Provas Bioquimicas bactérias

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Hidratos de Carbono 
 
 Provas 
Fermentativas 
Actividade da ββββ-
galactosidase 
(P. ONPG) 
P. de Kligler Iron Agar ou 
de Triple Sugar Iron Agar 
Hidrólise do 
amido 
Objectivo Identificar microrg. anaeróios facultativos. 
Fermentação – r. bioquímica 
produtora de energiua, em q as 
moléculas orgânicas são 
aceitadores finais de e-. 
Hidrato de 
carbono→Comp.Org. ácido + 
H2O/CO2 
Identifica microrg. q podem 
usar a lactose c/o fonte de 
carbono 
Identificar ≠s géneros de 
Enterobacteriaceae e p/ distinguir esta 
família de outros Bacilos Gram -. 
Avalia fermentação de hidratos de 
carbono e produçãoi de H2S. 
Amido = amilose + 
amilopectina, por 
hidrólise forma 
dextrinas, glicose e 
maltose 
Enzima - β-galactosidase + enzima de 
transporte p/ interior 
- α-amilase 
Meio 
utilizado 
Meio líquido c/ nutrientes 
Hidrato de carbono específico 
Indicador de pH 
Tubo de Durham – detectar 
produção de gás. 
Meio c/ água destilada 
Lactose 
ONPG 
- 
Reagente 
ou 
Indicador 
Vermelho de Fenol 
Púrpura de Bromocresol 
ONPG – o-nitrofenil-β-D-
galactopiranosídeo, c/o 
substracto p/ a enzima 
(incolor) 
Iodo (complexo azula 
qd contacto c/ o amido) 
R. 
Positiva 
Rosa/Amarelo e produção de 
gás 
Fermentação alcoólica – 
produção de gás, s/ mudança 
de cor 
ONPG (hidrólise)→ o-
nitrofenol – Amarelo, em meio 
alcalino 
Iodo+ meio 
c/amido+crescimento 
bacteriano → zona 
clara 
R. 
Negativa 
S/ mudança de cor 
S/ produção de gás. 
Incolor 
TSI: [glicose]= 1%, [lactose] >1%, 
vermelho de fenol (presença de ácidos), 
tiossulfato de NA (substrato p/ formar 
H2S), sulfato de Fe (detectar H2S). 
Kligler: igual ao TSI + [sacarose]> 1%. 
(meio em rampa) 
Cilindro amarelo (ácido) e Rampa 
vermelha (Base) - Glicose fermentada; 
Cilindro amarelo (ácido) e rampa Amarela 
(ácida) – fermentação da lactose/sacarose 
e glicose. 
Cilindro vermelho (base) e rampa amarela 
(ácida) – não fermentou os hidratos de 
carbono; 
Produção de gás – fracturas no meio de 
cultura; 
Produção de H2S – enegrecimento (o H2S 
liga-se ao Ferro originando sulfureto de 
ferro q precipita. 
Iodo+ meio 
c/amido+crescimento 
bacteriano → 
permanece azul. 
 
Proteínas, Aminoácidos e enzimas 
 
 P. do Sulfureto de 
Hidrogénio 
Hidrólise da Gelatina Hidrólise da Caseína 
Objectivo Capacidade de produção de H2S 
a partir de a.a. sulfurados ou 
compostos sulfurados 
inorgânicos. 
Capacidade do microrg. excretar uma 
enzima capaz de degradar a gelatina. 
Esta resulta da degradação do colagénio. 
Usada p/ diferenciar microrg e p/ 
determinar a sua patogenicidade. 
Capacidade do microrg. excretar uma 
enzima capaz de degradar a caseína. 
Esta é a prot. Mais importante do leite 
Enzima Cisteína dessulfarase Tiossulfato reductase 
Gelatinase Protease 
Meio utilizado Agar SIM (q tem cisteína), c/ Tissulfato de sódio (substrato 
sulfurado). 
(é um meio semi-sóliodo, q permite 
avaliar a mobilidade e a produção de 
indol) 
Inoculação p/ picada em meio nutritivo em 
tubo, c/ 12% de gelatina. 
Incubação 37ºC durante 24-48 h; 4ºC 
durante 30min ou em gelo durante 3-5min. 
Agar Milk – agar nutritivo suplementado 
c/ leite, um meio opaco. 
Reagente ou 
Indicador 
Sulfato ferroso amoniacal 
(Fe(NH4)2SO4) – indicador da 
presença de H2S. 
- - 
R. Positiva Precipitado negro insolúvel (o H2S-incolor- ao combinar-se c/ o 
Fe precipita. 
Gelatinase + – meio líquido após 
refrigeração 
Perda da opacidade, devido á hidrólise e 
formação de a.a. solúveis e n coloidais. 
R. Negativa S/ alteração. Gelatinase - – meio resolidifica Manutenção da opacidade do meio. 
 
 
Provas IMViC ( Indole, Methyl-red, Voges-Proskauer,Citrate) 
 
 P. Indol P. do Vermelho 
de Metilo 
P. de Voges-
Proskauers 
 P. do Citrato 
Objectivo Capacidade de degradar o a.a. 
triptofano 
Oxidação da glicose e 
manutenção de 
concentrações elevadas de 
produtos finais ácidos. 
Capacidade de produção de 
produtos finais n ácidos, ex. 
acetilmetilcarbinol (acetoína) 
Capacidade de usar o citrato 
como única fonte de carbono 
Enzima Triptofanase (marcador 
bioquímico) 
- - Citrato Permease (transporte do 
citrato para o interior do micror.) 
Citrase 
(citrato → ác. Oxaloacético + 
acetato → ác. Pirúvico + CO2) 
Meio utilizado Meio c/ triptofano, ex. Água 
Peptonada 
MR-VP (methyl-red, 
proskauers) 
MR-VP Meio Citrato ou de Simmons 
(tubo em rampa)* 
Reagente ou 
Indicador 
R. de Kovac’s coloca-se nas 
paredes do tubo para n se 
misturar c/ o meio. 
Indicador vermelho de 
metilo (pto de viragem a 
pH=4, p/ vermelho) 
R.de Barritt’s (40% KOH e 
sol de α-aftol em etanol abs) 
Indicador Azul de Bomotimol 
R. Positiva Anel vermelho na superfície Vermelho (pH< 4) Rosa/Vermelho (dps de 
15min) 
Crescimento na rampa + cor azul 
R. Negativa Amarelo Amarelo (pH >4) Ausência de cor (ex. 
Enterococcus) 
Ausência de Crescimento + cor 
verde 
* meio em rampa, pq o O2 é necessário p/ utilização do citrato. Qd este é utilizado o micror. produz CO2, q se combina c/ o Na, formando 
carbonato de sódio, o q faz aumentar o pH e virar o indicador p/ azul. 
 
 
 
 
*A cultura não muda de cor: o microrg pode ter enzimas q reduzem os nitritos a azoto ou amónia e a reacção dá negativa, ou então os nitratos n 
foram reduzidos. Assim, adiciona-se ao meio zinco, que reduz os nitratos e muda o meio p/ vermelho, logo se não ocorreu redução o meio torna-
se vermelho c/ o Zn (reacção negativa), porém se os nitritos forma reduzidos, a adição de Zn n altera o meio e considera-se reacção positiva. 
 
 Descarboxilação da Lisina Desaminação da 
Fenilalanina 
Redução de Nitratos 
Objectivo Remoção do grupo carboxilo de 1 
molécula org. e utilização destas aminas 
p/ síntese de outras moléculas ; reacção 
favorecida em meio ácido e anaeróbio, pq 
na remoção do grupo ácido aumentam o 
pH do meio. 
 
Remoção do grupo amina da 
fenilalanina, c/ produção de 
ác.orgânicos (q podem ser 
usados em reacções de síntese), 
água e NH4+. 
Distinguir bactérias q 
desaminam a fenilalanina c/ 
produção de ác. fenilpirúvico 
Ocorre na ausência de O2. 
Os microrg. usam os nitratos (NO3-) ou os 
sulfatos (SO42-) p fornecer O2 e funcionar 
c/o aceitadores finais de e-, na formação de 
energia: os nitratos são reduzidos a nitritos 
(NO2-). Alguns ainda podem actuar nos 
nitritos c/ produção de NH4+ ou N2. 
Enzima Descarboxilase da lisina Desaminase da fenilalanina 
Meio utilizado Lisina + Glicose+ Iindicador+ Óleo 
mineral (p/ impedir q o O2 atinja as 
bactérias) 
- Caldos de nitratos: 
0,5% de Nitrato de potássio 
0,1% de Agar (impede a difusão de O2-
ambiente anaeróbio) 
Reagente ou 
Indicador 
Púrpura de Bromocresol Cloreto de Ferro Solução A – ác. Sulanílico 
Solução B – α-naftilamina 
R. Positiva 1º) Fermentação da glicose – meio ácido: 
Púrpura→Amarelo, 
2º) Activa enzimas – pH sobe: 
Amarelo→Púrpura. 
Composto verde (cloreto de ferro 
+ ác.fenilpirúvico) 
R. Negativa N há mudança de cor N há mudança de cor. 
Vermelho – Reacção + 
Ausência de mudança de cor -2 hipóteses 
*: 
1º) nitratos-nitritos- azoto ou amónia: 
adicionar Zn – n ocorre mudança – 
Reacção + 
2º) adicionar Zn – vermelho – Reação - 
 
 
 
 Prova da Urease Prova da 
Oxidase 
Prova da Catálase Prova da Coagulase 
Objectivo Capacidade de degradar a 
ureia. 
Identificar espécies de Proteus 
relativamente a bact entéricas 
lactose negativas. 
Identificar microrg c/ base 
na actividade da enzimas 
citocromo oxidase. 
Identifica bact aeróbias, 
anaeróbias facultativas e 
microaerófilas. 
Distinguir gruposde 
Bacilos Gram negativo 
patogénicos. 
Avaliar a degradação do 
peróxido de hidrogénio, q 
leva à morte das células. 
Microrg aeróbios, anaeróbios 
facultativos ou 
microaerófilos, que usam o 
oxigénio c/o aceitador final 
de electrões. 
Capacidade de coagulação do 
plasma sanguíneo. 
Distinguir espécies patogénicas 
de Staphylococcus de espécie n 
patogénicas. É um bom 
indicador da patogenicidade do 
S. Aureus. 
Enzima Urease Citocromo oxidase: O2, p/ 
redução, forma H2O e 
citocromo oxidado. 
Catálase: H2O2/O2-→ H2O + 
O2 
Coagulase 
Meio utilizado Meio de Ureia de Christensen. - Meio em rampa c/ H2O2. Plasma + anticoagulante ( 
oxalato, citrato ou heparina) 
Reagente ou 
Indicador 
Indicador Vermelho de Fenol 
(amarelo). 
Reagente das oxídases ( 
dihidrocloreto de tetrametil 
p-fenilenodiamina) 
- - 
R. Positiva Rosa (ureia origina amónia q é 
alcalina). 
Rosa →Castanho→Negro 
(na superfície das colónias) 
Libertação de bolhas de gás. Coágulo ( 2/6/24 h dps) 
R. Negativa Amarelo. S/ mudança de cor ou rosa ligeiro. 
Ausência de bolhas de gás. 
Nos microrg catálse -, a 
enzima q degrada o 
superóxido é a superóxido 
dismutase. 
N forma coágulo.