Antibiograma

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OBJETIVOS 
 Executar o antibiograma pelo método de difusão em meio 
sólido (método de Kirby-Bauer) para determinar a 
sensibilidade de micro-organismos a diferentes 
quimioterápicos; 
 Interpretar um antibiograma em função do diâmetro do halo 
de inibição de diferentes antibióticos; 
 Avaliar a amplitude da atividade antimicrobiana de alguns 
atibióticos selecionados. 
ANTIBIOGRAMA 
 Qual antibiótico usar? 
 Qual a quantidade/dose a ser usada no tratamento? 
Antibiograma 
É um teste usado para determinar a sensibilidade de um micro-
organismo a um agente antimicrobiano. 
Os testes de sensibilidade são indicados para qualquer organismo 
responsável por um processo infeccioso que exija terapia 
antimicrobiana, quando é impossível predizer a sensibilidade 
desse organismo, mesmo conhecendo a sua identificação. 
 
Antibiograma 
 Os testes de sensibilidade são indicados, com maior frequência, 
quando se acredita que o organismo causador pertence a uma 
espécie capaz de apresentar resistência aos agentes 
antimicrobianos normalmente usados. 
 Esta susceptibilidade pode ser aferida por testes de diluição em 
tubo ou pelos testes de difusão em ágar. 
 
NCCLS. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; 
Approved Standard—8 ed, 2003.) 
Mecanismos de resistência 
Os mecanismos de resistência incluem a produção de enzimas 
que inativam a droga; a alteração dos alvos de ação da droga; 
alteração alteração da permeabilidade da membrana externa ou 
efluxo da droga. 
Alguns organismos ainda possuem sensibilidade previsível a 
agentes antimicrobianos, e a terapia empírica é amplamente 
reconhecida. 
MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO 
(Kirby-Bauer) 
Difusão em ágar  Capacidade de difusão do antibiótico que se 
encontra impregnado em discos de papel de filtro, através de um meio 
sólido, inibindo o crescimento microbiano, evidenciado pela formação 
de halos de inibição em torno dos discos. 
 Frequentemente usado para determinar a eficácia de uma variedade de 
antibióticos sobre uma espécie microbiana, com finalidade de fornecer 
orientação para prescrição da maioria dos antibióticos. 
 São usadas concentrações pré-estabelecidas de antibióticos. 
 O diâmetro do halo de inibição é 
proporcional à quantidade de agente 
antimicrobiano presente no disco, à 
solubilidade do agente, ao coeficiente de 
difusão no meio de cultura sólido e à eficácia 
global do agente antimicrobiano. 
 Este método é rotineiramente usado para 
determinar a sensibilidade a antibióticos 
de micro-organismos patogênicos. 
Um halo (zona transparente) de 
inibição é formado em volta do 
disco, onde não crescem colónias 
do micro-organismo. 
Após 24-48 h de incubação, o 
diâmetro do halo é medido. 
MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO 
(Kirby-Bauer) 
Procedimento: (em condições assépticas) 
Mergulhar um swab estéril no tubo com a cultura bacteriana a ser 
transferida. Usar um swab por cultura. 
Retirar o excesso de cultura, apertando o algodão do swab 
contra a parede interna do tubo de ensaio. 
Transferir as culturas para placas de Petri com meio ágar 
Mueller-Hinton, esfregando o swab em toda a superfície do meio. 
Em seguida deixar a cultura secar por 5 a 10 minutos a 
temperatura ambiente. 
 
MÉTODO DE DIFUSÃO EM DISCO 
(Kirby-Bauer) 
Com auxílio de uma pinça, previamente flambada, transferir 
assepticamente os discos de papel com concentrações conhecidas de 
antibióticos para a superfície do meio inoculado. Indicar ao fundo o 
nome do antibiótico correspondente. 
É preciso pressionar os discos de papel levemente para aderi-los ao meio. 
 Incubar as placas a 35oC por 24h. 
Avaliar o crescimento nas placas, procurando identificar as zonas de 
inibição em torno do disco de papel. 
Procedimento Kirby-Bauer 
Observações 
Meio deve ser semeado em toda a superfície de forma que o 
crescimento ocorra sobre todo o meio. 
O número máximo de discos por placa deve ser 5. 
Distância entre os discos: 15 mm da borda da placa e entre os discos. 
Os procedimentos são padronizados para assegurar resultados seguros 
e confiáveis: meio padronizado (ágar Mueller-Hinton- capacidade de 
difusão determinada); espessura do ágar na placa (4 mm); tamanho e 
espessura dos discos e inoculação através do swab. 
Procedimento Kirby-Bauer 
CULTURAS E ANTIBIÓTICOS TESTADOS 
Culturas: Escherichia coli e Staphylococcus aureus 
Antibióticos: 
o Bancada 1: Estreptomicina, ampicilina e polimixina B 
o Bancada 2: Eritromicina, rifampicina e clindamicina 
o Bancada 3: Rifamicina, cefazolina e amoxicilina 
o Bancada 4: Oxacilina, ceftriaxona e tetraciclina 
 
 
Reagentes para o Kirby-Bauer 
Meio de Ágar Müeller-Hinton 
Dentre os muitos meios disponíveis, o ágar Müeller-Hinton é 
considerado o melhor para testes rotineiros de sensibilidade contra 
bactérias não fastidiosas, pelas seguintes razões: 
 Demonstra reprodutibilidade aceitável entre os diferentes lotes nos 
testes de sensibilidade. 
 Contém baixo teor de inibidores de sulfonamida, trimetoprim e 
tetraciclina. 
 Permite crescimento satisfatório dos patógenos não fastidiosas. 
 Existe um grande acervo de dados e experiência relativos a testes de 
sensibilidade realizados com esse meio. 
LIMITAÇÕES 
Não são aplicáveis a micro-organismos que crescem 
lentamente, 
Não permite determinar se a droga é bactericida ou 
bacteriostática, 
Não são aplicáveis a antibióticos que se difundem lentamente. 
 
 
Leitura das Placas e Interpretação 
Após o período de incubação, examina-se cada placa. 
Se a placa foi satisfatoriamente semeada, e o inóculo era 
correto, os halos de inibição resultantes serão uniformemente 
circulares e haverá um tapete confluente de crescimento. 
Se colônias individuais forem aparentes, o inóculo era 
demasiado leve e o teste deverá ser repetido. 
Os diâmetros dos halos de inibição total (julgadas a olho nu) são 
mensurados, incluindo o diâmetro do disco. 
Leitura das Placas e Interpretação dos 
Resultados 
Medir o diâmetro dos halos de inibição, incluindo os dos 
discos. 
O diâmetro da zona de inibição é comparado com uma tabela 
padrão para as drogas (aprovada pela Sociedade Brasileira de 
Microbiologia para a droga e a concentração). 
O halo de inibição será considerado a área sem crescimento 
detectável a olho nu. 
Leitura das Placas e Interpretação 
O crescimento de pequenas colônias, detectável apenas com lente de 
aumento, na margem do halo de inibição do crescimento deve ser 
ignorado. Entretanto, no caso de crescimento discreto de colônias 
dentro de um halo de inibição evidente, o teste deverá ser repetido 
com uma cultura ou subcultura pura de uma única colônia, isolada da 
placa de cultura primária. 
 Se pequenas colônias continuarem a crescer no halo de inibição, o halo 
de inibição livre de colônias deve ser medido.Classificação dos micro-
organismos como resistentes, moderadamente sensíveis e sensíveis. 
Antibiograma 
CLASSIFICAÇÃO em Categoria de 
Interpretação do Teste de Sensibilidade 
Antimicrobiana 
 Sensíveis: Significa que uma infecção por uma determinada cepa pode ser 
tratada adequadamente com a dose do agente antimicrobiano recomendada 
para esse tipo de infecção e patógeno, exceto quando contra-indicado . 
 Intermediárias: A categoria “intermediária” inclui isolados com CIMs do 
agente antimicrobiano que se aproximam de níveis sangüíneos e tissulares 
atingíveis e para os quais as taxas de resposta podem ser inferiores àquelas 
apresentadas por isolados sensíveis. 
 Resistentes: não são inibidaspelas concentrações sistêmicas dos agentes 
antimicrobianos. 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS 
 Eritromicina: inibe a síntese de proteínas, ligando-se de modo reversível às subunidades 
ribossômicas/50S, de microrganismos sensíveis. 
Pode interferir na ligação do cloranfenicol que também atua neste local. 
 Acredita-se que o mesmo não iniba diretamente a formação das ligações peptídicas, mas sim, a etapa de transferência, através 
da qual uma molécula de peptidil-tRNA recém sintetizada, migra do sítio aceptor sobre o ribossomo, para o sítio peptidil, ou 
doador. 
 Os macrolídeos apresentam amplo espectro de ação, incluindo atividade contra bactérias, micobactérias, micoplasmas, 
Clamídias, Rickétsias e protozoários. 
 Polimixina B: Efetivo contra bactérias gram-negativas. 
 Ação na membrana plasmática, ligando-se a radicais fosfatos e levando a perda da permeabilidade. 
 Bactericida. 
 Tetraciclina: Inibidores específicos do ribossomo bacteriano. Bloqueiam o receptor na subunidade 30S 
que se liga ao tRNA. 
 Inibe a síntese de proteínas bacteriana, o que impede a replicação e leva à morte celular. 
 É eficaz contra muitas espécies: Gram-negativas e Gram-positivas, e até contra alguns protozoários. 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS 
 Estreptomicina: 
 Aminoglicosídeo que se Liga à subunidade 30S do ribossomo, ao receptor S 12, provocando uma 
leitura errada da mensagem codificada no mRNA. Não é tão usado no tratamento da tuberculose devido à 
sua toxicidade e ao desenvolvimento de estirpes resistentes. 
 É bactericida in vitro mas apenas supressiva in vivo já que não penetra facilmente no espaço intracelular. 
 Clindamicina: Mais eficiente em gram positivas como Staphylococcus aureus e Streptococcus. Atua inibindo a 
síntese protéica, através de ligação ao ribossomo. 
 Vancomicina: 
 Inibe a síntese da parede celular bacteriana, bloqueando a a incorporação no peptideoglicano das 
subunidades N-ácido acetilmuramico e N-acetilglucosamina, ao se ligar reversivelmente a estas moléculas. 
 Até recentemente, a vancomicina era dos poucos antibióticos sem casos descritos de resistência. No 
entanto, em 2002 uma mulher foi internada nos EUA com infecção por Staphylococcus resistente à 
vancomicina. 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS 
 Rifamicina: ação na replicação e/ou transcrição celular: inibição da RNA polimerase. 
 Cefazolina: cefalosporinas de 1a geração. 
 Desenvolve sua ação preferencialmente sobre germes Gram-positivos e, com muito menos 
freqüência, sobre Gram-negativos. 
 É um antibiótico betalactâmico, cujo mecanismo de ação é a lise da parede bacteriana. 
 Oxacilina: indicado para infecções por S. aureus penicilases resistentes. Sem efeitos em 
gram-positivas. Inibe a síntese da parede celular bacteriana. 
 Ceftriazona: cefalosporinas de 3a geração. 
 Grupo de antimicrobianos que apresenta pouca toxicidade, tendo seu mecanismo de 
ação na parede celular. Pode ser usado como alternativa ao uso de penicilinas. 
 São menos ativos contra GRAM positivos, ganhando melhor espectro contra GRAM 
negativos.