animais em atividades de pesquisa”; sen-</p><p>do que o método alternativo validado se refere àquele:</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 27</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 27 18/01/2021 11:41:42</p><p>cuja confi abilidade e relevância para determinado propósito</p><p>foram determinadas por meio de um processo que envolve os</p><p>estágios de desenvolvimento, pré-validação, validação e revisão</p><p>por especialistas, o qual está ́ em conformidade com os procedi-</p><p>mentos realizados por Centros para Validação de Métodos Alter-</p><p>nativos ou por estudos colaborativos internacionais, podendo</p><p>ter aceitação regulatória internacional (CARVALHO, 2015, n.p.).</p><p>O método alternativo reconhecido “é o método alternativo validado que</p><p>foi reconhecido pelo CONCEA” (CARVALHO, 2015, n.p.).</p><p>Na Resolução Normativa nº 18, de 24 de setembro de 2014, constam os</p><p>17 métodos alternativos para o uso de animais em atividades de pesquisa no</p><p>Brasil, agrupados nesses sete desfechos:</p><p>• Para avaliação do potencial de irritação e corrosão da pele;</p><p>• Para avaliação do potencial de irritação e corrosão ocular;</p><p>• Para avaliação do potencial de fototoxicidade;</p><p>• Para avaliação da absorção cutânea;</p><p>• Para avaliação do potencial de sensibilização cutânea;</p><p>• Para avaliação de toxicidade aguda;</p><p>• Para avaliação de genotoxicidade.</p><p>Controle de qualidade de material de acondicionamento</p><p>e embalagem</p><p>No cenário global atual, é praticamente impossível visualizar a existência</p><p>de qualquer empresa farmacêutica sem a embalagem, visto que a produção</p><p>de medicamentos em larga escala não teria utilidade caso eles não fossem</p><p>embalados adequadamente. A embalagem é essencial, desse modo, para que</p><p>o medicamento fabricado permaneça em sua forma original com todas as</p><p>especifi cações de qualidade e de segurança desejadas durante o prazo de</p><p>validade especifi cado.</p><p>De maneira geral, deve-se considerar que as embalagens necessitam aten-</p><p>der a uma séria de regulações, estando em conformidade com as boas práticas</p><p>de fabricação e com o controle de qualidade da indústria farmacêutica, bem</p><p>como atendendo às demandas do mercado. Por outro lado, as embalagens</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 28</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 28 18/01/2021 11:41:42</p><p>oferecem proteção (contra deterioração, vazamento, contaminação e cresci-</p><p>mento microbiano), estabilidade e qualidade, auxiliando na identifi cação do</p><p>produto e atuando como uma ferramenta para atrair o cliente, o que pode im-</p><p>pactar na venda do medicamento. A Figura 4 apresenta a ilustração de diversos</p><p>tipos de embalagem, destacando diferentes formatos e colorações.</p><p>Figura 4. Ilustração do produto fi nal disponível para comercialização. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>Materiais de acondicionamento e embalagens</p><p>[a embalagem] é o invólucro, recipiente ou qualquer forma de</p><p>acondicionamento, removível ou não, destinado a cobrir, empaco-</p><p>tar, envasar, proteger ou manter, especifi camente ou não, os me-</p><p>dicamentos, as drogas, os insumos farmacêuticos e correlatos, os</p><p>cosméticos, os saneantes e outros produtos (ANVISA, 2010, p. 42).</p><p>O termo “embalagem primária” diz respeito àquela que mantém contato di-</p><p>reto com seu conteúdo. “Considera-se material de embalagem primária: ampola,</p><p>bisnaga, envelope, estojo, fl aconete, frasco de vidro ou de plástico, frasco-ampola,</p><p>cartucho, lata, pote, saco de papel e outros” (ANVISA, 2010, p. 42), alguns desses</p><p>ilustrados na Figura 5. Não deve haver qualquer interação entre o material da em-</p><p>balagem primária e o conteúdo capaz de alterar a concentração, a qualidade ou a</p><p>pureza do material acondicionado.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 29</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 29 18/01/2021 11:41:44</p><p>A embalagem secundária se refere àquela que:</p><p>[...] possibilita total proteção do material de acondicionamento</p><p>nas condições usuais de transporte, armazenagem e distribui-</p><p>ção. Considera-se embalagem secundária:</p><p>caixas de papelão,</p><p>cartuchos de cartolina, madeira ou material plástico ou estojo</p><p>de cartolina e outros (ANVISA, 2010, p. 42).</p><p>Ainda de acordo com a Anvisa (2010):</p><p>[...] compreende-se por material de embalagem o recipiente; en-</p><p>voltório; invólucro; ou qualquer outra forma de proteção, remo-</p><p>vível ou não, usado para envasar; proteger; manter; cobrir; ou</p><p>empacotar, especificamente, ou não, matérias-primas; reagentes</p><p>e medicamentos (ANVISA, 2010, p. 47).</p><p>Há uma classificação para embalagens terciárias, elas geralmente não são vis-</p><p>tas pelos consumidores, pois são removidas pelos varejistas antes que os produ-</p><p>tos sejam expostos para venda. Essa embalagem, porém, tem papel crucial duran-</p><p>te o transporte dos produtos do fabricante até os distribuidores ou comerciantes,</p><p>protegendo o produto dos danos que podem ocorrer. Exemplos de materiais des-</p><p>se tipo de embalagem são: caixas de madeira e de papelão.</p><p>Figura 5. Diversas embalagens podem ser utilizadas para armazenar medicamentos, fabricadas com diferentes</p><p>tipos de materiais. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 30</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 30 18/01/2021 11:41:52</p><p>Uma das principais características das embalagens é garantir a estabilidade do</p><p>produto contra prejuízos e perigos ambientas. Alguns desses fatores englobam:</p><p>luz, temperatura, umidade, microrganismos, partículas e gases atmosféricos. Exis-</p><p>tem também os riscos mecânicos, como: compressão, vibração, abrasão, perfura-</p><p>ção e choque. Além disso, é importante proteger o produto contra perda ou ganho</p><p>de água e redução de qualquer componente da formulação. É fundamental que</p><p>os materiais da embalagem não reajam com o produto, preservando-os durante</p><p>todo o prazo de validade.</p><p>Os materiais comumente usados para embalar produtos farmacêuticos são</p><p>plástico, vidro, metal e borracha (Figura 5). O Quadro 3 apresenta os tipos de ma-</p><p>térias-primas que podem ser empregados na produção de embalagens de medi-</p><p>camentos, além da principal utilização. A escolha do material depende de vários</p><p>fatores, entre eles: o tipo de medicamento, o grau de proteção exigido, a adequa-</p><p>ção do método de envase, o requisito de esterilização, a compatibilidade entre</p><p>medicamento e material de embalagem, a conveniência do paciente e o custo da</p><p>embalagem. Esses materiais são utilizados isoladamente ou em combinação, ser-</p><p>vindo como ingrediente principal para a construção da embalagem primária. Os</p><p>materiais mais usados são plásticos e vidros (AMARJI e colaboradores, 2018).</p><p>Material Uso</p><p>Papelão Caixas, unidades de exposição.</p><p>Papel Etiquetas, folhetos.</p><p>Vidro Ampolas, frascos, seringas, cartuchos, garrafas.</p><p>Plástico Fechamentos, garrafas, tubos, laminados com papel ou metal, sacos/sacolas.</p><p>Metal Tubos, latas, folhas, agulhas, cilindros de gás, recipientes pressurizados.</p><p>Borracha Fechamentos.</p><p>QUADRO 3. TIPOS DE MATÉRIAS-PRIMAS QUE PODEM SER UTILIZADOS NA PRODUÇÃO DE</p><p>EMBALAGENS DE MEDICAMENTOS</p><p>Fonte: WHO, 2002. (Adaptado).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 31</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 31 18/01/2021 11:41:52</p><p>Em geral, os plásticos são polímeros sintéticos de alto peso molecular</p><p>e sensíveis à temperatura. Assim, considerando a embalagem de produtos</p><p>farmacêuticos, poucos materiais plásticos apresentam a resistência neces-</p><p>sária à temperatura para poderem ser autoclavados. Exemplos desses polí-</p><p>meros são: cloreto de polivinil, polipropileno de poliestireno, policarbonato,</p><p>polipropileno, tereftalato de polietileno (PET), olefinas cíclicas, poliamida</p><p>(nylon). Esses polímeros termoplásticos são leves e mecanicamente qua-</p><p>se tão fortes quanto os metais. Como o vidro, eles oferecem propriedades</p><p>transparentes com espessura relativamente menor, conseguindo armaze-</p><p>nar o produto por muito tempo. Ao contrário dos polímeros termoplásticos,</p><p>ureia-formaldeído, fenol-formaldeído, resinas epóxi (epóxidos), os poliure-</p><p>tanos são polímeros termoendurecíveis.</p><p>Os materiais plásticos oferecem liberdade de design. Durante a síntese</p><p>plástica, os polímeros termoplásticos mencionados são utilizados com uma</p><p>quantidade substancial de plastificante, cargas e antioxidantes etc. Esses in-</p><p>gredientes, nesse sentido, podem migrar do plástico para o produto, o que é</p><p>bastante prejudicial; os componentes do medicamento também não devem</p><p>ser adsorvidos pelo plástico. A seleção do material plástico, portanto, é crítica,</p><p>e o recipiente de plástico escolhido não deve interagir com o medicamento.</p><p>O vidro é principalmente um material inorgânico (isto é, sílica) ou sua</p><p>mistura com outros materiais como óxido de cálcio, de alumínio, de sódio,</p><p>de boro, de bário, de magnésio e de potássio. Há vários tipos de vidro dis-</p><p>poníveis em diferentes cores. Dependendo do requisito do medicamento,</p><p>diferentes modelos de embalagens de vidro são utilizados (por exemplo,</p><p>garrafas de vidro para xaropes, soluções, suspensões, comprimidos e para</p><p>injeções unitárias ou multidose). Com base no seu grau de resistência quí-</p><p>mica ao contato com a água (isto é, resistência à hidrólise), os recipientes de</p><p>vidro são classificados em quatro tipos.</p><p>• Borossilicato altamente resistente (vidro tipo I): contém sílica (80%),</p><p>óxido bórico (10%) e pequenas quantidades de óxido de sódio e óxido de</p><p>alumínio;</p><p>• Soda-cal moderadamente resistente (vidro tipo II): contém sílica (75%),</p><p>óxido de sódio (15%), óxido de cálcio (10%) e pequenas quantidades de óxido</p><p>de alumínio, de magnésio e de potássio;</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 32</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 32 18/01/2021 11:41:52</p><p>• Soda-cal altamente resistente (vidro tipo III): é fabricada a partir de</p><p>vidro tipo II que sofre a desalcalinização;</p><p>• Soda-cal para uso geral (vidro tipo IV): apresenta baixa resistência hi-</p><p>drolítica, não pode ser autoclavado.</p><p>CURIOSIDADE</p><p>A cor do vidro é determinada pelos seguintes componentes: fluoretos ou óxido</p><p>de estanho (branco); óxidos de cobalto, cobre, ferro e níquel (preto); óxido de</p><p>níquel e de titânio (cinza); óxido de neodímio (roxo); óxido de cobalto ou de</p><p>cobre (azul); cromato de ferro ou óxido de cobre (azul-esverdeado); óxido de</p><p>ferro e crômico (verde); óxido crômico ou sulfeto de cádmio (amarelo-esver-</p><p>deado); óxido de urânio, ferro/manganês, ou de prata (amarelo); óxido de ferro</p><p>e enxofre ou dissulfeto de ferro (âmbar); sulfeto de cádmio, manganês, ouro</p><p>metálico, óxido de cobre, cloreto de ouro (vermelho).</p><p>Vários medicamentos podem ser embalados em recipientes com o metal</p><p>como material básico. Estanho, alumínio, aço inoxidável e chumbo são os me-</p><p>tais empregados na fabricação desses recipientes. Algumas vantagens do uso</p><p>de metal em comparação com o plástico e vidro são: rigidez, ser inquebrável,</p><p>leveza em comparação com o vidro e impermeabilidade à umidade e aos gases,</p><p>sendo resistentes a flutuações extremas de temperatura. Suas principais limi-</p><p>tações, no entanto, incluem: o custo e a tendência à reação com determinados</p><p>produtos químicos. Entre todos os metais, o estanho tem menos reatividade e</p><p>é considerado quimicamente inerte. Por causa da sua inércia, vários recipien-</p><p>tes de metal são revestidos internamente com estanho. Além de estanho, são</p><p>utilizados recipientes revestidos com polímero termoplástico. Recipientes de</p><p>metal revestido de vidro também é uma das opções para melhorar a inércia</p><p>química da embalagem.</p><p>O fechamento é um componente crítico de um sis-</p><p>tema de embalagem, em geral, o material aprovei-</p><p>tado para esse fim é de plástico ou de borracha. A</p><p>borracha é um material vulcanizado de elastôme-</p><p>ros com aditivos apropriados. Esses elastômeros</p><p>podem ser de fontes naturais ou sintéticas e produzi-</p><p>dos por polimerização de adição ou por polimerização</p><p>de condensação.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 33</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 33 18/01/2021 11:41:52</p><p>O fechamento é capaz de ser utilizado como prova de violação (demons-</p><p>trando que o medicamento já foi aberto) e ser resistente a crianças,</p><p>ou seja,</p><p>deve possuir um mecanismo que exija uma habilidade não comum para esse</p><p>grupo de pessoas. Um dos pré-requisitos principais do sistema de fechamento</p><p>é garantir a segurança e a proteção do produto perante os fatores ambientais.</p><p>A opção por embalagens não contaminantes do tipo dose única ou dispensers</p><p>ajudam a minimizar essa interferência dos fatores ambientais no produto.</p><p>Percebe-se, dessa forma, que as embalagens têm como função primordial</p><p>a proteção do medicamento, mas também facilitam a identifi cação, manuseio,</p><p>abertura, fechamento, armazenamento, proporcionando melhor experiência ao</p><p>paciente. Além disso, diferentes tipos de materiais são usados de acordo com</p><p>requisitos específi cos de cada embalagem para o medicamento a que se destina.</p><p>Testes para avaliação de materiais de embalagens</p><p>Os principais testes disponíveis para avaliar os materiais de embalagem</p><p>são: físico, identifi cação, dimensão/medição, volume do recipiente, volume</p><p>da dose, extração e microbiológicos. Os testes físicos se baseiam nas altera-</p><p>ções físicas que podem ser facilmente detectadas por observação visual ou</p><p>microscopia óptica, são exemplos dessas alterações: descoloração, deforma-</p><p>ção, quebra, vazamento.</p><p>O teste de identifi cação confi rma a qualidade dos componentes da emba-</p><p>lagem em relação às especifi cações.</p><p>Ele é feito por meio de testes quími-</p><p>cos usando instrumentos sofi stica-</p><p>dos, como: cromatografi a líquida de</p><p>alta efi ciência (HPLC), cromatografi a</p><p>gasosa (GC) e ressonância magnética</p><p>nuclear (NMR). As dimensões internas</p><p>e externas das embalagens devem es-</p><p>tar dentro dos limites aceitáveis para</p><p>que qualquer material da embalagem</p><p>seja efi caz para o uso pretendido. As dimensões dos subcomponentes da em-</p><p>balagem são geralmente medidas por calibrador vernier ou por microscopia.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 34</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 34 18/01/2021 11:41:53</p><p>A formulação tem um volume de preenchimento definido no material de</p><p>embalagem que geralmente visa fornecer a quantidade rotulada suficiente ao</p><p>paciente em uma única dose ou em doses divididas uniformemente. O volu-</p><p>me em cada embalagem deve ser uniforme durante a fabricação de lotes com</p><p>limites aceitáveis rígidos. Desse jeito, cada formulação deve ter o volume em</p><p>um recipiente dentro do limite especificado/aceitável. Deve-se também testar</p><p>o volume de entrega, que depende dos componentes da embalagem, com as</p><p>características da formulação de viscosidade e tensão superficial. Esse vo-</p><p>lume garante a dose unitária terapêutica fornecida ao usuário com a via de</p><p>administração pretendida.</p><p>Os materiais que compõem as embalagens são produzidos a partir de di-</p><p>versas substâncias químicas que podem migrar para o medicamento. É im-</p><p>portante, portanto, realizar testes desses extraíveis para avaliar a potencial</p><p>toxicidade dessa migração durante a administração do medicamento.</p><p>Os testes microbiológicos precisam ser feitos pelo menos nas embalagens</p><p>primárias, mesmo não havendo um padrão regulamentar exigido. A Tabela 2</p><p>apresenta uma sugestão de critério de conformidade de embalagem primá-</p><p>ria, mostrando os valores máximos possíveis para a contagem microbiana ae-</p><p>róbia total. Os microrganismos Escherichia coli, Salmonella spp., Staphylococcus</p><p>aureus, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacteriaceae têm que estar ausentes</p><p>nessas embalagens (GOVERDE, 2020).</p><p>Embalagem Contagem microbiana aeróbia total</p><p>Até 200 ml/g 25 UFC (unidades formadoras de colônia) /unidade.</p><p>201-2000 ml/g 100 UFC/unidade.</p><p>> 2000 ml/g 200 UFC/unidade.</p><p>Folhas 1 UFC/cm2.</p><p>TABELA 2. EXEMPLO DE CRITÉRIOS DE ACEITAÇÃO PARA EMBALAGEM PRIMÁRIA</p><p>Fonte: GOVERDE, 2020. (Adaptado).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 35</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 35 18/01/2021 11:41:53</p><p>O material da embalagem desempenha, pois, um papel importante para</p><p>manter a formulação segura e inalterada. Ele carece evitar interações, toxici-</p><p>dade, deterioração ou instabilidade da formulação, sendo compatível com as</p><p>formulações e durável. Por isso, existem diversos regulamentos para esses</p><p>materiais a fim de confirmar a segurança e a qualidade, baseados em parâ-</p><p>metros regulatórios de biocompatibilidade (material inerte), propriedades fí-</p><p>sico-químicas e compatibilidade embalagem-medicamento. Tais materiais são</p><p>monitorados e aprovados pelas autoridades reguladoras, visando à proteção</p><p>dos consumidores, das empresas e da sociedade como um todo (AMARJI e co-</p><p>laboradores, 2018).</p><p>O descumprimento dessas recomendações e diretrizes regulatórias resulta</p><p>na qualidade comprometida do medicamento e na retirada do respectivo me-</p><p>dicamento do mercado. Exemplos de tais casos são a retirada do medicamento</p><p>graças a uma embalagem defeituosa, mal embalada, com rotulagem incorreta.</p><p>Para evitar recalls, é essencial que se faça o controle de qualidade adequada-</p><p>mente. Essa fermenta é a parte das boas práticas de fabricação relacionada</p><p>à amostragem, especificações, ensaios, organização, documentação e proce-</p><p>dimentos de liberação que garantem que os testes necessários e relevantes</p><p>sejam realmente executados e que os produtos não sejam liberados para uso</p><p>nem para venda até que sua qualidade seja considerada satisfatória.</p><p>O controle de qualidade não se limita às operações do laboratório, mas</p><p>deve estar envolvido em todas as decisões conexas à qualidade do produto.</p><p>Na cadeia de produção, o controle de qualidade das embalagens contém vários</p><p>pontos críticos. Os requisitos básicos para esse controle envolvem:</p><p>• Instalações adequadas, pessoal treinado e procedimentos aprovados de-</p><p>vem estar disponíveis para amostragem, inspeção e teste de matérias-primas,</p><p>materiais de embalagem e produtos intermediários, a granel e acabados;</p><p>• Os métodos dos testes devem ser validados;</p><p>• Registros carecem ser feitos demonstrando que todos os procedimentos</p><p>de amostragem, inspeção e teste necessários foram realmente realizados e</p><p>que quaisquer desvios foram totalmente registrados e investigados;</p><p>• Os produtos acabados têm que estar em conformidade com as legislações</p><p>vigentes, e os ingredientes que apresentam a pureza exigida, devem estar na</p><p>embalagem adequada e rotulados corretamente.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 36</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 36 18/01/2021 11:41:53</p><p>O departamento de controle de qualidade também terá outras obrigações,</p><p>como:</p><p>estabelecer, validar e implementar todos os procedimentos de</p><p>controle de qualidade, avaliar, manter e armazenar os padrões de</p><p>referência, garantir a rotulagem correta dos reagentes, padrões e</p><p>outros materiais de sua utilização, garantir que a estabilidade dos</p><p>ingredientes ativos e medicamentos seja monitorada, participar</p><p>da investigação de reclamações relativas à qualidade do produto</p><p>e participar do monitoramento ambiental (BRASIL, 2010, n.p.).</p><p>Além disso, todas as operações devem ser realizadas de acordo com os pro-</p><p>cedimentos descritos e, quando necessário, registradas.</p><p>Por fim, é importante salientar o aspecto ambiental. Após a utilização com-</p><p>pleta da formulação farmacêutica, o material da embalagem se torna um resíduo</p><p>e, portanto, carece ser descartado de maneira apropriada, conforme a Tabela 3.</p><p>O aumento do consumo de medicamentos, observado globalmente, acarretou a</p><p>formação de uma maior quantidade de resíduos dessas embalagens. Cada vez</p><p>mais, recursos naturais e de energia são necessários para a produção de tais</p><p>produtos, e, caso o descarte não seja adequado, outros potenciais perigos ao</p><p>meio ambiente podem ocorrer – como a contaminação química.</p><p>Material Reciclagem Aterro Incineração</p><p>Papelão e papel +++ ++ ++</p><p>Plástico ++ + +++</p><p>Vidro +++ ++ NA</p><p>Borracha + ++ +++</p><p>Metal +++ + NA</p><p>TABELA 3. MÉTODOS DE DESCARTE DE EMBALAGENS NÃO CONTAMINADAS</p><p>+++: altamente recomendado; ++: recomendado; +: aceitável; NA: não se aplica.</p><p>Fonte: WHO, 2002. (Adaptado).</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 37</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 37 18/01/2021 11:41:53</p><p>Controle</p><p>microbiológico de ambientes</p><p>A vigilância ambiental é uma ferramenta empregada para avaliar o efeito</p><p>dos controles no ambiente de fabricação. Um processo para avaliar a sala</p><p>limpa e outros ambientes controlados de uma instalação farmacêutica pode</p><p>servir como um complemento do programa de garantia de qualidade micro-</p><p>biana dos medicamentos. O sistema de controle, junto ao programa de mo-</p><p>nitoramento ambiental de superfície e ar, deve ser bem implementado com</p><p>base científi ca e regulatória do controle microbiano para a fabricação de me-</p><p>dicamentos certos. Tal programa de monitoramento ambiental de rotina é</p><p>um aspecto crítico do controle dessa indústria.</p><p>Controles de esterilidade</p><p>O objetivo do sistema de controle é garantir a esterilidade, dentro dos</p><p>limites designados, de todos os itens, meios, fl uidos de enxágue e equipa-</p><p>mentos usados em teste de esterilidade. Os sistemas de controle que acom-</p><p>panham todas as análises de esterilidade abrangem equipamentos, meios e</p><p>soluções, pessoal e controle ambiental, que se divide em:</p><p>• Controles de meios abertos: tubos dos meios usados na análise de es-</p><p>terilidade são expostos ao ambiente durante a realização do teste;</p><p>• Placas de Petri com ágar: são expostas ao ambiente por um período</p><p>que não exceda uma hora, apenas durante a análise. Depois, essas placas de-</p><p>vem ser incubadas por 48 horas a 35 °C (para detecção de bactérias) e cinco</p><p>dias a 25 °C (para detectar a contaminação por fungos);</p><p>• Controles dentro de um isolador: ao realizar o teste de esterilidade</p><p>dentro de um isolador, se ele tiver sido projetado para permitir uma cone-</p><p>xão a um amostrador de ar e contador de partículas, essa amostragem pode</p><p>ser realizada durante a análise da amostra, em vez das duas amos-</p><p>tragens ambientais descritas acima. Se o isolador não</p><p>puder acomodar um amostrador de ar e/ou contador</p><p>de partículas ou os instrumentos não estiverem dis-</p><p>poníveis, os controles ambientais de meio aberto e</p><p>placas devem ser usados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 38</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 38 18/01/2021 11:41:53</p><p>Monitoramento ambiental</p><p>O monitoramento ambiental é complementar a um programa de garantia</p><p>de esterilidade e é empregue para avaliar a efi cácia dos controles microbia-</p><p>nos utilizados na fabricação de produtos farmacêuticos. Para assegurar um</p><p>ambiente controlado consistentemente aceitável, um programa abrangente</p><p>de controle ambiental necessita ser apoiado por:</p><p>• Projeto e manutenção das instalações;</p><p>• Sistemas de documentação e registros estabelecidos;</p><p>• Procedimentos de higienização validados e executados de maneira</p><p>adequada;</p><p>• Controles de processo confiáveis (com ênfase nos períodos adequa-</p><p>dos para higienização);</p><p>• Boas práticas de higiene (pessoal) e higienização (superfícies);</p><p>• Controles efetivos de acesso à área da indústria;</p><p>• Controle de contaminação;</p><p>• Coleta e análise consistente de amostras (ênfase na seleção dos locais</p><p>de amostragem ambiental);</p><p>• Programas efetivos de treinamento, certificação, qualificação e ava-</p><p>liação;</p><p>• Garantia de qualidade de materiais, instalações e equipamentos.</p><p>Em suma, um programa de monitoramento ambiental precisa estabelecer</p><p>os locais a serem amostrados, a frequência dos ensaios, os níveis de alerta e de</p><p>ação. Os tipos de equipamentos, calibração, operação e manutenção carecem</p><p>ser considerados. A amostragem, nesse sentido, tem que contemplar as super-</p><p>fícies, o ar, o pessoal e a água, enfatizando as áreas críticas: por exemplo, onde</p><p>se realiza o envase asséptico.</p><p>A Instrução Normativa nº 35, de 21 de agosto de 2019, estabelece os quatro</p><p>graus de limpeza na fabricação de medicamentos estéreis:</p><p>• Grau A: a zona para as operações de alto risco como, por exem-</p><p>plo, a zona de envase, onde estão os reservatórios de tampas,</p><p>ampolas abertas e frascos-ampolas e onde são feitas conexões</p><p>assépticas. Normalmente, essas condições são fornecidas por</p><p>uma estação de trabalho com fl uxo de ar unidirecional ou isolador.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 39</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 39 18/01/2021 11:41:53</p><p>Os sistemas de fluxo de ar unidirecional devem fornecer uma ve-</p><p>locidade de ar homogênea na faixa de 0,36 a 0,54 m/s (valor de re-</p><p>ferência) medida na posição de trabalho das estações de trabalho</p><p>com fluxo de ar unidirecional abertas. A manutenção do padrão</p><p>de fluxo de ar unidirecional deve ser demonstrada e validada. Um</p><p>fluxo de ar unidirecional e com velocidades mais baixas pode ser</p><p>usado em isoladores e caixas com luva;</p><p>• Grau B: o ambiente circundante da área Grau A, ou seja, a zona</p><p>que circunda as preparações e o envase assépticos;</p><p>• Graus C e D: áreas limpas para a realização de etapas menos crí-</p><p>ticas da fabricação de medicamentos estéreis (BRASIL, 2019, n.p.).</p><p>A ISO 14644, referente a salas limpas e ambientes controlados associados,</p><p>descreve um método para determinar o número mínimo de locais que devem</p><p>ser amostrados. Esse número pode ser calculado pela equação 1:</p><p>N = √A (1)</p><p>Onde:</p><p>N: é o número mínimo de locais de amostragem (precisa ser arredondado</p><p>para um número inteiro);</p><p>A: é a área da sala limpa em m2.</p><p>Várias técnicas de amostragem conseguem ser aproveitadas para o moni-</p><p>toramento ambiental, sendo que as mais usadas são as de controle de ar e de</p><p>superfícies. A fim de analisar superfícies, uma das abordagens mais comuns é</p><p>a de suabe (Swab), que se caracteriza pela amostragem de uma área conhecida</p><p>de uma superfície qualquer. É importante destacar que, caso a amostra seja</p><p>coletada após a higienização, necessita ser utilizado um meio com neutrali-</p><p>zante, para que o desinfetante não interfira no resultado da análise, contri-</p><p>buindo para diminuição dos microrganismos potencialmente presentes. Uma</p><p>alternativa aos suabes são as placas de contato (Rodac), essas placas são pra-</p><p>ticamente iguais às placas de Petri, exceto pelo ágar que se sobressai na placa,</p><p>ou seja, após a abertura da placa, é possível perceber que o ágar se desloca</p><p>para fora da base, então, basta encostar na superfície desejada para realizar</p><p>a amostragem (processo semelhante à utilização de um carimbo); assim, não</p><p>é necessário usar o suabe, pois a amostra já estará em contato com o meio de</p><p>cultura – sendo preciso apenas fechar a placa e incubar em estufa.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 40</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 40 18/01/2021 11:41:53</p><p>Para a amostragem de ar, pode-se usar a abordagem passiva ou ativa. A</p><p>técnica de sedimentação (amostragem passiva) se baseia em expor as placas</p><p>de Petri (com o meio de cultura escolhido) ao ar pelo tempo de até quatro ho-</p><p>ras (EUDRALEX, 2008). Na amostragem ativa ou impressão em placa, contudo,</p><p>há necessidade de um equipamento (Figura 6) que captura o ar do ambiente,</p><p>colocando sobre o ágar da placa de Petri todas as partículas capturadas (inclu-</p><p>sive, os microrganismos); dessa forma, a quantidade de ar que foi amostrada é</p><p>conhecida, o que torna o ensaio reprodutível.</p><p>Figura 6. Equipamento de monitoramento da qualidade do ar. A placa de Petri contendo o meio de cultura desejado é colo-</p><p>cada dentro do equipamento, que capturará o ar, além de “imprimi-lo” no ágar. Fonte: Shutterstock. Acesso em: 14/09/2020.</p><p>Contaminação microbiana</p><p>A qualidade microbiológica das matérias-primas é capaz de afetar profun-</p><p>damente a qualidade dos produtos acabados. Assim, para alcançar a qualidade</p><p>desejada do produto acabado, as matérias-primas têm que ser monitoradas e</p><p>controladas. Devem ser realizados testes nas matérias-primas que precisam</p><p>atender às especifi cações apropriadas; algumas vezes, o tratamento é neces-</p><p>sário para atingir esses níveis de qualidade adequados.</p><p>CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO 41</p><p>SER_FARMA_CQM_UNID1.indd 41 18/01/2021 11:42:03</p><p>O controle microbiológico de matérias-primas farmacêuticas visa excluir</p><p>qualquer microrganismo que possa resultar em deterioração do produto ou</p><p>prejudicar o paciente. Além disso,</p>