Gênero Mycobacterium

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Fernando Figueredo
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Ácido-resistência
Presença de ácidos micólicos
Ácido-resistência
Crescimento lento
Resistência à descoloração
Resistência a ATBs comuns
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Ziehl-Neelsen
carbolfuccina
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Devido ao alto conteúdo de lipídios, a parede celular das micobactérias possui a singular capacidade de fixar o corante fucsina (carbolfucsina) de tal modo que não sofre descoloração pelo álcool-ácido.
São necesários 104 BAAR/mL para que sejam detectados microscopicamente. 
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A propriedade de ácido-álcool resistência é devida à camada cérea que envolve as micobactérias;
Para que a carbolfucsina aquosa (corante) penetre através das ceras, a camada deve ser “amaciada”  calor;
O corante que penetra através da camada amaciada se fixa na parede celular.
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Procedimento:
1) Cobrir o esfregaço, seco e fixado pelo calor com 5 a 7 gotas do corante carbolfuscina;
2) Aquecer a lâmina até emissão do vapor, mas sem deixar secar;
3) Lavar a lâmina em água suavemente;
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Procedimento:
4) Descorar com álcool-ácido até que não apareça mais o corante no lavado (2 min);
5) Realizar coloração de contraste com azul-de-metileno (1 min);
6) Enxaguar, escorrer e secar ao ar;
7) Obs em objetiva 100x com imersão em óleo.
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Fixação
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Carbolfucsina
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Aquecer Até emissão contínua de vapores
Não ferver!
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Lavar com água
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Descorar com Álcool-ácido
Até descorar totalmente
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Descoloração insuficiente
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Descoloração ideal
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Lavar com água
 Retirar o excesso
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Azul de metileno – 1 minuto
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Lavar com água
Secar 
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Reportando o Resultado Positivo
De 1 a 2 BAAR/300 campos  Nova lâmina
De 1 a 9 BAAR/100 campos  +
DE 1 a 9 BAAR/ 10 campo  ++
De 1 a 9 BAAR/ campo  +++
> de 9 BAAR/campo  ++++
Reportando o Resultado Negativo
Não foram visualizados BAAR na amostra analisada.
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Resultados:
BAAR = VERMELHAS
BNAAR = AZUL
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Ziehl-Neelsen
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Sensível e específica (detecta 10 a 100 bacilos na amostra)
Indicações
Todo paciente com suspeita de infecção
Formas extrapulmonares
Suspeita de resistência
Confirmação de casos com baciloscopia persistentemente negativas
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Meios de cultura
Löwenstein-Jensen – gema de ovo, albumina, corantes
Descontaminação
Método de Petrof NaOH 4%
Método n-acetil l-cisteína + NaOH 2%
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Culture on Lowenstein-Jensen medium revealed typical dry, heaped-up yellow to buff-colored colonies of Mycobacterium tuberculosis.
CULTURA
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Falência de tratamento
Retratamento
Contactantes de casos de resistência ao tratamento
Técnicas
Concentrações absolutas: 
CIM de cada droga
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Sintomas
Perda de peso
Febre baixa
Sudorese noturna
Fadiga
Anorexia
Tosse produtiva (pulmonar)
Formas clínicas
Pulmonar
Pleuropulmonar
Ganglionar
Urogenital
Meningoencefálica
Óssea
Miliar, etc.
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Teste Tuberculínico – “PPD” – Intradermo-reação para Tuberculose – Reação de Mantoux
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Teste de Mitsuda – reação à lepromina
Reação Intradérmica de Montenegro 
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O que é ?
Qual sua utilidade ?
Como interpretá-la ?
O que pode alterá-la?
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Teste que consiste na aplicação intradérmica, na face anterior do antebraço, de 0,1 mL de um derivado protéico purificado denominado tuberculina. 
Após 72 horas da aplicação é feita a medida do maior diâmetro transversal do nódulo palpável que se formou no local de infiltração da tuberculina.
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Infecção por micobactérias
M .Tuberculosis
Atípicas / M. bolvis (BCG)
Infecção latente
Doença
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Individual
Para diagnóstico diferencial (doença)
Avaliação de contatos (infecção latente)
Coletiva
Estudos epidemiológicos
Estudo de prevalência
Risco de infecção
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Avaliação da exposição ao bacilo causador de tuberculose e da resposta à vacina(BCG). 
É importante ressaltar que um resultado positivo nunca deve ser considerado diagnóstico de tuberculose, sendo importante:
A avaliação de parâmetros clínicos,
Radiológicos 
E de história de contato com indivíduo portador de tuberculose. 
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Do mesmo modo, um resultado negativo não exclui totalmente a possibilidade de infecção pelo bacilo da tuberculose. 
Em formas graves de tuberculose (formas meníngea e miliar) e na tuberculose pleural, o PPD pode estar suprimido e retornar ao normal após início do tratamento.
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Tuberculina
Tipo
Concentração
Potência
Volume injetado
Técnica de aplicação
Fatores ligado ao hospedeiro
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OMS – 1958
PPD - Rt 23 - tween 80
Serum Institute Copenhagem- Dinamarca
Tween 80 (diluente)
Estabilizante
Reforça as reações específicas
Brasil: 2UT (0,1ml)
Cuidados:
4 a 8ºC (inativada com t>20ºC)
Protegida da luz solar
6 m 
Após uma ampola ter sido aberta, deve ser utilizada no máximo em 24 horas.
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Leitura
 48 a 96 horas
Valores de positividade
 < 5mm = não reator
 5 – 9mm = reator fraco
  10mm = reator forte
 HIV +, considerar 5 mm
 Avaliar influencia do BCG
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0 a 4 mm: não reator – indivíduo não infectado pelo M. tuberculosis ou anérgico;
5 a 9 mm: reator fraco – indivíduo infectado pelo M. tuberculosis ou por outras micobactérias ou vacinado com BCG;
≥ 10 mm: reator forte – indivíduos infectado pelo M. tuberculosis, doente ou não, ou vacinado com BCG.
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Influenciado BCG
50% dos vacinados – PT +
Até 14mm
2 a 3 anos depois 80 a 90% negativam
Considerar:
Vacinados < 2 anos PT  15 mm
Vacinados > 2 anos PT  10 mm
Am Ver Respir Dis 1992; 146(3):752-6
Chest 1980; 77(1):32-7
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Alta reação:
Infecção recente
Tb doença
Contato frequente com Tb
Tb extra pulmonar
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Baixa reação ou negativa:
Tb miliar avançada (paralisia vaso-motora periférica - não reage nem à histamina, excesso de antígenos)
Meningite tuberculose
Níveis flutuantes: Tb serosas em geral
Hipotireoidismo
Administração vit. C
Febre (inibe a hialuronidase que é fator de dispersão) 
Doenças exantemáticas (sarampo, varicela, escarlatina, e outras)
Corticóides ou drogas imunossupressoras
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Baixa reação ou negativa:
HIV
Lupus, Sarcoidose
Hodgkin
Luz ultra violeta
Trabalho de parto ou puerpério imediato
Crianças e velhos
Desidratação, desnutrição
Alergia paradoxal
Reações cruzadas: outras micobactérias (atípicas, bolvis, leprae) actinomicose, brucelose
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Todos os indivíduos infectados pelo HIV devem ser submetidos ao teste tuberculínico. 
 não-reator aquele com endurecimento entre 0-4 mm e reator aquele com endurecimento de 5mm ou mais. 
Muitos pacientes com AIDS avançada podem ser anérgicos, sendo que 33 a 50% dos pacientes com AIDS e tuberculose têm uma reação fraca (<10 mm). 50 a 80% dos pacientes com Tuberculose e soropositivos, mas sem AIDS reagem ao PPD;
Todo o pessoal da área de saúde deve fazer um PPD à admissão.
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Criança contato de Tb em investigação, realizou PPD, porém mãe não retornou para leitura e refere que formou um “caroçinho”. Pediatra pede que exame seja repetido, o que fazer?
Considerar forte reator e não repetir a PPD, pelo risco de reação exacerbada
Repetir a PPD para avaliar conduta de forma adequada. Já que não há problemas na repetição deste exame.
Como quem pediu o exame foi a pediatra a responsabilidade é dela... E pode repetir...
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Pode ocorrer aumento da enduração na 2º prova:
Variabilidade aleatória
Erros leitura – desvio padrão de até 3mm
Portanto variação até 6 mm poderá ocorrer em até 95% dos casos
Resgate imunológico (efeito booster)
 da enduração na 2º prova, após uma 1º negativa, na ausência de nova infecção
> 10mm com um incremento de pelo menos 6mm
Ocorrência de uma nova infecção (conversão)
Pode ser repetida !!!
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Um teste cutâneo negativo não exclui a doença em pacientes imunocomprometidos
e pacientes com tuberculose avançada podem ser anérgicos. 
Pacientes vacinados com BCG poderão ter o teste positivo. 
Um teste tuberculínico negativo não pode ser o único critério para excluir o diagnóstico de tuberculose.
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Para a validação clínica selecionar periodicamente resultados em todas as categorias e compilar outros resultados de exames:
BAAR,
Cultura para BK,
Biópsias,
 Rx tórax, etc) 
Verificar junto ao médico assistente a correlação entre os resultados. 
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Intra-dérmica (1908 – Mantoux)
	
		
			
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Atenção: medir só a pápula, não medir a área vermelha em volta. 
O paciente reator forte pode ainda apresentar a chamada “reação flictenular”, crivada de pequenas bolhas e pústulas. 
Esta reação em geral se associa à presença de tuberculose ativa e deve ser relatada.
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Baseado em sinais clínicos e sintomas
Baciloscopia e histopatologia
M. leprae não é cultivável em meios de cultura artificiais
Biologia molecular
PCR
Teste de Mitsuda – reação à lepromina
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Material
Linfa do lóbulo auricular, cotovelo, joelho, muco nasal e da lesão
Coloração de Ziehl-Neelsen
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Intradermoreação
Importante para classificação e prognóstico da doença
Aplicação de 0,1 ml de Ag (lepromina) na face anterior do antebraço esquerdo
Leitura após 28 dias
Resultado
Negativo: ausência de sinal ou pápula inferior a 5mm de diâmetro
Positivo: pápula ou nódulo com diâmetro = ou > 5 mm
Interpretação
Mitsuda positivo: paciente com resposta imune celular específica contra o M. leprae
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Paucibacilar
Rifampicina e dapsona
6 meses
Multibacilar
Rifampicina, dapsona e clofazimina
12 meses
Indicada como método auxiliar no diagnóstico da tuberculose, a prova tuberculínica, quando reatora, isoladamente, indica apenas contato com o Bacilo da Tuberculose e não é suficiente para o diagnóstico da tuberculose doença. 
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Doença auto-imune de causa ainda desconhecida, aparece mais comumente em adultos jovens.
Tecnicamente, qualquer órgão pode ser acometido pela doença. Todavia, os granulomas aparecem com mais frequência nos pulmões elinfonodos.
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anérgicos (não reagir). 
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Reação Intradérmica de Montenegro :
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Em termos terapêuticos, somente dois tipos são considerados: paucibacilar (com poucos bacilos) e multibacilar (com muitos bacilos).
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