Fixadores Histológicos biomedicina histologia

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Fixadores Histológicos
UFPI- Universidade Federal do Piauí
Campus Ministro Reis Veloso 
Curso de Bacharelado em Biomedicina
Disciplina de Histologia e Embriologia
Parnaíba-PI - 2016
Componentes : 
Anderson de Sousa Brito
Lenilson do Nascimento Melo Junior
Luis Felipe de Sousa Pimentel Borges
Rafael Henrique de Brito
Enviar para junior_05@r7.com
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Tópicos
Introdução;
Fixação; 
Fixação Química;
Fatores que influenciam o fixador;
Questões;
Bibliografia;
Introdução
Você alguma vez refletiu sobre o que acontece quando esquecemos um pedaço de carne fora da geladeira?
Por que a carne apodrece?
O que realmente acontece com esse material?
Fixação
Física:
Temperatura, ondas eletromagnéticas ou agitação molecular.
Química:
Substâncias químicas que formam reações com sítios biomoleculares, impedindo alteração tecidual.
Referencia: Rolls, G. The process of fixation and the nature of fixatives. Leica Biosystems. Manual, 2012.
Fixadores (Fixação Química)
Fixadores aldeídos;	
Agentes oxidantes;
Agentes desnaturantes ou coagulantes de proteínas;
Mecanismo desconhecido;
Combinação de reagentes;
Referência: Rolls, G. The process of fixation and the nature of fixatives. Leica Biosystems. Manual, 2012.
Glutaraldeído
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210
Indicado na ME;
Deformação da estrutura -hélice das proteínas;
Rapidez na fixação;
Baixa penetração;
2% (padrão) de solução de glutaraldeído tamponado;
Não indicado para imunoperoxidase;
Disponível em: http://www.indalabor.com.br/site/index.php?Conteudo=saneantesDetalhes&contentProdutos=glutarin2 . Acesso em: 07/11/2016
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Ácido Crômico 
Liga-se às proteínas , mas causa extensa desnaturação.
Tem aplicações específicas mas raramente são utilizados.
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210
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Disponível em: http://www.quimibalance.com/home/71-acido-cromico-1-kilo-trioxido-de-cromo.html . Acesso em: 07/11/2016
Metanol
Desnatura proteínas;
Causam muita fragilidade e danos aos mesmos;
Muito indicado para esfregaços citológicos pois age rapidamente e dá bons detalhes nucleares;
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210
. 
Disponível em: http://alunosonline.uol.com.br/quimica/metanol.html/ . Acesso em: 07/11/2016
Cloreto de Mercúrio
Fixa o tecido por um mecanismo desconhecido;
Este fixador penetra relativamente pouco mas rápido , causa alguns danos ao tecido;
Excelentes detalhes nucleares;
Ideal para a fixação dos tecidos hematopoiéticos e reticuloendoteliais;
Uma vez que contem mercúrio, deve ser eliminado cuidadosamente;
Toxicidade;
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210
Disponível em : http://www.splabor.com.br/produto/cloreto-de-mercurio-oso-p-a-a-c-s-100-synth-produto-controlado-pela-policia-federal/. Acesso em: 07/11/2016
Carnoy
É um dos fixadores mais rápidos e penetrantes;
Geralmente utilizado para diagnósticos urgentes;
Tempo de fixação média 3h;
Muito utilizado em esfregaços hemorrágicos, para retirada do sangue (destrói as hemácias);
Não é necessária a lavagem após fixação;
Composto por:
Álcool Absoluto;
Clorofórmio;
Ácido Acético Glacial;
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210
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Disponível em: http://www.labosphera.eu/shop/index.php?page=shop.product_details&flypage=flypage.pbv.labo.tpl&product_id=1149&category_id=58&option=com_virtuemart&Itemid=55&lang=pt Acesso em: 07/11/2016
Fatores que influenciam os fixadores
Temperatura;
Aumento da temperatura – aumento da velocidade de fixação.
Temperatura mais baixa – mais tempo para a penetração do fixador.
Volume e concentração;
Razão mínima de 10:1
Concentração muito alta pode prejudicar os tecidos.
Velocidade de penetração;
Capacidade de difusão de cada fixador;
Espessura do tecido;
Tampão e pH;
pH perto do neutro;
 A hipóxia de tecidos reduz o pH;
Fixador tamponado para evitar a acidez excessiva;
Referência: Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210. 
Volume e concentração
Velocidade de penetração
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Concurso – Téc. Em Laboratório – Comperve - 2009
Questão 2
O cloreto de mercúrio uma vez utilizado , deve ser descartado cuidadosamente. Por quê?
Resposta: O cloreto de mercúrio em si é uma das formas mais tóxicas de mercúrio. Possui alta propagação por ser hidrossolúvel.
Questão 3
Indicado na microscopia eletrônica , esse fixador tem como característica a deformação da estrutura -hélice , rapidez na fixação e baixa penetração. As características se referem à:
A) Tetróxido de Ósmio
B) Ácido Crômico
C) Metanol
D) Glutaraldeído
Bibliografia
Eltoum I, Fredenburgh J, Grizzle WE. Advanced concepts in fixation: 1. Effects of fixation on immunohistochemistry, reversibility of fixation and recovery of proteins, nucleic acids, and other molecules from fixed and processed tissues. 2. Developmental methods of fixation. J Histotechnol 2001;24;201-210.
Eltoum I, Fredenburgh J, Myers RB, Grizzle WE. 1997. Introduction to the theory and practice of fixation of tissues. J Histotechnol 2001;24;173 190.Carson FL. Histotechnology. 2nd ed. Chicago: ASCP Press.
Rolls, G. The process of fixation and the nature of fixatives. Leica Biosystems. Manual, 2012.