Autofagia: Processo Celular de Degradação e Reciclagem

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Aula prática 02- Autofagia 
Disciplina: Biofísica
Professor: Leonardo Travassos
Aluna: Bruna Almeida
Resultados e discussão:
Autofagia é um processo celular fisiológico para degradação e reciclagem de componentes do citosol e organelas celulares danificadas, para manutenção da homeostase celular em condições adversas como privação de nutrientes, presença de patógenos e toxinas. Porém, quando o processo ultrapassa um determinado limiar pode levar ao processo de morte autofágica. 
Foram utilizadas duas drogas para testar a autofagia, induzindo ou inibindo-a:
 -Cloroquina: utilizada no tratamento de malária.
- Rapamicina: antibiótico usado para evitar a rejeição de órgãos transplantados.
Segundo a bibliografia: A rapamicina induz a autofagia, sendo estudada para o tratamento de melanomas (câncer de pele)1 e a Cloroquina, inibe a autofagia podendo ser útil ao tratamento auxiliar do câncer 2.
As imagens abaixo, obtidas na prática irão reafirmar os dados bibliográficos acima:
A figura A é o controle, onde a célula não foi tratada com nenhuma droga.
A figura B foi tratada com rapamicina.
A figura C foi tratada com cloroquina.
Utiliza-se a proteína LC3,uma proteína citosólica (LC3 na forma I – LC3-I) que sofre uma clivagem C-terminal quando um sinal pró-autofágico é percebido pela célula, sendo convertida, assim, à forma II (LC3-II). Esta sofre modificações e passa a se localizar especificamente na membrana de autofagossomos.
 A célula possui fluorescência verde em sua membrana plasmática em condições não pró-autofágicas, ao passo que, quando um sinal pró-autofágico é percebido pela célula, a proteína LC3-I é clivada e ataca à membrana dos autofagossomos, sendo estes visualizados como pontos verdes no citoplasma da célula, que representam a proteína de fusão LC3-GFP agrupada nos autofagossomos. Assim, a autofagia pode ser “quantificada” através da concentração de pontos fluorescentes.
Com os dados acima sobre o método utilizado nesta análise podemos reafirmar os dados bibliográficos. A célula tratada com rapamicina apresenta uma maior concentração de pontos fluorescente do que no controle, já na cloroquina há uma diminuição no número de pontos baseando-se pelo controle.
Assim, conclui-se que realmente a rapacimina induz a autofagia e a cloroquina inibe a mesma.
Bibliografia:
1 http://www.ufrgs.br/labsinal/autofagia.html - Consultado em 16/10/2014 
2 http://www.medicinabiomolecular.com.br/biblioteca/pdfs/Cancer/ca-0748.pdf -Consultado em 16/10/2014