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D i s c i p l i n a : B i o l o g i a C e l u l a r e M o l e c u l a r C u r s o : E n f e r m a g e m – 1 º s e m e s t r e Replicação do DNA Faculdade de Ciências Sociais Aplicadas C u r s o : E n f e r m a g e m – 1 º s e m e s t r e P r o f ª : M s c . N a t h á l i a L i m a 2 9 / 0 9 / 2 0 1 7 Dogma Central da Biologia Molecular DNA - Acido Desoxirribonucléico PAPEL BIOLÓGICO Transmitir a informação genética de uma célula para a outra Síntese de RNA Os ácidos nucléicos são macro moléculas formadas pela união de unidades menores chamadas NUCLEOTÍDEOS.unidades menores chamadas NUCLEOTÍDEOS. Um NUCLEOTÍDEO é formado por: Pentose - Desoxirribose Fosfato Bases Nitrogenadas T A G C NUCLEOTÍDEO . Nucleotídeos DNA Nucleotídeos RNA U A molécula de DNA Ácido Desoxirribonucléico. Molécula de fita duplafita dupla formando uma dupla hélicedupla hélice As fitas estão unidas pelas ligações de Hidrogênioligações de Hidrogênio A = T A = T C = G O Modelo Proposto por Watson e Crick -DNA é formado por 2 fitas (fita dupla) antiparalelas; •Cada filamento e composto por vários nucleotídeos; •As cadeias se ligam por meio das bases nitrogenadas. Ciclo Celular A vida das células que se dividem passam por duas etapas que se alternam ciclicamente, conhecidas como: intérfase e fase M; Intérfase: Período G1 – Desempenha suas diferentes atividades S – Ocorre a replicação do DNA G2 – Estende-se até o início da M Fase M: Mitose Meiose Replicação do DNA A replicação do DNA ocorre na interfase; Ao final da divisão celular, as células-filhas herdam a mesma informação genética contida na célula progenitora; Como essa informação está presente na molécula de DNA, esta deve originar outra molécula de DNA idêntica à que lhe deudeve originar outra molécula de DNA idêntica à que lhe deu origem, para que ambas sejam repartidas entre as duas células- filhas; É a única molécula capaz de sofrer autoauto--duplicaçãoduplicação. A replicação é do tipo semiconservativasemiconservativa, pois cada molécula nova apresenta uma das fitas vinda da mãe e outra fita recém sintetizada. Replicação do DNA O DNA é sintetizado na direção 5’___3’; O processo de replicação do DNA envolve a participação de diversas enzimas, dentre elas as polimerases; As DNA polimerases, adicionam nucleotídeos sucessivos – um de cada vez – na extremidade 3’ da cadeia em crescimento; A partir de uma molécula de DNA, originam-se duas moléculas de DNA (dupla fita), cada uma composta por uma cadeia originária do DNA progenitor e uma recém sintetizada. A autoduplicação do DNA permite que as informações Replicação do DNA permite que as informações hereditárias sejam transmitidas às células filhas A Replicação Ocorre Setorialmente DNA – Formado por nucleossomos de 10 nm e se enrola até originar uma estrutura helicoidal de 30 nm de diâmetro, que ao tornar a se enrolar forma alças de diferentes comprimentos, que emanam de um eixo constituído por proteínas não histônicas; Esta disposição da cromatina se organiza setorialmente, uma vez Esta disposição da cromatina se organiza setorialmente, uma vez que cada alça representa uma unidade de replicação; Se a síntese de DNA iniciasse em uma das extremidades da molécula e avançasse até o final, demoraria em média 30 dias; A duração da fase S (tempo para o DNA se replicar) é de 7 horas? Como isto é possível? A duplicação Ocorre por Múltiplas origens A rapidez com que a síntese ocorre deve-se ao estabelecimento de numerosas origens de replicação ao longo da molécula de DNA; As origens de replicação contêm sequências especiais de DNA, que se formam ao separar-se localmente as duas fitasDNA, que se formam ao separar-se localmente as duas fitas do DNA; Todas as origens possuem uma sequência em comum, chamada de ARS (autonomous replication sequence) ; Quando se abre a dupla hélice do DNA em uma origem de replicação forma-se uma bolha de replicação. Origens de Replicação A replicação é Bidirecional As bolhas de replicação originam, em cada extremidade, uma estrutura em forma de Y denominada forquilha de replicação; As duas forquilhas que se formam em cada origem As duas forquilhas que se formam em cada origem avançam em direções opostas e desaparecem quando encontram as bolhas contíguas; O segmento de DNA que é sintetizado a partir de uma origem de replicação é denominada replicon; Como são sintetizadas as duas cadeias de DNA? A cadeia Filha que cresce na direção 5’ 3’, cujo molde é a cadeia progenitora, é sintetizada sem maiores complicações, pela adição contínua de nucleotídeos em sua extremidade 3’ à medida que a forquilha se desloca; A outra cadeia filha, que usa como molde a cadeia A outra cadeia filha, que usa como molde a cadeia progenitora 3’ 5’ é sintetizada de maneira descontínua, pois cresce na direção contrária ao avanço da forquilha; Nesta cadeia se formam pequenos fragmentos de DNA, chamados fragmentos de Okazaki, que se ligam entre si a medida que vão sendo formados. A replicação é Assimétrica O Início da Replicação Requer um primer A DNA polimerase não é capaz de iniciar uma fita a partir do nada; Para isto, necessita de uma extremidade 3’ livre para poder colocar o primeiro desoxirribonucleotídeo; Essa extremidade é fornecida por uma pequena sequência com cerca de 10 nucleotídeos chamada de primer; Uma enzima chamada Primase confecciona o primer para que a DNA polimerase possa iniciar a duplicação do DNA; DNA Primase - primer Replicação - Elongamento A DNA polimerase δ adiciona os desoxirribonucleotídeos que estão presentes no núcleo como desoxirribonucleotídeos trifosfatados (dATP, dTTP, dCTP, dGTP) na fita contínua. Ao contrário da cadeia contínua, a descontínua requer muitos primers (um para cada fragmento de Okazaki);primers (um para cada fragmento de Okazaki); Depois de adicionar o primeiro desoxirribonucleotídeo na extremidade 3’ do primer, a DNA polimerase α adiciona os nucleotídeos sucessivos na extremidade 3’ do fragmento de okazaki; A síntese é interrompida quando a forquilha atinge a extremidade do replicon, ou no caso da descontínua, do fragmento de Okazaki. Sentido do elongamento do DNA 5’3’ Replicação – Demais Componentes O segmento de DNA fica coberto por proteínas denominadas SSB (single-strand DNA binding), que têm a propriedade de associar-se de maneira cooperativa com as cadeias de DNA em filamento simples; A presença dessas SSB confere rigidez a esse segmento, o qual A presença dessas SSB confere rigidez a esse segmento, o qual evita o pareamento entre as bases complementares da própria cadeia; A enzima Helicase: separa as duas fitas de DNA (cortam as pontes de H) na forquilha de replicação. Processo que gasta energia (ATP) Replicação – Demais Componentes A Topoisomerase I e a girase : agem impedindo o superenrolamento da dupla hélice conforme as cadeias de DNA se separam na forquilha; Ao final da replicação, cada primer é eliminado por uma nuclease reparadora e substituído por umuma nuclease reparadora e substituído por um segmento equivalente de DNA que é a DNA polimerase β; Finalmente atua a DNA ligase: conecta a sequência de DNA com o restante da cadeia contínua, e no caso da descontínua, liga os fragmentos de okazaki. A Topoisomerase I e a Girase Enzimas Envolvidas na Replicação Esquema da replicação do DNA
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