Proteinas totais e frações

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INSTITUTO FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO - IFES 
CURSO BACHARELADO EM BIOMEDICINA 
 
 
GABRIELA GRAMLICH 
MARIANA GOLTARA 
 
 
PROTEÍNAS TOTAIS E FRAÇÕES – METÓDOS E ANÁLISE 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Vila Velha - ES 
Abril/2021 
 
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INTRODUÇÃO 
As proteínas são enzimas essenciais para o funcionamento do organismo e possuem 
variadas funções dentro do corpo, que vão desde ajudar o sistema imunológico a até 
mesmo permitir a formação dos músculos. São grandes moléculas biológicas 
compostas de aminoácidos, que podem ser obtidos a partir de carnes, aves e peixes 
e derivados, como queijo leite e etc. 
As principais proteínas plasmáticas são a albumina, as globulinas e o fibrinogênio e 
estão envolvidas em diversas funções como a manutenção da pressão osmótica e da 
viscosidade do sangue, a regulação do pH sanguíneo, participam na coagulação 
sanguínea e transporte de nutrientes metabólitos, hormônios e produtos de excreção. 
As análises clínicas realizam exames que permitem mostrar e observar indicadores e 
valores referentes a substâncias que estão no organismo, como as proteínas. Através 
dos resultados obtidos é possível saber o estado de saúde do indivíduo, além de 
indicar o melhor tratamento caso alguma patologia seja detectada. 
No caso do exame de proteínas totais, são medidas as quantidades de proteínas 
presentes na circulação sanguínea da pessoa, e permite medir os valores dos 
componentes albumina e globulina, além dos valores totais de proteínas. Também 
pode ser feita em frações, onde é feito o fracionamento das proteínas em dois grandes 
grupos, de albumina e outro com as restantes, onde a maior parte é de globulina, para 
fazer um diagnóstico mais preciso. 
O exame de proteínas totais e frações é um exame de rotineiro, pois a alterações nele 
pode ser indicador de doenças renais ou hepáticas e esse procedimento também é 
indicado para pacientes com perda de peso recente. 
Se os valores no resultado dos exames de proteínas totais e frações estiver abaixo do 
normal, o paciente pode apresentar condição de hipertireoidismo, deficiência de 
vitamina D, insuficiência cardíaca e cirrose, além de alcoolismo crônico. E se os 
valores forem acima da tabela podem ser indicadores de doenças autoimunes, 
hepatite B e C, câncer, artrite reumatoide e lúpus. 
 
 
 
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Os valores de referência usados são; 
 Proteínas Totais:6.0 a 8.0 g/dL 
 Albumina...........:3.5 a 5.5 g/dL 
 Globulina...........:2.5 a 3.5 g/dL 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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OBJETIVO 
Analisar o método e equipamentos que são utilizados em laboratórios clínicos para 
determinar as concentrações das proteínas totais e frações. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1. QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE LOWRY 
O método de Lowry tem sido o mais utilizado para determinação de proteínas totais, 
devido a sua simplicidade, baixo custo e rapidez. Nesse método, amostra é tratada 
com solução alcalina de cobre e depois com o cromógeno misto de ácidos 
fosfotúngtico e fosfomolíbdico. Nessa segunda etapa, a cor é transformada em 
decorrência da rápida redução do reagente fenólico pelos resíduos de aminoácidos 
aromáticos no caso, a tirosina e o triptofano e de uma reação devagar do quelato de 
cobre com cadeia peptídica, e o resultado é um heteropoliácido de cor azul com 
absorção máxima de 750 nm9. Esse método apresenta detecção inferior a 
10 µg mL-1 e apresenta baixa variação com diferentes tipos de proteínas. A albumina 
bovina é utilizada como padrão. 
Equipamentos usados 
 Espectrofotômetro de absorção molecular UV-Visível Cary 60 
 Cubetas de plástico 
 Vortéx 
Vantagens: 
 Possui alta sensibilidade; 
 Tem sido utilizado em diversos tipos de equipamentos automatizados. 
 É usado para determinar proteínas totais em líqüor, tecido animal e tecido 
vegetal; 
 Mais sensível; 
 Melhor exatidão; 
 Menor consumo de amostra; 
 Menos suscetível a alguns tipos de interferentes. 
Desvantagens: 
 Está sujeito a muitos interferentes; 
 Apresenta longo tempo de análise; 
 Possui absortividade específica altamente variável para diferentes proteínas; 
 
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 Segue a Lei de Beer-Lambert apenas numa pequena faixa de concentração de 
proteínas. 
2. QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO BCA 
O método do ácido bicinchoninico (BCA 4,4’-dicarboxi-2,2’-biquinolina) proposto por 
Smith se baseia na reação do cobre (II) com as proteínas, em um meio alcalino e 
produz cobre (I) formando um complexo BCA que absorve fortemente a região e 560 
nm. Esse teste é usado na determinação de proteínas totais da saliva, leite humano, 
proteínas celulares e na determinação de grupos funcionais. 
 
Equipamentos usados: 
 Kit Bicinchoninic Acid Protein Assay (Sigma, Alemanha); 
 Tubos descartáveis com tampa; 
 Tubos de vidro com tampa, em triplicata; 
 Banho térmico a 60°C. 
Vantagens: 
 É mais simples no preparo dos reagentes; 
 É tão sensível quanto o método de Lowry; 
 Relativamente rápido. 
Desvantagens: 
 Dependência da temperatura de incubação das amostras; 
 Variação da absortividade específica para diferentes proteínas; 
 Variação da absorbância com o tempo. 
 
3. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE 
KJELDAHL PRINCÍPIO 
 
O método de Kjeldahl determina a matéria nitrogenada total de uma amostra. A base 
do processo de Kjeldahl é o deslocamento do nitrogênio presente na amostra, 
 
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transformando-se em sal amoniacal (sulfato de amônio, por meio de H2SO4). A 
seguir, desse sal obtido, desloca-se o amônio recebendo-se sobre a solução ácida 
(ácido bórico). Por titulação determina-se a quantidade de nitrogênio que lhe deu 
origem. 
Os equipamentos usados nessa técnica são o erlenmeyer e funil separador. 
 Vantagens: 
 Aplicável a todos os tipos de alimentos; 
 Relativamente simples; 
 Não é caro; 
 É preciso. Trata-se de um método oficial para a determinação de proteínas; 
 Vem sendo modificado para análise de microgramas de proteína (micro 
Kjeldhal). 
 
Desvantagens: 
 Mede Nitrogênio orgânico total, não apenas nitrogênio de proteínas; 
 Demorado; 
 Utiliza reagentes corrosivos. 
 
4. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE 
BIURETO 
O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura 
de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução, 
sendo o tartarato de sódio o recomendado por Gornall e cols. O cobre, em meio 
alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação 
peptídica. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm 
e outra em 540 nm. Apesar da banda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a 
sensibilidade do método do biureto, a banda na região de 540 nm é a mais utilizada 
para fins analíticos, porque diversas substâncias, normalmente presentes na maioria 
dos meios analisados, absorvem na região de 270 nm causando muita interferência 
no método. 
 
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O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas 
totais em diversos meios, sendo eles: soro ou plasma sangüíneo, líquido cérebro 
espinhal (líqüor), urina, alimentos, saliva, fibrinogênio e tecido animal. O método de 
biureto tem sido, também, utilizado em análise por injeção em fluxo, assim como em 
alguns métodos cinéticos. 
Os equipamentos usados nessa técnica são pipetas e conta gotas. 
Vantagens: 
 Rápido; 
 Utiliza reagentes de baixo custo; 
 Por envolver uma reação com a ligação peptídica, envolve proteína e não 
nitrogênio total. 
 Desvantagens: 
 Não é considerado um método muito sensível; 
 Está sujeito a interferência de substancias que possam reagir com os íons de 
cobre. 
 
 
5. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE 
BRADFORD 
O método de Bradford é uma técnica para adeterminação de proteínas totais que 
utiliza o corante de "Coomassie brilliant blue" BG-250. 
Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de 
proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH 
de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG-250 
provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve 
fortemente em 595 nm. 
O método de Bradford, é mais rápido e sensível que o de Lowry e cols e tem sido 
utilizado para a determinação de proteínas totais em diversos meios: plasma ou soro 
 
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sangüíneo, líqüor, saliva humana, produtos alimentícios, leite humano, tecidos de 
plantas, suspensões de células, avidina e estreptavidina, urina e detergentes. 
Os equipamentos usados nessa técnica são agitador de tubos e espectrofotômetro. 
Vantagens: 
 Rápido; 
 Preciso; 
 Está sujeito a menor número de interferências que o método de Lowry. 
Desvantagens: 
 Os resultados podem não ser tão reprodutíveis, dependendo da pureza do 
corante. 
6. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE 
NINIDRINA 
Reação de ninidrina é um teste geral para aminoácidos, podendo ser usado de uma 
forma qualitativa, em geral para detectar a presença de aminoácidos em meios de 
suporte para cromatografia ou eletroforese (ver Eletroforese de Aminoácidos) , ou 
de uma forma quantitativa (por exemplo, para dosear aminoácidos após 
separação cromatográfica de hidrolisados proteicos , na determinação da 
composição em aminoácidos de proteínas). A reação dos aminoácidos com a 
ninidrina origina um composto de cor roxa ou púrpura par a todos eles, com exceção 
do derivado prolina, que dá origem a um composto de cor amarela e a Ovalbumina 
que dá origem a um composto incolor contendo um anel de Heller. 
Os equipamentos usados nessa técnica são tubos de ensaio. 
 Vantagens: 
 Rápido; 
 Utiliza reagentes de baixo custo; 
 
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 Por envolver uma reação com aminas livres a intensidade da cor produzida 
é proporcional a concentração de espécie (aminoácidos, proteínas e 
peptídeos). 
 Desvantagens: 
 Não é considerado um método muito sensível. 
 
7. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS - MÉTODO POR 
ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA 
A espectrofotometria é um método que estuda a interação da luz com a matéria e a 
partir desse princípio permite a realização diversas análises. Cada composto químico 
absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado intervalo de 
comprimento de onda. A espectrofotometria pode ser utilizada identificar e quantificar 
substâncias químicas a partir da medição da absorção e transmissão de luz que passa 
através da amostra. 
Espectrofotometria é uma ferramenta importante e versátil amplamente utilizada para 
a análise em diversas áreas como química, física, biologia, bioquímica, materiais, 
engenharia química e aplicações clínicas e industriais. 
Dentre as diversas aplicações o espectrofotômetro é usado para medir determinados 
ingredientes em uma droga, medir o crescimento bacteriano, ou diagnosticar um 
paciente com base na quantidade de ácido úrico presente em sua urina. Sendo que 
as análises podem ser quantitativas (identificação da concentração da substância) e 
qualitativas (identificação de uma substância desconhecida), já que cada substância 
irá refletir e absorver a luz de forma diferente. 
Os equipamentos usados nessa técnica são espectrofotômetro e cubeta. 
 
 
 
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Vantagens: 
 Rápido; 
 Não destrutivo; 
 Altamente sensível (0,06 a 2,0g de proteína). 
 Desvantagens: 
 Os tipos e os conteúdos de aminoácidos diferem entre as proteínas; 
 Somente aplicado em soluções de proteínas; 
 Sujeito a muitos interferentes. 
 
8. TÉCNICA DE QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO DE DYE-
BINDING 
Este método apareceu por volta de 1944, e seu uso em alimentos tem aumentado nos 
últimos anos. Quando uma amostra é tratada com excesso de corante (tipo indicador), 
o corante e a proteína reagem quantitativamente para formar um complexo insolúvel 
que pode ser separado por centrifugação ou filtração. O excesso de corante não 
reagido em solução é medido colorimetricamente e, por diferença, obtém-se 
indiretamente a quantidade de proteína da amostra. Uma relação entre a quantidade 
de corante de ligação e o conteúdo de proteína de uma amostra permite a construção, 
para cada tipo de alimento, de uma tabela de conversão onde as % de proteínas são 
lidas. O método é normalmente utilizado em amostras de grãos de cereais, sementes 
oleaginosas, produtos vegetais e animais e laticínios. Existem equipamentos 
comerciais disponíveis que tornam o método rápido e sem a desagradável 
manipulação dos reagentes corrosivos utilizados no método Kjedahl. Estes 
equipamentos fazem, num mesmo conjunto, a reação colorimétrica, a filtração do 
complexo insolúvel e a medida colorimétrica da solução filtrada. Os corantes utilizados 
 
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no método são: laranja G, laranja 12, vermelho A, preto búfalo e preto amino 10B. 
Este método tem boa correlação com método oficial de Kjeldahl. 
Os equipamentos usados nessa técnica são filtros e centrifuga. 
Vantagens: 
 Rápido; 
 Barato; 
 Maior precisão que Kjeldhal; 
 Não utiliza reagentes perigosos; 
 Não quantifica nitrogênio não proteico. 
 Desvantagens: 
 Pouco sensível; 
 Depende de equipamento próprio. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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CONCLUSÃO 
Como mencionado as proteínas são de grande importância para o bom funcionamento 
do corpo, além de ser uma molécula orgânica mais abundantes entre os seres vivos 
possui estruturas diversificadas e funções importantes como enzimática, 
transportadora, catalítica, estrutural e energética. 
Dessa forma, fica evidente o quão importante são as proteínas até para identificação 
de possíveis problemas relacionados a saúde. Os testes de identificação de proteínas 
são necessários pois possuem o papel de prevenção de doenças de acordo com os 
níveis proteicos no sangue, estando em falta ou em excesso. 
Os métodos utilizados para a identificação de proteínas totais e frações são 
complexos, mas são importantes para a saúde no geral, por isso é necessário que os 
testes sejam feitos com corretamente pois podem prevenir possíveis patologias como 
alcoolismo crônico, doenças hepáticas e doenças renais quando em excesso, e 
doenças como o aumento da produção de anticorpos em algumas doenças 
infecciosas, câncer, doenças autoimunes, doenças granulomatosas quando as 
proteínas estão em excesso no sangue. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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REFERÊNCIS 
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https://doi.org/10.1590/S0100-40421998000600020