Artigo sobre estudo da adrenalina e memoria traduzido

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Consolidação de memória humana aprimorada com estresse pós-aprendizagem: interação com o grau de excitação na codificação.
Resumo.
Muitas evidências indicam que os hormônios de estresse endógenos, como epinefrina e corticosterona, modulam a consolidação da memória em animais. Nós recentemente fornecemos a primeira demonstração de que um hormônio do estresse endógeno (epinefrina) pode melhorar a consolidação da memória humana. No entanto, esses achados também sugeriram que a ativação do hormônio do estresse pós-aprendizagem não aumenta uniformemente a memória para todas as informações recentemente adquiridas; em vez disso, ele interage com o grau de excitação na codificação inicial do material na memória moduladora para o material. Aqui, testámos esta hipótese administrando o estresse com o frio (CPS) ou um procedimento de controle para sujeitos depois de verem slides de conteúdo emocional variável e avaliar a memória para as lâminas 1 semana mais tarde. CPS, que elevou significativamente os níveis de cortisol salivar, aumentou a memória para lâminas emocionalmente excitantes em comparação com os controles, mas não afetou a memória para lâminas relativamente neutras. Essas descobertas sustentam ainda mais a visão de que a atividade relacionada ao hormônio do estresse pós-aprendizagem interage com a excitação na codificação inicial para modular a consolidação da memória.
Uma grande evidência que data dos resultados iniciais de McGaugh nos documentos da década de 1950 de que os tratamentos administrados após a aprendizagem, como injeções de drogas ou estimulação cerebral, podem modular (melhorar ou prejudicar) processos de consolidação de memória (McGaugh 2000). Uma evidência abundante também documenta que hormônios de estresse endógenos como epinefrina e corticosterona também modulam a consolidação em animais (McGaugh 2000, Roozendaal 2000). E recentemente, nós fornecemos a primeira demonstração de que um hormônio do estresse endógeno pode modular a consolidação da memória humana (Cahill e Alkire 2003). Esta evidência constitui a base da visão de que a memória melhorada para eventos emocionalmente estressantes resulta dos efeitos potenciais dos hormônios do estresse nos processos de consolidação (Gold e McGaugh, 1975).
Um pressuposto generalizado é que a ação do hormônio do estresse modifica bastante a consolidação de memória para obter informações recentemente adquiridas. Livingston (1967), originador da metáfora "Now print!" Sobre a influência da excitação no armazenamento de memória, explicitou essa suposição sugerindo que, após um evento suscetível / significativo, "o cérebro" imprime a lembrança de todos os eventos imediatamente anteriores e que " seguindo um ... " Now print!" Ordem, tudo o que está em andamento no passado recente receberá um " Now print!" Contribuição na forma de um estímulo de crescimento ou uma influência neuro-hormonal que favorecerá futuras repetições das mesmas atividades neurais "(itálico adicionado). Em contraste com essa visão, nossos recentes achados com infusões de epinefrina após o aprendizado sugeriram que o grau de excitação associado à codificação inicial do material ajudou a determinar se a adrenalina adotou a consolidação efetivamente modulada do material (Cahill e Alkire 2003). Nossos resultados se assemelham aos de Buchanan e Lovallo (2001), que descobriram que a administração pré-aprendizagem de cortisol aumentava a memória de longo prazo para imagens relativamente excitantes, mas não para imagens relativamente neutras.
O objetivo do presente experimento foi examinar ainda mais a hipótese de interação entre o estresse pós-aprendizagem e a excitação na codificação inicial usando estresse com o frio (CPS). Embora não tenha sido previamente utilizado para modular processos de consolidação de memória, o CPS é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa médica (Lovallo 1975) e induz uma resposta robusta e confiável do hormônio do estresse, incluindo a ativação do cortisol (CORT). Nós administramos CPS ou um procedimento de controle para assuntos depois de verem uma série de slides muito semelhantes aos usados ​​em nosso estudo prévio de influência da epinefrina na consolidação (Cahill e Alkire, 2003). Se o estresse pós-aprendizagem e a ativação concomitante do hormônio do estresse interagem com a excitação associada à codificação inicial de slides para modular a consolidação de memória dos slides, então o CPS administrado imediatamente após o aprendizado deve aumentar a memória de longo prazo para slides relativamente excitantes, mas não afetar a memória para slides relativamente neutros nos mesmos assuntos.
Resultados.
Um total de 11 indivíduos de 59 total foram excluídos da análise por várias razões: seis devido a indícios de que eles estavam conscientes de que eles experimentariam um teste de memória, dois por problemas técnicos durante o experimento, um porque seus níveis de CORT basal eram superiores a quatro desvios-padrão (SD) acima da média do grupo e dois porque eles apareceram por suas classificações para terem experimentado praticamente nenhuma resposta de excitação ao procedimento de CPS, classificando a experiência com mais de 2 SD abaixo da média do grupo. Assim, o número final de indivíduos foi de 25 no grupo CPS (15 do sexo feminino, 10 homens) e 23 no grupo controle (19 do sexo feminino, 4 homens).
Cortisol e resposta emocional ao CPS.
Como esperado, as classificações de desconforto revelaram que o procedimento CPS produziu um nível de desconforto muito maior do que o procedimento de controle (t [46] = 23,3, P <.0001). A Figura 1 mostra os resultados da análise salivar CORT. Como esperado, não houve diferença entre a CPS e os grupos de controle no nível CORT na linha de base. Após o procedimento de imersão no braço, os níveis de CORT foram significativamente maiores no grupo CPS do que no grupo controle (t [46] = 1,39, P <0,05). Além disso, os níveis de CORT aumentaram significativamente após a imersão do braço no grupo CPS em comparação com a linha de base (t [24] = -3,56, P <0,002, teste t pareado), mas caiu significativamente no grupo controle (t [22] = 3.31, P <.005, teste t pareado). A quantidade média de tempo que as pessoas mantiveram no braço na água gelada foi de 95,4 ± 67,1 segs.
Figura 1. 
Resposta média (± SEM) de cortisol salivar a CPS ou imersão de braço de controle. * = P <.05 do valor de controle correspondente.
Recuperação de todos os slides.
A CPS produziu um aumento quase significativo (t [48] = 1,96, P = 0,056) no recall total das 21 lâminas em comparação com o procedimento de controle, com indivíduos CPS lembrando uma média ± SEM de 9,2 ± 0,40 slides em comparação com 7,9 ± 0,50 slides lembrados para o grupo de controle. O grupo CPS também recordou em média mais detalhes dos slides como um todo 29,8 ± 2,3 do que o grupo controle 24,5 ± 2,2, embora este efeito não tenha sido estatisticamente confiável (t [46] = 1,65, P = 0,10).
Recuperação do estimulo versus slides neutros.
Os dados revelaram efeitos muito diferentes da CPS e procedimentos de controle sobre o recall das lâminas excitantes versus neutras, conforme definido pelas reações emocionais auto-relatadas aos slides. Conforme mostrado na Figura 2, os sujeitos da CPS lembraram significativamente mais as lâminas excitantes do que os sujeitos de controle (t [46] = 2,59, P <0,02). Em contrapartida, os indivíduos da CPS não diferiram dos controles na retirada das lâminas neutras (t [46] = -0.49, P ».10). Quando a análise foi restrita a apenas as mulheres, obtiveram-se as mesmas conclusões: as mulheres do grupo CPS lembraram as lâminas mais excitantes do que os controles (t [32] = 2,14, P <0,05), mas não diferiram delas em recall de slides neutros (t [32] = 0,49, P ».10).
Figura 2. 
Recuperação média (± SEM) por cento dos slides definidos como excitantes e neutros pelos grupos controle e controle. * = P <0,02 do valor de controle correspondente.
A CPS também afetou o número de detalhes que foram chamados de cada slide. Conforme mostrado na Figura 3, ossujeitos da CPS lembraram um número significativamente maior de detalhes dos slides excitantes do que os sujeitos de controle (t [46] = 2,73, P <0,01), mas os CPS e os sujeitos de controle não diferiram no recall de detalhes a partir de slides neutros (t [46] = -.23, ns). Curiosamente, em indivíduos que receberam a imersão do braço de controle, muito menos detalhes foram retirados da excitação em comparação com as lâminas neutras (t [22] = -2,97, P <0,01, teste t pareado). O número de detalhes lembrados dos slides de excitação versus neutro não diferiu significativamente no grupo CPS (t [24] = 1.31, P> .10).
Figura 3. 
Número médio (± SEM) de detalhes retirados das lâminas de despertar e neutro pelo CPS e grupos de controle. * <.01 do valor de controle correspondente.
Relação entre Resposta de Cortisol e Memória.
A relação entre o grau de resposta do cortisol e a memória foi avaliada nos sujeitos da CPS, correlacionando a alteração nos níveis de cortisol (determinada subtraindo o nível na linha de base daquela após a imersão) com (1) o número total de lâminas lembradas ou (2 ), a percentagem ou as lâminas de despertar foram lembradas, utilizando uma correlação de produto Pearson. Nem o escore de memória correlacionou-se com a alteração do cortisol (r = -0,19 para recall total, r = 0,06 para despertar o recall, P ».10 em ambos os casos). Também não houve correlação significativa entre as classificações de desconforto induzidas pela CPS e o recall total de slide, a recuperação de slide neutro e a recuperação de slide (P ».10 em todos os casos). As classificações de desconforto no grupo CPS correlacionaram-se significativamente com a resposta do cortisol (r = 0,58, P <0,002), embora o período de tempo que os sujeitos mantiveram no braço na água gelada não fosse (r = 0,23, n.s.).
Argumentação.
Este experimento testou a hipótese de que a ativação do hormônio do estresse pós-aprendizagem não modula uniformemente a consolidação da memória para todas as informações recentemente adquiridas; em vez disso, ele interage com o grau de excitação associado à codificação inicial de estímulos para modular a consolidação desses estímulos. Nós testamos esta hipótese examinando os efeitos de um estressor-pressor frio pressionado por estresse, administrado após sujeitos vistos uma série de lâminas de conteúdo de excitação variável na memória de longo prazo para os slides. Como esperado, o CPS ativou significativamente uma resposta endógena ao hormônio do estresse, conforme indicado pelos níveis salivares de CORT. E, conforme previsto pela hipótese, o CPS aumentou significativamente a memória para os slides definidos pelos sujeitos como excitantes emocionalmente, mas não afetaram a memória para slides definidos como relativamente emocionalmente neutros. Esses achados, portanto, convergem com os de nosso estudo anterior sobre o efeito da epinefrina na consolidação da memória humana (Cahill e Alkire 2003) ao sugerir que a ativação do hormônio do estresse pós-aprendizagem interage com o grau de excitação na codificação inicial de experiências para modular a consolidação da memória para as experiências.
Há outras sugestões de que a administração de fármacos nos seres humanos melhora seletivamente a memória para material relativamente excitante, embora a questão não tenha sido, de nosso conhecimento, analisada sistematicamente. Por exemplo, as ações seletivas de glicose (Messier et al., 1998) e o antagonista colinérgico scopolamine (Crow 1979) sobre a memória para a porção de primatas presumivelmente relativamente excitante (Cahill e Alkire 2003) das listas de palavras foram relatadas. Da mesma forma, Buchanan e Lovallo (2001) relataram que a administração de cortisol pré-aprendizagem aumentou de forma seletiva a memória de longo prazo de imagens excitantes. Por outro lado, de Quervain et al. (2000) descobriram que a administração de corticosterona pós-treinamento em humanos não afetou a memória para material não excitante. Finalmente, mas um tanto menos diretamente relacionados, Nielson et al. (1996) relataram que o despertar da tensão muscular pós-aprendizagem aumentou a memória para palavras apenas quando a tensão de "inicialização" foi administrada antes de aprender. Coletivamente, cada um dos achados acima é consistente com o presente estudo ao sugerir que os efeitos do hormônio / estresse pós-aprendizagem na memória dependem de algum modo do grau de excitação associado à aprendizagem inicial. Assim, esses dados desafiam a suposição generalizada, explicitada por Livingston (1967), de que o esforço pós-aprendizagem e a ação do hormônio do estresse modularão a memória para todas as informações adquiridas recentemente.
Deve-se enfatizar que, uma vez que a CPS foi administrada após a aprendizagem, o efeito de reforço na memória não pode ser atribuído a ações nos processos de atenção, emocional, perceptual ou de codificação durante a apresentação de slides e deve ter resultado de alguma ação nos processos de armazenamento de memória. Como a CPS também significativamente, como esperado, ativou a resposta endógena ao estresse (avaliada através dos níveis de CORT salivar), os resultados fornecem novas evidências consistentes com a proposta (Gold e McGaugh 1975) que os hormônios endógenos liberados por eventos emocionalmente estressantes modulam a consolidação de memória dos eventos , e apoiam a visão de que os hormônios de estresse endógenos são um componente essencial de um sistema modulador de memória endógeno para eventos emocionantes que ajudam a garantir a força da memória, em geral, proporcional à importância da memória (Cahill e McGaugh, 1998). Mais geralmente, esses achados se somam aos estudos que demonstram a modulação da consolidação da memória humana com manipulações pós-treinamento (por exemplo, Weingartner e Parker 1984; Colrain et al., 1992; Manning et al., 1992; Soetens et al., 1995; Scholey et al. 1998, Southwick et al., 2002, Cahill e Alkire, 2003).
Não detectamos uma correlação neste experimento entre a alteração no nível CORT induzido pelo CPS e a memória, tanto para o número total de slides lembrados quanto para a porcentagem de slides excitantes lembrados, como pode ser esperado se a atividade CORT estiver causalmente relacionada com a melhoria consolidação de memória, como sugerido por pesquisa animal extensiva (Roozendaal 2000). A falha em estabelecer uma correlação nesta instância pode ter resultado do tempo em que avaliamos CORT na saliva pós-CPS. Embora o ponto de tempo utilizado (10 minutos após a CPS) tenha evidenciado um aumento significativo nos níveis de cortisol com CPS, pode não ter detectado a alteração máxima do cortisol, que poderia ter ocorrido 20-30 minutos após a CPS (Roozendaal 2000). Estudos futuros que examinam a resposta do cortisol a CPS em diferentes pontos de tempo após o estressor poderem detectar uma relação significativa entre a ativação e a memória do cortisol.
A CPS tem sido amplamente utilizada em vários domínios de pesquisa médica (principalmente pesquisa cardiovascular) há mais de 50 anos (Lovallo, 1975). Destaca-se, portanto, que essas descobertas constituem a primeira demonstração de que a CPS pode melhorar a consolidação da memória humana. Os resultados, portanto, indicam que a CPS pode ser uma ferramenta experimental eficaz para aqueles que estão interessados ​​em mecanismos neurais de consolidação de memória em seres humanos e sua modulação por experiências estressantes.
As descobertas recentes apontam para influências substanciais relacionadas ao sexo nos mecanismos neuronais de memória para eventos emocionais (Shors 1998; Cahill et al., 2001; Canli et al., 2002; Cahill and van Stegeren, 2003). Conforme observado nos resultados, foi encontrado um efeito altamente similar da CPS na memória para deslizar as lâminas quando a análise foi restrita a indivíduos do sexo feminino. No entanto, o presente estudo envolveu muito poucos sujeitos do sexo masculino para permitir conclusões sobre se o mesmo efeito existia apenas nos indivíduos do sexo masculino. Assim,a questão de saber se o gênero pode influenciar os efeitos da CPS pós-aprendizagem e a liberação concomitante do hormônio do estresse na consolidação da memória em seres humanos permanece aberta e, em nossa visão, merece atenção em estudos futuros. A evidência sugere que o sexo dos sujeitos pode influenciar a correlação entre a ativação do cortisol em resposta ao CPS e a memória (Wolf et al., 2001), bem como o efeito da CPS sobre o recall dos detalhes (Cahill e van Stegeren, 2003). No mínimo, a evidência disponível nos sugere que os efeitos idênticos da CPS na consolidação da memória em homens e mulheres não devem ser assumidos.
Nesta experiência, muito menos detalhes foram retirados em indivíduos de controle para despertar em comparação com as lâminas neutras (Fig. 3). O efeito de aprimoramento seletivo do CPS na memória para obter detalhes de slides excitantes precisa ser considerado relativo a essa descoberta. O fato de que menos detalhes foram lembrados da excitação em comparação com as lâminas neutras nos sujeitos controle pode estar relacionado ao estreitamento atenção que a hipótese ocorre com a excitação aumentada (o conhecido efeito "Easterbrook"). Assim, é possível que o CPS pós-aprendizagem aperfeiçoe a memória de detalhes, pelo menos em parte, bloqueando um efeito prejudicial sobre a consolidação produzida por um efeito Easterbrook. Além disso, é concebível que o sexo sujeito ainda mais influência esse efeito. Possibilidades como estas nos parecem merecer atenção nos futuros trabalhos.
Em resumo, os resultados presentes demonstram que o CPS administrado imediatamente após ver uma série de slides reforçou a consolidação de memória de longo prazo para lâminas emocionalmente emocionantes, mas não para slides relativamente neutros, em comparação com os efeitos do procedimento de controle. A CPS também aumentou significativamente os níveis de CORT salivar, consistente com a possibilidade de que a atividade do CORT tenha influenciado a consolidação da memória. Os achados apoiam a hipótese derivada de um estudo prévio do efeito da epinefrina na consolidação da memória humana (Cahill e Alkire 2003) ao sugerir que a atividade endógena do hormônio do estresse pós-aprendizagem interage com o grau de excitação na codificação inicial do material para modular a consolidação desse material na memória de longo prazo.
Materiais e métodos.
Assuntos.
Um total de 59 indivíduos saudáveis, todos os estudantes da UCI, média de idade (± SEM) de 20,1 ± 3,6 anos, 51 dístas e oito canhotas participaram deste estudo. Todos forneceram o consentimento informado por escrito antes de participar de acordo com os ditames do Conselho de Revisão Institucional da UC Irvine e receberam o crédito do curso por sua participação. Todas as disciplinas foram testadas individualmente.
Materiais.
Os 21 slides utilizados neste estudo foram retirados do International Affective Picture System (IAPS, Lang et al., 1999), uma coleção de imagens amplamente utilizadas na pesquisa psicofisiológica. Os slides foram escolhidos por sua qualidade de excitação de baixa a moderada conforme determinado pelas classificações IAPS independentes. A classificação padronizada média (ver Lang et al., 1999) de excitação para as lâminas foi de 4,64 ± 0,31, e a classificação média de valência foi de 5,15 ± 0,45 e envolveu apenas lâminas com valência negativa. Os slides foram mostrados em ordem aleatória para cada assunto, com exceção do primeiro slide, para o qual todos os sujeitos viram um dos três slides neutros (uma lâmpada, um garfo ou um caminhão), aleatoriamente atribuídos em todos os assuntos. Um slide neutro inicial foi usado para evitar potenciais efeitos de teto no recall que podem resultar dos efeitos combinados de uma primazia e excitação na memória. Cada slide foi apresentado por 15 segundos, sem slides de tela em branco. Os slides foram apresentados em uma tela de computador padrão localizada a aproximadamente 3,5 pés na frente do assunto. As seguintes lâminas IAPS foram utilizadas: 717, 253, 303, 623, 237, 708, 156, 503, 130, 589, 726, 109, 957, 907, 461, 713, 226, 265, 900, 167, 322. O A classificação de reação emocional média da CPS e os sujeitos de controle para os slides não diferiram (t [46] = 1,4, P> .10).
Procedimentos.
Para reduzir o impacto da variação diurna nos níveis de cortisol, todos os testes foram realizados entre o meio dia e as 5:00 da tarde, e o experimento foi realizado em todos os grupos controle / controle. Antes do início do experimento, cada assunto foi solicitado a lavar as mãos e enxaguar a boca com água em preparação para fornecer uma amostra de saliva. O sujeito então sentou-se confortavelmente em uma cadeira reclinável e foi conectado através do índice da direita e dos dedos do meio para um pletismógrafo de pulso (MP100, BioPac Instruments). Isso permitiu a medição potencial das alterações da frequência cardíaca em resposta à visão de slide e forneceu uma artilharia necessária para convencer os sujeitos de que o estudo era sobre reações emocionais aos estímulos, reduzindo assim a probabilidade de suspeitar de um teste de memória subsequente. Os sujeitos foram informados de que provavelmente encontrariam alguns dos slides agradáveis, alguns desagradáveis ​​e alguns neutros. Eles foram ainda informados de que, quando cuidadoso pelo experimentador (5 segundos após cada início do slide), eles deveriam nomear o slide usando uma palavra ou frase curta e que o conteúdo de cada slide seria facilmente identificável (por exemplo, um jogador de tenis) . Os indivíduos foram convidados a identificar cada slide para garantir que cada slide fosse codificado por cada assunto. No momento apropriado, as luzes da sala foram esmaecidas e a apresentação do slide começou. As respostas de nomeação dos indivíduos para cada slide foram gravadas.
Imediatamente após a apresentação do slide, o sujeito imergiu o braço esquerdo até o cotovelo em água quente (37 ° -40 ° C) ou gelada (0 ° -3 ° C). Embora todos os assuntos tenham sido informados desde o início que podem ser convidados a colocar o braço na água gelada, nenhum assunto sabia em qual grupo foram atribuídos até imediatamente antes da imersão no braço. Aqueles em estado quente mantiveram o braço na água até que o experimentador o instruiu para remover o braço, o que ocorreu pseudorandomly(eventos aleatórios) entre os indivíduos 1, 2 ou 3 min após a imersão do braço. Aqueles na condição de gelo-água foram informados disso, porque o procedimento pode ser extremamente desconfortável, eles devem manter o braço na água o maior tempo possível, não excedendo 3 min, e que eles poderiam remover o braço a seu critério. Aqueles que mantiveram o braço por 3 minutos foram instruídos nesse ponto para remover o braço da água. Após a imersão do braço, cada sujeito descansou durante 3 minutos com o braço coberto por um cobertor. Após o período de descanso, as luzes da sala foram novamente ligadas, e o sujeito pediu para avaliar o nível de desconforto que experimentaram durante a imersão em água. Para fazer isso, primeiro eles foram convidados a recordar a dor física mais intensa que já experimentaram e avaliar essa experiência marcando adequadamente uma escala de 0 a 10, com 0 denotado como "sem dor ou desconforto" e 10 denotados como "o pior dor ou desconforto imagináveis ​​". Isso foi feito para" calibrar "cada assunto para a escala. Eles avaliaram o pico de dor / desconforto que experimentaram durante a imersão no braço na mesma escala.
Saliva.
As amostras de saliva foram coletadas de cada sujeito para análise dos níveis de cortisol imediatamente antes da visualização do slide (linha de base) e 10 minutos após a remoção do braço da água. A saliva foi coletada usando tubos Salivette (Sarstedt). Para cada amostra, o sujeito colocou pela primeira vez o cotonete fornecido em cada tubo de Salivette debaixo da língua, ou entre uma bochecha e dentes, por 1 minuto para produzir saliva. O cotonete foi então colocado de volta no tubo de salivetes e as amostras foram centrifugadas durante20 min e armazenadas a -40 ° C até serem ensaiadas.
Teste de memória.
Uma semana após a exibição de slide, cada assunto voltou ao laboratório esperando ver um novo conjunto de slides. Em vez disso, eles receberam um teste de recuperação gratuita de sua memória para os slides vistos 1 semana mais cedo. Os sujeitos foram informados de que eles tinham tanto tempo quanto eles precisavam recordar e anotar, como muitos dos slides da semana anterior como podiam. Todos os assuntos terminaram dentro de 15 min. Depois que eles terminaram, os assuntos foram solicitados a listar, para cada slide lembrado, quantos detalhes eles poderiam recordar. Eles foram instruídos a escrever um detalhe por linha da folha de pontuação (permitindo que a definição de um detalhe fosse feita pelos sujeitos em todos os casos) e que nenhum detalhe era pequeno demais para listar. Os assuntos novamente compreendidos por esta tarefa não tinham limite de tempo. Depois de escreverem todos os que sentiram que podiam lembrar, o experimentador perguntou se eles tinham certeza de que estavam terminados e, se houvesse algo mais, eles sentiram que eles poderiam se lembrar. Este procedimento de encorajamento adicional foi usado porque, na nossa experiência, muitas vezes provoca uma recuperação adicional precisa dos assuntos. Após a avaliação da memória, os assuntos novamente visualizaram cada imagem vista 1 semana mais cedo e avaliou como elas achavam que o slide estava em uma escala de 1 a 9, com 1 como "calmante / relaxante", 5 como "neutro" e 9 como " excitante / agitada ". Os sujeitos foram então perguntados se eles sabiam ou suspeitavam que sua memória seria testada e se eles já haviam visto algum dos slides antes (todos indicavam que eles não tinham visto nenhum dos slides anteriormente). Após o experimento, os assuntos foram totalmente esclarecidos quanto à natureza do estudo.
Análise de Cortisol.
As concentrações de cortisol salivar foram medidas usando um kit de ELISA (ensaio de imunoabsorção enzimática) de Cortisol (DRG International), no qual foram adicionados 100 μL de saliva aos poços apropriados na microplaca anti-cortisol com anticorpo de coelho pré-revestido. Para cada poço, adicionou-se 200 μL de conjugado de peroxidasse de raiz de cortisol, exceto no branco do substrato. A placa foi então incubada durante 1 h à temperatura ambiente e lavada três vezes com solução de lavagem. Foram adicionados 200 centímetros de tetrametilbenzidina (TMB) aos poços e as placas foram então incubadas à temperatura ambiente durante 30 min para permitir o desenvolvimento da cor. A reação foi então interrompida pela adição de 100 μL de ácido sulfúrico 0,5 M e as placas foram lidas a 450 nm com um fotômetro de microplacas Multiskan Ascent (Thermo Labsystems Oy). As concentrações de cortisol em cada amostra foram determinadas a partir de uma curva de calibração.
Análise de Memória. 
A recuperação de slide total foi determinada contando o número de slides lembrados por cada assunto. Os assuntos foram creditados com um recall exato de um slide quando sua descrição dele poderia ser atribuída inequivocamente a um slide específico que eles tinham visto. Os deslocamentos "Despertando" e "neutro" foram determinados por uma divisão média das classificações atribuídas por cada assunto às lâminas. Os slides que recebem uma classificação por um sujeito em ou abaixo da classificação de excitação mediana para esse assunto foram definidos como "neutros", enquanto que os slides classificados acima da mediana foram definidos como "despertando". A porcentagem de deslize e slide neutro recordados por cada assunto foi então determinado, e estes valores percentuais foram calculados em média entre os indivíduos para criar uma pontuação média de recall percentual para ambos os slides excitantes e neutros tanto na CPS quanto nas condições de controle. Estes valores foram comparados com os testes t de Student (não comparados, de duas colas). O número de detalhes corretos lembrados por slide também foi determinado para cada assunto. Em todos os casos, as respostas de um sujeito foram prontamente identificadas (por L.G.) como precisas ou, em uma pequena porcentagem de casos, detalhes inexatos do slide correspondente. O número total de detalhes lembrados por cada assunto foi determinado, tanto para o despertar como para os slides neutros. Uma pontuação média entre sujeitos em cada grupo foi então calculada usando esse escore de detalhe total.
A análise das alterações da frequência cardíaca em um grande subconjunto de sujeitos neste experimento detectou praticamente nenhuma alteração na frequência cardíaca em resposta às corrediças neutras ou excitantes em indivíduos nessas condições, talvez devido à insensibilidade relativa da técnica de pletismografia de pulso. Portanto, esses dados não foram úteis como uma possível medida adicional de excitação em resposta aos slides e, portanto, não os relacionamos com o desempenho da memória.