Prática identificação Bact 2017.2

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Prática: Identificação bioquímica 
das bactérias 
Disciplina: Microbiologia 
Profª: Lílian Pantoja 
Mestranda: Gabriela Campolina 
 
Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri 
Instituto de Ciências e Tecnologia 
 
Voltando aos testes bioquímicos 
vistos na aula de classificação 
de micro-organismos... 
1. Características morfológicas 
2. Coloração diferencial 
3. Testes bioquímicos 
4. Sorologia 
5. Fagotipagem 
6. Perfil dos ácidos graxos 
7. Citometria de fluxo 
8. Composição de bases do DNA 
9. Fingerprinting de DNA 
10. Reação em cadeia da polimerase -PCR 
11. Hibridização de ácidos nucléicos 
12. União dos métodos - Chaves dicotômicas e Cladogramas 
Testes Bioquímicos 
Utilizados associados com os resultados de 
coloração e cultivo; 
Prova definitiva na identificação de bactérias 
isoladas ; 
Os testes bioquímicos avaliam a presença ou 
ausência de enzimas envolvidas no processo 
metabólico 
Características 
Metabólicas 
p/ identificação 
• Para reduzir o tempo de identificação: 
 
Uso de meios 
seletivos e 
diferenciais 
Uso de métodos 
rápidos de 
identificação 
Tortora 2012 (cap.10) 
Enterotubo II da 
 Becton Dickson 
Testes Bioquímicos 
A família Enterobacteriaceae constitui um grupo 
heterogêneo de bactérias Gram-negativas, que 
estão largamente distribuídas na natureza: 
Testes Bioquímicos 
Como se diferenciam? 
 A diferenciação das enterobactérias baseia-se, 
principalmente, na presença ou não de diferentes 
enzimas codificadas pelo material genético das 
bactérias. Estas enzimas participam do metabolismo 
bacteriano em diversas vias, e podem ser detectadas 
por meios especiais utilizados em técnicas de cultivo 
 
Objetivos da prática 
Identificar bactérias (enterobactérias); 
Aprender as principais provas bioquímicas 
utilizadas para identificar bactérias 
(enterobactérias); 
Discutir as reações bioquímicas que ocorrem 
nas provas de identificação. 
Enterobacteriáceas: bacilos Gram-
negativos 
• Membrana 
plasmática; 
• Espaço 
periplásmico; 
• Peptideoglicano ou 
mureína; 
• Membrana externa 
Células 
Fisiologia 
Anaeróbios facultativos; 
Reduzem nitrato e nitrito; 
Fermentam glicose e são oxidase-negativas; 
São capazes de metabolizar substâncias como: 
carboidratos, proteínas e aminoácidos, lipídios e 
ac. Orgânicos 
Produzem catalase; 
Utilizam glicose e amônia como fonte única de 
carbono e nitrogênio . 
Testes Bioquímicos 
Teste de utilização de citrato; 
Teste de catalase; 
Produção de Sulfeto de Hidrogênio – H2S 
Teste de motilidade; 
Teste de Fenilalanina; 
Teste do Indol. 
Teste da Lisina 
 
 
Teste de utilização de citrato 
 Objetivo: Determinar se o m.o é capaz de utilizar o citrato 
como única fonte de carbono para o seu desenvolvimento; 
 
Meio Ágar citrato de Simmon  tubo de ensaio 
 citrato de sódio como única fonte de carbono; 
 Íon amônio como única fonte de nitrogênio e; 
 azul de bromotimol como indicador de pH; 
 
Citrase 
ENZIMA 
Citrato 
ENERGIA 
Ciclo dos ácidos tricarboxílicos 
 
Metabolismo do citrato em organismos citrato-positivo 
Carbonato de sódio 
Meio Alcalino 
CO2 
Na+ 
H2O 
Interpretação dos Resultados 
Teste de catalase 
 Objetivo: Identifica m.o. que produzem a enzima catalase, visto 
que algumas bactérias produzem peróxido de hidrogênio durante 
a respiração aeróbica; 
 
 Ágar simples  Tubo de ensaio/ lâmina 
 Peróxido de Hidrogênio H2O2; 
 Indicador é a formação de bolhas. 
 
 A maioria das bactérias aeróbicas e anaeróbicas facultativas 
produz H2O2, que quando acumulado na célula se torna tóxico 
(mólecula altamente reativa que promove danos aos 
componentes celulares); 
Peróxido de Hidrogênio 
Interpretação dos Resultados 
Teste de Indol 
Objetivo: Caracterizar e/ou identifica bactérias 
entéricas, que são capazes de produzir indol a partir de 
aminoácido triptofano através da enzima triptofanase. 
 
Meio SIM 
 Peptona (que contém o aa triptofano); 
 Extrato de carne; 
 Indicador é o reagente Kovac; 
 
 
 
triptofanase 
ENZIMA 
Indol + Kovac  mudança de cor 
(rósea-avermelhado) 
Interpretação dos Resultados 
Produção de Sulfeto de hidrogênio 
(H2S) 
 Objetivo: Determinar se ocorre a liberação de ácido sulfídrico 
(H2S) gasoso, promovida pela metabolização bacteriana de aa que 
contêm enxofre em sua estrutura; 
 
Meio SIM 
 Peptonas (rica em aa cisteína  fonte de enxofre); 
 Tiossulfato de sódio; 
 Indicador: Sulfato Ferroso. 
 
 
 
 
 
Cisteína dessulfurase 
ENZIMA 
Sulfeto de Hidrogênio 
Cisteína Tiossulfato de sódio 
(Na2S2O3) 
Sulfeto de Hidrogênio Sulfato Ferroso 
Sulfeto de 
ferro 
Teste de Motilidade 
 Objetivo: Verificar se a bactéria é móvel ou imóvel. A mobilidade das bactérias 
é proporcionada pela presença de um ou mais flagelos. As bactérias imóveis 
não possuem flagelos. 
 
 Meio SIM –semi-sólido 
 
 
Teste de Fenilalanina 
 Objetivo: Detectar bactérias capazes de produzir enzimas que 
removem o grupo amina da fenilalanina presente no meio; 
 
Meio Ágar-fenilalanina 
 Indicador é cloreto férrico; 
 
 
Fenilalanina desaminase 
ENZIMA 
Ác. Fenilpirúvico + cloreto de ferro (Indicador) 
Ác. fenilpirúvico 
Fenilalanina desaminase 
 
(+) 
(-) 
Mudança de 
coloração 
Teste de Lisina 
 Objetivo: Detectar a habilidade de um organismo descarboxilar 
um aminoácido (usualmente a lisina, ornitina ou arginina) para 
formar uma amina, resultando na alcalinização do meio no qual o 
m.o. se desenvolve. 
 
Meio Lisina Descarboxilase 
 Peptona, glicose, piridoxial fosfato 
 Indicador: bromocresol púrpura 
 
 
Lisina descarboxilase 
ENZIMA 
Teste de Lisina 
Inicialmente  amarelo (fermentação da glicose - pH); 
 
 pH  descarboxilases  acúmulo de aminas ( pH) 
 
Teste positivo  volta à cor púrpura 
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Nitrito + + + + + + + + + + + 
Fenilalanina deaminase - - - - - + + - - - - 
Ureia +/- - +/- - +/- + +/- - +/- - + 
Lactose +/- - + +/- + - - - - - +/- 
Glicose + +/- + + + + + +/+ +/+ + +/+ 
Manitol + +/- + +/- + - +/- + + +/- + 
Lisina de carb - + +/- +/- +/- - - + +/- - - 
Maldkato +/- +/- +/- +/- + - - - - - - 
Indol +/- +/- - +/- +/- +/- + - - +/- +/- 
H2s2 - +/- - - - +/- - + - - - 
Mobilidade + +/- + +/- - + + +/- + - - 
Citrato + - + - + +/- + +/- + - - 
Identificação bioquímica de Enterobacteriaceae (Manual Bergey, 1984) 
 
Escherichia coli 
• Pertencente à família Enterobacteriaceae, o 
gênero Escherichia compreende as espécies E. 
coli, Escherichia blattae, Escherichia fergusonii, 
Escherichia hermanii, Escherichia vulneris. No 
entanto, a principal espécie de importância é E. 
coli. 
Escherichia coli 
• E. coli faz parte do grupo de coliformes fecais 
(coliformes a 45 ºC) sendo considerada o mais 
específico indicador de contaminação fecal e 
eventual presença de bactérias patogênicas. 
Escherichia coli 
• Características: 
• Bastonete curto;• Gram-negativo; 
• Mede entre 1,1 a 1,5 µm por 2 a 6 µm; 
• Maioria é móvel (existência de flagelos); 
• A temperatura ótima de crescimento é por 
volta dos 37 ºC. 
Salmonella 
• Tem, em seu nome, uma referência ao 
cientista estadunidense chamado Daniel 
Elmer Salmon, que associou a doença à 
bactéria pela primeira vez. 
• As doenças causadas por salmonela e 
transmitidas por alimentos são consideradas 
um dos problemas mais alarmantes de Saúde 
Pública em todo mundo. 
Salmonella 
• São bactérias gram-negativas, em forma 
de bacilo, na sua maioria móveis (com 
flagelos), não capsuladas, sendo que a maioria 
não fermenta a lactose. 
 
Salmonella 
• O trato intestinal do homem e dos animais é o 
principal reservatório natural deste patógeno, 
sendo os alimentos de origem aviaria 
importantes vias de transmissão. 
Salmonella 
• Patologias causadas: gastroenterite, septicemia e 
febre entérica ou tifóide. 
 
Transmissão: 
• ingestão de alimentos contaminados. 
• Ingestão de água contaminada 
• Disseminação fecal-oral; 
• Contacto com pessoas doentes ou portadores 
assintomáticos. 
 
OBRIGADA