METODO DE ESTUDO DE CELULA ENFERM

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MÉTODOS DE ESTUDOS DA 
CÉLULA 
 
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE 
CENTRO DE BIOCIÊNCIAS 
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E GENÉTICA 
Prof. Delando Nasário de Medeiros 
1. INTRODUÇÃO 
 1. Aperfeiçoamento dos métodos de investigação. 
 2. Microscópio óptico de luz  célula. 
 3. Microscópio eletrônico  organelas e moléculas 
celulares 
 3. Equipamentos como ferramentas de estudos. 
 4. Biologia Celular e Molecular  depende de 
aperfeiçoamento de instrumentos e técnicas de 
pesquisa. 
TAMANHO DAS CÉLULAS 
• Hemácia humana - 7.6 µm 
 Óvulo Humano - ~100 µm 
TAMANHO DAS CÉLULAS 
 
2. OBJETIVOS: 
 
Compreender os métodos gerais empregados para 
decifrar as estruturas e as funções celulares. 
 
Identificar a importância das técnicas e suas 
metodologias experimentais no estudo das células. 
3. MÉTODOS: 
 3.1.PREPARADOS PERMANENTES: 
 Fixação do material (1ª etapa) 
 Finalidades: 
 Evitar autólise 
 Impedir invasão de microrganismos decompositores. 
 Endurecimento do tecido (célula) para os cortes. 
 Aumentar afinidade por corantes (MO) e contrastantes 
em (ME). 
 
 
3.2. FIXADORES: 
 
 a) Formaldeído  H-C-OH 
 Não Forma ligação cruzada 
 Preserva a integridade bioquímica e antigênica da célula 
b) Glutaraldeído  HOC-CH2-CH2-CH2-COH 
 Forma ligação cruzada com o grupo amina livre das 
proteínas 
 Fixa bem proteínas 
 Fixador aditivo 
 Concentração 2,5% 
3.2. FIXADORES: 
3.2. FIXADORES: 
 
c) Tetróxido de ósmio: OsO4 
 Usado na segunda fixação 
 Fixa bem lipídios (ácidos graxos insaturados) 
 Confere contraste as membranas 
 Poder de penetração 1mm/hora 
 Não fixa bem proteínas devido ao 
deslocamento do ponto isoelétrico 
d) Misturas Fixadoras  contêm proporções 
variadas. 
 
3.3. Microtomia: corte do material 
1. Microscopia óptica  inclusão parafina 
2. Microscopia eletrônica  inclusão resinas 
3.3. Microtomia: corte do material 
 
3.4. Coloração/Contrastação: 
Corantes: ácidos, básicos e vitais. 
 
Contrastantes: conferir melhor 
visualização 
 
Acetato de Uranila, citrato de Chumbo, 
OsO4. 
4. MICROSCOPIA 
4.1. MICROSCOPIA ÓPTICA: 
a) Histórico 
Hans Jansen – 1590 
Roberto Hooke – 1665 
Antony Leeuwenhoeck – 1674 (MO 266X) 
4. MICROSCOPIA ÓPTICA: 
Hans Jansen–1590 
Antony Leeuwenhoeck-1674 
Roberto Hooke-1665 
4. MICROSCOPIA: 
b) Limite de resolução e poder de resolução. 
 
Olho Humano - 0,2mm 
 
MO - 0,2µm 
 
ME - 0,2nm 
PODER DE RESOLUÇÃO 
 PR de um microscópio é a 
capacidade de: 
 
 Separar detalhes 
 
 Produzir imagens separadas de 
partículas muito próximas 
 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Tipos: 
 
 
MET 
MEV 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
4.2. MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Micrografias: imagens. 
5. CITOQUÍMICA: 
Localização intracelular das diversas 
substâncias que compõem a célula. 
Reação de Feulgen: reação específica para 
DNA 
1ª etapa HCl quente 
2ª etapa reativo de Schiff 
Lei de Lambert-Beer 
5. CITOQUÍMICA: 
REAÇÃO DE FEULGEN 
Hidrólise em HCl 1M a 60ºC 
por 12 minutos 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
Localização intracelular de proteínas 
específicas. 
Tipos: 
Imunocitoquímica direta: antígeno/anticorpo 
 
Imunocitoquímica indireta: marcação de 
antianticorpo. 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
6. IMUNOCITOQUÍMICA: 
7. ELETROFORESE EM GEL: 
 Separação de diversas substâncias (íons ou 
moléculas) de uma solução, de acordo 
com suas cargas elétricas. 
7. ELETROFORESE EM GEL 
INCLUSÃO E EXCLUSÃO - PATERNIDADE 
8. PCR (Reação de Polimerização em Cadeia) 
Amplificação de regiões específicas do DNA. 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
1. Cultura de células vegetais: (Meio 
de cultura MS) 
2. Germinação in vitro 
3. Micropropagação in vitro 
4. Formação de calos 
5. Fusão de células: protoplastos 
(heterocários) 
6. Micropropagação de plantas 
geneticamente modificada 
(plantas transgênicas) 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
1. Cultura de células animais: meio de 
cultura 
2. Embriões clonados 
3. Células tronco 
4. Animais geneticamente modificados 
(animais transgênicos) 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
(terapia celular) 
1. Fertilização in vitro 
 Animais estéreis 
 Ejaculação retrógrada 
 Determinação do sexo extra-uterino 
 Poliembrionia 
 Fertilização pós-mortem 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
Fertilização in vitro 
9. ESTUDO DE CÉLULAS VIVAS: 
 Micromanipulação in vitro: inoculação 
do núcleo do espermatozóide no óvulo 
Estudo de caso 1: 
Aline, 5 anos é a filha do meio das três filhas de Dona Renata. A filha mais velha, Paula, tem 8 
anos de idade e a menor Júlia tem 3 anos. Seu marido João está preso por porte de drogas e 
assalto. Ela vive com as três filhas em um cortiço junto com uma irmã Isabel que também tem 
uma filha, Letícia de 2 anos de idade. Aline e Júlia passam o dia na creche e somente no final de 
tarde que D. Renata ou Paula, a filha mais velha pega as meninas e levam-nas para casa. O 
relacionamento de D. Renata com a creche é bastante estressante, pois não segue as normas 
impostas. Paula estuda numa escola do estado, mas a mãe nos contou que há um mês ela não vai 
para a escola devido as feridas e mau cheiro que vem da sua cabeça. Ela e toda a família têm 
piolho. Júlia é uma criança retraída, fica sempre isolada dos colegas da creche devido o seu mau 
cheiro. A irmã Aline também apresenta as mesmas condições de higiene o que leva seus colegas 
de sala a se afastarem dela. Além do mau cheiro, piolhos, elas apresentam a pele ressecada e 
cheia de feridas. A mãe é alcoolista e fumante. Ela trabalha esporadicamente como diarista, 
porém ganha pouco para sustentar as crianças. A mãe já foi vista várias vezes batendo nas crianças. 
A tia Isabel também não trabalha, é solteira e está grávida do segundo filho. O pai é desconhecido 
e não mora com ela. Aline foi internada na UTIP após levar choque ao introduzir a presilha do 
cabelo em uma tomada da creche. 
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