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INTRODUÇÃO
Lambert (1870) observou a relação entre a transmissão de luz e a espessura da camada do meio absorvente. Quando um feixe de luz monocromática atravessava um meio transparente homogêneo, cada camada deste meio absorvia igual à fração de luz que atravessava, independentemente da intensidade da luz que incidia. A partir desta conclusão foi enunciada a seguinte lei: “A intensidade da luz emitida decresce exponencialmente à medida que a espessura do meio absorvente aumenta aritmeticamente”. 
Beer em 1852 observou a relação existente entre a transmissão e a concentração do meio onde passa o feixe de Luz. Uma certa solução absorve a Luz proporcionalmente à concentração molecular do soluto que nela encontra; enunciada então a seguinte lei: “A intensidade de um feixe de luz monocromático decresce exponencialmente à medida que a concentração da substância absorvente aumenta aritmeticamente ". As leis de Lambert-Beer são o fundamento da espectrofotometria. Elas são tratadas simultaneamente, processo no qual a quantidade de luz absorvida ou transmitida por uma determinada solução depende da concentração do soluto e da espessura da solução.
A espectrofotometria, medida de absorção ou transmissão de luz, é uma das mais valiosas técnicas analíticas amplamente utilizadas em laboratórios de área básica, bem como em análises clínicas. Por meio da espectrofotometria, componentes desconhecidos de uma solução podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho. A curva de calibração corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância (A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.
PROBLEMA
Realizar os procedimentos necessários para quantificar sua concentração pelo método enzimático da Glicose Oxidase.
Para essa determinação é necessário:
Conhecer o cumprimento de onda onde o método enzimático da glicose oxidase apresenta sua máxima absorção (espectro de absorção).
Realizar uma curva de calibração.
Determinar a concentração da solução problema.
MATERIAIS E MÉTODOS
Tubo de ensaio.
Pipeta automática.
Reagente de cor.
Espectrofotômetro.
Água.
Branco (Reagente de glicose).
Inicialmente foi utilizado o Branco para regular o Autozero do aparelho e, em seguida adicionados 10µl de glicose para o tubo de ensaio, e mais 1 ml de água, o qual foram misturados e incubados por 10 minutos. Na tabela a seguir demostrando os valores obtidos a cada cumprimento de onda.
Tabela 01- Cumprimento de onda e Transmitância.
	λ (nM)
	Transmitância T(%)
	Absorbância D.O ou Abs.
	450
	67.4
	0,172
	500
	47.6
	0,322
	550
	59.3
	0,227
	600
	65.1
	0,070
Logo depois foram feitos os cálculos para a preparação da solução padrão da solução stock de glicose com concentrações de 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 1000 mg/dl. 
RESULTADO E DISCUSSÃO
O cumprimento de onda ideal foi obtido através das analises de cumprimentos de onda no espectrofotômetro, onde houve maior absorbância de 0,322 no seu resultado. Pode-se determinar a concentração da substância em amostras com base numa curva de calibração, que relaciona absorbância e concentração. A Tabela 02 sendo nosso modelo de analise e comparação para os valores obtidos. A tabela 03 com alguns de seus valores acima do esperado na tabela 02. No entanto, durante a realização do procedimento para determinação da curva de calibração a tabela 04 do grupo II não obteve precisão em seus resultados, com valores de absorbância muito acima do esperado. 
Tabela 02- Absorbância e concentração (Eduardo)
	TUBO (N°)
	ÁGUA (l)
	Solução Stock (µl)
	Concentração (mg/dl)
	Absorbância ou D.O
	1
	95
	5
	50
	0,140
	2
	90
	10
	100
	0,328
	3
	85
	15
	150
	0,485
	4
	80
	20
	200
	0,643
	5
	60
	40
	400
	1,151
	6
	50
	50
	500
	-
	7
	40
	60
	600
	1,750
	8
	30
	70
	700
	-
	9
	20
	80
	800
	2,312
	10
	0
	100
	1000
	2,350
Tabela 03- Absorbância e Concentração (Grupo I)
	TUBO (N°)
	ÁGUA (l)
	Solução Stock (µl)
	Concentração (mg/dl)
	Absorbância ou D.O
	1
	95
	5
	50
	0,161
	2
	90
	10
	100
	0,461
	3
	85
	15
	150
	0,495
	4
	80
	20
	200
	0,651
	5
	60
	40
	400
	0,696
	6
	50
	50
	500
	-
	7
	40
	60
	600
	1,723
	8
	30
	70
	700
	-
	9
	20
	80
	800
	2,295
	10
	0
	100
	1000
	2,996
Tabela 04- Absorbância e Concentração (Grupo II)
	TUBO (N°)
	ÁGUA (l)
	Solução Stock (µl)
	Concentração (mg/dl)
	Absorbância ou D.O
	1
	95
	5
	50
	0,167
	2
	90
	10
	100
	0,453
	3
	85
	15
	150
	0,857
	4
	80
	20
	200
	0,848
	5
	60
	40
	400
	0,653
	6
	50
	50
	500
	0,380
	7
	40
	60
	600
	-
	8
	30
	70
	700
	2,289
	9
	20
	80
	800
	-
	10
	0
	100
	1000
	1,730
A partir desses dados pôde-se construir as curvas de calibração, porém os seus valores de referência que determinaria o limite de linearidade não estão de acordo.
CONCLUSÃO
Através da analise dos resultados obtidos na tabela 01, observamos que o cumprimento de onda ideal é o de 500nM, onde obteve-se a maior absorbância. Num segundo momento onde foram feitos os cálculos da solução stock para determinar a curva de calibração, os resultados obtidos não foram satisfatórios, devido a erros cometidos durante a realização do experimento. Foi percebido tão fato, e ao ser realizado a determinação da solução problema obtivemos o seguinte valor 0,276 de absorbância e 53% de transmitância.