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Micologia Guia rápido de diagnóstico por imagem dos fungos de importância médica – Detecção e identificação laboratorial Fungos Filamentosos 1 2 3 4 1. Rhizopus sp. 2. Penicilliun sp. 3. aspergillus flavus 4. fusarium sp. Fungos Leveduriformes FUNGOS DE RELEVÂNCIA MÉDICA PATÓGENOS PRIMÁRIOS FUNGOS OPORTUNISTAS DERMATÓFITOS FUNGOS DIMÓRFICOS FILAMENTOSOS LEVEDURAS CANDIDA SP. CRYPTOCOCCUS SP. TRICHOSPORON SP. MALASEZZIA SP. RODOTORULA SACHAROMYCES ASPERGILLUS SP. FUSARIUM SP. SCEDOSPORIUM SP. MUCORALES DEMATIACEOS P. BRASILIENSIS H. CAPSULATUM B. DERMATIDITIS COCCIDIODES SP. P. MARNEFFEI S. SCHENCKII DEMATIÁCEOS CONíDIoSPOROS ESPORANGIóSPOROS BROTAMENTO Esporos Blastoconídeos REPRODUÇÃO ASSEXUADA FISSÃO CELULAR Esporos Artroconídios REPRODUÇÃO ASSEXUADA ESPORULAÇÃO Esporos Conídios REPRODUÇÃO ASSEXUADA ESPORULAÇÃO Esporos Conídios REPRODUÇÃO ASSEXUADA ESPORANGIÓSPOROS ESPOROS INTERNOS PRODUZIDOS POR MITOSE EM ESPORÂNGIOS - ZYGOMYCOTA ESPORÂNGIOS ESPORÂNGIÓSPORO Conídios ESPOROS EXTERNOS PRODUZIDOS SOBRE CONIDIÓFOROS CONIDIÓFOROS CONÍDIOS ASPERGILLUS NIGER ZOÓSPOROS ESPOROS MÓVEIS PRODUZIDOS EM ZOOSPORÂNGIOS - OOMYCOTAc Ascomycota Ascos com ascósporos de Apiosordaria hispanica. Ascomycota Ascos com 4 ascósporos de Saccharomyces cerevisiae, uma levedura. Basidiomycota Basidiocarpo de Coprinus cinereus Basidiomycota Basídio e basidiósporos de Schizophyllum commune. Zygomycota Zigósporo de Rhizomucor pusillus. Zygomycota Esporângios de Absidia corymbifera. Esporos produzidos por fungos. (a) Blastoconídios, característico de leveduras, produzidos por brotamento em Candida albicans. (b) Conídios de Aspergillus sp. agrupados em torno de uma vesícula. (c) Conídios de Curvularia sp. organizados em cadeias na extremidade dos conidióforos. (d) Esporangiósporos de Rhizopus sp. dentro de esporângios. (e) Artroconídios formados por fragmentação de hifas em elementos retangulares, presentes tanto em fungos filamentosos, com em leveduras, um exemplo é Coccidioides immitis, que pode adquirir as duas formas. A B C D E Zigosporos: as extremidades das hifas próximas fundem-se, ocorre meiose e desenvolvem-se os zigosporos. Ascospóros: 4-8 esporos se formam no interior de uma célula especializada, o asco, na qual ocorreu meiose. Basidiosporos: após a meiose, 4 esporos geralmente se formam na superfície de uma célula especializada, o basídio. Oosporos: resultantes da união dos elementos sexuados desiguais, o oogônio e o anterídeo. REPRODUÇÃO SEXUADA c. albicans positivo Cultura positiva Exame direto levedura Cultura pura não sim Obter colônia pura por isolamento cápsula negativo macromorfologia macromorfologia positivo negativo Colônia bege: Criptococcus sp. Colônia salmão: Rhodothorula sp. Provas bioquímicas e cultivo em lâmina bactéria Blastoconídios e hifas sim não clamidósporos artrósporos sim sim não não Candida albicans Trichosporon sp Provas bioquímicas para identificação de gênero e espécie Cultivo em lâmina Estruturas encontradas em leveduras. Os blastoconídios são estruturas reprodutivas típicas de fungos leveduriformes, que se originam a partir da célula-mãe, por brotamento. permanecem ligados, formando pseudo-hifas. Hifas: filamentos dos fungos. Micélio: conjunto das hifas. Classificação quanto presença de septos: Asseptada ou cenocítica Septada ou apocítica Micoses Superficiais Malassezia Furfur; Piedraia hortae; trichosporon beigelii; Phaeoannellomyces werneckii; hortae werneckii Raspagem e preparação lâmina-lamínula e KOH. Utilização de K-tinta. Uso da lâmpada de Wood. Isolamento das leveduras em meio contendo azeite de oliva. Pitiríase versicolor Forma saprofítica leveduriforme Pityrosporum ovale (levedura ovóide) Pityrosporum orbiculare (levedura esférica) Forma parasitária Malassezia furfur (pseudo-hifas e esporos) Exame direto – blastoconídios em cacho e hifas septadas curtas e curvas. Cultura – não é realizado Malassezia sp. Colônia leveduriforme pregueada bege, reverso incolor, em ágar Mycosel com óleo (azeite) à 37ᵒC Malassezia furfur Pitiríase versicolor Com azeite de oliva sem azeite de oliva Malassezia furfur Pitiríase versicolor Célula de Levedura mãe e filha Malassezia furfur Pitiríase versicolor Blastoconídios em cachos Piedra negra Piedraia hortae Raspagem e preparação lâmina - lamínula e KOH. Isolamento das leveduras em meio AS – Colônias esverdeadas-acastanhadas Cultura: Colônia filamentosa elevada ou apiculada, de cor escura e reverso preto. Piedra branca Trichosporon beigelii Raspagem e preparação lâmina-lamínula e KOH. Isolamento das leveduras em meio Agar Sabouraud: Colônias leveduriformes de coloração branca-amarelada, rugosas-pregueadas, de reverso incolor Piedra branca Trichosporon beigelii Hifa hialina septada verdadeira fragmenta-se em artroconídios ovais ou retangulares. Presença de pseudohifas e blastoconídio único ou de cadeia curta. Piedra branca Trichosporon beigelii Exame direto: Presença de artroconídios e blastoconídios tinea nigra Phaeoannellomyces werneckii Raspagem e preparação lâmina - lamínula e KOH (hifas curtas e escuras) Isolamento das leveduras em meio AS – Colônias escuras cerebriformes sem pigmento difusível Exame direto: hifas septadas demáceas, torulóides, células leveduriformes e clamidoconídios. tinea nigra Phaeoannellomyces werneckii Cultura: leveduriforme/filamentosa demácea. tinea nigra Phaeoannellomyces werneckii microscopia: hifas septadas demáceas e conídios bicelulares. Hortaea werneckii tinea nigra Cultura: leveduriforme lisa ou cerebriforme de coloração preta e reverso preto Hortaea werneckii tinea nigra Exame direto: hifas septadas castanhas e conídios com um septo Micoses Cutâneas Microsporum canis; Microsporum gypsen; tricophyton rubrum; tricophyton mentagrophytes; tricophyton tonsuran; Epidermophyton floccosum MICOLOGICO DIRETO Visualização direta de hifas ou leveduras MICROCULTIVO identificação de agentes Câmara úmida - microcultivo Raspado cutâneo Exame direto - koh Microscópio Cultivo em ágar sabouraud à 25°C dermatofitoses Trichophyton T. Rubrum T. Mentagrophytes T. tonsurans Epidermophyton E. floccosum Microsporum M. Canis M. Gypseum Micológico direto hifas hialinas septadas Microsporum Canis Cultura: Colônia filamentosa penugenta (hifas ralas na superfície, lembrando penugem) com sulcos e aspecto raiado, reverso amarelo-alaranjado. Microsporum Canis Microscopia: Hifas septadas hialinas e macroconídios em naveta ou fuso, com parede irregular grossa, com mais seis células no interior Microsporum gypseum Cultura: Colônia filamentosa pulverulenta ou, para alguns, granulosa, cor canela com açúcar, reverso de incolor a castanho. Microsporum gypseum Microscopia: hifas septadas hialinas e raros microconídios. Macroconídios fusiformes, de paredes finas e irregulares, com cerca de 3 a 6 células internas. extremidade apical arredondada, com base truncada. Isso diferencia o macroconídio de M. gypseum do macroconídio de M. canis que tem extremidades bem pontudas. Microsporum gypseum Microsporum gypseum Macroconídio de paredes finas e Superfície verrucosa áspera Microconídios sésseis anexados as hifas T. rubrum E. floccosum T. mentagrophytes Trichophyton sp. 55 T. rubrum T. mentagrophytes Prova da urease + - 56 Trichophyton mentagrophytes cultura: Colônia filamentosa granulosa, anverso amarelado e reverso castanho. Trichophyton mentagrophytes 58 Trichophyton mentagrophytes Macroconídios com paredes finas e exterior suave microconídios esféricos Hifa em espiral e vários microconídios no meio Trichophyton mentagrophytesMacroconídio com ligeira distorção Numerosos microconídios esféricos Macroconídios com 7 células internas microconídios esféricos Trichophyton mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes Microscopia: Hifas septadas hialinas, microconídios globosos e hifas em espiral ou gavinha Tricophyton rubrum Colônia filamentosa algodonosa centro elevado e reverso com pigmento rubro ou vermelho na borda. Reverso Colônia filamentosa algodonosa centro elevado e reverso com pigmento rubro ou vermelho na borda. Em determinadas colônias o pigmento vermelho pode ser notado no anverso. Tricophyton rubrum 64 T. rubrum Microscopia: Hifas septadas hialinas e microconídios em gotas pequenas implantados paralelamente na hifa Tricophyton tonsurans Cultura: Colônia filamentosa pulverulenta, cor amarelo sulfuroso (amarelo enxofre) com sulco no centro e reverso castanho avermelhado. 66 Tricophyton tonsurans Micromorfologia: Hifas septadas hialinas e microconídios em gotas grandes e pequenas implantados alternadamente. Presença de macroconídio em lápis 67 Epidermophyton floccosum Cultura: Colônia filamentosa aveludada de cor amarelo esverdeado com centro pregueado e reverso castanho. Epidermophyton floccosum Macroconídeos em cachos – sem microconídeos 69 Epidermophyton floccosum hifas septadas hialinas Não apresenta microconídios Macroconídios: desenvolvem-se como descendentes laterais ou terminais de hifas maduras e inicialmente não possui um septo basal. possuem paredes finas com 2 a 5 células. encontrados isoladamente ou em grupos. À medida que a cultura envelhece, os microconídos podem se transformar em clamidoconídios (chlamydosporos). Epidermophyton floccosum Epidermophyton floccosum macroconídio com septações internas e basais Macroconídios e clamidósporos (colônia antiga) Micoses Oportunistas Criptococcus sp.; Candida sp.; Fusarium sp.; Aspergillus sp.; Rhodotorula sp. Auxanograma e zimograma Cultivo em lâmina Com blastoconídios Sem blastoconídios criptococcus sp. Branca, bege - Tubo germinativo Rhodothorula sp. hifas c. albicans artrosporadas Associar a cor da colônia Prova da urease c. albicans Trichosporon sp. Geotrichum sp. Associar à pesquisa da capsula Somente blastoconídios Não-artrosporadas com blastoconídios Laranja, avermelhada, salmão - - + + + Candida sp. Cultura: Colônia leveduriforme lisa (glabra) branca ou bege e reverso incolor. Na descrição macroscópica todas as espécies apresentam o mesmo tipo de colônia. Em alguns momentos o aspecto da colônia pode apresentar o centro cerebrifome ou pregueado. Candida sp. Candida albicans - VERDE Candida tropicalis - AZUL Candida krusei - ROSA Candida sp. Candida albicans- VERDE Candida tropicalis - AZUL Candida krusei - ROSA Teste do Tubo germinativo Tubo Germinativo Positivo Candida albicans Formação do tubo diretamente da célula leveduriforme Observar a constrição entre a célula mãe (blastoconídio) e o início da formação da pseudohifa. Tubo Germinativo Negativo Outras leveduras Pseudohifas abundantes e ramificadas Clamidósporos terminais estruturas arredondadas de parede espessa Blastoconídeos ovais e formam aglomerados no septo das pseudohifas. Candida albicans Candida albicans Blastoconídios únicos ou em pequenos grupos ao longo de pseudohifa Pseudohifa abundante, ramificada com verticilos de blastoconídios dispostos em cadeias simples, ramificadas ou irregulares. Candida tropicalis Candida tropicalis Blastoconídios aparecem de forma única ou em pequenos aglomerados ao longo da pseudohifa. Pseudohifa tem como características marcantes a aparência tortuosa ou curva, largas, denominadas pseudohifas gigantes. Candida parapsilosis Candida parapsilosis Blastoconídios ovais, cilíndricos, dispostos na constrição da pseudohifa. Pseudohifas Alongadas, delgadas e ramificam lembrando Candida krusei Candida krusei Blastoconídios pequenos, ovais ou com gemulação terminal única. Não há formação de pseudohifa. Candida glabrata Blastoconídios células redondas ou ovais, com gemulação e raramente apresentam pseudohifa. Rhodotorula spp Aspergillus niger Cultura: Colônia filamentosa granulosa preta ou castanho escuro (lembra borra de café) e reverso de incolor a castanho. Aspergillus niger Microscopia: Micromorfologia da colônia. Hifas septadas hialinas e conidióforo com vesícula, fiálides e conídios Aspergillus niger Fusarium sp. Cultura: Colônia filamentosa algodonosa branca e reverso lilás. Exame direto: Hifas septadas hialinas e esporos septados transversalmente e em meia lua Fusarium sp. Criptococcus neoformans Zimograma - Teste de urease positivo separação de ureia para liberar amoníaco eleva o pH do indicador de vermelho de fenol na mídia, transformando-o de palha para rosa brilhante Criptococcus neoformans Tinta da china – identificação rápida da capsula em torno da célula Criptococcus neoformans A Maioria Não produz pseud0-hifas Diferenciação de criptococcus e cândida pela prova da urease: Positivo = Criptococcus / Negativo = Candida Criptococcus neoformans teste de ácido cafeico – A fenoloxidase é inibida pela presença de glicose, de modo a cultivar a levedura em um meio sem glucose, como ágar corn meal - Tween 80. Agar sabouraud – Colônias mucoides, limitadas à convexas, de coloração branco-amareladas Micoses Subcutâneas Sporothrix schenkii (dimórfico; Fonsecaea pedrosoi; Rhinosporidium seeberi; Conidiobolus coronatus Esporotricose Sporothrixschenkii(dimórfico) Cromomicose Fonsecaeapedrosoi, Fonsecaeacompacta,Phialophoraverrucosa,CladosporiumcarrioniRinocladiellaaquaspersa M. Jorge Lobo Lacazialoboi Micetoma Fungos hialinos edematiáceos Actinomyces(bactérias) Feo-hifomicose ExophialajeanselmeieWangielladermatitidis Zigomicose Conidiobolussp. Rinosporidiose Rhinosporidiumseeberi Esporotricose Exame direto e histopatológico: geralmente negativo, quando positivo presença de corpo asteroide. Cultura: cresce rapidamente em 4 dias, como colônia filamentosa com pigmento escuro na borda. Microscopia: hifas septadas hialinas, finas e conidióforos simples com conídios implantados lembrando flores. Teste intradérmico com esporotriquina positivo com 5 mm Sporothrix schenkii – S. brasiliensis Exame direto: Presença de forma gemulante arredondada ou elíptica, geralmente são difíceis de visualizar, resultando em exame direto negativo. Esporotricose Cultura: Colônia filamentosa membranosa, espiculada, de brilho nacarado, cor escura na borda e reverso com pigmento escuro na borda. Sporothrix schenkii Esporotricose Conídiosporos bem definidos Sporothrix schenkii filamentoso forma de bolor Esporotricose Sporothrix schenkii Esporotricose “Mickey mouse” Levedura Sporothrix schenkii forma de levedura Esporotricose Sporothrix schenkii fase levedura fase bolor Esporotricose Sporothrix schenkii cromomicose Exame direto: presença de estrutura arredondada castanha com divisão por cissiparidade - corpo fumagóide. Cultura: colônia filamentosa demácia. Microscopia: identificação dos tipos de reprodução: rinocladiela, cladospório e fiálide ou fialófora. cromomicose Fonsecae pedrosoi Em Agar sabouraud não se diferencia Somente em Agar corn meal (CMS) pode se observar conidióforos e conídios cromomicose Fonsecae pedrosoi Conídio se dispersa com Padrão de crescimento sympodial à medida que a colônia amadurece, as hifas escureceram com a produção do pigmento de melanina cromomicose Fonsecae pedrosoi cromomicose Fonsecae pedrosoi Exame direto: Reprodução tipo rinocladiela. Hifas septadas castanhas e conidióforo com conídios implantados ao longo e na extremidade Feo-hifomicose Exame direto: presença de hifas septadas castanhas, torulóides. Cultura: colônia filamentosa demácia algodonosaou aveludada, De cor escura. Microscopia: estruturas reprodutivas típicas de cada espécie. Micose de Jorge lobo rinosporidiose Exame direto: presença de esférulas muito grandes, parede espessa e endósporos. Estruturas arredondadas ou esférulas com parede grossa e trofozoítos no interior (endósporos). Rhinosporidium seeberi zigomicose Conidiobolus coronatus Exame direto: Presença de hifas largas ramificadas em ângulo reto zigomicose Cultura: Colônia filamentosa pregueada, bege, reverso incolor e a superfície anterior do tubo com aspecto de vidro suado ou não polido, em AS. Exame direto: Presença de hifas largas ramificadas em ângulo reto, septadas (exceção), com conídios grandes apresentando uma papila e outro conídio viloso. Micoses Sistêmicas Paracoccidiodes brasiliensis; Histoplasma capsulatum; Coccidioides immitis; Blastomyces dermatitidis Doença Microscopia Macroscopia Micromorfologia Paracoccidioido-micose Célula leveduriforme em "roda de leme" Paracoccidiodes brasiliensis Histoplasmose Células leveduriformes dentro de macrófagos Histoplasmacapsulatum Coccidioidomicose Esférula com endósporos Coccidioides immitis Blastomicose Estruturas esféricas com brotamentos únicos e de base larga Blastomyces dermatitidis Paracoccidioides brasiliensis Cultura: Colônia filamentosa pregueada branca com rachadura na superfície e reverso castanho. Incubada a temperatura ambiente. Cultura: Colônia leveduriforme pregueada branca ou bege com rachadura na superfície e reverso castanho. Incubada a 37ᵒC Paracoccidioides brasiliensis Histoplasma capsulatum Cultura: Colônia filamentosa à temperatura ambiente, branca com rachadura no centro e reverso castanho. A colônia do Histoplasma lembra do Paracoccidioides, diferindo pela extensão da colônia maior no caso do Histoplasma. 126 Histoplasma capsulatum Exame direto: Hifas septadas hialinas e macroconídios mamilonados ou espiculados 127 Coccidioides immitis Cultura: Coccidioides immitis ou C. posadasii. Colônia filamentosa algodonosa branca e reverso castanho. 128 Coccidioides immitis 129 Blastomyces dermatitidis 130
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