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Replicação do DNA Prof. Ms. Rodrigo Eduardo da Silva Replicação do DNA • Características gerais da replicação do DNA: • A molécula de DNA inicia a replicação em locais específicos; • Origem de replicação (células eucariontes possuem múltiplas origens de replicação); • Células eucariontes ao iniciarem a replicação em várias origens possuem unidades de replicação; • Denominados réplicons. Replicação do DNA Replicação do DNA Replicação do DNA Replicação do DNA • Replicação é Bidirecional: • Uma vez iniciada a replicação em cada ponto de origem, ela se propaga para os 2 lados do DNA; • A esse movimento para lados opostos se denominou de replicação bidirecional; • Quando a dupla hélice de DNA se separam, esses locais tem a forma de Y (Forquilhas de Replicação). Replicação do DNA Replicação do DNA • Replicação é Semidescontínua: • As duas cadeia parentais da dupla hélice vão, ambas, sendo replicadas em cada forquilha; • Filamentos de DNA de hélice dupla são antiparalelos, isto é; • Uma fita possui direção 5´ para 3´ e a outra 3´ para 5´. Replicação do DNA Replicação do DNA • As cadeias filhas devem ser sintetizadas sempre na direção 5´ para 3´; • Portanto as formas de sintetizar as cadeias filhas são diferentes; • Seguindo um padrão de replicação semidescontínua. Replicação do DNA • A cópia da cadeia parental 3´ para 5´ pode ser sintetizada continuamente; • A cadeia filha avança na direção 5´ para 3´ (Cadeia líder ou cadeia contínua). Replicação do DNA Replicação do DNA • A outra cadeia parental 5´ para 3´ é copiada de uma forma intermitente (descontínua); • Através de uma série de fragmentos, que depois de unidos dão origem a cadeia retardatária ou descontínua ; • Fragmentos são denominados Fragmentos de Okazaki. Replicação do DNA Replicação do DNA 3´ 5´ 5´ 5´ 5´ 3´ 3´ 3´ Replicação do DNA • Replicação do DNA é realizada por enzimas: • Células (procariontes/eucariontes) possuem enzimas denominadas DNA polimerases; • Capazes de sintetizar DNA a partir de seus precursores; • Esses precursores de DNA devem estar presentes sob a forma de trifosfatos de dexorribonucleosídeos; Replicação do DNA • 4 trifosfatos de dexorribonucleosídeos: • dATP contento a base adenina (A); • dCTP contento a base citosina (C); • dTTP contento a base timina (T); • dGTP contento a base guanina (G); • Além de serem moléculas estruturais, proporcionam energia para a síntese de novos filamentos de DNA. Replicação do DNA • Todas as DNA polimerases obedecem as seguintes propriedades: • a) Cada dexorribonucleosídeo a ser incorporado é selecionado de modo que a sua base nitrogenada seja complementar (AT/ CG); • b) O crescimento da cadeia sempre se dá na direção 5´ para 3´; • c) Requerem um segmento inicial de nucleotídeos (primer) para dar continuidade à cadeia. Replicação do DNA 3´ 5´ 5´ 5´ 5´ 3´ 3´ 3´ Replicação do DNA A T C G DNA POLIMERASE • O desenrolamento da dupla hélice é feito pela enzima helicase; • Trabalha em cada forquilha de replicação, a frente da polimerase, desenrolando as cadeias; • A porção desenrolada de DNA deve ser então estabilizadas (proteínas SSP mantém os filamentos separados); • O desenrolamento da dupla hélice no ponto de origem leva a um superenrolamento do DNA mais adiante; • Ação da enzima DNAtopoisomerases (pequenas quebras). Replicação do DNA 3´ 5´ 5´ 5´ 5´ 3´ 3´ 3´ Replicação do DNA • Não somente o DNA é replicado, mas também as suas proteínas de sustentação (histonas) na fase S; • A replicação do DNA é extremamente precisa, isso se dá pela ação da enzima DNA-polimerase; • Ela é capaz de conferir as bases à medida que as adiciona ao novo filamento de DNA; • Se houver uma base errada, ela remove imediatamente; • Mas mesmo assim, algumas bases erradas conseguem escapar dessa correção (DNA defeituoso); Replicação do DNA Organização gênica procariotos e eucariotos Organização gênica: procariotos e eucariotos Organização gênica: procariotos e eucariotos Organização gênica: Eucariotos • Núcleo: • É o centro de controle de todas as atividades celulares; • Nele encontramos os cromossomos contendo todo o genoma (DNA); • Contém maquinaria para replicar o DNA; • Responsável também pela síntese e processamento de todos os tipos de RNA (mRNA, rRNA e tRNA). Organização gênica: Eucariotos • Apresenta-se como uma estrutura alongada ou arredondada; • Os principais componentes do núcleo são: • Envoltório nuclear, cromatina, nucléolo, matriz nuclear e o nucleoplasma. Organização gênica: Eucariotos • Envoltório nuclear: • Conteúdo intranuclear é separado do citoplasma pelo envoltório nuclear; • Apresenta poros, cuja função é o transporte seletivo de moléculas para fora e para dentro do núcleo. Organização gênica: Eucariotos Organização gênica: Eucariotos • Cromatina: • Heterocromatina, grânulos grosseiros e bem visíveis ao microscópio óptico; • Inativa, pois a dupla hélice de DNA está muito compactada (não há transcrição de genes); • Eucromatina aparece granulosa e clara (entre a heterocromatina); • Na eucromatina, o DNA não está condensado e pode transcrever seus genes. (Cromatina ativa). Organização gênica: Eucariotos Organização gênica: Eucariotos • Nucléolos: • São as fábricas para a produção de ribossomos; • São formações intranucleares arredondadas constituídas principalmente por rRNA e proteínas. Organização gênica: Eucariotos Organização gênica: Eucariotos • Nucleoplasma: • Também designado carioplasma, presente no núcleo de uma célula; • Envolto pela membrana nuclear, a qual o separa do citoplasma; • Ligeiramente ácido e proporciona ao núcleo a sua consistência; • É constituída principalmente por proteínas. Organização gênica: Eucariotos Organização gênica: Eucariotos Organização gênica: Procariotos • Parede Celular: parede esquelética que fica externa à membrana plasmática e tem função de proteção e controle das trocas de substâncias com o meio externo à célula. • Membrana plasmática: membrana seletiva que fica na região interna à parede celular e que permite a entrada de elementos necessários à célula, ao mesmo tempo que permite a saída daquilo que ela não necessita. Organização gênica: Procariotos • Citoplasma (hialoplasma): espaço no interior da membrana plasmática preenchido por uma matéria coloidal e semi-fluida onde se encontram substâncias importantes à célula e as organelas ficam suspensas. O citosol ainda confere consistência à célula. • Plasmídeos: moléculas circulares duplas de DNA que possuem a capacidade de se reproduzir independentemente do DNA cromossômico. Organização gênica: Procariotos • Nucleóides: região onde se concentra o material genético da célula. • Material genético (DNA): Contem todas informações necessárias para a sobrevivência da célula e é capaz de autoduplicação. O cromossomo bacteriano é enrolado, espiralado e compactado. • Ribossomos: são organelas não-membranosas que ficam dispersas no citoplasma e atuam na sínteseprotéica, decodificando os comando enviados pelo DNA. Ribossomos Nucleóides / DNA Organização gênica: Procariotos
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