17. ELISA 1

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Plantas indicadoras 
Chenopodium chinoa 
Métodos de diágnostico en virología 
• Test E.L.I.S.A 
(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 
• Se basan en la especifidad de la reacción entre 
antígenos y anticuerpos marcados por una enzima que 
a su vez puede reaccionar con compuestos fácilmente 
detectables por colorimetría. 
• Antígeno: Nuestro problema 
• Anticuerpo, se obtienen de conejos (hoy monoclonales) 
a los que les inyectó el antígeno 
• Tipos: Con anticuerpos marcados:Directo, Indirecto, 
Sandwich. Con antígenos marcados: Competición 
 
1.-Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos. Lavado para 
eliminar los antígenos fijados mal o no fijados 
2.- Adición de anticuerpos marcados con una enzima. Si los anticuerpos 
reaccionan con los antígenos, el complejo quedará insolubilizado. Lavar 
 para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado 
3.- Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima 
marcadora. Parar la reacción si se desea 
4.- Aparición de un producto coloreado observable a simple vista o 
cuantificable colorimétricamente 
ELISA directo 
Reacción positiva Antigeno (virus) 
se une a anticuerpo 
Anticuerpo 
 marcado 
se une a 
antigeno 
 
Enzima marcadora 
reacciona con 
 sustrato 
dando color 
Y 
Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y 
Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 
Añadimos el problema (antigeno) 
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Antigeno (virus) 
se une a anticuerpo 
Y 
Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y 
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Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 0 
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Antigeno (virus) 
se une a anticuerpo 
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Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y 
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Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 0 
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Antigeno (virus) 
se une a anticuerpo 
Lavado 
Y 
Y 
Y 
Y Y 
Y 
Y Y 
Y 
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Y 
Y 
Y Y 
Y 
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Añadimos anticuerpo marcados 
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Y 0 
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Añadimos anticuerpo marcados 
L 
O L 
O 
L 
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O L 
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Lavamos 
L 
O 
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O 
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O 
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O 
Y 
Y 
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Y Y 
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Y 0 
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Añadimos un colorante que reacciona con anticuerpos marcados 
L 
O 
L 
O 
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Y 
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Añadimos un colorante que reacciona con anticuerpos marcados 
L 
O 
L 
O 
L 
O 
L 
O L 
O 
Reacción positiva Reacción negativa 
Test ELISA.- Lectura, por colorimetría de 
una prueba de substratos 
Diagnóstico mediante PCR y RT-PCR 
 
La técnica de la PCR detecta niveles muy 
bajos de virus en la planta. Se basa en la 
especificidad de secuencia del ADN o el 
ARN de los virus. En el caso de los virus 
cuyo ácido nucleico es ARN (la mayoría) 
es necesario sintetizar ADN a partir del 
ARN del virus para poder proceder a los 
pasos siguientes. 
 
 
La hibridación molecular consiste en el 
empleo de sondas de ADN o ARN 
marcadas que son específicas para la 
secuencia de ADN o ARN de un virus 
específico. 
 
Técnicas de diagnóstico