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Bactérias Fitopatogênicas Universidade Federal de Goiás Escola de Agronomia Disciplina: Fitopatologia I 2014 Bactérias são procariontes Procariontes: organismos unicelulares e microscópicos que não possuem núcleo organizado O tamanho das bactérias geralmente varia de 0,5 a 5 μm Só podem ser vistas com microscópio Sem microscópio é possível ver as colônias CARACTERISTICAS DIMENSÕES •Bactéria é um organismo unicelular, procarionte, que pode ser encontrado na forma isolada ou em colônias e pertencentes aos domínios Bacteria e Archaea. •Microrganismo constituído por uma célula sem envoltório nuclear e nucleóide. Diferenças entre procariotos e eucariotos Reino Procaryotae Bacteria Divisão Gracilicutes (Gram negativa) Classe Proteobacteria Família Enterobacteria Pseudomonadaceae Rhizobiaceae Divisão Firmicutes (Gram positiva) Classe Firmibacteria Thallobacteria Mollicutes (membrana celular e ausência de parede) Divisão Tenericutes Classe Mollicutes Família Spiroplasmataceae (ainda desconhecida) Agrios (2004) Formas das células bacterianas BACTÉRIAS: MORFOLOGIA Estreptococos Bacilos Cocos Espiroquetas Vibrião Formas e arranjos das células bacterianas Formas e arranjos das células bacterianas Estrutura da Célula Bacteriana Estrutura Flagelo - Motilidade • 15.000 rpm • Deslocamento até 50 µm/s - Quimiotaxia • Atração • Repelência Importância na sistemática Difícil visualização Flagelo: Estruturas alongadas, delgadas, sinuosa e natureza protéica (Flagelina) Ondulatório e Helicoidal Tipos de flagelos Monotríquia Lofotríquia Xanthomonas spp. Burkolderia spp. Tipos de flagelos Peritríquia Atríquia – Clavibacter spp. Erwinia spp. Pilus (Pili) e Fímbrias • Não tem função de mobilidade → recombinação bacteriana – pili • Aderência ao hospedeiro (Fímbrias) • Variabilidade (pili) -conjugação -transdução Pilus de conjugação Cápsula Cobertura viscosa de natureza polissacarídica (Exopolissacarídeo {EPS}– mais externo a capsula) • Aderência • Proteção contra dessecamento • Patogenicidade (algumas bactérias) • Toxina • Virulência • Não essencial a vida Parede celular • Envoltório rígido (20% do peso da célula) – Pressão de 2 atm • Principal componente: peptídeo-glicano • Estrutura e composição diferente : • Gram + (Menor permeabilidade – solúvel ) {Sem fio} – Uma camada de PC • Gram – (Maior permeabilidade - insolúvel) {Fio} – Pelo menos duas camadas de PC Membrana citoplasmática • Permeabilidade seletiva – entra ou sai • Síntese da parede celular • Geração de energia (mesossomas - invaginações) • Transporte ativo de proteínas • Rotação flagelar • Replicação do cromossomo (divisão celular) Citoplasma • Nucleóide: material genético DNA (cromossomo circular – 1mm) • Plasmídeos: anéis de DNA com 1 ou 2 genes • Ribossomos – síntese de proteínas Plasmídeos Pequenos fios de DNA Idênticos em estrutura ao cromossomo da bactéria, diferindo em: Tamanho Essencialidade Tipos de genes Podem ser perdidos ou transferidos Genes em plasmídeos • Auto-replicação • Auto-transferência • Resistência a antibióticos • Resistência a metais pesados • Produção de alguns pigmentos • Síntese de algumas toxinas Responsável pela resistência da bactéria em ambientes desfavoráveis; Resistência ao calor e ao dessecamento; Endósporo Célula de repouso Sobrevivência (Gram +) Bacillus e Clostridium Reprodução Variabilidade Genética Mutação Transferência de genes Transformação Transdução Conjugação Mecanismos de variabilidade: Mecanismos de variabilidade: 1) Conjugação – transferência direta de genes de uma célula bacteriana para outra, utilizando plasmídeos de conjugação. Pili de conjugação 2) Transdução Transferência de fragmentos de DNA de uma bactéria a outra por intermédio de bacteriófagos (fagos – vírus que infectam bactérias) TRANSDUÇÃO Fago Integração Profago DNA do fago com genes da bactéria O fago infecta nova bactéria. Genes de outra bactéria são introduzidos e integrados ao DNA da bactéria hospedeira. Causa a morte da bactéria 3) Transformação Incorpora fragmentos de DNA livres no ambiente Pouca frequência na natureza Muito usado em engenharia genética MORTE LISE CÉLULA BACTERIANA FRAGMENTOS DE DNA ADSORÇÃO PENETRAÇÃO INSERÇÃO Consequência da variabilidade • Alteração na composição do DNA • Surgimento de população morfologicamente idênticas porém com habilidade patogênica distinta: - Biovar – fisiologicamente e / ou bioquimicamente especiais - Patovar – habilidade patogênica Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli Xanthomonas axonopodis pv. citri Crescimento bacteriano – exponencial Consequências de um crescimento exponencial 1 célula com tempo de geração de 30 minutos; Depois de 72 h de crescimento exponencial: 2114 células ou 22 x 1042 células Uma célula pesa 10-12 gramas – peso total da cultura de 22 x 1030 gramas ou 22 x 1024 toneladas Massa maior que a massa da Terra E D C B A Fase Exponencial ou Logarítmica Fase de Morte ou Declínio Fase Estacionária Fase Lag ou de Adaptação Curva de Crescimento de Uma População Bacteriana - Lag fase: pequena população bacteriana. - Fase logaritmica ou exponencial: multiplicação em velocidade máxima. - Fase estacionária: número de células viáveis cte. - Fase morte: número células mortas maior que se dividem. Classificação bacteriana Procariotas fitopatogênicos - Fastidiosas – meio de desenvolvimento mais rico em nutrientes – feixe vascular - Não fastidiosos: menor exigência nutricional Crescimento em meio de cultura de rotina (fastidiosas) - Meio NA (Nutriente-Ágar) - Meio 523 (Kado & Heskel, 1970) Não fastidiosas Pseudomonas sp. Xanthomonas sp. Técnica da risca → obtenção de uma colônia de bactéria Morfologia das colônias circular enrolado inteiro Forma da colônia borda Elevação Ondulado levantada Plano Convexo Bactérias fastidiosas • Xilema → Xylella (Gram -) • Floema → Liberibacter (Gram -) e Spiroplasma (Gram +) Métodos para identificação 1) Teste da exsudação em folha 2) Teste da exsudação em haste 3) Coloração de Gram Resultado da coloração de Gram Staphylococcus sp. (Gram +) Pseudomonas aeruginosa (Gram -) 4) Diferenciação de Gram no teste de solubilidade em KOH – hidróxido de potássio (alternativo) -Gram - → insolúvel - fio -Gram + → solúvel – sem fio 5) Catalase (peróxido de hidrogênio) 6) Teste da Oxidase (fitas de oxidase) Determina se a bactéria é - aeróbia obrigatória (+) ou- anaeróbia facultativa (-) Ex.: Erwinia (-) e Agrobacterium (+) 7) Teste da urease