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Breve Tutorial - software ImageJ SUZANE S,M. CALCULAR ÁREA CELULAR Calibre a régua traçando uma reta (horizontal) entre duas linhas (vertical). Lembrando que a distância entre duas linhas grandes é 50 µm e duas linhas pequenas é 10 µm . Clique em SET SCALE para continuar a calibração Ao abrir a janela SET SCALE finalize a calibração da régua inserindo os dados que se pede. Lembrando que a Regra precisa está no mesmo aumento em que foram obtidas as imagens. (ou seja, lente objetiva de 40X e assim por diante) Coloque a distância conhecida em KNOWN DISTANCE e a unidade que você trabalhando em UNIT OF LENGTH (micrometros). Clique em GLOBAL para padronizar as unidades para as demais imagens e depois OK. Depois de calibrar o software, selecione imagem que você irá trabalhar clicando em OPEN. Clique no ícone (seta preta) para contornar a célula. Depois de contornar a célula clique em ANALYZE – MEASURE, e mensure a área celular. CALCULAR DENSIDADE NUCLEAR E/OU CELULAR Calibre a régua traçando uma reta (horizontal) entre duas linhas (vertical). Lembrando que a distância entre duas linhas maiores é 50 µm e duas linhas menores é 10 µm . Clique em SET SCALE para continuar a calibração Ao abrir a janela SET SCALE finalize a calibração da régua inserindo os dados que se pede. Lembrando que a Régua precisa estar no mesmo aumento em que foram obtidas as imagens. (ou seja, lente objetiva de 40X – régua de 40X, e assim por diante) Coloque a distância conhecida em KNOWN DISTANCE e a unidade que você trabalhando em UNIT OF LENGTH (micrometros). Clique em GLOBAL para padronizar as unidades para as demais imagens e depois OK. Depois de calibrar o software, selecione a imagem que você irá trabalhar clicando em OPEN. Clique no ícone (seta preta) para contornar a célula. Depois de contornar a célula clique em ANALYZE – MEASURE, e mensure a área celular. Ajuste o software para “colorir” as células ou núcleos clicando em IMAGE – ADJUST – COLOR THRESHOLD 3º ajuste o software para “colorir” as células ou núcleos Calibre a Saturação (SATURATION) indicado pela seta. Mexa na primeira ou na segunda barra de modo que somente as células da imagem estejam coloridas. (como mostra o exemplo) 3º ajuste o software para “colorir” as células ou núcleos Analise as partículas mensurando sua área clicando em ANALYZE - ANALYZE PARTICLES 3º ajuste o software para “colorir” as células ou núcleos Calibre a Análise em SIZE (PIXEL^2) colocando o valor mínimo e máximo conforme a primeira mensuração de células encontradas na imagem. Ative o DISPLAY RESULTS. Clique em OK para calcular. Valores representativos Organize seus dados e faça Um bom trabalho!!!!!
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