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DNA e RNA: Composição e Estrutura Prof. Eldo Campos Os assuntos abordados na aula : • Visão Geral • Propriedades do RNA • Classes de RNA • RNA Funcionais • Mundo de RNA RNA? •RNA: ácido ribonucléico; Experimento de Pulso-Caça Propriedades do RNA 1 - É geralmente uma cadeia de nucleotídeos unifilamentares Propriedades do RNA A molécula de fita simples de RNA é versátil podendo formar estruturas secundárias e terciárias. Propriedades do RNA Estrutura terciária do tRNA. Dobra terciária da estrutura em trevo do tRNAPhe. Pontes de hidrogênio são i n d i c a d a s p o r l i n h a s cruzadas. Propriedades do RNA • Elementos comuns de estrutura secundária em RNA fita simples fita dupla Saliência de um único ribonucleotíd eo Saliência três ribonucleotíd eo alça em grampo-de- cabelo alça interna simétrica alça interna assimétrica junção de duas hastes ou monte coaxial junção de três hastes junção de quatro hastes Propriedades do RNA • Elementos comuns de estrutura terciária em RNA pseudonó grampos reunidos contato entre alça e grampo Propriedades do RNA 2 - No RNA o açúcar é a RIBOSE Propriedades do RNA 3 - O RNA contém a base URACILA (U) no lugar da timina (T) URACILA (U) TIMINA (T) Componentes dos ribonucleotídeos Bases púricas Adenina Guanina Bases pirimídicas Citosina Uracil Classes de RNA • RNA mensageiro • RNAs funcionais RNA mensageiro RNA Funcionais 1 – RNA transportador: são moléculas responsáveis por levar o aminoácido correto para o mRNA no processo de tradução 2 – RNA ribossômico: são os principais componentes dos r ibossomos, que são grandes máquinas macromoleculares que guiam a montagem da cadeia de aminoácidos pelo mRNA e tRNA RNA Funcionais 3 - Pequenos RNA nucleares (snRNA) Pequenos RNA nucleares (snRNA) 4 - Auto – recomposição de Íntrons 5 - RIBOZIMAS Muitos dos RNAs funcionais possuem atividade catalítica sendo denominados RNA enzimas ou Ribozimas Seleção in vitro de ribozimas sintéticas grande conjunto de moléculas de RNA de dupla simples, cada uma com uma seqüência de nucleotídeos diferentes geradas aleatoriamente TRANSCRIÇÃO PELA RNA POLIMERASE E DOBRAMENTO DAS MOLÉCULAS DE RNA ADP γSATP ADIÇÃO DE UM DERIVADO DE ATP somente as raras moléculas capazes de autofosforilação incorporam enxofre CAPTURA DAS RIBOZIMAS POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE PARA ENXOFRE ELUIÇÃO DAS MOLÉCULAS LIGADAS descarte Molécula rara de RNA com atividade kinase grande conjunto de moléculas de DNA de dupla fita, cada um com uma seqüência de nucleotídeos diferente gerado aleatoriamente Seleção in vitro de ribozimas sintéticas grande conjunto de moléculas de DNA de dupla fita, cada um com uma seqüência de nucleotídeos diferente gerado aleatoriamente grande conjunto de moléculas de RNA, cada uma com uma seqüência de nucleotídeos diferente, são gerados aleatoriamente TRANSCRIÇÃO PELA RNA POLIMERASE E DOBRAMENTO DAS MOLÉCULAS DE RNA ADP γSATP ADIÇÃO DE UM DERIVADO DE ATP somente as raras moléculas capazes de autofosforilação incorporam enxofre CAPTURA DAS RIBOZIMAS POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE PARA ENXOFRE ELUIÇÃO DAS MOLÉCULAS LIGADAS descarte Molécula rara de RNA com atividade kinase Seleção in vitro de ribozimas sintéticas TRANSCRIÇÃO PELA RNA POLIMERASE E DOBRAMENTO DAS MOLÉCULAS DE RNA ADP γSATP ADIÇÃO DE UM DERIVADO DE ATP somente as raras moléculas capazes de autofosforilação incorporam enxofre CAPTURA DAS RIBOZIMAS POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE PARA ENXOFRE ELUIÇÃO DAS MOLÉCULAS LIGADAS descarte Molécula rara de RNA com atividade kinase grande conjunto de moléculas de DNA de dupla fita, cada um com uma seqüência de nucleotídeos diferente gerado aleatoriamente grande conjunto de moléculas de RNA, cada uma com uma seqüência de nucleotídeos diferente, são gerados aleatoriamente Seleção in vitro de ribozimas sintéticas TRANSCRIÇÃO PELA RNA POLIMERASE E DOBRAMENTO DAS MOLÉCULAS DE RNA ADP γSATP somente as raras moléculas capazes de autofosforilação incorporam enxofre CAPTURA DAS RIBOZIMAS POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE PARA ENXOFRE ELUIÇÃO DAS MOLÉCULAS LIGADAS descarte Molécula rara de RNA com atividade kinase grande conjunto de moléculas de DNA de dupla fita, cada um com uma seqüência de nucleotídeos diferente gerado aleatoriamente grande conjunto de moléculas de RNA, cada uma com uma seqüência de nucleotídeos diferente, são gerados aleatoriamente ADIÇÃO DE UM DERIVADO DE ATP somente as raras moléculas capazes de autofosforilação incorporam enxofre A atividade das ribozimas depende a conformação estrutural RNA função de Clivagem função de ligase 5 - RNA de interferência (RNAi) Para Pensar Quais são os papeis vitais desempenhados pela via de RNAi em condições naturais? O mundo do RNA O mundo do RNA DNA Replicação Transcrição Proteínas Tradução RNA • Como seria a teoria de evolução a partir do dogma central clássico? O MUNDO DO RNA Na teoria do Mundo do RNA “RNA WORLD” as ribozimas (moléculas de RNA) serviriam para catálise enzimática e também para auto replicação (Walter Gilbert. Nature 319:618-618, 1986). O ATP é um ribonucleotídeo Evidências para o mundo de RNA O NAD tem, como parte da cadeia, um ribonucleotídeo Evidências para o mundo de RNA O FAD tem, como parte da cadeia, um ribonucleotídeo Evidências para o mundo de RNA A coenzima A tem, como parte da cadeia, um ribonucleotídeo Evidências para o mundo de RNA O sítio ativo do ribossomo constitui-se de RNA Evidências para o mundo de RNA A telomerase é uma transcriptase reversa que usa RNA como molde Evidências para o mundo de RNA O MUNDO DO RNA O MUNDO DO RNA
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