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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DO AMAZONAS CAMPUS MANAUS – ZONA LESTE AYDRA LAINI DE SOUZA CIRÍACO LUIS FELYPE GARCIA DE SOUSA CALDAS LETÍCIA COSTA DOS SANTOS MAISA RENATA ROSAS DO PRADO MATHEUS YURI DOS SANTOS VICTOR GAMA LIMA MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA - BIOFILMES ORIENTADOR: PROF. FELIPE FACCINI DOS SANTOS MANAUS 2018 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 02 O QUE É UM BIOFILME? No ambiente as bactérias podem ser encontradas de duas formas: • Plactônica (flutuante ) – Para a proliferação; • Séssil (imóvel) – Para resistência. - O biofilme é constituído por microrganismos sésseis que produzem matriz como um polímero orgânico e hidratado (Exopolissacarídeo – EPS), que tem a função de defesa aos interpéries do ambiente. - Os biofilmes podem ser formados por um tipo de microrganismo, mas na natureza, normalmente são constituídos também por outros (algas, fungos, protozoários) juntamente com resíduos orgânicos. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 03 Figura 1 Colônia de bactérias atrelada para formar biofilmes. Fonte :http://microbiologia.icb.usp.br/cultura-e- extensao/textos-dedivulgacao/bacteriologia/bacteriologia- oral/biofilmes-bacterianos-vivendo-em-comunidade/ Basicamente todo microorganismo séssil tem potencial para produzir biofilme, ou podem viver em simbiose com os microorganismos produtores de biofilme. 95% a 99% dos microrganismos existem na forma de biofilmes, sendo assim a forma planctônica pode ser observada, como estagio de translocação entre superfícies. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 04 Figura 2: Ciclo de formação dos biofilmes. Fonte: Imagem disponível em: www.usp.br/agen/?p=226558 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 05 Figura 3: Biofilme formados por bactérias Staphyloccocus aureus na superfície de um cateter. Fonte: aedcursos.com.br/pdf/aula%20biofilme.pdf BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 06 A transformação da bactéria de seu estado planctónico para o séssil se dá por mudanças fenotípicas que estão associados a mecanismos genéticos. MECANISMOS GENÉTICOS ENVOLVIDOS NA MUDANÇA DO MODO DE VIDA PLACTÔNICA PARA SÉSSIL Microrganismo Gene Função da proteína Papel na formação dos biofilmes Pseudomonas aeruginosa psǀ Síntese de polissacarídeos Maturação do biofilme ǀasǀ Síntese de 30C12-HSL Quorum sensing Escherichia coli wcaB Síntese deácido colânico Estrutura do biofilme agn43 Antígeno de superfície Agregação Vibrio cholerae hapR Regular transcrição Quorum sensing Staphilococcus epidermis ǀcaADBC Síntese de PNAG Agregação e evasasão da resposta imune Staphilacoccus aureus ǀcaADBC Síntese de PNAG Agregação e evasão da resposta imune cid Hidrolase de mureína Matriz do biofilme sasG Adesina de superfície Adesão inicial Streptococcus gordonii abpA Adesina para amilase Adesão inicial Streptococcus mutans gbpA Adesão ao glucano Adesão inicial gtfB, gtfC Síntese de glucano Agregação, maturação do biofilme luxS Moléculas de autoindução-2 Quorum sensing Enterococcus fecalis ebp Formação de pilos Adesão inicial e Agregação bopABCD Operação de formação de biofilmes em plásticos Adesão inicial Tabela 1: genes associados á mudanças entre os modos de vidas de algumas bactérias. Fonte: microbiologia.icb.usp.br/cultura-e-extensao/textos- de-divulgacao/bacteriologia/bacteriologia-oral/biofilmes-bacterianos-vivendo-em-comunidade BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 07 Principais microorganismos que fazem adesão e geral problemas de saúde publica e econômica: Pseudomonas aeruginosa; Pseudomonas fragi; Pseudomonas fluorescens; Micrococcus spp.; Enterococcus spp; Listeria monocytogenes; Yersinia enterocolitica; Salmonella spp. Escherichia coli Staphylococcus aureus; Bacillus cereus; Candida Albicanis. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 08 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 09 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 10 FORMAÇÃO DE BIOFILMES 1 - Adesão: Estágio reversível; 2 - Adesão secundária: Estágio irreversível - Adesinas; - Exopolissacarídeo; - Slime – Estafilococos spp; 3 - Desenvolvimento do biofilme maduro; - Quorum sensing 4 - Descolamento: fase de ruptura do biofilme. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 11 FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 4: Ciclo de formação dos biofilmes. Fonte: http://microbiologia.icb.usp.br/cultura-e-extensao/textos-de- divulgacao/bacteriologia/bacteriologia-oral/biofilmes-bacterianos-vivendo-em-comunidade BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 12 FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 5: Ilustração da arquitetuta de um biofilme. Fonte: dreamstime.com/stock-illustration-biofilm-antibiotic-resistant-bacteria-rod-shaped-spherical-escherichia-coli-pseudomonas- mycobacterium-tuberculosis-image79165763 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 13 MECANISMOS DE FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 6: Fotomicrografia de biofilme em peça de granito de pia. Fonte: Andrade 2009. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 14 MECANISMOS DE FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 7: Fotomicrografia de biofilmes em peça de mármore de pia de uma residência. Fonte: Andrade 2009 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 15 MECANISMOS DE FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 8: Fotomicrografia de biofilme em aço de reservatório de conservação de leite. Fonte: Andrade 2009 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 16 MECANISMOS DE FORMAÇÃO DE BIOFILMES Figura 9: Ilustração de endocardite, causada por acúmulo de bactérias orais nas válvulas cardíacas, formando biofilmes. Fonte: http://estomatologista.blogspot.com/2012/05/bacterias-da-placa-dental-podem.html BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 17 Figura 10: Formação de biofilmes em tecido lesado.Fonte: Judith Andrade – Biofilmes, um inimigo invisível. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 18 IMPORTÂNCIA DOS BIOFILMES PARA OS MICROORGANISMOS Comunidades estruturadas que adquirem vantagens de sobrevivência: 1. Ambiente protetor; 2. Captação de elementos necessários à sobrevivência; 3. Estimulação do processo de multiplicação. Figura 11: Ilustração de Salmonella spp. sintetizando biofilme. Fonte: usp.br/agen/?p=226558 Figura 12: Ilustração de bactérias embebidas em biofilme. Fonte: pnas.org/content/113/2/E209 BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 19 IMPORTÂNCIA CLÍNICA DOS BIOFILMES • Dispositivos biomédicos sujeitos à colonização por microrganismos e ao desenvolvimento de biofilmes com consequente infecção; • capacidade que os biofilmes têm de se formarem em tecidos vivos; • Diminuir ou evitar a formação de biofilmes em materiais biológicos é praticamente impossível, devendo-se restringir ao mínimo seu uso ou, ainda, por um tempo limitado. • A detecção de cepas produtoras de biofilmes também se torna de grande relevância clínica BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 20 • A adesão bacteriana e a consequente formação de biofilme = causa comum de infecções persistentes. • Biofilmes estão associados a aproximadamente 80% de todas as infecções médicas no mundo. • Resistência ao sistema imune do hospedeiro e aos agentes antimicrobianos. • Doenças envolvendo biofilmes são geralmente crônicas e difíceis de tratar. • Portanto, o biofilme tem importância médica, por ser capaz de se formar tanto em próteses sintéticas de transplantes – cateter. IMPORTÂNCIA CLÍNICA DOS BIOFILMES BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 21 IMPORTÂNCIA CLINICA • Infecções causadas por biofilmes associadas a biomateriais - Infecção associada a cateter urinário; - Infecção associada a prótese de válvula cardíaca; - Infecção associada ao cateter venoso central. • Doenças não associadas a dispositivos médicos causadas por biofilmes: - Fibrose quística - Periodontite - Endocardite BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 22 PERIODONTITE • Doença inflamatória que ocorre nos tecidos periodontais em resposta à formação de um biofilme microbiano; • Foram os primeiros biofilmes a serem relatados; • “Os biofilmes apresentam uma capacidade de se desenvolver na superfície do esmalte logo após a limpeza da cavidade oral” (Donlan, 2002). • “O controle da doença periodontal faz-se através da remoção de biofilmes estabelecidos a partir de zonas subgengivais e com utilização combinada de agentes antimicrobianos” (Kokare et al., 2008; Berezow and Darveau, 2011). BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 23 • A doença periodontal se inicia pelo acúmulo de bactérias imóveis, gram positivas e aeróbias na região cervical do dente, ou seja, a região da coroa dentária, que se localiza mais próximo ao sulco gengival, formando o biofilme. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 24 IMPORTÂNCIA SANITÁRIA • Formado nas tubulações de sistemas de distribuição sem manutenção. • Na linha de produção da indústria de laticínios, a formação de biofilmes eleva a carga microbiana e, muitas vezes, contamina com patógenos os alimentos. • “Em relação à saúde pública, além do perigo de transmissão de enfermidades ao consumidor, convém ressaltar que em um biofilme as bactérias podem ser 1000 vezes mais resistentes a um antimicrobiano, quando comparadas às mesmas células planctônicas” (KYAW, 2008). BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 25 • Na indústria de alimentos os biofilmes podem se acumular em uma variedade de substratos como, por exemplo: aço inox, vidro, borracha, polipropileno, fórmica, ferro, polietileno de baixa densidade, policarbonato, entre outros. • biofilme, quando submetido ao calor, pode cristalizar e formar depósitos ou crostas que são muito aderentes, protegendo novos microrganismos e dificultando ainda mais os procedimentos de higiene. IMPORTÂNCIA SANITÁRIA BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 26 APLICAÇÕES BIOTECNOLÓGICAS DOS BIOFILMES • É possível ocorrer adesão bacteriana e formação de biofilme em praticamente todas as superfícies; • A adesão bacteriana depende das propriedades físico-químicas do material do substrato e da superfície da célula.; • Os biofilmes nas indústrias têm várias aplicações, como exemplo, os existentes em biorreatores para a produção de fermentados; BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 27 APLICAÇÕES BIOTECNOLÓGICAS DOS BIOFILMES • Na saúde que revestiram implantes cirúrgicos com o filme de quitosana; • São materiais eficazes no tratamento de queimaduras superficiais recentes; • No processo de tratamento de água potável; BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 28 AVALIAÇÃO DE BIOFILMES Atualmente, vários métodos são usados na detecção e monitoramento da carga microbiana de superfícies envolvidas na produção de alimentos. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 29 AVALIAÇÃO DE BIOFILMES As técnicas de microscopia eletrônica apresentam alto poder de resolução e comprimento de onda muito curto (0,5 A) de feixe de elétrons, permitindo observar as amostras em aumentos maiores quando comparados com a microscopia óptica comum BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 30 AVALIAÇÃO DE BIOFILMES BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 31 CONTROLE DE BIOFILMES • A presença de biofilmes em superfícies de indústrias alimentícias pode resultar em um impacto negativo na qualidade dos produtos finais contaminando os alimentos. • Promove riscos tanto de transmissão de doenças quanto da deteriorização precoce • Quando em biofilmes consolidados, apresentam uma maior resistência aos sanitizantes BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 32 CONTROLE DE BIOFILMES • Os processos usados tanto na prevenção da formação quanto no controle de biofilme já instalado são os indicados na execução da higienização,quais sejam, os de limpeza e o de desinfecção. • Os produtos de limpeza usados são os detergentes alcalinos, detergentes ácidos, tensoativos e agentes quelantes ou sequestrantes BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 33 CONTROLE DE BIOFILMES • Os produtos de desinfecção são os compostos químicos ácido peracético, compostos clorados, iodóforo e compostos quaternários de amônia. • A prevenção da formação de biofilmes exige um rígido programa de higiene ambiental. • Biofilmes já consolidados são de difícil controle, demandando um grande gasto de energia física e química BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 34 CONTROLE DE BIOFILMES • A higienização divide-se em duas etapas distintas: limpeza e sanitização: • Na limpeza, o objetivo é a remoção de resíduos orgânicos e minerais (proteínas, gorduras e outras sujidades). • Na sanitização, procura-se eliminar microrganismos patogênicos a níveis que não comprometam a qualidade higiênico-sanitária do alimento. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 35 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Biofilmes bacterianos vivendo em comunidade. Microbiologia USP. Disponível em: http://microbiologia.icb.usp.br/cultura-e-extensao/textos- de-divulgacao/bacteriologia/bacteriologia-oral/biofilmes-bacterianos- vivendo-em-comunidade. Acesso em 01 de Junho de 2018. CHAGAS, L. G. S. Formação de biofilmes microbianos em diferentes materiais para equipamentos de ordenha em fazenda leiteira. Tese de doutorado. Uberlândia, 2015 COSTA, K. A. D. Et al. Formação de biofilmes bacterianos em diferentes superfícies de indústrias de alimentos. Rev. Inst. Laticínios Cândido Tostes, Juiz de Fora, v. 71, n. 2, p. 75-82, abr/jun, 2016. ESPER, L. M. R. Formação de biofilmes microbianos. V simpósio de Brasileiro de Microbiologia Aplicada. Rio de janeiro, 2011. BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 36 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS LAILA, H. J. E. A; SANTOS. R. C. V. Aspectos gerais e mecanismos moleculares envolvidos na formação de biofilmes de pseudomonas aeruginosa. Disciplinarum Scientia. Série: Ciências da Saúde, Santa Maria, v. 17, n. 1, p. 125-144, 2016 OLIVEIRA, M. M. M. Biofilmes microbianos na indústria de alimentos: Uma revisão. Rev Inst Adolfo Lutz. 2010; 69(3): 277-84. SOUSA, S. S. Et al. Aplicações biotecnológicas de biofilmes constituídos por diferentes moléculas. Edição Especial - Volume 4 / Número 3/ Jul/Set – 2013. SOUZA, A. C. et al. Biofilmes bacterianos e sua atuação na infecção hospitalar. TCC. Ribeirão Preto, 2013. TELLES, E. M. A higienização na prevenção e no controle do biofilme: uma revisão. [Trabalho de Conclusão de Curso de Especialização – Faculdade de Veterinária da UFRGS] BIOFILMES IFAM – MEDICINA VETERINÁRIA (MICROBIOLOGIA VETERINÁRIA) 12 de Junho de 2018 37 GRATOS PELA ATENÇÃO E COMPREENSÃO!!!
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